CN106029668B - 吡咯并[3,2]嘧啶衍生物作为人类干扰素诱导剂 - Google Patents

Abstract

式(I)的化合物及其盐是人类干扰素的诱导剂：其中R¹是氢、甲基或–(CH₂)₂OR³，R²是甲基或–(CH₂)₂OR⁴，或R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成5‑或6‑元杂环基，其中所述6‑元杂环基任选被两个羟基取代基取代；R³和R⁴各自独立地为氢或甲基；且n是具有5或6的整数。诱导人类干扰素的化合物可用于治疗或预防各种障碍，例如治疗或预防过敏性疾病和其它炎性状况，例如过敏性鼻炎和哮喘、传染病和癌症，并且也可用作疫苗佐剂。

Description

吡咯并[3,2]嘧啶衍生物作为人类干扰素诱导剂

本发明的技术领域

本发明涉及化合物、它们的制备方法、含有它们的组合物、它们在各种障碍，特别是过敏性疾病和其它炎性状况，例如过敏性鼻炎和哮喘，传染病和癌症的治疗或预防中和作为疫苗佐剂的用途。

发明背景

脊椎动物一直受微生物侵入威胁并已进化出免疫防御机制以清除传染性病原体。在哺乳动物中，这种免疫系统包含两个分支；先天免疫和获得性免疫。宿主防御的第一线是由巨噬细胞和树突细胞介导的先天免疫系统。获得性免疫涉及在感染后期清除病原体并也能生成免疫记忆。由于大量具有已发生基因重排的抗原特异性受体的淋巴细胞指令（repertoire），获得性免疫是高度特异性的。

在哺乳动物体内生成有效先天免疫应答的关键是导致诱导干扰素和在作用于细胞时诱发许多效应的其它细胞因子的机制。在人类中，I型干扰素是由染色体9上的基因编码并编码干扰素α（IFNα）的至少13个亚型和干扰素β（IFNβ）的一个亚型的相关蛋白质家族。干扰素最初被描述为可保护细胞免受病毒感染的物质（Isaacs & Lindemann, J. Virus Interference. Proc. R. Soc. Lon. Ser. B. Biol. Sci. 1957: 147, 258-267）。重组IFNα是最早批准的生物疗法并已成为病毒感染和癌症中的重要疗法。除对细胞的直接抗病毒活性外，干扰素还已知是作用于免疫系统的细胞的有力的免疫应答调节剂（Gonzalez- Navajas J.M.等人Nature Reviews Immunology, 2012；2, 125-35）。

Toll样受体（TLR）是在人类中描述的10种模式识别受体的家族（Gay, N.J.等人, Annu. Rev. Biochem., 2007: 46, 141-165）。TLR主要由先天免疫细胞表达，其中它们的作用是监测感染信号的环境并在活化时调动旨在清除入侵病原体的防御机制。由TLR触发的早期先天免疫应答限制感染的传播，而它们诱发的促炎性细胞因子和趋化因子导致抗原呈递细胞、B细胞和T细胞的募集和活化。TLR可以调节适应性免疫应答的性质以经由树突细胞活化和细胞因子释放提供适当的保护（Akira S.等人, Nat. Immunol., 2001: 2, 675- 680）。从不同TLR激动剂中看出的应答状况取决于活化的细胞类型。

TLR7是定域在已专门化为检测非自核酸的细胞的内涵体小室（endosomalcompartment）中的TLR亚类（TLR 3、7、8和9）的成员。TLR7在经由ssRNA的识别的抗病毒防御中起到关键作用（Diebold S.S.等人, Science, 2004: 303, 1529-1531；和Lund J. M.等 人, PNAS, 2004: 101, 5598-5603）。TLR7在人类中具有受限表达曲线并主要由B细胞和浆细胞样树突状细胞表达（pDC）并在较低程度上由单核细胞表达。浆细胞样DC是淋巴衍生的树突细胞的一个独特群体（0.2-0.8%的外周血单核细胞（PBMC）），其是响应病毒感染分泌高含量的干扰素-α（IFNα）和干扰素-β（IFNβ）的原发性（primary）I型干扰素产生细胞（Liu Y- J, Annu. Rev. Immunol., 2005: 23, 275-306）。

可以经由Toll样受体刺激先天免疫应答，包括I型干扰素和其它细胞因子的活化的小分子化合物的给药可以成为用于治疗或预防人类疾病的重要策略。已经描述了可以在动物和人类中诱导干扰素α的TLR7的小分子激动剂（Takeda K.等人, Annu. Rev. Immunol., 2003: 21, 335-76）。TLR7激动剂包括咪唑并喹啉化合物，如咪喹莫特和雷西莫特（resiquimod）、氧代腺嘌呤（oxoadenine）类似物以及核苷类似物，如洛索立宾和7-硫代-8-氧桥鸟嘌呤（7-thia-8-oxoguanosine），它们早就已知诱导干扰素α（Czarniecki. M., J. Med, Chem., 2008: 51, 6621-6626；Hedayat M.等人, Medicinal Research Reviews, 2012: 32, 294-325 ）。这种类型的免疫调节策略具有识别可用于治疗过敏性疾病（Moisan J.等人, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2006: 290, L987- 995）、病毒感染（Horcroft N.J.等人, J. Antimicrob. Chemther, 2012: 67, 789-801）、癌症（Krieg A., Curr. Oncol. Rep., 2004: 6(2), 88-95）、其它炎性状况，如肠易激综合征（Rakoff-Nahoum S., Cell., 2004, 23, 118(2): 229-41）和作为疫苗佐剂（Persing 等人 Trends Microbiol. 2002: 10(10 Suppl), S32-7）的化合物的潜力。

