CN106034659A - 一种室内快速鉴定小麦冬春性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种室内快速鉴定小麦冬春性的方法。一种检测小麦冬春性的方法，包括如下步骤：1)将每个待测小麦品种的种子分七批进行春化处理0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天，得到春化0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天的种子，合理安排这七批种子的春化时间，使七批种子完成春化的时间为同一天；春化前将待测小麦品种的种子进行催芽处理；2)将所述春化0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天的小麦种子在同一天移栽至人工气候室内培养，观察其抽穗开花情况；3）根据待测小麦品种抽穗开花需要的最短的春化时间t确定冬春性。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种室内快速鉴定小麦冬春性的方法。
背景技术
小麦是中国的第二大粮食作物，春化发育特性是小麦品种的重要农艺性状，直接影响其种植范围和利用效率。小麦品种的冬春性不同,其抗寒性早熟性丰产性往往存在较大差异,生产上常因部分品种冬春性划分不准确而造成重大损失,因此对小麦冬春性做科学鉴定有重要的意义。
从20世纪初苏联科学家李克森（Lysenko）提出春化理论以来，国内外学者已经从不同的角度和层次对小麦春化特性做了大量研究。目前小麦冬春性鉴定方法主要分形态观察法、田间错期春播法、综合顺序分类法、分子生物学方法4种。形态观察法：正常秋播情况下，从苗情苗相方面看，田间苗期小麦为匍匐、半匍匐和直立苗相分别对应冬性、半冬性和春性品种；从起身、拔节、抽穗、开花时间来看，早者为春性，晚者为冬性。目前鉴定最常用的方法是田间错期春播法，具体可参照《植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南—普通小麦》（国家标准，GB/T19557.3—2004）的鉴定方法。
由于田间错期春播法易受环境因素、人为因素及时间空间因素等影响，鉴定结果具有一定误差，且周期性较长，每年只有特定时间可以进行鉴定。随着分子生物学的发展，学者们开发了多种分子标记手段用于小麦春化基因的研究。当前研究表明，至少有5个基因控制小麦春化，即Vrn-A1（以前的Vrn1）、Vrn-B1（Vrn2）、Vrn-D1（Vrn3）、Vrn4和Vrn-B4（Vrn5），其中的大部分基因已开发出相应的分子生物学标记，但由于春性对冬性为显性的现象，使得单纯依靠分子生物学的方法很难对品种冬性的强弱做出明确的鉴定。需要分子生物学鉴定和田间鉴定相结合才能更准确的鉴定品种的冬春性。
发明内容
本发明克服目前方法的缺点，提供一种室内快速鉴定小麦冬春性的方法。
本发明提供的方法如下：
一种检测小麦冬春性的方法，包括如下步骤：
1)将每个待测小麦品种的种子分七批进行春化处理0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天，得到春化0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天的种子，合理安排这七批种子的春化时间，使七批种子完成春化的时间为同一天；
春化前将待测小麦品种的种子进行催芽处理；
2)将所述春化0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天的小麦种子在同一天移栽至人工气候室内培养，观察其抽穗开花情况；
3）根据待测小麦品种抽穗开花需要的最短的春化时间t确定冬春性。
优选的，步骤3）中所述的根据待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t确定冬春性，标准如下：
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t为0天，则待测小麦品种为春性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为0＜t≤15天，则待测小麦品种为偏春性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为20≤t＜30，则待测小麦品种为半冬性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为30≤t＜40天，则待测小麦品种为冬性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t≥40天，则待测小麦品种为强冬性小麦。
优选的，所述的春化前将待测小麦品种的种子进行催芽处理为：
春化前将待测小麦品种的种子用70%酒精消毒处理2min，用去离子水冲洗干净，置于培养皿中，培养皿底部事先垫好滤纸，加水10ml，置于25℃无光培养箱中催芽48h。
优选的，所述的春化处理为：待幼芽生长至2cm时，置于2℃低温春化室中低温春化处理，24h光照，每隔2-3天加水5ml以保证培养皿内滤纸湿润，水温应与室温2℃相近以避免温差太大影响小麦幼苗生长。
优选的，所述的人工气候室设定温度20℃，光照为16h/d，排除光周期对抽穗的影响。
本发明的有益之处:本发明通过将小麦幼苗分别进行0天、10天、15天、20天、25天、30天、40春化处理，通过观察小麦抽穗开花所需的最少春化天数来确定待测小麦的冬春性。相对于传统的田间错期春播法，本发明更加简单、省力、快捷，克服了传统方法每年只能进行一次鉴定的限制，缩短了检测周期，且准确率高，为育种人员提供简易可靠的检测手段，提高育种效率。本发明提供的方法和形态观察法、分子生物学方法相比，准确率高。
附图说明
图1为温室移栽10天后小麦幼苗生长情况。
