CN106063790A - 连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物在制备抗衰老药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物在制备抗衰老药物中的新应用。试验证明，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物抗衰老的效果显著，见效快、毒副作用小、是一种安全、高效、稳定、制备工艺简单的抗衰老药物，适于工业化生产，易于推广。本发明为抗衰老及由于衰老引起的并发症提供了一种新的药物来源。

Description

连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物在制备抗衰老药物中的应 用

技术领域

本发明涉及医药领域，涉及一种抗衰老的药物或保健食品，特别涉及一种中药连翘及连翘叶提取成分在抗衰老药物或保健食品中的应用。

背景技术

随着世界人口老龄化速度的加快，人口老龄化己成为世界难题。脑是人体中最复杂、最精密、对老化反应最敏感的器官，脑老化引起的智能低下及其进一步发展形成的痴呆，给家庭和社会带来了一系列严重的问题和负担，因此，脑老化问题日益引起人们的广泛关注。寻找延缓脑老化的有效药物和探讨其防治机理具有重要的现实意义。脑老化是脑在生长、发育、成熟之后走向衰老过程中而表现的生物老化的正常生理现象，其最突出的临床表现是智能老化，其核心症状是记忆和学习能力下降，其进一步发展可形成老年性痴呆。脑老化的形成主要与遗传因素、氧化损伤、神经细胞凋亡、免疫系统异常、脑组织缺血缺氧等因素关系密切。目前对脑老化尚无明确的防治药物。

中医认为，脑老化属中医的“呆病”、“文痴”、“痴呆”、“健忘”等范畴。其病位在脑，与心肝脾肾功能失调关系密切，尤其是肾。其发生主要是由于年迈体弱，脏腑虚衰，而渐使脑髓亏虚、气血不足、痰凝血癖，终致脑失所养、神机失用，出现渐进性善忘、呆傻愚笨以及性情改变等症状而发病。随着世界人口老龄化速度的加快，人口老龄化己成为世界难题。脑是人体中最复杂、最精密、对老化反应最敏感的器官，脑老化引起的智能低下及其进一步发展形成的痴呆，给家庭和社会带来了一系列严重的问题和负担，因此，脑老化问题日益引起人们的广泛关注。

寻找延缓脑老化的有效药物和探讨其防治机理具有重要的现实意义。

脑老化是脑在生长、发育、成熟之后走向衰老过程中而表现的生物老化的正常生理现象，其最突出的临床表现是智能老化，其核心症状是记忆和学习能力下降，其进一步发展可形成老年性痴呆。脑老化的形成主要与遗传因素、氧化损伤、神经细胞凋亡、免疫系统异常、脑组织缺血缺氧等因素关系密切。目前对脑老化尚无明确的防治药物。

中医认为，脑老化属中医的“呆病”、“文痴”、“痴呆”、“健忘”等范畴。其病位在脑，与心肝脾肾功能失调关系密切，尤其是肾。其发生主要是由于年迈体弱，脏腑虚衰，而渐使脑髓亏虚、气血不足、痰凝血癖，终致脑失所养、神机失用，出现渐进性善忘、呆傻愚笨以及性情改变等症状而发病。

连翘是中药临床常用传统药物之一，应用广泛，用量巨大，它具有清热"解毒"消肿散结"清除自由基的功能，临床上常与其他的中草药制成配方，用于抗衰老。发明者经过艰苦探索，制备提取了其中活性单体化合物连翘苷，并经化学合成，制备了相应的衍生物，进行了一系列的药理活性研究，发现连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物具有抗衰老功能活性，为患者开辟了新的治疗途经。

连翘苷(phillyrin)

连翘脂素((+)-phillygenin)

本发明人通过大量的现代科学研究，采用先进的分离纯化技术从连翘及连翘叶中提取抗衰老的有效成分连翘苷，并经进一步研究合成制备了连翘苷衍生物。可以为患者提供一种高效低毒的药物。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述现有抗衰老药物或保健品存在的技术问题，提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物(即连翘苷/连翘脂素)抗衰老的性能和功效，并提供连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物新的药用用途，即在抗衰老的药物或保健食品中的新应用。

为实现上述目的，本发明一方面提供一种连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物在制备抗衰老药物或保健品中的应用。

在筛选具有抗衰老作用的天然活性成分的过程中，发明人发现连翘的化学成分中连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物具有强烈的抗衰老作用。

其中，所述药物或保健品由连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷/连翘脂素组合物和药学上可接受的载体组成。

