CN106039766B - 一种分离藤黄酸差向异构体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种分离藤黄酸差向异构体的方法。采用的技术方案是:将藤黄酸溶于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,使用C8硅胶色谱柱,以有机溶剂和水的混合溶液为流动相,控制流速0.8~1.0ml/min,柱温25~35℃下进行分离。所述的有机溶剂是甲醇或乙腈。本发明使用普通的C8色谱柱,通过对流动相及其配比的筛选,可快速分离藤黄酸C‑2位的差向异构体,仅需17.290min,即可快速分离藤黄酸的R、S构型,两者的分离度可达4.00左右,且纯度达98%以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种分离藤黄酸差向异构体的方法,具体涉及用C8硅胶色谱柱分离藤黄酸C-2位R构型及S构型的方法。
背景要求
藤黄酸(gambogic acid,GA)是藤黄的主要活性成分,是一种从藤黄科植物提取出来的橙黄色到棕褐色的树脂。其可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,在体内外都展现出了广泛的较强的抗肿瘤作用,而对正常的造血系统和免疫功能无明显抑制效果。
藤黄酸的C-2位存在一对差向异构体,即R构型(结构式如A)和S构型(结构式如B)。化合物空间构型对其生物活性的影响是药物的重要研究领域,在药物研究中手性药物异构体的质量控制至关重要。差向异构体可能存在多种理化性质及作用效果的不同,如甘草酸的C-18位存在一对差向异构体,分别为α-甘草酸和β-甘草酸,两者除理化性质的差异外,药理作用、不良反应和临床疗效也存在相当的差异性。故考虑藤黄酸的R、S构型可能存在不同的药效或者优于藤黄酸的药效,所以快速分离检测藤黄酸的差向异构体,具有重要的意义,可便于对其进行进一步的药理和临床研究,为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物创造条件。
目前,有文献报道,可通过高效逆流色谱来分离藤黄酸C-2位的差向异构体,耗时长,仅第一次循环就需要150min,两物质分开时需要800min,纯度分别为97.2%、97.5%,且需要使用高速逆流色谱仪,设备要求高。张俊艳等通过高效液相,采用价格较贵Sun Fire(Waters)C8(2.1mm×150mm,3.5μm),鉴定藤黄酸C-2位的差向异构体。此方法出峰时间在36min左右,耗时较长。故寻找一种快速分离藤黄酸R、S构型的方法迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是克服已有的分离藤黄酸R、S构型方法,成本高、耗时长等缺点,提供一种使用普通C8硅胶色谱柱的快速分离藤黄酸R、S构型的方法,且得到目标物的纯度高达98%以上。
本发明采用的技术方案是:一种分离藤黄酸差向异构体的方法,方法如下:将藤黄酸溶于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,使用C8硅胶色谱柱,以有机溶剂和水的混合溶液为流动相,控制流速0.8~1.0ml/min,柱温25~35℃下进行分离。
上述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法,所述的有机溶剂是甲醇或乙腈。优选的,所述的有机溶剂是乙腈。
上述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法,所述的流动相中,按体积比,有机溶剂:水=83-78:17-22。优选的,按体积比,有机溶剂:水=83:17。
本发明的有益效果是:本发明使用普通的C8硅胶色谱柱,通过对流动相及其配比的筛选,可快速分离藤黄酸C-2位的差向异构体,仅需17.290min即可快速分离藤黄酸的R、S构型,两者的分离度可达4.00左右,且纯度达98%以上。
附图说明
图1是实施例2中乙腈和水的配比为83:17时,对藤黄酸差向异构体的分离。
图2是实施例2中乙腈和水的配比为82:18时,对藤黄酸差向异构体的分离。
图3是实施例2中乙腈和水的配比为81:19时,对藤黄酸差向异构体的分离。
图4是实施例2中乙腈和水的配比为75:25时,对藤黄酸差向异构体的分离。
具体实施方式
实施例1 有机溶剂对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件:安捷伦高效液相色谱仪1200,色谱柱:C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm,5um);检测波长:360nm。
方法:将藤黄酸溶解于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,流动相如表1所示,控制流速1.0ml/min,柱温35℃下进行分离,结果如表1。
表1
由表1可见,以甲醇和水的混合溶液为流动相,R构型的出峰时间为35.236min,而以乙腈和水的混合溶液为流动相,R构型的出峰时间为23.702min,可见,以乙腈为流动相中的有机溶剂,分离速度快,因此本发明优选有机溶剂为乙腈。
实施例2 乙腈和水的配比对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件:安捷伦高效液相色谱仪1200,色谱柱:C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm,5um);检测波长:360nm。
方法:将藤黄酸溶解于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,流动相如表2所示,控制流速1.0ml/min,柱温35℃下进行分离,结果如表2和图1-图4。
表2
由表2和图1-4可见,固定柱温及流速不变时,改变流动相中乙腈与水的比例,藤黄酸R、S构型的出峰时间及分离度呈现一定的规律性。若是增大水的比例,R、S构型的出峰时间变长;若是增大乙腈的比例,R、S构型的出峰时间变短但两者不能分离开。在比例为83:17时,R、S构型的出峰时间最短且能达到完全分离(分离度>1.5)。所以,优选乙腈:水=83:17。
实施例3 流速对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件:安捷伦高效液相色谱仪1200,色谱柱:C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm,5um);检测波长:360nm。
方法:将藤黄酸溶解于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,流动相为按体积比,乙腈:水=83:17,如表3控制流速,柱温35℃下进行分离,结果如表3所示。
表3
由表3可见,固定柱温及流动相中乙腈与水的比例,改变流速,藤黄酸的R、S构型呈现一定的规律。高效液相的流速一般不超过1.0ml/min,随着流速的减小,出峰时间变长,所以优选流速为1.0ml/min。
实施例4 柱温对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件:安捷伦高效液相色谱仪1200,色谱柱:C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm,5um);检测波长:360nm。
方法:将藤黄酸溶解于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,流动相为按体积比,乙腈:水=83:17,控制流速1.0ml/min,如表4控制柱温进行分离,结果如表4所示。
表4
由表4可见,固定流速及流动相中乙腈与水的比例不变时,改变柱温,藤黄酸R、S构型的出峰时间及分离度呈现一定的规律性。若是降低柱温,R、S构型的出峰时间变长,分离度R>1.5。若是增大柱温,R、S构型的出峰时间变短且分离度>1.5,但是色谱柱的最大耐受温度为40℃,故选择柱温为35℃。
Claims (1)
1.一种分离藤黄酸差向异构体的方法,其特征在于:方法如下:将藤黄酸溶于乙腈中,然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中,使用C8硅胶色谱柱,以乙腈和水的混合溶液为流动相,控制流速0.8 ~ 1.0 ml/min,柱温35℃下进行分离;所述的流动相中,按体积比,乙腈 : 水=83 : 17;所述的藤黄酸差向异构体为,藤黄酸C-2位的一对差向异构体,R构型和S构型。
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