图2为温室移栽10天后小麦幼苗生长情况。
图3为强冬性材料不同春化时间下生长情况对比图。
图4为冬春性基因型检测部分材料电泳图。
具体实施方法
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊情况说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业用途得到。
实施例1. 本发明方法的确立
试验材料：泰山1号、济麦19、济麦20、钱交麦、中国春及山东省区试材料：AQ14032、11WST067、11WST062、AQ14029、BQ14028、HQ14006、BC12VST066、AQ14028、BC13VST017、HQ14049、11WST048、BC12VST041、BC12VST033、
BC13VST005、AQ14027、11WST073、11WST066、11WST063、BC12VST056、BC13VST067 、BC12VST065、BC12VST021、BC12VST019、HQ14024、11WST059、BC13VST017、HQ14049、AQ14033、BC13VST018、HQ14022、BQ14023、BC13VST012、HQ14005、BQ14006、10WST028、BC12VST056、11WST066等42个品种。
试验方法：每个品种挑选籽粒饱满的籽粒140粒，分为7等份，每份20粒，70%酒精消毒处理2min，用去离子水冲洗干净，放入垫有滤纸的培养皿中，置于25℃暗培养箱中催芽48h。
待幼苗生长至2cm时，置于2℃低温春化室中低温春化处理（24h光照），每隔2-3天加水5ml以保证培养皿内滤纸湿润(水温应与室温2℃相近以避免温差太大影响小麦幼苗生长)。
将7批处理后的幼苗同一天移栽至人工气候室的花盆中，人工气候室设置温度20℃，光照为16h/d以排除光周期对抽穗的影响（不同季节日照时常不同，应根据不同日照长度做适当光照调节）。
统计待测小麦品种的孕穗抽穗时间及苗情苗相。统计时间以60天为限。
冬春性判定标准：
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t为0天，则待测小麦品种为春性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为0＜t≤15天，则待测小麦品种为偏春性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为20≤t＜30，则待测小麦品种为半冬性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为30≤t＜40天，则待测小麦品种为冬性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t≥40天，则待测小麦品种为强冬性小麦。
表1室内检测结果
| 编号 | 品种名 | 抽穗开花需要的最短的春化时间 | 判定结论 |
| 1 | 泰山1号 | 20 | 半冬性 |
| 2 | 济麦19 | 40 | 强冬性 |
| 3 | 济麦20 | 15 | 偏春性 |
| 4 | 钱交麦 | 30 | 冬性 |
| 5 | 中国春 | 0 | 春性 |
| 6 | AQ14032 | 15 | 偏春性 |
| 7 | 11WST067 | 35 | 冬性 |
| 8 | 11WST062 | 20 | 半冬性 |
| 9 | AQ14029 | 30 | 冬性 |
| 10 | BQ14028 | 0 | 春性 |
| 11 | HQ14006 | 30 | 冬性 |
| 12 | BC12VST066 | 40 | 强冬性 |
| 13 | AQ14028 | 15 | 偏春性 |
| 14 | BC13VST017 | 15 | 偏春性 |
| 15 | HQ14049 | 30 | 冬性 |
| 16 | 11WST048 | 30 | 冬性 |
| 17 | BC12VST041 | 20 | 半冬性 |
| 18 | BC12VST033 | 0 | 春性 |
| 19 | BC13VST005 | 30 | 冬性 |
| 20 | AQ14027 | 0 | 春性 |
| 21 | 11WST073 | 15 | 偏春性 |
| 22 | 11WST066 | 20 | 半冬性 |
| 23 | 11WST063 | 20 | 半冬性 |
| 24 | BC12VST056 | 30 | 冬性 |
| 25 | BC13VST067 | 15 | 偏春性 |
| 26 | BC12VST065 | 40 | 强冬性 |
| 27 | BC12VST021 | 20 | 半冬性 |
| 28 | BC12VST019 | 30 | 冬性 |
| 29 | HQ14024 | 30 | 冬性 |
| 30 | 11WST059 | 15 | 偏春性 |
| 31 | BC13VST017 | 15 | 偏春性 |
| 32 | HQ14049 | 40 | 强冬性 |
| 33 | AQ14033 | 20 | 半冬性 |
| 34 | BC13VST018 | 40 | 强冬性 |
| 35 | HQ14022 | 20 | 半冬性 |
| 36 | BQ14023 | 10 | 偏春性 |
| 37 | BC13VST012 | 30 | 冬性 |
| 38 | HQ14005 | 20 | 半冬性 |
| 39 | BQ14006 | 20 | 半冬性 |
| 40 | 10WST028 | 30 | 冬性 |
| 41 | BC12VST056 | 30 | 冬性 |
| 42 | 11WST066 | 20 | 半冬性 |
从表1可以看出，利用本发明提供的方法可以很好的区分品种的冬春性。
