CN105651927A - 一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的rt-hplc检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的反相高效液相色谱检测方法。本发明公开了一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的RT-HPLC检测方法，包括下列步骤：配置分析溶液；色谱条件；上机测定。本发明能够有效的测定伐地昔布、帕瑞昔布溶液中各种相关杂质的存在，尤其实现了谱图中伐地昔布特征峰与伐地昔布同分异构体和间位伐地昔布特征峰的分离，以及帕瑞昔布特征峰与帕瑞昔布同分异构体和间位帕瑞昔布特征峰的分离。从而确保产品的质量可控。

Description

一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的RT-HPLC检测方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的反相高效液相色谱检测方法。

背景技术

在药物分析中所称的“有关物质(relatedsubstances)”是指在原料药生产过程中带入的起始原料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、贮藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。有关物质的种类与药物的合成路线和制剂工艺密切相关，药物在合成和制剂过程中的任何一个因素的改变都可能导致其有关物质的种类不同，因而有关物质的检测和控制过程相对复杂。有关物质的检测是控制药品质量的重要指标。

非甾体抗炎药通过抑制环氧合酶(COX)来发挥解热、抗炎和镇痛等作用，COX有两个亚型，分别为COX-1和COX-2。传统的非甾体抗炎药为非选择性COX抑制剂，对COX-1的抑制作用会导致血小板功能抑制、上消化道溃疡出血等不良反应。伐地昔布、帕瑞昔布、帕瑞昔布钠均为高选择性COX-2抑制剂，镇痛作用快速、强大，且不良反应较少，很适合患者围手术期的疼痛治疗，临床应用前景广泛。

伐地昔布(Valdecoxib)，帕瑞昔布(Parecoxib)结构式分别为：

伐地昔布、帕瑞昔布两者结构及合成路线均极为相似，帕瑞昔布有关物质为起始物料S、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I、J，伐地昔布有关物质为起始物料S、杂质A、B、C、D、F、G、H、I、J，仅缺少杂质E一种(见表1)。因此，帕瑞昔布有关物质的检测方法可以同时用于伐地昔布的有关物质检测。

表1

用注射用帕瑞昔布钠的进口药品注册标准JX20110120中提及的有关物质检测方法，对上述杂质进行检测(即下文的实施例4)，如附图4所示，谱图中，虽然杂质ABEHI等特征峰比较明显，但伐地昔布与伐地昔布同分异构体(C)、间位伐地昔布(D)的特征峰无法分离，帕瑞昔布与帕瑞昔布同分异构体(F)、间位帕瑞昔布(G)的特征峰亦无法分离。

因此，若能通过RT-HPLC方法检测并鉴定出溶液中CDFG的存在，对于伐地昔布、帕瑞昔布的质量控制具有重大现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测方法，以解决现有技术无法将伐地昔布特征峰与伐地昔布同分异构体和间位伐地昔布的特征峰分离，亦无法将帕瑞昔布特征峰与帕瑞昔布同分异构体和间位帕瑞昔布的特征峰分离的问题。

为解决的上述技术问题，本发明公开了一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的RT-HPLC检测方法，包括下列步骤：

b)配置分析溶液

用体积比1:1为甲醇-水或乙腈-水混合溶液溶解样品，制成分析溶液；

b)色谱条件

色谱柱为反相色谱柱，以磷酸盐溶液-有机相的混合液为流动相，所述的有机相为甲醇或乙腈；采用等度或梯度洗脱方法，流速为0.8-1.2ml/min；柱温为30-50℃，检测波长为210-220nm；

c)上机测定

取步骤a)制成的分析溶液5-40μl注入高效液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。

在一些实施例中，所述反相色谱柱的填充剂为苯基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶，优选为苯基硅烷键合硅胶。

在一些实施例中，所述反相色谱柱的规格如下：柱长介于100mm至300mm，色谱柱内径介于1mm至10mm，粒径介于1μm至10μm，优选为SUPELCOSILLC-DP250mmX4.6mm，5μm的苯基硅烷键合硅胶色谱柱。

在一些实施例中，所述磷酸盐溶液中的磷酸盐为磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾；优选为磷酸氢二钠。

