CN106035091A - 一种寒兰人工种子制作方法 - Google Patents

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    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
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Abstract

本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子，具体步骤包括：选种、消毒、采种与原球茎诱导、原球茎增殖培养及人工种子的制作，将寒兰种子诱导产生的原球茎作为人工种子的繁殖体，可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。同时采用制作人工种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本发明通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。

Description

一种寒兰人工种子制作方法
技术领域
本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种寒兰人工种子制作方法。
背景技术
寒兰为兰科兰属地生植物，假鳞茎狭卵球形，包藏于叶基之内。叶带形，薄革质，暗绿色，前部边缘常有细齿。花常为淡黄绿色而具淡黄色唇瓣，也有其他色泽，常有浓烈香气；株型修长健美，叶姿优雅俊秀，花色艳丽多变，香味清醇久远，凌霜冒寒吐芳，实为可贵，因此有“寒兰”之名，为国兰之一，生于林下、溪谷旁或稍荫蔽、湿润、多石之土壤上，海拔400-2400米。分布于中国、日本南部、朝鲜半岛南端。
由于寒兰种子非常微小，几乎无胚乳，在自然条件下种子萌发率极低，因此在生产实践中多采用分株方式或组织培养进行繁殖，但是分株培养繁殖率低，时间长，不能满足市场需要，组织培养能在一定程度上解决快速繁殖的难题，但是依然存在转接次数多、成本高、移栽成活率低等问题，特别是不方便运输储藏，所以人工种子繁殖方式应用越来越广泛，目前，采用人工种子在寒兰繁殖方面还未见报道，并且大多数人工种子采用的繁殖体，都是通过组织培养诱导假鳞茎、花梗腋芽或茎尖产生原球茎，这种方式往往使繁殖体产生病毒的同时，使繁殖后的苗株发生突变，不能有效遗传苗株的优秀品质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种寒兰人工种子制作方法，从而缩短组织培养周期、降低成本的同时，提高生产效率。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子。
如上所述的一种寒兰人工种子制作方法，包括以下步骤：
(1)选种：采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；
(2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3～5min，再用10％的次氯酸钠溶液浸泡12～14min，浸泡后用清水冲洗1～2min，再用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿中备用；
(3)采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90～110mg/L肌醇+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～3mg/L甘氨酸+1～2g/L蛋白胨+160～180mg/L磷酸二氢钠+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂+90～110g/L香蕉汁；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；
(4)原球茎增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；增殖培养后的寒兰原球茎用于制作人工种子的繁殖体；
(5)人工种子的制作：将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工种皮包埋后，即得人工种子；所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5～0.7mg/L NAA+8～12％椰汁+0.4～0.6mg/L BA+20～25g/L蔗糖+20～25g/L苹果酸+0.4～0.6％多灵菌+0.2％活性炭+15～25mg/L脱落酸；所述人工种皮为：3％海藻酸钠+2％壳聚糖+2％CaCl2。
本发明的有益效果是：将寒兰种子诱导产生的原球茎作为人工种子的繁殖体，可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。同时采用制作人工种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本发明通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。
具体实施方式
下面对本发明具体实施方式做进一步的阐述。
本发明提供的一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子，从而可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。具体步骤如下：
(1)选种：采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；由于这时的寒兰蒴果较成熟，能大大增加种子的诱导成功率，例如采用授粉80天的寒兰蒴果，这时蒴果还不够成熟，以致使种子的诱导成功率大大下降；
表1为授粉后不同时间的种子诱导率
种子数量(个) 授粉的天数 种子诱导率(％)
100 50 0
100 80 5
100 100 31
100 130 89
100 140 87
100 200 72
由表1可以看出采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，能大大增加种子的诱导成功率。
(2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3～5min，再用10％的次氯酸钠溶液浸泡12～14min，浸泡后用清水冲洗1～2min，再用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿中备用；消毒是在保证蒴果内部种子活性的同时，保证蒴果的灭菌。
(3)采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90～110mg/L肌醇+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～3mg/L甘氨酸+1～2g/L蛋白胨+160～180mg/L磷酸二氢钠+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂+90～110g/L香蕉汁；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；通过本步骤主要是为了使寒兰种子诱导出原球茎；
表2为诱导培养基的多种实施例
通过本诱导培养基，能大大增加种子的诱导率，作为优选，所述诱导培养基为：1/2MS+100mg/L肌醇+0.5mg/L烟酸+0.5mg/L VB6+0.15mg/L VB1+2mg/L甘氨酸+2g/L蛋白胨+170mg/L磷酸二氢钠+20g/L蔗糖+9g/L琼脂+100g/L香蕉汁，即为表2中诱导培养基1的成分及用量。
(4)原球茎增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；增殖培养后的寒兰原球茎用于制作人工种子的繁殖体；通过本步骤主要是为了使诱导出的原球茎进行增殖，培养出更多的原球茎，提高生产效率。
(5)人工种子的制作：将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工种皮包埋后，即得人工种子；所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5～0.7mg/L NAA+8～12％椰汁+0.4～0.6mg/L BA+20～25g/L蔗糖+20～25g/L苹果酸+0.4～0.6％多灵菌+0.2％活性炭+15～25mg/L脱落酸；所述人工种皮为：3％海藻酸钠+2％壳聚糖+2％CaCl2。
表3为人工胚乳溶液的多种实施例
通过本人工胚乳溶液，能增加人工种子的萌芽率和储藏时间，作为优选，所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.6mg/L NAA+10％椰汁+0.5mg/L BA+23g/L蔗糖+23g/L苹果酸+0.5％多灵菌+0.2％活性炭+20mg/L脱落酸，即为表3中人工胚乳溶液1的成分及用量。制作人工种子的过程为现有技术，这里不做详细阐述。通过采用制作人工种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本发明通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。
本发明并不限于上述实例，在本发明的权利要求书所限定的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可做出的各种变形或修改均受本专利的保护。

Claims (2)

1.一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于：用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子。
2.根据权利要求1所述的一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选种：采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；
(2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3～5min，再用10％的次氯酸钠溶液浸泡12～14min，浸泡后用清水冲洗1～2min，再用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿中备用；
(3)采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90～110mg/L肌醇+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/LVB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～3mg/L甘氨酸+1～2g/L蛋白胨+160～180mg/L磷酸二氢钠+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂+90～110g/L香蕉汁；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；
(4)原球茎增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；增殖培养后的寒兰原球茎用于制作人工种子的繁殖体；
(5)人工种子的制作：将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工种皮包埋后，即得人工种子；所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5～0.7mg/LNAA+8～12％椰汁+0.4～0.6mg/L BA+20～25g/L蔗糖+20～25g/L苹果酸+0.4～0.6％多灵菌+0.2％活性炭+15～25mg/L脱落酸；所述人工种皮为：3％海藻酸钠+2％壳聚糖+2％CaCl2。
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