更具体地，过敏性疾病与对过敏原的Th2-偏性（biased）免疫应答相关联。Th2应答与提高的IgE水平相关联，所述IgE经由其对肥大细胞的作用促进对过敏原的超敏反应，产生例如在哮喘和过敏性鼻炎中所见的症状。在健康个体中，对过敏原的免疫应答用混合Th2/Th1和调节性T细胞应答更平衡。TLR7配体已显示出在体外降低Th2细胞因子和增强Th1细胞因子释放并在体内改善过敏性肺模型中的Th2型炎性反应（Duechs M.J., Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 2011: 24, 203-214；Fili L.等人, J. All. Clin. Immunol., 2006: 118, 511-517；Tao等人, Chin. Med. J., 2006: 119, 640-648；Van L.P. Eur. J. Immunol., 2011: 41, 1992-1999）。因此TLR7配体具有再平衡在过敏个体中所见的免疫应答并导致疾病修饰的潜力。最近使用TLR7激动剂的临床研究已显示在患有过敏性鼻炎和过敏性哮喘两者的患者中TLR7的反复鼻内刺激以产生对过敏原的应答性的持续降低（Greiff L. Respiratory Research, 2012: 13, 53；Leaker B.R.等人, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2012: 185, A4184）。

在对人类干扰素IFNα的新型小分子诱导剂的探索中，已经开发出基于用化合物刺激原发性人类供体细胞或全血的表征小分子（无论机制如何）的测定策略并公开在本文中。

发明概述

在第一方面，本发明涉及式(I)的化合物及其盐：

其中R¹、R²和n如下定义。

本发明的某些化合物已显示是人类干扰素的诱导剂并与人类干扰素的已知诱导剂相比可具有期望的可发展状况（developability profile）。在一个实施方案中，本发明的某些化合物可相对于TNFα表现出对IFNα的选择性。在一个进一步实施方案中，本发明的某些化合物可适合发展，因为它们可比人类干扰素的其它诱导剂较不强效。

诱导人类干扰素的化合物可用于治疗或预防各种障碍，例如治疗或预防过敏性疾病和其它炎性状况，例如过敏性鼻炎和哮喘，治疗或预防传染病和癌症。因此，本发明进一步涉及包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的药物组合物。本发明进一步涉及使用式(I)的化合物或其药物上可接受的盐或包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的药物组合物治疗或预防与其相关的障碍的方法。

本发明的化合物还可用作疫苗佐剂。因此，本发明进一步涉及包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和抗原或抗原组合物的疫苗组合物。

本发明的某些化合物可以是强效免疫调节剂，且因此在它们的操作中应该小心注意。

发明详述

在第一方面，本发明涉及式(I)的化合物及其盐：

其中：

R¹是氢、甲基或–(CH₂)₂OR³，

R²是甲基或–(CH₂)₂OR⁴，或

R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成5-或6-元杂环基（heterocyclyl），其中所述6-元杂环基任选被两个羟基取代基取代；

R³和R⁴各自独立地为氢或甲基；且

n是具有5或6的整数。

在一个实施方案中，R¹是氢、甲基或–(CH₂)₂OR³，且R²是甲基或–(CH₂)₂OR⁴。在另一实施方案中，R¹是氢且R²是–(CH₂)₂OR⁴，例如–(CH₂)₂OH。在另一实施方案中，R¹和R²都是甲基。在另一实施方案中，R¹是–(CH₂)₂OR³且R²是–(CH₂)₂OR⁴。

在一个实施方案中，R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成5-或6-元杂环基，其中所述6-元杂环基任选被两个羟基取代基取代。在另一实施方案中，R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成吡咯烷。在另一实施方案中，R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成任选被两个羟基取代基取代的哌啶。在另一实施方案中，R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成哌啶-3,5-二醇。

在一个实施方案中，当R¹是–(CH₂)₂OR³且R²是–(CH₂)₂OR⁴时，R³和R⁴都是氢。在另一实施方案中，当R¹是–(CH₂)₂OR³且R²是–(CH₂)₂OR⁴时，R³是氢且R⁴是甲基。在另一实施方案中，当R¹是–(CH₂)₂OR³且R²是–(CH₂)₂OR⁴时，R³和R⁴都是甲基.