在一些实施例中，所述磷酸盐溶液的浓度为0.001-0.05mol/L，pH3.0。

在一些实施例中，所述流动相为磷酸盐溶液-有机相，所述的磷酸盐溶液与水相的体积比为80:20～30:70，优选为60:40～40:60。

在一些实施例中，所述样品为帕瑞昔布及其盐或伐地昔布及其盐。

在一些实施例中，所述盐包括钙盐、钠盐、钾盐、镁盐、盐酸盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、醋酸盐、乙二酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、苯甲酸盐、枸橼酸盐、甲磺酸盐等药学可接受盐类。

本发明能够有效的测定伐地昔布、帕瑞昔布溶液中各种相关杂质的存在，尤其实现了谱图中伐地昔布特征峰与伐地昔布同分异构体和间位伐地昔布特征峰的分离，以及帕瑞昔布特征峰与帕瑞昔布同分异构体和间位帕瑞昔布特征峰的分离。同时本发明的方法还可用于帕瑞昔布、伐地昔布两者盐形式的有关物质检测。

上述改进能够进一步确保产品的质量可控。

附图说明

图1、本发明方法等速洗涤流动相比例为52:48的色谱图；

图2、本发明方法等速洗涤流动相比例为55:45的色谱图；

图3、本发明方法流动相按梯度洗脱的色谱图；

图4、进口药品注册标准JX20110120色谱条件下分离色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例一

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent1260高效液相色谱系统及工作站；

色谱柱：苯基柱(SUPELCOSILLC-DP250*4.6mm，5μm)；

配制0.01mol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调节pH值至3.0为水相，流动相中水相-甲醇的比例为52:48，设置流速为1.0ml/min，检测波长为215nm，柱温为40℃。

(2)实验步骤

分别取帕瑞昔布钠、间位帕瑞昔布(G)、帕瑞昔布同分异构体(F)、伐地昔布、间位伐地昔布(D)、伐地昔布同分异构体(C)、水解杂质(A)、二取代杂质(B)、二聚体杂质(H)、乙酰化杂质(E)、伐地昔布酸乙酯(J)、起始物料S、S同分异构体(I)适量，用甲醇-水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含伐地昔布、帕瑞昔布、起始物料S各0.2mg及其他杂质各2μg的混合溶液，作为分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见附图1，可以看出在该条件下伐地昔布、帕瑞昔布主峰可以和其他杂质峰完全分离。

实施例二

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent1260高效液相色谱系统及工作站；

色谱柱：苯基柱(SUPELCOSILLC-DP250*4.6mm，5μm)；

配制0.01mol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调节pH值至3.0为水相，流动相中水相-甲醇的比例为55:45，设置流速为1.0ml/min，检测波长为215nm，柱温为40℃。

(2)实验步骤

分别取帕瑞昔布钠、间位帕瑞昔布(G)、帕瑞昔布同分异构体(F)、伐地昔布、间位伐地昔布(D)、伐地昔布同分异构体(C)、水解杂质(A)、二取代杂质(B)、二聚体杂质(H)、乙酰化杂质(E)、伐地昔布酸乙酯(J)、起始物料S、S同分异构体(I)适量，用甲醇-水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含伐地昔布、帕瑞昔布、起始物料S各0.2mg及其他杂质各2μg的混合溶液，作为分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见附图2，可以看出在该条件下伐地昔布、帕瑞昔布主峰可以和其他杂质峰完全分离。

实施例三

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent1260高效液相色谱系统及工作站；

色谱柱：苯基柱(SUPELCOSILLC-DP250*4.6mm，5μm)；

配制0.01mol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调节pH值至3.0为水相，流动相中水相-甲醇比例按下表2进行梯度洗脱，设置流速为1.0ml/min，检测波长为215nm，柱温为40℃。

表2

	水相％	有机相％
			0min	52	48
25min	52	48
			40min	40	60
40.1min	52	48
			50min	52	48

(2)实验步骤

分别取帕瑞昔布钠、间位帕瑞昔布(G)、帕瑞昔布同分异构体(F)、伐地昔布、间位伐地昔布(D)、伐地昔布同分异构体(C)、水解杂质(A)、二取代杂质(B)、二聚体杂质(H)、乙酰化杂质(E)、伐地昔布酸乙酯(J)、起始物料S、S同分异构体(I)适量，用甲醇-水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含伐地昔布、帕瑞昔布、起始物料S各0.2mg及其他杂质各2μg的混合溶液，作为分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见附图3，可以看出在该条件下伐地昔布、帕瑞昔布主峰可以和其他杂质峰完全分离。