实施例2. 田间错期春播法和分子生物学方法验证本发明的方法
1. 田间错期春播法
以钱交麦、泰山1号和中国春作为冬性、半冬性和春性对照，分别于2013年和2014年对上述材料进行了田间错期播种鉴定。
2013-2014年田间错期播种鉴定时间如下：以上材料分6次进行播种，第1期正常播种（2012年10月19日），第2期至第6期延期播种，播种时间分别为2013年2月26日、3月5日、3月12日、3月19日、3月26日，正常田间管理。
2014-2015年田间错期播种鉴定时间如下：以上材料分6次进行播种，第1期正常播种（2014年10月27日），第2期至第6期延期播种，播种时间分别为2015年2月27日、3月6日、3月13日、3月20日、3月27日，正常田间管理。
根据延期播种的第2-6期抽穗结果，结合冬性、半冬性、春性品种的抽穗情况，综合判定供试材料的冬春性。强冬性品种钱交麦在第2-6期无法正常抽穗，仅表现为无效分蘖的生长，不能由营养生长转变为生殖生长；半冬性品种泰山1号在第2、3期能抽穗，但抽穗不完全，第4-6期所有单株均无法正常抽穗，只表现为无效分蘖生长；春性品种中国春在所有第2-6期延期播种中均能正常抽穗，无效分蘖基本退化。根据以上分析，从第2期就无法抽穗的材料，可以判定为强冬性；第2期能正常抽穗，从第3期抽穗不完全或无法抽穗的材料，可以判定为冬性；第2、3期可以正常抽穗，从第4期开始未能正常抽穗，可以判定为半冬性；供试材料中第2-4期能够正常抽穗，无效分蘖完全退化，第5-6期仍能抽穗，无效分蘖已基本退化或者存在极少无效分蘖未完全退化，可以判定为春性。
表2田间错期春播法鉴定结果
| 品种 | 冬春性类型 | 品种 | 冬春性类型 |
| 钱交麦 | 冬性 | 11WST073 | 偏春性 |
| 泰山1号 | 半冬性 | 11WST066 | 半冬性 |
| 中国春 | 春性 | 11WST063 | 半冬性 |
| AQ14032 | 半冬性 | BC12VST056 | 冬性 |
| 11WST067 | 强冬性 | BC13VST067 | 偏春性 |
| 11WST062 | 半冬性 | BC12VST065 | 强冬性 |
| AQ14029 | 半冬性 | BC12VST021 | 半冬性 |
| BQ14028 | 春性 | BC12VST019 | 冬性 |
| HQ14006 | 冬性 | HQ14024 | 冬性 |
| BC12VST066 | 强冬 | 11WST059 | 春性 |
| AQ14028 | 偏春性 | BC13VST017 | 偏春性 |
| BC13VST017 | 偏春性 | HQ14049 | 强冬性 |
| HQ14049 | 冬性 | AQ14033 | 半冬性 |
| 11WST048 | 冬性 | BC13VST018 | 强冬性 |
| BC12VST041 | 半冬性 | HQ14022 | 半冬性 |
| BC12VST033 | 春性 | BQ14023 | 偏春性 |
| BC13VST005 | 强冬性 | BC13VST012 | 冬性 |
| AQ14027 | 春性 | HQ14005 | 半冬性 |
| BC12VST056 | 冬性 | BQ14006 | 半冬性 |
| 11WST066 | 半冬性 | 10WST028 | 冬性 |
| 济麦19 | 强冬性 | 济麦20 | 偏春性 |
田间错期春播法以冬性、半冬性和春性对照品种鉴定，可以很好的鉴定小麦品种的冬春性，是目前常见的权威鉴定方法。
、分子生物学方法检测
当前研究表明，至少有5个基因控制小麦春化，即Vrn-A1、Vrn-B1、Vrn-D1、Vrn4和Vrn- B4（Vrn5）。其中Vrn-A1、Vrn-B1、Vrn-D1、Vrn-B4起主要作用。
具体方法：在上述小麦材料3叶期时采用全式金公司的全基因组DNA提取试剂盒提取DNA，做小麦春化基因Vrn-A1、Vrn-B1、Vrn-D1、Vrn-B4检测。
PCR反应体系为20μL，其中2*PCR MIX溶液10μL，引物各溶液0.6μL，待测DNA模板（DNA浓度100ng/μl）1μl，用ddH2O稀释至20μl。同时设置不加模板的阴性对照。
PCR反应程序为：94 ℃变性10 min；然后94 ℃变性45 s，72 ℃延伸1 min，38个循环；72 ℃延伸10 min。各引物及退火温度如下：
Vrn-A1基因位点的检测用了3对引物（Yan等，2004；Fu等，2005），引物对Ⅰ为VRN1AF与VRN1-INT1R，引物对Ⅱ为Intr1/A/F2与Intr1/A/R3，引物对Ⅲ为Intr1/C/F与Intr1/AB/R。引物对Ⅰ是根据启动子序列设计的，可以区分该基因位点的Vrn-A1a、Vrn-A1b与Vrn-A1c及vrn-A1变异类型。Vrn-A1a因启动子序列的重复，用引物对Ⅰ将产生965bp和876bp两个扩增条带；而Vrn-A1b产生714bp条带，显性Vrn-A1c和隐性vrn-A1类型均产生734bp条带，但无法分开Vrn-A1c与vrn-A1类型。引物对Ⅱ和Ⅲ是根据第1内含子序列差异而设计的引物，一起用于区分显性Vrn-A1c与隐性vrn-A1类型；隐性vrn-A1类型仅在引物对Ⅲ下产生1068bp条带，而显性Vrn-A1c类型至少在引物对Ⅱ下产生1170bp条带。
引物对Ⅰ：退火温度50℃，循环延伸1min
VRN1AF为：5’-GAAAGGAAAAATTCTGCTCG-3’ （序列1）
VRN1-INT1R：5’-GCAGGAAATCGAAATCGAAG-3’ （序列2）。
引物对Ⅱ：退火温度56℃，循环延伸1min
Intr1/A/F2：5’- AGCCTCCACGGTTTGAAAGTAA-3’ （序列3）
Intr1/A/R3：5’- AAGTAAGACAACACGAATGTGAGA-3’ （序列4）。
引物对Ⅲ：退火温度58℃延伸1min