在一个实施方案中，n是5。在另一实施方案中，n是6。

式(I)的化合物的实例提供在下列列表中，并形成本发明的另一方面：

2,6-二甲基-7-(6-(哌啶-1-基)己基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺；

2,6-二甲基-7-(5-(吡咯烷-1-基)戊基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺；

2,2'-((5-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)戊基)亚氨基（azanediyl）)二乙醇；

2,2'-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)亚氨基)二乙醇；

2-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙醇；

7-(6-(双(2-甲氧基乙基)氨基)己基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺；

2-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)氨基)乙醇；

(3R,5S)-1-(6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)哌啶-3,5-二醇；

(3R,5R)-1-(6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)哌啶-3,5-二醇；和

7-(6-(二甲基氨基)己基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-]嘧啶-4-胺；

和它们的盐。

本文所用的术语“杂环基”是指含有指定数量的碳原子和一个杂原子的单环饱和杂环，该杂原子是氮。这样的杂环是吡咯烷或哌啶。

要理解的是，在本文中提到本发明的化合物是指作为游离碱或作为盐，例如药物上可接受的盐的式(I)的化合物。

在本发明的一个方面中，式(I)的化合物是游离碱的形式。在本发明的另一方面中，式(I)的化合物是药物上可接受的盐的形式。

式(I)的化合物的盐包括药物上可接受的盐和药物上不可接受但可用于制备式(I)的化合物及其药物上可接受的盐的盐。在本发明的一个方面中，式(I)的化合物是药物上可接受的盐的形式。盐可衍生自某些无机或有机酸。

盐的实例是药物上可接受的盐。药物上可接受的盐包括酸加成盐。关于合适的盐的综述，参见Berge等人, J. Pharm. Sci., 66:1-19 (1977)。

式(I)的化合物的药物上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸，例如盐酸、氢溴酸、正磷酸、硝酸、磷酸或硫酸，或有机酸，例如甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、苹果酸、琥珀酸、水杨酸、马来酸、甘油磷酸、酒石酸、苯甲酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯磺酸、萘磺酸，如2-萘磺酸，己酸或乙酰水杨酸。

本发明在其范围内包括式(I)的化合物的盐的所有可能的化学计量和非化学计量形式。

可以使用本领域中公知的技术形成盐，例如通过从溶液中沉淀，接着过滤，或通过溶剂的蒸发。

通常，可以通过式(I)的化合物与合适的酸（如氢溴酸、盐酸、硫酸、马来酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、萘磺酸或琥珀酸）任选在合适的溶剂，如有机溶剂中反应以产生盐而形成药物上可接受的酸加成盐，其通常例如通过结晶和过滤分离。

要认识到，许多有机化合物可与它们在其中反应或从中沉淀或结晶的溶剂形成络合物。这些络合物被称作“溶剂合物”。例如，与水的络合物被称作“水合物”。具有高沸点的溶剂和/或具有高的形成氢键的倾向的溶剂，如水、乙醇、异丙醇和N-甲基吡咯烷酮可用于形成溶剂合物。识别溶剂合物的方法包括，但不限于，NMR和微量分析。式(I)的化合物的溶剂合物在本发明的范围内。本文所用的术语溶剂合物包括游离碱化合物及其任何盐的溶剂合物。

本发明的某些化合物可含有手性原子，且因此可以一种或多种立体异构形式存在。本发明包括本发明的化合物的所有立体异构体，包括旋光异构体，无论作为独立立体异构体还是作为它们的混合物，包括外消旋变体。任何立体异构体可含有少于10重量%，例如少于5重量%或少于0.5重量%的任何其它立体异构体。例如，任何旋光异构体可含有少于10重量%，例如少于5重量%或少于0.5重量%的其对映体。

本发明的某些化合物可以互变异构形式存在。要理解的是，本发明包括本发明的化合物的所有互变异构体，无论作为独立互变异构体还是作为它们的混合物。

本发明的化合物可以为结晶或无定形形式。此外，本发明的化合物的一些晶形可作为多晶型物存在，这些都包括在本发明的范围内。本发明的化合物的最热力学稳定的一种或多种多晶型形式特别受关注。

本发明的化合物的多晶型形式可以使用许多常规分析技术表征和区分，所述分析技术包括但不限于X-射线粉末衍射（XRPD）、红外光谱（IR）、拉曼光谱、差示扫描量热法（DSC）、热重分析（TGA）和固态核磁共振（ssNMR）。

本发明还包括式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的所有合适的同位素变体。式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的同位素变体是指其中至少一个原子被具有相同原子序数但具有与自然界中通常发现的原子质量不同的原子质量的原子替代。可并入本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，分别例如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F和³⁶Cl。式(I)的化合物或其盐或溶剂合物的某些同位素变体，例如其中并入放射性同位素，如³H或¹⁴C的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。氚化（即³H）和碳-14（即¹⁴C）同位素由于它们易于制备和检测而特别优选。此外，被氘（即²H）之类的同位素取代可提供由更大的代谢稳定性带来的某些治疗优点，例如提高的体内半衰期或降低的剂量要求，并因此在一些情况下可优选。式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的同位素变体通常可通过常规程序，如通过示例性方法或通过下文的实施例中描述的制备、使用合适的试剂的适当同位素变体制备。