特别是，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。

特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(33-Hydroxyphillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(9-Hydroxy phillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(33,34-Methylenedioxyphillygenin-8-O-β-D-glucuronide)、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯((2R,3R,4R,5S)-methyl6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetra hydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸钠(sodium(2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸钾(potassium(2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylate)、连翘脂素葡萄糖醛酸((2R,3R,4R,5S)-6-(5-((1R,4S)-4-(3,4-dimethoxyphenyl)hexahydrofuro[3,4-c]furan-1-yl)-2-methoxyphenoxy)-3,4,5-trihydroxytetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid)；优选为33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。

特别是，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比为2～98：2～98；优选为2-10:90-98；进一步优选为80:20或20:80，进一步优选为90:10或10:90，更进一步优选为98:2或2:98；再进一步优选为98:2。

其中，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量为1％～98％；优选为30～80％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量为1％～98％；优选为30～80％。

特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》(Handbook ofPharmaceutical excipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑；AmericanPharmaceutical Association出版，Washington and The Pharmaceutical Press，London，1994)等工具书中找到。

尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；防腐剂、矫味剂、香料等；

其中，所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂形式存在。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷与连翘脂素组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

本发明另一方面提供一种抗衰老药物或保健品，该药物或保健品含有连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素的组合物。

其中，所述连翘苷衍生物选择连翘脂素葡萄糖醛酸衍生物。

特别是，所述连翘苷衍生物包括33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸；优选为33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠或连翘脂素葡萄糖醛酸钾。

其中，所述连翘苷与连翘脂素组合物中连翘苷与连翘脂素的重量份配比为2～98：2～98；优选为2-10:90-98；进一步优选为80:20或20:80，进一步优选为90:10或10:90，更进一步优选为98:2或2:98；再进一步优选为98:2。

特别是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量≥1％，优选为≥30％，进一步优选为≥60％，更进一步优选为≥80％，再更进一步优选为≥98％。

尤其是，所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％，优选为1％～98％；优选为30～80％，更进一步优选为60％；连翘苷与连翘脂素的组合物含量≥1％，优选为1％～98％；优选为30～80％，更进一步优选为60％。

特别是，所述连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物的重量与所述药物或保健品的总重量之比为0.01-10：100，优选为0.1～10：100，进一步优选为1～10：100。

其中，所述连翘苷/连翘脂素组合物以连翘苷、连翘脂素单体组成、或采用溶剂加热提取方法制备而成的连翘脂素-连翘苷提取组合物，或连翘脂素和连翘苷与环糊精或环糊精的衍生物组合而成连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物。

特别是，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物选择连翘脂素和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或连翘脂素和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物经物理、化学方法处理形成的复合物。

其中，所述连翘脂素-连翘苷-环糊精组合物中连翘苷和连翘脂素重量与环糊精或环糊精的衍生物的重量之比为1：1-50。

特别是，所述环糊精为α-或β-、γ-环糊精；所述环糊精衍生物为羟乙基-环糊精、2,6-二甲基-环糊精、2,3,6-三甲基-环糊精、2,6-二乙基-环糊精、2,3,6-三乙基-环糊精、麦芽糖基-环糊精或磺丁醚β-环糊精、对甲基苯磺酰氯(p-TsCl)取代的β-环糊精、6-位取代的β-CD对甲基苯磺酸酯(β-环糊精-6-OTs)、2-氧羟丙基-β-环糊精、2-位单取代的对甲基苯磺酸酯(β-环糊精-2-OTs)、β-环糊精对甲基苯磺酸酯(Tosyl-β-CD)、β-环糊精的星形大分子PCL-(Tos)7-β-CD。

特别是，所述药物或保健品中还包括何首乌提取物、黄芪提取物、人参提取物、三七提取物、剌五加提取物、灵芝提取物、枸杞子提取物、红景天提取物、绞股蓝提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、蜂王浆、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

1、本发明对已知化合物连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物发掘了新的药用价值，将其用于抗衰老，并可制备成抗衰老的药物或保健食品，从而为连翘及连翘叶药材的应用开拓了一个新的领域。

2、本发明的系列试验研究证明连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物具有显著的抗衰老功效。

3、本发明的连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物药理作用强，用于抗衰老的功效显著，见效快、毒副作用小、安全性好，能够长期服用，具有良好的药用前景。

