CN106070535A - 一种以香果、香叶为原料制备的香辛料及其在抑菌中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以香果、香叶为原料制备的香辛料，是通过以下方法制备得到的：(1)粉碎：取香果和香叶，分别用粉碎机粉碎；(2)取上述粉碎完的香果和香叶，分别置于蒸馏瓶中，加入乙酸乙酯，在60℃水浴条件下浸提5小时；(3)抽滤：将浸提液抽滤后得到滤液；(4)浓缩：使用水浴锅于通风橱中蒸发浓缩，得到浓缩浸膏，即分别得到香果提取物、香叶提取物；将香果提取物与香叶提取物按质量比1:1的比例混合，即得。本发明的香辛料，经实验证明，其对猪肉中的微生物(比如：单增李斯特菌，耶尔森氏菌属，绵羊李斯特菌)有抑制作用，且取得了增效作用，因此，可以作为猪肉的防腐剂进行应用，也可以作为抑菌剂进行应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种以香果、香叶为原料制备的香辛料及其在抑菌中的应用。
背景技术
在食品调味调香中使用的芳香植物的干燥粉末或精油被人们称为香辛料。香辛料主要来自植物的种子、茎叶、花蕾、果实等其他部位，有独特的刺激性味道，如香、甜、苦、辣等味道，有抗氧化、着色、防腐抗菌以及其他生理药理作用，此外，还有使食品风味更好和香味更浓的作用。香辛料有以下的特点：绝大多数香辛料具有一定的药理作用；绝大多数香辛料含有挥发性物质；有典型的滋味或香气；在正常使用量(一般不做限量)内对人体功能不会造成损害，或对身体功能有帮助。
香果，又名川芎，伞形科、藁本属多年生草本植物，高40～60厘米。发达的根茎形成不规则的结节状拳形团块，有强烈的香气。根茎竖立，形状为圆柱形，条纹纵向发展，上部大多是分枝，下部茎节胀大呈盘状(苓子)。大多在路边、树林边缘、山地疏林或以竹类为优势的开敞的混交林中、海拔700-1000米生长，而很少在密林中生长。主产四川(灌县)，在其他地区也有培育，比如云南、浙江、江苏、陕西、广西、贵州、江西、湖北、甘肃、内蒙古、河北等省区。香辛料的根茎具有药用价值，可以祛湿，活血化瘀，治疗头痛头晕、腹部疼痛、痈疽疮疡、闭经、难产等症状。
香叶，也可称为月桂叶、香桂叶、桂叶、天竺桂等。香叶为樟科月属常绿小乔木，它的叶片是烹调中的调味料。香叶为小乔木或绿灌木，主要生长在南欧地中海沿岸，这两种香叶的颜色都呈现为绿色，形状为长椭圆披针形，长约三英寸，叶面是光滑的，味道有辛辣及强烈苦味。欧洲人常用香叶作为调味料和餐点装饰，可以和肉食、蔬菜、汤作为搭配，有健胃保胃的功能。
肉类保鲜是当今社会面临的一大难题，人们在肉类中添加防腐剂来维持肉类的新鲜，防止其变质腐败，最终推迟肉类的货架期。但是化学防腐剂对身体会造成一定的危害，损害身体健康。因此，选出安全可靠的天然防腐剂刻不容缓。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种以香果、香叶为原料制备的香辛料，通过实验证明，本发明的香辛料，对猪肉中的微生物都有较好的抑菌效果，可作为天然防腐剂进行应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种以香果、香叶为原料制备的香辛料，是通过以下方法制备得到的：
(1)粉碎：取香果和香叶，分别用粉碎机粉碎至颗粒直径为0.1mm；
(2)取上述粉碎完的香果和香叶，分别置于蒸馏瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10(单位g：ml)，在60℃水浴条件下浸提5小时；
(3)抽滤：将浸提液抽滤后得到滤液；
(4)浓缩：使用水浴锅于通风橱中蒸发浓缩，得到除去全部溶剂的浓缩浸膏，即分别得到香果提取物、香叶提取物；将香果提取物与香叶提取物按质量比1:1的比例混合，即得。
通过上述方法制备得到的香辛料，经实验证明，其对猪肉中的微生物(比如：单增李斯特菌，耶尔森氏菌属，绵羊李斯特菌)有抑制作用，且取得了增效作用，因此，可以作为猪肉的防腐剂进行应用，也可以作为抑菌剂进行应用。
附图说明