将从上文认识到，式(I)的化合物及其盐和溶剂合物的溶剂合物、水合物、异构体和多晶型形式包括在本发明的范围内。

化合物制备

式(I)的化合物及其盐可通过下述方法制备，其构成本发明的进一步方面。

因此，提供式(I)的化合物或其盐的制备方法：

其中R¹、R²和n如上定义的，所述方法包括式(II)的化合物的脱保护：

其中R¹、R²和n如上文对式(I)的化合物所定义，且PG是保护基，如苄氧基甲基（BOM）或对甲苯磺酰基，且此后，如果需要，制备式(I)的化合物的盐。

例如，将其中PG相当于BOM的式(II)的化合物溶解在合适的溶剂，例如甲醇或乙醇中，并在合适的流动氢化装置，如Thales H-cube™中，在合适的温度，例如20-60℃下，在氢气存在下经过合适的催化剂，例如10%钯碳。通过除去溶剂和视需要提纯分离产物(I)。

式(II)的化合物可通过式(III)的化合物与氢气在催化剂存在下的反应制备：

其中R¹、R²和n如上文对式(II)的化合物所定义的，且PG是保护基。

例如，将式(III)的化合物溶解在合适的溶剂，例如甲醇或乙醇中，并在合适的流动氢化装置，如Thales H-Cube™中，在合适的温度，例如20-60℃下，在氢气存在下经过合适的催化剂，例如10%钯碳。通过除去溶剂和视需要提纯分离产物(II)。

当保护基是苄氧基甲基（BOM）时，还原炔的反应可导致同时除去该保护基以直接提供式(I)的化合物。

式(III)的化合物可通过式(IV)的化合物与式(V)的化合物的反应制备：

其中Y是离去基团，例如卤素，如碘或溴，或烷基磺酸根，如三氟甲磺酸根，且PG是保护基，

其中R¹、R²和n如对式(I)的化合物所定义的。

例如，在碘化铜(I)、合适的催化剂，例如双(三苯基膦)二氯化钯(II)和合适的碱，例如三乙胺存在下，将式(IV)的化合物和式(V)的化合物溶解在合适的溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺中，并在合适的温度，例如20-55℃下加热合适的时间，例如0.5-17小时。在水性后处理和提纯后分离产物(III)。

式(V)的化合物可通过式(VI)的化合物与式(VII)的化合物的反应制备：

其中n如对式(I)的化合物所定义的，且X是离去基团，如卤素，例如氯、溴或碘，或烷基磺酸根，如对甲苯磺酸根，

其中R¹和R²如对式(I)的化合物所定义的。

例如，将式(VI)的化合物和式(VII)的化合物和合适的碱，例如碳酸氢钠溶解在合适的溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺中，并在合适的温度，例如80-100℃下加热合适的时间，例如16-18小时。在水性后处理和提纯后分离产物(V)，例如通过合适的结晶盐，例如草酸盐的分离。

式(VI)和式(VII)的化合物可商业购得或可通过文献中描述的方法制备。

或者，式(III)的化合物可通过式(VIII)的化合物与式(VII)的化合物的反应制备：

其中n如上文对式(I)的化合物所定义的，X是如对式(VI)的化合物所定义的离去基团，且PG是保护基。

例如，将式(VIII)的化合物、式(VII)的化合物和合适的碱，例如三乙胺溶解在合适的溶剂，例如乙腈中并在合适的温度，例如60-80℃下加热合适的时间，例如16-26小时。在水性后处理和提纯后分离产物(III)。

式(VIII)的化合物可通过式(IV)的化合物与式(VI)的化合物的反应制备。例如，在碘化铜(I)、合适的催化剂，例如双(三苯基膦)二氯化钯(II)和合适的碱，例如三乙胺存在下，将式(IV)的化合物和式(VI)的化合物溶解在合适的溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺中，并在合适的温度，例如65℃下加热合适的时间，例如18-20小时。在水性后处理和提纯后分离产物(VIII)。

式(IV)的化合物可通过式(IX)的化合物与氨溶液的反应制备：

其中Y如对式(IV)的化合物所定义的，且PG是保护基。

例如，将氨水溶液(0.88)添加到式(IX)的化合物在合适的溶剂，例如异丙醇中的溶液中。然后将所得混合物在微波加热器中在合适的温度，例如120-150℃下加热合适的时间，例如1-2小时。在水性后处理和提纯后分离产物(IV)。

式(IX)的化合物可通过式(X)的化合物与式(XI)的化合物的反应制备：

其中Y如对式(IV)的化合物所定义的，

其中式(XI)的化合物是保护基PG的合适的前体，例如苄基氯甲基醚。

例如，用合适的碱，例如氢化钠的油悬浮液处理在合适的溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺或四氢呋喃中的式(X)的化合物。加入式(XI)的化合物，例如苄基氯甲基醚并将反应混合物在合适的温度，例如20℃下搅拌合适的时间，例如1-4小时。在水性后处理和提纯后分离产物(IX)。

式(X)的化合物可通过式(XII)的化合物与卤化剂，例如N-碘代琥珀酰亚胺的反应制备：

。

例如，将式(XII)的化合物溶解在合适的溶剂，例如四氢呋喃中，在合适的温度，例如20℃下与N-碘代琥珀酰亚胺反应合适的时间，例如1-2小时。在水性后处理和提纯后分离产物(X)。

