CN106171984A - 一种春兰快速培养繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种春兰快速培养繁殖方法，利用辐射处理后的春兰种子诱导产生原球茎，在对原球茎进行增殖、生根培养，最后移栽得到春兰苗株；具体包括以下步骤：辐射处理、材料消毒、原球茎诱导培养、增殖培养、生根壮苗培养和移栽。通过辐射处理后的种子，可以提高种子的萌发率，减少萌发时间，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养春兰提供了技术支持。同时本方法中使用的各种培养基能够使苗株成苗率高，长势良好，提高了效率，节约了成本。

Description

一种春兰快速培养繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种春兰快速培养繁殖方法。
背景技术
春兰为兰科兰属地生植物，又名朵兰、扑地兰、幽兰、朵朵香、草兰，是中国兰花中栽培历史最为悠久、人们最为喜欢的种类之一。植株一般较小，假鳞茎较小，卵球形。叶带形，边缘无齿或具细齿。花多单朵或两朵，不出架；花色以绿色、淡褐黄色居多，花幽香。
由于春兰种子非常微小，几乎无胚乳，在自然条件下种子萌发率极低，因此在生产实践中多采用分株方式或组织培养进行繁殖，但是分株培养繁殖率低，时间长，不能满足市场需要，组织培养能在一定程度上解决快速繁殖的难题，但是依然存在繁殖时间相对较长、转接次数多、成本高、移栽成活率低等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种培养时间短、种子萌发率高的春兰快速培养繁殖方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种春兰快速培养繁殖方法，利用辐射处理后的春兰种子诱导产生原球茎，在对原球茎进行增殖、生根培养，最后移栽得到春兰苗株。
如上所述的一种春兰快速培养繁殖方法，包括以下步骤：
(1)辐射处理：取无病虫害、长势良好春兰植株上的成熟蒴果，用60Co-γ射线进行辐射处理，辐射剂量为10～30Gy；
(2)材料消毒：将辐射处理后的蒴果用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，接着将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀；
(3)原球茎诱导培养：用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～2g/L蛋白胨+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；
(4)增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+0.1～0.2mg/L肌醇+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；
(5)生根壮苗培养：增殖培养后，选择高2cm以上、有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为：MS+3～6mg/L KT+0.5～0.8mg/LNAA+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L柠檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L琼脂，pH为5.5～5.7，培养温度23～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000～2500lx；
(6)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天，然后进行盆栽。
如上所述的一种春兰快速培养繁殖方法，进一步说明为，所述诱导培养基为：1/2MS+0.5mg/L烟酸+0.5mg/L VB6+0.15mg/L VB1+1.5g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+9g/L琼脂。
如上所述的一种春兰快速培养繁殖方法，进一步说明为，所述增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.15mg/L肌醇+10％椰汁。
如上所述的一种春兰快速培养繁殖方法，进一步说明为，所述壮苗培养基为：MS+5mg/L KT+0.7mg/L NAA+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+7g/L琼脂。
如上所述的一种春兰快速培养繁殖方法，进一步说明为，所述辐射剂量为20Gy。
本发明的有益效果是：通过辐射处理后的种子，可以提高种子的萌发率，减少萌发时间，通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养春兰提供了技术支持。同时本方法中使用的各种培养基能够使苗株成苗率高，长势良好，提高了效率，节约了成本。
具体实施方式
本发明提供的一种春兰快速培养繁殖方法，适用于春兰的快速繁殖使用。该方法利用辐射处理后的春兰种子诱导产生原球茎，在对原球茎进行增殖、生根培养，最后移栽得到春兰苗株。通过辐射处理后的种子，可以提高种子的萌发率，减少萌发时间。
本春兰快速培养繁殖方法具体包括以下步骤：
(1)辐射处理：取无病虫害、长势良好春兰植株上的成熟蒴果，用60Co-γ射线进行辐射处理，辐射剂量为10～30Gy；
表1为不同辐射剂量对种子萌发率的影响
辐射剂量(Gy) 接种数(个) 平均萌发时间(d) 萌发率(％)
0 100 28 48
5 100 26 41
10 100 22 61
20 100 20 69
30 100 23 66
40 100 27 51
60 100 29 32
80 100 33 15
120 100 35 9
表1中为了保证对照试验的准确性，只是辐射剂量不同，而其他培养条件一致，如辐射后接种的培养基、培养温度等均一致，从表1中可以看出，辐射剂量过小，对种子的影响不大，辐射剂量过大时，种子会受到不可逆的损害，失去活性，所以辐射剂量为10～30Gy；作为优选，所述辐射剂量为20Gy；通过辐射处理后的春兰种子，减少了萌发时间的同时，还提高了种子的萌发率。
(2)材料消毒：将辐射处理后的蒴果用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，接着将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀；进行消毒是为了对种子进行杀菌，从而使后面的培养处理能够不受污染，保证春兰的诱导成活率，从而提高了工作效率；
(3)原球茎诱导培养：用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～2g/L蛋白胨+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；由于春兰种子体积很小，故采用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均布于诱导培养基表面；
表2为多种诱导培养基的实施例
表2为6种不同诱导培养基的实施例，在本诱导培养基取值范围内，还可以有其他多种组合方式，这里不一一进行阐述。作为优选，所述诱导培养基为：1/2MS+0.5mg/L烟酸+0.5mg/L VB6+0.15mg/L VB1+1.5g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+9g/L琼脂，即为表2中诱导培养基1的成分及用量，通过本诱导培养基诱导出来的原球茎，颗粒大、长势良好，成长速度快等优点。
(4)增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+0.1～0.2mg/L肌醇+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；增值培养作用在于通过原球茎分化出繁殖出更多的原球茎，从而提高生产速率，为企业规模化培养春兰提供有效途径；
表3为多种增值培养基的实施例
表3为6种不同增值培养基的实施例，在本增值培养基取值范围内，还可以有其他多种组合方式，这里不一一进行阐述。作为优选，所述增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.15mg/L肌醇+10％椰汁，即为表3中增值培养基1的成分及用量。通过本步骤之后，还可以将增值后的单个芽切下，重新放置在增值培养基中继续增值培养，从而培养出更多的春兰苗株，提高产量的同时，降低了制造成本。
(5)生根壮苗培养：增殖培养后，选择高2cm以上、有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为：MS+3～6mg/L KT+0.5～0.8mg/LNAA+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L柠檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L琼脂，pH为5.5～5.7，培养温度23～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000～2500lx；
表4为多种壮苗培养基的实施例
表4为6种不同壮苗培养基的实施例，在本壮苗培养基取值范围内，还可以有其他多种组合方式，这里不一一进行阐述。作为优选，所述壮苗培养基为：MS+5mg/L KT+0.7mg/LNAA+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+7g/L琼脂，即为表4中壮苗培养基1的成分及用量。通过本壮苗培养基培养出来的春兰苗株长势良好、根系发达、叶片葱绿，大大提高了春兰移栽后的成活率。
(6)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天，然后进行盆栽。
通过本方法在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养春兰提供了技术支持，同时能够使苗株成苗率高，长势良好，提高了效率，节约了成本。
本发明并不限于上述实例，在本发明的权利要求书所限定的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可做出的各种变形或修改均受本专利的保护。

