CN106039766B - 一种分离藤黄酸差向异构体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种分离藤黄酸差向异构体的方法。采用的技术方案是：将藤黄酸溶于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，使用C8硅胶色谱柱，以有机溶剂和水的混合溶液为流动相，控制流速0.8～1.0ml/min，柱温25～35℃下进行分离。所述的有机溶剂是甲醇或乙腈。本发明使用普通的C8色谱柱，通过对流动相及其配比的筛选，可快速分离藤黄酸C‑2位的差向异构体，仅需17.290min，即可快速分离藤黄酸的R、S构型，两者的分离度可达4.00左右，且纯度达98％以上。

Description

一种分离藤黄酸差向异构体的方法
技术领域
本发明涉及一种分离藤黄酸差向异构体的方法，具体涉及用C8硅胶色谱柱分离藤黄酸C-2位R构型及S构型的方法。
背景要求
藤黄酸(gambogic acid，GA)是藤黄的主要活性成分，是一种从藤黄科植物提取出来的橙黄色到棕褐色的树脂。其可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，在体内外都展现出了广泛的较强的抗肿瘤作用，而对正常的造血系统和免疫功能无明显抑制效果。
藤黄酸的C-2位存在一对差向异构体，即R构型(结构式如A)和S构型(结构式如B)。化合物空间构型对其生物活性的影响是药物的重要研究领域，在药物研究中手性药物异构体的质量控制至关重要。差向异构体可能存在多种理化性质及作用效果的不同，如甘草酸的C-18位存在一对差向异构体，分别为α-甘草酸和β-甘草酸，两者除理化性质的差异外，药理作用、不良反应和临床疗效也存在相当的差异性。故考虑藤黄酸的R、S构型可能存在不同的药效或者优于藤黄酸的药效，所以快速分离检测藤黄酸的差向异构体，具有重要的意义，可便于对其进行进一步的药理和临床研究，为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物创造条件。
目前，有文献报道，可通过高效逆流色谱来分离藤黄酸C-2位的差向异构体，耗时长，仅第一次循环就需要150min，两物质分开时需要800min，纯度分别为97.2％、97.5％，且需要使用高速逆流色谱仪，设备要求高。张俊艳等通过高效液相，采用价格较贵Sun Fire(Waters)C8(2.1mm×150mm，3.5μm)，鉴定藤黄酸C-2位的差向异构体。此方法出峰时间在36min左右，耗时较长。故寻找一种快速分离藤黄酸R、S构型的方法迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是克服已有的分离藤黄酸R、S构型方法，成本高、耗时长等缺点，提供一种使用普通C8硅胶色谱柱的快速分离藤黄酸R、S构型的方法，且得到目标物的纯度高达98％以上。
本发明采用的技术方案是：一种分离藤黄酸差向异构体的方法，方法如下：将藤黄酸溶于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，使用C8硅胶色谱柱，以有机溶剂和水的混合溶液为流动相，控制流速0.8～1.0ml/min，柱温25～35℃下进行分离。
上述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，所述的有机溶剂是甲醇或乙腈。优选的，所述的有机溶剂是乙腈。
上述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，所述的流动相中，按体积比，有机溶剂:水＝83-78:17-22。优选的，按体积比，有机溶剂:水＝83:17。
本发明的有益效果是：本发明使用普通的C8硅胶色谱柱，通过对流动相及其配比的筛选，可快速分离藤黄酸C-2位的差向异构体，仅需17.290min即可快速分离藤黄酸的R、S构型，两者的分离度可达4.00左右，且纯度达98％以上。
附图说明
图1是实施例2中乙腈和水的配比为83:17时，对藤黄酸差向异构体的分离。
图2是实施例2中乙腈和水的配比为82:18时，对藤黄酸差向异构体的分离。
图3是实施例2中乙腈和水的配比为81:19时，对藤黄酸差向异构体的分离。
图4是实施例2中乙腈和水的配比为75:25时，对藤黄酸差向异构体的分离。
具体实施方式
实施例1 有机溶剂对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱：C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm，5um)；检测波长：360nm。
方法：将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，流动相如表1所示，控制流速1.0ml/min，柱温35℃下进行分离，结果如表1。
表1
由表1可见，以甲醇和水的混合溶液为流动相，R构型的出峰时间为35.236min，而以乙腈和水的混合溶液为流动相，R构型的出峰时间为23.702min，可见，以乙腈为流动相中的有机溶剂，分离速度快，因此本发明优选有机溶剂为乙腈。
实施例2 乙腈和水的配比对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱：C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm，5um)；检测波长：360nm。
方法：将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，流动相如表2所示，控制流速1.0ml/min，柱温35℃下进行分离，结果如表2和图1-图4。
表2
由表2和图1-4可见，固定柱温及流速不变时，改变流动相中乙腈与水的比例，藤黄酸R、S构型的出峰时间及分离度呈现一定的规律性。若是增大水的比例，R、S构型的出峰时间变长；若是增大乙腈的比例，R、S构型的出峰时间变短但两者不能分离开。在比例为83:17时，R、S构型的出峰时间最短且能达到完全分离(分离度>1.5)。所以，优选乙腈:水＝83:17。
实施例3 流速对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱：C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm，5um)；检测波长：360nm。
方法：将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，流动相为按体积比，乙腈:水＝83:17，如表3控制流速，柱温35℃下进行分离，结果如表3所示。
表3
由表3可见，固定柱温及流动相中乙腈与水的比例，改变流速，藤黄酸的R、S构型呈现一定的规律。高效液相的流速一般不超过1.0ml/min，随着流速的减小，出峰时间变长，所以优选流速为1.0ml/min。
实施例4 柱温对分离藤黄酸差向异构体的影响
仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱：C8硅胶色谱柱(250mm*4.6mm，5um)；检测波长：360nm。
方法：将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，流动相为按体积比，乙腈:水＝83:17，控制流速1.0ml/min，如表4控制柱温进行分离，结果如表4所示。
表4
由表4可见，固定流速及流动相中乙腈与水的比例不变时，改变柱温，藤黄酸R、S构型的出峰时间及分离度呈现一定的规律性。若是降低柱温，R、S构型的出峰时间变长，分离度R>1.5。若是增大柱温，R、S构型的出峰时间变短且分离度>1.5，但是色谱柱的最大耐受温度为40℃，故选择柱温为35℃。

Claims (1)

1.一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于：方法如下：将藤黄酸溶于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，使用C8硅胶色谱柱，以乙腈和水的混合溶液为流动相，控制流速0.8 ~ 1.0 ml/min，柱温35℃下进行分离；所述的流动相中，按体积比，乙腈 : 水=83 : 17；所述的藤黄酸差向异构体为，藤黄酸C-2位的一对差向异构体，R构型和S构型。
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