式(XII)的化合物可通过式(XIII)的化合物与氯化剂，例如三氯氧化磷的反应制备：

。

例如，将式(XIII)的化合物悬浮在三氯氧化磷中并在合适的温度，例如90-120℃下加热合适的时间，例如3-30小时。可以在真空中除去过量的三氯氧化磷，然后将残留物倒在冰上并将该混合物的pH调节至7-9。然后将产物萃取到合适的有机溶剂，例如乙酸乙酯中。通过除去溶剂和视需要提纯分离产物(XIII)。

式(XIII)的化合物可通过式(XIV)的化合物与合适的碱，例如氢氧化钠的反应制备：

。

例如，用氢氧化钠水溶液处理式(XIV)的化合物在合适的溶剂，例如乙醇中的溶液，并将反应混合物在合适的温度，例如80-100℃下搅拌合适的时间，例如2 – 18小时。在水性后处理和提纯后分离产物(XIII)。

式(XIV)的化合物可通过式(XV)的化合物与乙腈的反应制备：

。

例如，用氯化氢在合适的溶剂中的溶液，例如氯化氢在1,4-二氧杂环己烷中的溶液处理式(XV)的化合物在乙腈中的悬浮液并在合适的温度50-70℃下加热合适的时间，例如16-96小时。在过滤后分离产物(XIV)。

式(VI)、(VII)、(XI)和(XV)的化合物是文献中已知的或可商购自例如Sigma- Aldrich, UK，或可以用已知程序，例如合成方法的标准参考文本，如J. March, Advanced Organic Chemistry, 第6版(2007), WileyBlackwell或Comprehensive Organic Synthesis (Trost B.M.和Fleming I., (Eds.), Pergamon Press, 1991)（各自通过引用并入本文，因为其涉及这样的程序）中公开的那些类推制备。

可用于本文所述的合成路径的其它保护基及其除去方法的实例可见于T. W. Greene ‘Protective Groups in Organic Synthesis’, 第4版, J. Wiley and Sons, 2006，通过引用并入本文，因为其涉及这样的程序。

对于任何上述反应或方法，可以使用常规加热和冷却方法，分别例如调温油浴或调温热块，和冰/盐浴或干冰/丙酮浴。可以使用常规分离方法，例如从或向水性或非水性溶剂中萃取。可以使用干燥有机溶剂、溶液或萃取物的常规方法，如与无水硫酸镁或无水硫酸钠一起摇振或经过疏水玻璃料。可以按需要使用常规提纯方法，例如结晶和色谱法，例如二氧化硅色谱法或反相色谱法。可以使用常规溶剂，如乙酸乙酯、甲醇、乙醇或丁醇或它们的水性混合物进行结晶。要认识到，通常可通过反应监测技术，例如薄层色谱法和LC-MS确定具体反应时间温度。

如果适当，可以使用常规程序，如非对映异构体衍生物的分级结晶或手性高效液相色谱法（手性HPLC）作为独立异构体制备本发明的化合物的独立异构形式。

可以使用常规方法，如X-射线晶体学测定化合物的绝对立体化学。

使用方法

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐在其中具有潜在有益作用的病状的实例包括过敏性疾病和其它炎性状况，例如过敏性鼻炎和哮喘、传染病和癌症。式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也有可能用作疫苗佐剂。

作为免疫应答调节剂，式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可用于治疗和/或预防免疫介导障碍，包括但不限于炎性或过敏性疾病，如哮喘、过敏性鼻炎和结膜炎、食物过敏、超敏性肺病、嗜酸性细胞肺炎、迟发型超敏障碍、动脉粥样硬化、胰腺炎、胃炎、结肠炎、骨关节炎、牛皮癣、肉状瘤病（sarcoidosis）、肺纤维化、呼吸窘迫综合征、细支气管炎、慢性阻塞性肺病、鼻窦炎、囊性纤维化、光化性角化病、皮肤异生、慢性荨麻疹、湿疹和所有类型的皮炎。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可用于治疗和/或预防对呼吸道感染的反应，包括但不限于呼吸道病毒恶化和扁桃体炎。该化合物也可用于治疗和/或预防自身免疫病，包括但不限于类风湿性关节炎、银屑病关节炎、全身性红斑狼疮、Sjöegrens病、强直性脊柱炎、硬皮病、皮肌炎、糖尿病、移植物排斥，包括移植物抗宿主病、炎性肠病，包括但不限于克罗恩氏病和溃疡性结肠炎。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可用于治疗或预防传染病，包括但不限于由肝炎病毒（例如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒）、人类免疫缺陷病毒、乳头状瘤病毒、疱疹病毒、呼吸道病毒（例如流感病毒、呼吸道合胞体病毒、鼻病毒、偏肺病毒、副流感病毒、SARS）和西尼罗河病毒造成的那些。式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可用于治疗或预防由例如细菌、真菌或原生动物造成的微生物感染。这些包括，但不限于，结核、细菌性肺炎、曲霉病、组织胞浆菌病、念珠菌病、肺囊虫病、麻风病、衣原体病、隐球菌病、隐孢子虫病、弓形体病、利什曼原虫病、疟疾和锥虫病。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可用于治疗或预防各种癌症，特别是治疗或预防已知响应免疫疗法的癌症，且包括但不限于肾细胞癌、肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤和卵巢癌。