Claims (6)

1.一种春兰快速培养繁殖方法，其特征在于：利用辐射处理后的春兰种子诱导产生原球茎，在对原球茎进行增殖、生根培养，最后移栽得到春兰苗株。
2.根据权利要求1所述的一种春兰快速培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)辐射处理：取无病虫害、长势良好春兰植株上的成熟蒴果，用60Co-γ射线进行辐射处理，辐射剂量为10～30Gy；
(2)材料消毒：将辐射处理后的蒴果用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，接着将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀；
(3)原球茎诱导培养：用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～2g/L蛋白胨+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；
(4)增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+0.1～0.2mg/L肌醇+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；
(5)生根壮苗培养：增殖培养后，选择高2cm以上、有明显突起的小苗转入壮苗培养基中培养，所述壮苗培养基为：MS+3～6mg/L KT+0.5～0.8mg/L NAA+140～160g/L香蕉泥+90～110mg/L柠檬酸+28～32g/L食糖+5～9g/L琼脂，pH为5.5～5.7，培养温度23～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为2000～2500lx；
(6)移栽：当试管苗生长至4～5cm高，根2～4条，叶1～2片时，将试管苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1～2天，然后进行盆栽。
3.根据权利要求2所述的一种春兰快速培养繁殖方法，其特征在于：所述诱导培养基为：1/2MS+0.5mg/L烟酸+0.5mg/L VB6+0.15mg/L VB1+1.5g/L蛋白胨+20g/L蔗糖+9g/L琼脂。
4.根据权利要求2所述的一种春兰快速培养繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.15mg/L肌醇+10％椰汁。
5.根据权利要求2所述的一种春兰快速培养繁殖方法，其特征在于：所述壮苗培养基为：MS+5mg/L KT+0.7mg/L NAA+150g/L香蕉泥+100mg/L柠檬酸+30g/L食糖+7g/L琼脂。
6.根据权利要求2所述的一种春兰快速培养繁殖方法，其特征在于：所述辐射剂量为20Gy。
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