Intr1/C/F：5’-GCACTCCTAACCCACTAACC-3’ （序列5）
Intr1/AB/R:为5’-TCATCCATCATCAAGGCAAA-3’ （序列6）。
Vrn-B1基因位点用2对引物Intr/B/F与Intr1/B/R3、Intr/B/F与Intr1/B/R4进行检测，其中前1对引物用于检测显性基因型Vrn-B1Vrn-B1，后1对用于检测隐性基因型vrn- B1vrn-B1（Fu等，2005）。退火温度分别为63和58℃延伸循环1min引物序列为：
Intr/B/F：5’-CAAGTGGAACGGTTAGGACA-3’ （序列7）
Intr1/B/R3：5’-CTCATGCCAAAAATTGAAGATGA-3’ （序列8）
Intr1/B/R4：5’-CAAATGAAAAGGAATGAGAGCA-3’ （序列9）。
检测Vrn-D1基因位点的2对引物为Intr/D/F与Intr1/D/R3、Intr/D/F与Intr1/D/R4，分别用于检测显性基因型Vrn-D1Vrn-D1和隐性基因型vrn-D1vrn-D1（Fu等，2005）。退火温度分别为65和63℃，延伸循环1min引物序列为：
Intr1/D/F：5’-GTTGTCTGCCTCATCAAATCC-3’ （序列10）
Intr1/D/R3：5’-GGTCACTGGTGGTCTGTGC-3’ （序列11）
Intr1/D/R4：5’-AAATGAAAAGGAACGAGAGCG-3’ （序列12）。
检测Vrn-B4基因位点的2对引物为VRN4-B-INS-F与VRN4-B-INS-R、VRN4-B-NOINS-F与VRN4-B-NOINS-R，分别用于检测显性基因型Vrn-B4Vrn-B4和隐性基因型vrn-B4vrn-B4。其退火温度分别为63、57℃，延伸循环1min引物序列为：
VRN4-B-INS-F：CATAATGCCAAGCCGGTGAGTAC （序列13）
VRN4-B-INS-R：ATGTCTGCCAATTAGCTAGC （序列14）
VRN4-B-NOINS-F：ATGCTTTCGCTTGCCATCC （序列15）
VRN4-B-NOINS-R：CTATCCCTACCGGCCATTAG （序列16）。
表3 田间错期春播法、室内鉴定方法、分子生物学方法鉴定结果
| 编号 | 品种 | 田间鉴定 | 室内鉴定 | 基因型 |
| 1 | 钱交麦 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 2 | 泰山1号 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 3 | 中国春 | 春性 | 春性 | a1b1D1b4 |
| 4 | AQ14032 | 半冬性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
| 5 | 11WST067 | 强冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 6 | 11WST062 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 7 | AQ14029 | 半冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 8 | BQ14028 | 春性 | 春性 | A1bb1d1b4 |
| 9 | HQ14006 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 10 | BC12VST066 | 强冬 | 强冬 | a1b1d1b4 |
| 11 | AQ14028 | 偏春性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
| 12 | BC13VST017 | 偏春性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
| 13 | HQ14049 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 14 | 11WST048 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 15 | BC12VST041 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 16 | BC12VST033 | 春性 | 春性 | A1bbdb |
| 17 | BC13VST005 | 强冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 18 | AQ14027 | 春性 | 春性 | a1b1D1b4 |
| 19 | BC12VST056 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 20 | 11WST066 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 21 | 11WST073 | 春性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
| 22 | 11WST066 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 23 | 11WST063 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 24 | BC12VST056 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 25 | BC13VST067 | 偏春性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