4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种剂型，且服量小，使用方便，因此易于推广。

5、本发明既可采用单一成分的连翘苷、连翘苷衍生物活性成分、连翘苷与连翘脂素组合物制备抗衰老的药物，又可采用连翘苷、连翘苷衍生物与其它活性成分(例如与何首乌提取物、黄芪提取物、人参提取物、三七提取物、剌五加提取物、灵芝提取物、枸杞子提取物、红景天提取物、绞股蓝提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、蜂王浆、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。)共同组方，制备治疗抗衰老的复方药物。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步描述本发明所述配方的有益效果，这些实施例包括了本发明的连翘苷、连翘苷衍生物的胶囊、片剂、软胶囊剂的药效学试验。这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

本发明中所述连翘苷衍生物33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷与专利申请(申请号：201510319303.4，优先权号：201510164294.6)中所述连翘苷衍生物相同；连翘脂素葡萄糖醛酸甲酯、连翘脂素葡萄糖醛酸钠、连翘脂素葡萄糖醛酸钾、连翘脂素葡萄糖醛酸与专利申请(申请号：201510320579.4，优先权号：201410825547.5)中的相同。

实施例1连翘苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷和淀粉混匀后制成颗粒，再加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例2连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

连翘苷(纯度90％) 200g

淀粉 1000g

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例3连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

连翘苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将连翘苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例4连翘苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、何首乌提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，再加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例5连翘苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、枸杞提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例6连翘苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将连翘苷、绞股蓝提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例7连翘苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取连翘苷、剌五加提取物、黄芪提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例8 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例9 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％) 200g

淀粉 1000g

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例10 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度90％) 500g

淀粉 1000g

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例11 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、黄芪提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例12 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例13 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例14 33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、黄芪提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例15 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例16 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度97％) 200g

淀粉 1000g

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例17 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例18 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、黄芪提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例19 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例20 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例21 9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、人参提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例22 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例23 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度97％) 200g

淀粉 1000g

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例24 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(纯度98％) 500g

淀粉 1000g

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例25 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷片剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、人参提取物、维生素C和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。

实施例26 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷胶囊剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、三七提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例27 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例28 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷颗粒剂

1、按照如下配比准备原料

2、将33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。

实施例29 33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷口服液

1、按照如下配比准备原料

2、取33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷、剌五加提取物、人参提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆，最终加去离子水至100ml，即得。

实施例30连翘苷和连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例31连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 100g

微晶纤维素 10000g

2、取连翘苷98g、连翘脂素2g与微晶纤维素混合均匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例32连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

连翘苷/连翘脂素组合物(两者重量比为98:2) 250g

淀粉 2500g

2、取连翘苷245g、连翘脂素5g与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例33-36连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

实施例33-36中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与淀粉混合均匀后装胶囊，各制成10000粒胶囊。

实施例:37-40连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

实施例37-30中，连翘苷/连翘脂素组合物分别按下表的重量比与微晶纤维素混合均匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例41连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、称取连翘苷490g、连翘脂素10g与灵芝提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。

实施例42连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

2、取连翘苷245g、连翘脂素5与枸杞子提取物、灵芝提取物粉末混合均匀，再与微晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例43连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

2、连翘苷245g、连翘脂素5g与绞股蓝提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

实施例44连翘苷/连翘脂素组合物片剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的片剂：

2、取连翘苷490g、连翘脂素10g与葡萄子提取物粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压，制成10000片。

实施例45连翘苷/连翘脂素组合物颗粒剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的颗粒剂：

2、取连翘苷900g、连翘脂素100g与上述提取物(人参、三七)粉末混合均匀，再与微晶纤维素混合均匀后制成颗粒装袋，制成10000袋。

实施例46连翘苷/连翘脂素组合物胶囊剂制备

1、按照如下配比制备连翘苷/连翘脂素组合物的胶囊剂：

2、连翘苷1880g、连翘脂素120g与上述提取物(人参、何首乌、葡萄子)粉末混合均匀，再与淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。

试验例1.连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对自然衰老小鼠的影响

1试验材料

1.1药品与试剂

连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.5％，并用中国药品生物制品含量测定用连翘苷对照品标定和确认其含量为99.5％。批号：20130303。

33-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物A)，(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.5％。

9-羟基-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物B)，(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130302。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为99.2％。

33，34-亚甲基二氧-连翘脂素葡萄糖醛酸苷(连翘苷衍生物C)，(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301。经高效液相色谱两种检测器紫外检测器和蒸发光散射检测器面积归一化法测定，其纯度为98.7％。

连翘苷/连翘脂素组合物A，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为98：2。

连翘苷/连翘脂素组合物B，连翘苷(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130303；连翘脂素(含量＞98％)，白色粉末，大连富生天然药物开发有限公司生产，批号：20130301；连翘苷与连翘脂素的重量之比为90：10。