本领域技术人员会认识到，在本文中提到的治疗是指治疗既有状况。但是，根据情况，式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可用于预防某些疾病。因此，在一个实施方案中，提供疾病的治疗或预防。在另一实施方案中，提供疾病的治疗。在另一实施方案中，提供疾病的预防。

因此作为本发明的另一方面提供用于疗法的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐。

要认识到，当式(I)的化合物或其药物上可接受的盐用于疗法时，其用作活性治疗剂。

因此还提供用于治疗或预防过敏性疾病和其它炎性状况、传染病和癌症的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐。

因此还提供用于治疗或预防过敏性鼻炎的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐。

因此还提供用于治疗或预防哮喘的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐。

进一步提供式(I)的化合物或其药物上可接受的盐在制造用于治疗或预防过敏性疾病和其它炎性状况、传染病和癌症的药物中的用途。

进一步提供式(I)的化合物或其药物上可接受的盐在制造用于治疗或预防过敏性鼻炎的药物中的用途。

进一步提供式(I)的化合物或其药物上可接受的盐在制造用于治疗或预防哮喘的药物中的用途。

进一步提供治疗或预防过敏性疾病和其它炎性状况、传染病和癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐给药至有此需要的人类对象。

进一步提供治疗或预防过敏性鼻炎的方法，所述方法包括将治疗有效量的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐给药至有此需要的人类对象。

进一步提供治疗或预防哮喘的方法，所述方法包括将治疗有效量的式(I)的化合物或其药物上可接受的盐给药至有此需要的人类对象。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也有可能用作疫苗佐剂。

因此作为本发明的另一方面提供用于疗法的包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和抗原或抗原组合物的疫苗组合物。

因此作为本发明的另一方面提供式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和抗原或抗原组合物在制造用于疗法的药物中的用途。

进一步提供治疗或预防疾病的方法，其包括将包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和抗原或抗原组合物的疫苗组合物给药至患有或易患疾病的人类对象。

组合物

通常，但不是必须在给药至患者前将式(I)的化合物及其药物上可接受的盐配制成药物组合物。因此，在本发明的另一方面中，提供包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和一种或多种药物上可接受的赋形剂的药物组合物。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以配制用于以任何方便的方式给药。式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以例如配制用于口服、局部、吸入、鼻内、口腔含化、肠胃外（例如静脉、皮下、皮内或肌肉内）或直肠给药。在一方面，式(I)的化合物及其药物上可接受的盐配制用于口服给药。在另一方面，式(I)的化合物及其药物上可接受的盐配制用于局部给药，例如鼻内或吸入给药。

用于口服给药的片剂和胶囊可含有常规赋形剂，如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯树胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶、淀粉粘胶、纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；填料，例如乳糖、微晶纤维素、糖、玉米淀粉、磷酸钙或山梨糖醇；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉、交联羧甲基纤维素钠或淀粉乙醇酸钠；或润湿剂，如十二烷基硫酸钠。可根据本领域中公知的方法包衣该片剂。

口服液体制剂可以是例如水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或可以呈现为在使用前用水或其它合适的载体构造的干燥产品。这样的液体制剂可含有常规添加剂，如悬浮剂，例如山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖糖浆、明胶、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯树胶；非水性载体（其可包括食用油），例如杏仁油、分馏椰子油、油酯、丙二醇或乙醇；或防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸。该制剂还可酌情含有缓冲盐、调味剂、着色剂和/或甜味剂（例如甘露醇）。

用于鼻内给药的组合物包括通过滴剂或通过加压泵向鼻给药的水性组合物。合适的组合物含有水作为用于此用途的稀释剂或载体。向肺或鼻给药的组合物可含有一种或多种赋形剂，例如一种或多种悬浮剂、一种或多种防腐剂、一种或多种表面活性剂、一种或多种张力调节剂、一种或多种助溶剂并可包含控制该组合物的pH的组分，例如缓冲体系。此外，该组合物可含有其它赋形剂，如抗氧化剂，例如焦亚硫酸钠，和掩味剂。该组合物也可通过雾化向鼻或呼吸道的其它区域给药。

鼻内组合物可允许将一种或多种式(I)的化合物或其一种或多种药物上可接受的盐递送至鼻腔的所有区域（靶组织）并进一步可允许一种或多种式(I)的化合物或其一种或多种药物上可接受的盐与靶组织保持接触更长时间。鼻内组合物的合适剂量方案将是让患者在清理鼻腔后经鼻缓慢吸入。在吸入过程中，在用手压紧另一鼻孔的同时向一个鼻孔给药组合物。然后对另一鼻孔重复这一程序。通常，每日一次、两次或三次，理想地每日一次通过上述程序向每个鼻孔1或2次喷雾给药。适合每日一次给药的鼻内组合物特别受关注。