| 26 | BC12VST065 | 强冬性 | 强冬性 | a1b1d1b4 |
| 27 | BC12VST021 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 28 | BC12VST019 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 29 | HQ14024 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 30 | 11WST059 | 偏春性 | 偏春性 | A1bb1d1b4 |
| 31 | BC13VST017 | 偏春性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
| 32 | HQ14049 | 强冬性 | 强冬性 | a1b1d1b4 |
| 33 | AQ14033 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 34 | BC13VST018 | 强冬性 | 强冬性 | a1b1d1b4 |
| 35 | HQ14022 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 36 | BQ14023 | 偏春性 | 偏春性 | a1b1D1b4 |
| 37 | BC13VST012 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 38 | HQ14005 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 39 | BQ14006 | 半冬性 | 半冬性 | a1b1d1b4 |
| 40 | 10WST028 | 冬性 | 冬性 | a1b1d1b4 |
| 41 | 济麦19 | 强冬性 | 强冬性 | a1b1d1b4 |
| 42 | 济麦20 | 偏春性 | 偏春性 | a1b1d1b4 |
从上表可以看出，本发明提供的室内鉴定方法和田间鉴定基本符合；42个品种中有5个不同，但冬春性的基本特征没有变：如AQ14032田间鉴定为半冬性，室内鉴定为偏春性；11WST067田间鉴定为强冬性，室内鉴定为冬性；AQ14029田间鉴定为半冬性，室内鉴定为冬性；BC13VST005田间鉴定为强冬性，室内鉴定为冬性；11WST073田间鉴定为春性，室内鉴定为偏春性。
从上表可以看出，本发明提供的室内鉴定方法和分子生物学方法相比，更加精细，更能符合田间鉴定结果，比如济麦20室内鉴定和田间鉴定结果均为偏春性，但分子生物学检测基因型为a1b1d1b4，不带有春性显性基因，分子生物学检测不能区分半春性和冬性。
经过比较可以看出，本发明提供了一种准确、精细、快速的鉴定方法，并且受外界环境影响小，实验结果稳定可靠。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省农业科学院作物研究所
<120> 一种室内快速鉴定小麦冬春性的方法
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gaaaggaaaa attctgctcg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcaggaaatc gaaatcgaag 20
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
agcctccacg gtttgaaagt aa 22
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
aagtaagaca acacgaatgt gaga 24
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gcactcctaa cccactaacc 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
tcatccatca tcaaggcaaa 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
caagtggaac ggttaggaca 20
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ctcatgccaa aaattgaaga tga 23
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
caaatgaaaa ggaatgagag ca 22
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
gttgtctgcc tcatcaaatc c 21
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
ggtcactggt ggtctgtgc 19
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
aaatgaaaag gaacgagagc g 21
<210> 13
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
cataatgcca agccggtgag tac 23
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
atgtctgcca attagctagc 20