阳性对照药：脑复康(Naofukang，NFK)，金陵药业合肥利民药厂，批号:130805

1.2实验动物

老龄前期小鼠(12月龄)，体重40.5土3.0g，雌雄各半，购自大连医科大学实验动物中心，质量合格证号：SCXK(13)2012-0008。

2试验方法：

2.1剂量选择

根据受试物的人体推荐用量及样品的最大可能灌胃剂量设置3个连翘苷实验组，即连翘苷低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；

连翘苷衍生物A、B、C分别设置3个连翘苷衍生物实验组，即连翘苷衍生物A低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷衍生物B低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷衍生物C低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；

连翘苷/连翘脂素组合物A、B分别设置3个连翘苷/连翘脂素实验组，即连翘苷/连翘脂素A低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷/连翘脂素B低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg。

另设一个空白对照组和阳性药物对照组(脑复康，20mg/kg)。

2.2分组与给药

取健康老龄前期小鼠(12月龄)200只，各组雌雄各半，随机分为20组，每组10只，即空白对照组、连翘苷药组(低，中，高三个剂量组)、连翘苷衍生物A、B、C(低，中，高三个剂量组)、连翘苷/连翘脂素组合物A、B(低，中，高三个剂量组)、阳性药对照组(脑复康，20mg/kg)。

空白对照组：生理盐水(NS)灌胃给药，每天1次，连续给药30天；连翘苷组、连翘苷衍生物A、B、C组、连翘苷/连翘脂素组合物A、B分别灌胃给药相应剂量的药物，每天灌胃给药1次，连续给药30天；阳性药对照组:给予脑复康灌胃给药20mg/kg，每天1次，连续给药30天。

末次给药后第二天，对各实验组小鼠进行跳台训练，将铜栅通36V电流，把小鼠放在跳台装置的安全橡皮台上，小鼠跳至铜栅时即受到电击，为错误反应，其正确反应是逃回安全的橡皮台上。如此进行训练，使各组每只小鼠均有3次由橡皮台跳入铜栅遭电击又逃回的经历。24h后进行检测，铜栅通电，将各组小鼠放在橡皮台上，记录发生错误反应的潜伏期及受电击后逃回安全台的潜伏期，以评价连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对老龄小鼠学习记忆能力的影响，试验结果如表1所示。

3实验结果

表1连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素对老龄小鼠学习记忆的影响(x±s n＝10)

通过跳台法实验可知，空白对照组老龄小鼠学习记忆能力显著降低，而与老龄模型对照组相比，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物各给药防治组老龄小鼠学习记忆功能得到显著改善。

二、连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物对半乳糖小鼠衰老的影响

1试验材料

1.1药品与试剂

试验药物连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素；阳性对照药物与试验例1相同。

D-半乳糖：南京建成生物工程研究所，批号：130501

1.2实验动物

昆明种小鼠(3月龄)，体重19.5±2.1g，雌雄各半，购自大连医科大学实验动物中心，质量合格证号：SCXK(13)2013-002。

2实验方法

2.1剂量选择

根据受试物的人体推荐用量及样品的最大可能灌胃剂量设置3个连翘苷实验组，即连翘苷低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；

连翘苷衍生物A、B、C分别设置3个连翘苷衍生物实验组，即连翘苷衍生物A低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷衍生物B低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷衍生物C低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；

连翘苷/连翘脂素组合物A、B分别设置3个连翘苷/连翘脂素实验组，即连翘苷/连翘脂素A低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg；连翘苷/连翘脂素B低、中、高剂量组，剂量分别为3、6、12mg/kg。

另设一个空白对照组和阳性药物对照组(脑复康，20mg/kg)。

2.2分组与给药

210只昆明种小鼠，被分成21组，分别是衰老模型组，正常对照组和连翘苷低、中、高剂量组，连翘苷衍生物A低、中、高剂量组，连翘苷衍生物B低、中、高剂量组，连翘苷衍生物C低、中、高剂量组，连翘苷/连翘脂素组合物A低、中、高剂量组，连翘苷/连翘脂素组合物B低、中、高剂量组，阳性药物对照组。

每组10只，雌雄各半，温度控制在(22±2)℃，12h光照，自由饮食。其中除正常对照组每天注射等体积生理盐水外，其他各组每天于小鼠颈背部皮下组织注射200mg/kg的D-半乳糖。衰老模型组和正常对照组灌胃给予蒸馏水，其他各给药组按照“2.1剂量选择”确定的剂量给药，每次灌胃前禁食2h。5周后将实验小鼠处死，分离出大脑，将大脑冰冻起来，用预冷的生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和结缔组织，滤纸拭干称量。用剪刀剪碎，按1：9加入预冷的生理盐水，使用超声波细胞粉碎机将组织打碎，制得10％的组织匀浆。用于生化指标的测定。