如果包含一种或多种悬浮剂，其通常将以基于该组合物总重量的0.1至5% (w/w)，如1.5%至2.4% (w/w)的量存在。药物上可接受的悬浮剂的实例包括，但不限于，Avicel^®（微晶纤维素和羧甲基纤维素钠）、羧甲基纤维素钠、硅酸镁铝（veegum）、黄蓍胶、膨润土、甲基纤维素、黄原胶、卡波姆和聚乙二醇。

用于向肺或鼻给药的组合物可含有一种或多种赋形剂，可通过包含一种或多种防腐剂防止微生物或真菌污染和生长。药物上可接受的抗微生物剂或防腐剂的实例包括，但不限于，季铵化合物（例如苯扎氯铵、苄索氯铵、溴棕三甲铵、西吡氯铵、劳拉氯铵和咪吡氯铵（myristyl picolinium chloride））、汞剂（例如硝酸苯汞、醋酸苯汞和硫柳汞）、醇剂（例如氯丁醇、苯乙醇和苄醇）、抗菌酯（例如对羟基苯甲酸的酯）、螯合剂，如乙二胺四乙酸二钠（EDTA）和其它抗微生物剂，如氯己定、氯甲酚、山梨酸及其盐（如山梨酸钾）和多粘菌素。药物上可接受的抗真菌剂或防腐剂的实例包括，但不限于，苯甲酸钠、山梨酸、丙酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。如果包含一种或多种防腐剂，其可以以基于该组合物总重量的0.001至1% (w/w)，如0.015%至0.5% (w/w)的量存在。

组合物（例如其中至少一种化合物在悬浮液中）可包含一种或多种用于促进药物粒子溶解在该组合物的水相中的表面活性剂。例如，所用表面活性剂的量是在混合过程中不会造成发泡的量。药物上可接受的表面活性剂的实例包括脂肪醇、酯和醚，如聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯（聚山梨醇酯80）、聚乙二醇醚（macrogol ethers）和泊洛沙姆。表面活性剂可以以基于该组合物总重量的大约0.01至10% (w/w)，如0.01至0.75% (w/w)，例如大约0.5% (w/w)的量存在。

可以包含一种或多种张力调节剂以达到与体液，例如鼻腔液的张力，从而降低刺激水平。药物上可接受的张力调节剂的实例包括，但不限于，氯化钠、右旋糖、木糖醇、氯化钙、葡萄糖、甘油和山梨糖醇。如果存在张力调节剂，其可以以基于该组合物总重量的0.1至10% (w/w)，如4.5至5.5% (w/w)，例如大约5.0% (w/w)的量包含。

本发明的组合物可以通过添加合适的缓冲剂，如柠檬酸钠、柠檬酸、氨基丁三醇、磷酸盐，如磷酸二钠（例如十二水合物、七水合物、二水合物和无水形式）或磷酸钠及其混合物缓冲。

如果存在缓冲剂，其可以以基于该组合物总重量的0.1至5% (w/w)，例如1至3%(w/w)的量包含。

掩味剂的实例包括三氯蔗糖、蔗糖、糖精或其盐、果糖、右旋糖、甘油、玉米淀粉、阿斯巴甜、安赛蜜-K、木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇、甘草酸铵、奇甜蛋白、纽甜、甘露醇、薄荷醇、桉叶油、樟脑、天然调味剂、人工调味剂及其组合。

可以包含一种或多种助溶剂以助于溶解一种或多种药物化合物和/或其它赋形剂。药物上可接受的助溶剂的实例包括，但不限于，丙二醇、二丙二醇、乙二醇、甘油、乙醇、聚乙二醇（例如PEG300或PEG400）和甲醇。在一个实施方案中，该助溶剂是丙二醇。

如果存在一种或多种助溶剂，其可以以基于该组合物总重量的0.05至30% (w/w)，如1至25% (w/w)，例如1至10% (w/w)的量包含。

用于吸入给药的组合物包括通过加压泵或吸入器，例如储器型（reservoir）干粉吸入器、单位剂量干粉吸入器、预计量式多剂量干粉吸入器、鼻吸入器或加压气雾剂吸入器、雾化器或吹入器给药至呼吸道的水性、有机或水性/有机混合物、干粉或结晶组合物。合适的组合物含有水作为用于此用途的稀释剂或载体并可以具有常规赋形剂，如缓冲剂、张力改性剂等。水性组合物也可通过雾化给药至鼻和呼吸道的其它区域。这样的组合物可以是借助合适的液化抛射剂从加压包，如定量吸入器递送的水性溶液或悬浮液或气雾剂。

用于局部给药至鼻（例如用于治疗鼻炎）或肺的组合物包括通过加压泵递送至鼻腔的加压气雾剂组合物和水性组合物。非加压并适合局部给药至鼻腔的组合物特别受关注。合适的组合物含有水作为用于此用途的稀释剂或载体。向肺或鼻给药的水性组合物可以具有常规赋形剂，如缓冲剂、张力改性剂等。也可通过雾化向鼻给药水性组合物。