<210> 15
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
atgctttcgc ttgccatcc 19
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
ctatccctac cggccattag 20
Claims (9)
1.一种检测小麦冬春性的方法，包括如下步骤：
1)将每个待测小麦品种的种子分七批进行春化处理0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天，得到春化0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天的种子，合理安排这七批种子的春化时间，使七批种子完成春化的时间为同一天；
春化前将待测小麦品种的种子进行催芽处理；
2)将所述春化0天、10天、15天、20天、25天、30天、40天的小麦种子在同一天移栽至人工气候室内培养，观察其抽穗开花情况；
3）根据待测小麦品种抽穗开花需要的最短的春化时间t确定冬春性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
步骤3）中所述的根据待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t确定冬春性，标准如下：
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t为0天，则待测小麦品种为春性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为0＜t≤15天，则待测小麦品种为偏春性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为20≤t＜30，则待测小麦品种为半冬性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间为30≤t＜40天，则待测小麦品种为冬性小麦；
若待测品种抽穗开花需要的最短的春化时间t≥40天，则待测小麦品种为强冬性小麦。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述的春化前将待测小麦品种的种子进行催芽处理为：
春化前将待测小麦品种的种子用70%酒精消毒处理2min，用去离子水冲洗干净，置于培养皿中，培养皿底部事先垫好滤纸，加水10ml，置于25℃无光培养箱中催芽48h。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述的春化处理为：待幼芽生长至2cm时，置于2℃低温春化室中低温春化处理，24h光照，每隔2-3天加水5ml以保证培养皿内滤纸湿润，水温应与室温2℃相近以避免温差太大影响小麦幼苗生长。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
所述的春化处理为：待幼芽生长至2cm时，置于2℃低温春化室中低温春化处理，24h光照，每隔2-3天加水5ml以保证培养皿内滤纸湿润，水温应与室温2℃相近以避免温差太大影响小麦幼苗生长。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述的人工气候室设定温度20℃，光照为16h/d，排除光周期对抽穗的影响。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：
所述的人工气候室设定温度20℃，光照为16h/d，排除光周期对抽穗的影响。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：
所述的人工气候室设定温度20℃，光照为16h/d，排除光周期对抽穗的影响。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：
所述的人工气候室设定温度20℃，光照为16h/d，排除光周期对抽穗的影响。
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| CN201610397019.3A CN106034659A (zh) | 2016-06-07 | 2016-06-07 | 一种室内快速鉴定小麦冬春性的方法 |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111631131A (zh) * | 2020-06-09 | 2020-09-08 | 石河子大学 | 1年3代加速强冬性小麦杂交育种进程的方法 |
| CN114646740A (zh) * | 2022-03-15 | 2022-06-21 | 青岛市农业科学研究院 | 一种春大白菜耐抽薹性室内鉴定的方法 |
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| CN102912027A (zh) * | 2012-11-05 | 2013-02-06 | 新疆农垦科学院 | 用于鉴定小麦春化基因vrn-1的引物对组及其应用 |
| CN102912026A (zh) * | 2012-11-05 | 2013-02-06 | 新疆农垦科学院 | 用于鉴定或辅助鉴定小麦春化基因vrn-1的pcr体系 |
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-
2016
- 2016-06-07 CN CN201610397019.3A patent/CN106034659A/zh active Pending
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