2.3测定指标及方法

2.3.1丙二醛(MDA)活性的测定

采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定。将测试样品置于95℃水浴40min，取出后流水冷却，然后3500r/min离心10min，取上清液，532nm，1cm光径，蒸馏水调零，测其吸光值。

2.3.2超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定

本指标采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力。将测试样品充分混匀后置于37℃恒温水浴40min，加入显色剂后，室温放置10min，于波长550nm处，1cm光径比色。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，即可计算出被测样品中的SOD活力。2.3.3谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的测定

谷光甘肽过氧化物酶GSH-PX可以促进过氧化氢(H₂O₂)与谷光甘肽(GSH)反应生成H₂O及氧化型谷光甘肽(GSSG)。按试剂盒说明书配好试剂后混匀，首先进行酶促反应，3500r/min，离心10min，取上清液1mL作显色反应，加入测试样品及GSH标准品溶剂应用液后混匀，15min后，412nm处1cm光径比色。

2.3.4过氧化氢酶(CAT)活性的测定

过氧化氢酶(CAT)分解H₂O₂反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H₂O₂与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物。按试剂盒说明书添加好各试剂后混匀，0.5cm光径，405nm处测定CAT生成量。

2.4数据处理

小鼠每天注射及灌胃给药5周后，按各试剂盒说明用分光光度计检测吸光度值，以测定小鼠大脑中SOD、GSH-PX、CAT活力和MDA含量，试验测定结果见表2。各项数据均采用SAS6.12软件分析，所有数据均以(X±SD)表示，显著性为P＝0.05水平。

3试验结果与分析

表2连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素对D-半乳糖致衰老模型小鼠大脑中SOD、GSH-PX、CAT活力及MDA含量的影响

D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型因其衰老变化明显，模型稳定，在抗衰老研究中广泛应用。一般认为，D-半乳糖引起的代谢紊乱使机体过氧化反应增强是其致老化反应的重要因素。给动物连续注射D-半乳糖后，因其代谢产物半乳糖醇不能进一步代谢而堆积在细胞内，导致细胞肿胀，致使动物组织细胞出现衰老的退行性变化以及功能的改变。同时D-半乳糖在体内氧化产生大量自由基超过机体的清除能力，引发脂质过氧化的链式反应，产生大量的脂质过氧化物丙二醛，导致细胞膜损伤。本试验连续5周给小鼠颈背部皮下连续注射D-半乳糖后，衰老模型组大脑中超氧化物岐化酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性比空白对照组明显下降；而丙二醛比空白对照组明显升高，说明衰老模型建立成功。

连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物各组脑内的超氧化物岐化酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性均比衰老模型组有所增高，连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物各组脑内的丙二醛比衰老模型组有所降低，而且，高剂量组趋近于正常水平。说明连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷/连翘脂素组合物能明显改善D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型的生理指标，从而证明其具有一定的抗衰老作用。

Claims (10)

1.连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素组合物在制备用于抗衰老的药物或保健品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征是所述药物由连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素组合物和药学上可接受的载体组成。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述药物以片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂形式存在。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是所述的连翘苷、连翘苷衍生物的含量≥1％；连翘苷与连翘脂素的组合物的含量≥1％。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征是所述的连翘苷、连翘苷衍生物的纯度为1％～98％；连翘苷与连翘脂素的组合物的含量为1％～98％。

6.一种用于抗衰老的药物或保健品，其特征是含有连翘苷、连翘苷衍生物或连翘苷与连翘脂素的组合物。

7.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述连翘苷、连翘苷衍生物的纯度为≥1％；连翘苷与连翘脂素组合物的含量为≥1％。

8.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述连翘苷、连翘苷衍生物、连翘苷与连翘脂素的组合物的重量与所述药物或保健品的总重量之比为0.01-10：100。

9.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是所述连翘苷与连翘脂素组合物选择连翘脂素和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物相混合而成的混合物，或连翘脂素和连翘苷与α-、β-或γ-环糊精或其衍生物经物理、化学方法处理形成的复合物。

10.根据权利要求6所述的药物或保健品，其特征是还包括何首乌提取物、黄芪提取物、人参提取物、三七提取物、剌五加提取物、灵芝提取物、枸杞子提取物、红景天提取物、绞股蓝提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、蜂王浆、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。