图1：25℃时香果对猪肉中微生物的抑制效果图。
图2：4℃时香果对猪肉中微生物的抑制效果图。
图3：25℃时香叶对猪肉中微生物的抑制效果图。
图4：4℃时香叶对猪肉中微生物的抑制效果图。
图5：25℃时香果香叶混合对猪肉中微生物的抑制效果图。
图6：4℃时香果香叶混合对猪肉中微生物的抑制效果图。
图7：25℃各种香料及混合对猪肉中微生物的抑制效果。
图8：4℃各种香料及混合对猪肉中微生物的抑制效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1香辛料的研究
1研究目的和意义
俗话说“民以食为天，食以安为先”。人们的生存，离不开食物，因此食品安全至关重要。猪肉是人们补充能量的主要食物，本身含有多种营养丰富物质，非常有利于微生物的生长繁殖，因此常温下猪肉很容易腐败变质，特别是到了夏天，猪肉更容易变质。而运用香辛料，不仅可以增进猪肉的风味，更可以保鲜。天然香辛料没有危害成分，是安全可靠的，并且具有改善猪肉风味，防止猪肉腐烂变质的作用。
研究开发香辛料刻不容缓，一是香辛料天然，富有很多医疗保健作用的成分，有助于人们的身体健康；二是香辛料改善猪肉的风味，促进人们的食欲；三是香辛料可以防止食物的腐败变质，延长储藏期。
2材料与方法
2.1实验材料与设备
2.1.1实验材料
主要原料：如下：
香果，干制，购自徐州农贸市场。
香叶，干制，购自徐州农贸市场。
主要试剂：如下：
乙酸乙酯，分析纯，天津福晨化学试剂厂。
超纯水，分析纯，化学与食品实验室。
胰蛋白胨大豆琼脂，生化试剂，北京陆桥技术有限责任公司。
胰蛋白胨大豆肉汤，生化试剂，北京陆桥技术有限责任公司。
纯化琼脂粉，生化试剂，上海宜兴市有信生物有限公司。
氯化钠，分析纯，江苏腾狮化工厂。
2.1.2实验设备：如下：
旋转蒸发仪，上海申生科技有限公司。
循环水式真空泵，巩义市英峪予华仪器厂。
数显式电热恒温水浴锅，上海跃进医疗器械厂。
电热恒温干燥箱，上海跃进医疗器械厂。
JA2003N型电子天平，上海精密仪器有限公司。
微型植物粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司。
DNP-9162型电热恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司。
SW-CJ-IC标准型双人净化工作台，苏州净化设备厂。
薄层层析硅胶，烟台江友硅胶开发有限公司。
点样毛细管，国药集团化学试剂有限公司。
2.1.3供试菌种：如下：
单增李斯特菌，ATCC。
耶尔森氏菌属，实验室分离，并经生理生化鉴定。
绵羊李斯特菌，ATCC。
2.2实验方法
2.2.1提取工艺
流程为：香果、香叶(干制)→粉碎→称量→乙酸乙酯60℃浸提→抽滤→蒸发浓缩→成品。
步骤如下：
(1)粉碎：取香果或香叶，用粉碎机粉碎到颗粒直径为0.1mm，用筛子筛选(颗粒太大，提取率不高，也不利于有效成分溶出；颗粒太小，各种杂质的溶出度也会增高，而且不利于过滤、浓缩和分离)。
(2)取50g粉碎完的香果或香叶，置于蒸馏瓶中，加入500ml乙酸乙酯，在60℃水浴条件下浸提5小时。
(3)抽滤：将浸提液抽滤后得到滤液。
(4)浓缩：使用水浴锅于通风橱中蒸发浓缩，得到浓缩浸膏(除去全部溶剂)，即分别得到香果提取物、香叶提取物。
(5)保存：提取好后，放于离心管中保存。
2.2.2抑菌作用的研究
2.2.2.1实验用培养基的配制
胰蛋白胨大豆琼脂培养基(用于细菌培养)：TSA34g，琼脂粉6g，水1000mL，pH7.4～7.6。
2.2.2.2菌悬液制备
1.菌种的活化。将供试菌种从冷冻中取出，放入无菌操作台中解冻5分钟左右。点燃酒精灯，并用酒精棉消毒双手和擦净台面。将接种环在酒精灯火焰外焰烧至通红，冷却，挑取2-3次供试菌种，接入培养液中进行活化，置于37℃水浴中恒温振荡培养。
2.菌悬液的制备。在无菌条件下，在9.5ml的生理盐水中加入0.5ml活化好的菌种，稀释成10倍的稀释液，得到菌悬液。
2.2.2.3抑菌直径的测定