实施例四(对比例)

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent1260高效液相色谱系统及工作站；

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(YMCODS-AQ150*4.6mm，5μm)；

配制0.01mol/L磷酸氢二钠溶液，用磷酸调节pH值至3.0为水相，有机相为乙腈，流动相中水相-有机相比例为40：60，设置流速为1.0ml/min，检测波长为215nm，柱温为40℃。

(2)实验步骤

分别取帕瑞昔布钠、间位帕瑞昔布(G)、帕瑞昔布同分异构体(F)、伐地昔布、间位伐地昔布(D)、伐地昔布同分异构体(C)、水解杂质(A)、二取代杂质(B)、二聚体杂质(H)、乙酰化杂质(E)、伐地昔布酸乙酯(J)、起始物料S、S同分异构体(I)适量，用甲醇-水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含伐地昔布、帕瑞昔布、起始物料S、伐地昔布酸乙酯各0.2mg及其他杂质各2μg的混合溶液，作为分析溶液；

取上述分析溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见附图4，可以看出在该条件下伐地昔布与伐地昔布同分异构体、间位伐地昔布无法分离，且帕瑞昔布与帕瑞昔布同分异构体、间位帕瑞昔布亦无法分离。

本发明的范围不受所述具体实施方案的限制，所述实施方案只作为阐明本发明各个方面的单个例子，本发明范围内还包括功能等同的方法和组分。实际上，除了本文所述的内容外，本领域技术人员参照上文的描述和附图可以容易地掌握对本发明的多种改进。所述改进也落入所附权利要求书的范围之内。上文提及的每篇参考文献皆全文列入本文作为参考。

Claims (10)

1.一种伐地昔布/帕瑞昔布有关物质的RT-HPLC检测方法，包括下列步骤：

a)配置分析溶液

用体积比1:1为甲醇-水或乙腈-水混合溶液溶解样品，制成分析溶液；

b)色谱条件

色谱柱为反相色谱柱，以磷酸盐溶液-有机相的混合液为流动相，所述的有机相为甲醇或乙腈；采用等度或梯度洗脱方法，流速为0.8-1.2ml/min；柱温为30-50℃，检测波长为210-220nm；

c)上机测定

取步骤a)制成的分析溶液5-40μl注入高效液相色谱仪中，进行色谱分析，并记录色谱图。

2.如权利要求1所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述反相色谱柱为苯基硅烷键合硅胶色谱柱或十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

3.如权利要求2所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述反相色谱柱的规格为：柱长介于100mm至300mm，色谱柱内径介于1mm至10mm，粒径介于1μm至10μm。

4.如权利要求1所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述反相色谱柱为SUPELCOSILLC-DP250mmX4.6mm，5μm的苯基硅烷键合硅胶色谱柱。

5.如权利要求1所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述磷酸盐溶液的浓度为0.001-0.05mol/L、pH3.0，所述磷酸盐为磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中之一。

6.如权利要求5所述的RT-HPLC检测方法，其特征在所述磷酸盐溶液为0.01mol/L磷酸氢二钠溶液、pH3.0。

7.如权利要求1所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述流动相为磷酸盐溶液-有机相，所述磷酸盐溶液与有机相的体积比为80:20～30:70。

8.如权利要求1所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述步骤b为所述反相色谱柱为苯基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为以0.01mol/L、pH3.0磷酸氢二钠溶液为水相，流动相中水相-甲醇的比例为52:48或55:45，进行等度洗涤，流速为1.0ml/min；柱温为40℃，检测波长为215nm；

或为所述反相色谱柱为苯基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为以0.01mol/L、pH3.0磷酸氢二钠溶液为水相，流动相中水相-甲醇比例按0、25、40、40.1、50min时间点，水相体积比为52％、52％、40％、52％、52％进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为215nm，柱温为40℃。

9.如权利要求1所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述样品为帕瑞昔布及其盐或伐地昔布及其盐。

10.如权利要求9所述的RT-HPLC检测方法，其特征在于所述盐为钙盐、钠盐、钾盐、镁盐、盐酸盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、醋酸盐、乙二酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、苯甲酸盐、枸橼酸盐、甲磺酸盐。