滤纸片的制备及处理：将定性滤纸对折2～3次，用打孔器制备出6mm的圆片，放入离心管中密封，在121℃的高压灭菌锅中干热灭菌20min，然后放于置于烘箱中烘干备用。
在无菌环境下，用灭菌镊子取烘干后的灭菌滤纸圆片放到香辛料提取物中浸泡2h，以无菌水浸过的滤纸片做空白。滤纸片经充分浸泡后取出晾干，备用。
在无菌环境下，在灭好菌的培养皿中倒入固体培养基，待其完全冷却凝固后，倒置放于无菌操作台中。要用时，在酒精灯周围分别移取各菌悬液0.1mL于培养基中，用涂布器涂布均匀。
以无菌操作将浸泡过香辛料提取物的四种不同的滤纸片和一个空白滤纸片贴在一个平板上，之间间隔一定距离，每种菌做三个平行。倒置于恒温培养箱中，在适宜温度下培养24h。观察测量抑菌圈直径大小。
2.2.3香辛料抑制作用实验
在无菌操作台中用天平秤取10g猪肉40份。
在5份猪肉上滴上香果的提取物50mg，揉搓10～20min，分别放入无菌均质袋中，编号0d，1d，2d，3d，4d；在5份猪肉上滴上香叶的提取物50mg，揉搓10～20min，分别放入无菌均质袋中，编号0d，1d，2d，3d，4d；在5份猪肉上滴上香果和香叶的提取物各25mg，揉搓10～20min，分别放入无菌均质袋中，编号0d，1d，2d，3d，4d；另将5份不加任何提取物的猪肉做空白，对比，编号0d，1d，2d，3d，4d。
先在0d的无菌均质袋中倒入90ml生理盐水，在拍打机中拍打直到猪肉拍烂。用移液枪移取菌液做菌落计数法。其余的无菌均质袋放入25℃恒温培养箱培养，每隔24h测定一次。
在5份猪肉上滴上香果的提取物50mg，揉搓10～20min，分别放入无菌均质袋中，编号0d，2d，4d，5d，6d；在5份猪肉上滴上香叶的提取物50mg，揉搓10～20min，分别放入无菌均质袋中，编号0d，2d，4d，5d，6d；在5份猪肉上滴上香果和香叶的提取物各25mg，揉搓10～20min，分别放入无菌均质袋中，编号0d，2d，4d，5d，6d；另将5份不加任何提取物的猪肉做空白，对比，编号0d，2d，4d，5d，6d。
先在0d的无菌均质袋中倒入90ml生理盐水，在拍打机中拍打直到猪肉拍烂。用移液枪移取菌液做菌落计数法。其余的无菌均质袋放入4℃冰箱中培养，每隔48h测定一次。
3实验结果
3.1香辛料提取物在纯培养环境中的抑菌效果
各种香辛料对微生物都有一定的抑制作用，其中香果香叶混合提取物抑菌效果最好，香果抑菌效果其次，香叶抑菌效果最差(如表1所示)。
表1香辛料提取物抑菌效果(抑菌圈直径mm)
3.2香辛料提取物对猪肉中微生物的抑制作用
3.2.1香果对猪肉中微生物的抑制作用
3.2.1.1 25℃时香果对猪肉中微生物的抑制效果：如表2、图1所示。
表2香果的菌落总数(个/mL)
根据图1，25℃时香果处理的猪肉比纯猪肉中生长的菌落总数要少，说明香果对猪肉中微生物有抑制作用。
3.2.1.2 4℃时香果对猪肉中微生物的抑制效果，如表3、图2所示。
表3香果的菌落总数(个/mL)
根据图2，4℃时香果处理的猪肉比纯猪肉中生长的菌落总数要少，说明香果对猪肉中微生物有抑制作用。
3.2.2香叶对猪肉中微生物的抑制作用
3.2.2.1 25℃时香叶对猪肉中微生物的抑制效果，如表4、图3所示。
表4香叶的菌落总数(个/mL)
根据图3，25℃时香叶处理的猪肉比纯猪肉中生长的菌落总数要少，说明香叶对猪肉中微生物有抑制作用。
3.2.2.2 4℃时香叶对猪肉中微生物的抑制效果，如表5、图4所示。
表5香叶的菌落总数(个/mL)
根据图4，4℃时香叶处理的猪肉比纯猪肉中生长的菌落总数要少，说明香叶对猪肉中微生物有抑制作用。
3.2.3香果香叶混合对猪肉中微生物的抑制作用
3.2.3.1 25℃时香果香叶混合队猪肉中微生物的抑制效果，如表6、图5所示。
表6香果香叶混合的菌落总数(个/mL)
根据图5，25℃时香果香叶混合处理的猪肉比纯猪肉中生长的菌落总数要少，说明香果香叶混合对猪肉中微生物有抑制作用。
3.2.3.2 4℃时香果香叶混合对猪肉中微生物的抑制效果，如表7、图6所示。
表7香果香叶混合的菌落总数(个/mL)
根据图6，4℃时香果香叶混合处理的猪肉比纯猪肉中生长的菌落总数要少，说明香果香叶混合对猪肉中微生物有抑制作用。
3.3总结
3.3.1 25℃各种香料及混合对猪肉中微生物的抑制效果，如图7所示。
根据图7，在25℃时香叶处理的猪肉中生长的菌落总数较多，香果次之，香果香叶混合最少，而未任何处理的猪肉中生长的菌落总数作对。说明香果香叶混合对猪肉中微生物的抑制效果最好，香果次之，香叶最差。
3.3.2 4℃各种香料及混合对猪肉中微生物的抑制效果，如图8所示。
根据图8，在4℃时香叶处理的猪肉中生长的菌落总数较多，香果次之，香果香叶混合最少，而未任何处理的猪肉中生长的菌落总数作对。说明香果香叶混合对猪肉中微生物的抑制效果最好，香果次之，香叶最差。
3.4分析
由以上图表可以看出，香辛料提取物都对猪肉中的微生物有抑制作用。以纯猪肉做空白，香果和香叶混合处理的猪肉，微生物的生长得到较好抑制；香果的抑制效果次之；香叶的抑制效果最差。在4℃下香辛料提取物的抑制效果要比在25℃下的抑制效果要好，微生物生长更缓慢，有更好地抑制效果。
香果和香叶混合对猪肉中微生物的抑制效果最好，是协同增效的作用。香果和香叶中两种或两种以上的成分对猪肉中的微生物有协同增效作用，所以抑菌效果更好。
4结论
由上述实验可以得知：香果、香叶对猪肉中的微生物都有较好的抑菌效果。说明香辛料提取物能够有效地防止食品储藏过程中微生物的生长。把香辛料作为天然防腐剂添加到食品中去，不仅能够赋予食物特殊的香味，还能有效延长食品的保存期限。
香果比香叶的抑菌作用要好，两者混合的抑菌作用最好。
在不同温度下，香果、香叶和混合都有抑菌作用，在4℃下的抑制作用比在25℃下的抑制作用还要好。
Claims (5)
1.一种以香果、香叶为原料制备的香辛料，其特征在于：是通过以下方法制备得到的：
(1)粉碎：取香果和香叶，分别用粉碎机粉碎至颗粒直径为0.1mm；
(2)取上述粉碎完的香果和香叶，分别置于蒸馏瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10，在60℃水浴条件下浸提5小时；
(3)抽滤：将浸提液抽滤后得到滤液；
(4)浓缩：蒸发浓缩，得到浓缩浸膏，即分别得到香果提取物、香叶提取物；将香果提取物与香叶提取物按质量比1:1的比例混合，即得。
2.权利要求1所述的香辛料的制备方法，其特征在于：步骤如下：
(1)粉碎：取香果和香叶，分别用粉碎机粉碎至颗粒直径为0.1mm；
(2)取上述粉碎完的香果和香叶，分别置于蒸馏瓶中，加入乙酸乙酯，料液比1:10，在60℃水浴条件下浸提5小时；
(3)抽滤：将浸提液抽滤后得到滤液；
(4)浓缩：蒸发浓缩，得到浓缩浸膏，即分别得到香果提取物、香叶提取物；将香果提取物与香叶提取物按质量比1:1的比例混合，即得。
3.权利要求1所述的香辛料在抑制微生物中的应用，其特征在于：所述微生物选自单增李斯特菌，耶尔森氏菌，绵羊李斯特菌。
4.权利要求1所述的香辛料在制备抑制微生物的制剂中的应用，其特征在于：所述微生物选自单增李斯特菌，耶尔森氏菌，绵羊李斯特菌。
5.权利要求1所述的香辛料在作为或制备猪肉防腐剂中的应用。
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| CN107637824A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-01-30 | 江苏省农业科学院 | 一种抑制水产品中单增李斯特菌的复合香辛料 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101507486A (zh) * | 2008-02-13 | 2009-08-19 | 黄启强 | 复合香辛调味料及其生产方法与工艺 |
| CN106070536A (zh) * | 2016-06-15 | 2016-11-09 | 徐州工程学院 | 以香果、香叶为原料制备的香辛料及其在抑制单增李斯特菌中的应用 |
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