通常可以使用流体分配器向鼻腔递送流体组合物。该流体组合物可以是水性或非水性的，但通常是水性的。式(I)的化合物或其药物上可接受的盐可配制为悬浮液或溶液。这样的流体分配器可具有分配喷嘴或分配孔，在施加使用者向流体分配器的泵机构施力时经其分配计量剂量的流体组合物。这样的流体分配器通常具有多个计量剂量的流体组合物的储器，可在相继泵驱动时分配剂量。或者，用于向鼻腔递送流体组合物的流体分配器可以设计成限定剂量的，例如包含单剂量的一次性分配器。分配喷嘴或孔可配置成插入使用者鼻孔内以将该流体组合物喷雾分配到鼻腔中。上述类型的流体分配器描述和例示在国际专利申请公开WO 2005/044354（Glaxo Group Limited）中。该分配器具有外壳，其容纳具有安装在用于容纳流体组合物的容器上的压缩泵的流体排出装置。该外壳具有至少一个可用手指操作的侧杆，其可相对于外壳向内移动以借助凸轮在外壳中向上移动容器以使泵压缩并经由外壳的鼻喷嘴从泵杆中泵出计量剂量的组合物。在一个实施方案中，该流体分配器具有WO 2005/044354的图30-40中图示说明的一般类型。

含有式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的水性组合物也可以通过如国际专利申请公开WO2007/138084（Glaxo Group Limited）中公开的，例如如参照其图22-46公开的，或如英国专利申请GB0723418.0（Glaxo Group Limited）中公开的，例如如参照其图7-32公开的泵递送。该泵可通过如GB0723418.0的图1-6中公开的执行器驱动。

通过吸入局部递送至肺的干粉组合物可以例如存在于例如明胶的胶囊和盒或例如层压铝箔的泡罩包装中，以用于吸入器或吹入器。粉末掺和组合物通常含有式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和合适的粉末基料（载体/稀释剂/赋形剂物质），如单-、二-或多糖（例如乳糖或淀粉）的吸入粉末混合物。干粉组合物除药物和载体外还可包含其它赋形剂（例如三元合剂，如糖酯，例如纤维二糖八乙酸酯、硬脂酸钙或硬脂酸镁。

在一个实施方案中，适合吸入给药的组合物可并入在安装在合适的吸入装置内的一个或多个药品包装上提供的多个密封剂量容器中。如本领域中已知的，该容器可以一次一个地破裂、剥开或以其它方式打开并通过在吸入装置的管嘴上吸入给药干粉组合物的剂量。该药品包装可采取许多不同形式，例如圆盘形或细长条。代表性的吸入装置是GlaxoSmithKline出售的DISKHALER™和DISKUS^TM装置。

干粉可吸入组合物也可以大量储备在吸入装置中，该装置随之具有计量机构以从该储器向吸入通道计量出一定剂量的组合物，其中在该装置的管嘴处吸气的患者能够吸入该计量的剂量。这种类型的示例性市售装置是TURBUHALER™（AstraZeneca）、TWISTHALER™（Schering）和CLICKHALER™（Innovata）。

干粉可吸入组合物的另一递送方法是在胶囊中提供计量剂量的组合物（每个胶囊一剂），然后通常由患者按需要置于吸入装置中。该装置具有破裂、刺穿或以其它方式打开胶囊的手段以便患者在装置管嘴处吸气时能将该剂量携带到患者肺中。作为这样的装置的市售实例，可以提到ROTAHALER™（GlaxoSmithKline）和HANDIHALER™（BoehringerIngelheim）。

适合吸入的加压气雾剂组合物可以是悬浮液或溶液并可含有式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和合适的抛射剂，如氟碳化合物或含氢氯氟烃或其混合物，特别是氢氟烷烃，尤其是1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷或其混合物。该气雾剂组合物可任选含有本领域中公知的附加组合物赋形剂，如表面活性剂，例如WO94/21229和WO98/34596（Minnesota Mining and Manufacturing Company）中描述的例如油酸、卵磷脂或低聚乳酸或其衍生物，和助溶剂，例如乙醇。加压组合物通常将装在用阀（例如计量阀）密封并组装到具有管嘴的执行器中的罐子（例如铝罐）中。

软膏剂、霜剂和凝胶可以例如在添加合适的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂的情况下用水性或油性基料配制。这样的基料因此可以例如包括水和/或油，如液体石蜡或植物油，如花生油或蓖麻油，或溶剂，如聚乙二醇。可根据基料的性质使用的增稠剂和胶凝剂包括软石蜡、硬脂酸铝、鲸蜡硬脂醇、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、羧聚乙烯（carboxypolymethylene）和纤维素衍生物，和/或单硬脂酸甘油酯和/或非离子乳化剂。

乳液可以用水性或油性基料配制并通常将还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂或增稠剂。

外用粉剂可以借助任何合适的粉末基料，例如滑石、乳糖或淀粉形成。滴剂可以用水性或非水性基料配制，其还包含一种或多种分散剂、增溶剂、悬浮剂或防腐剂。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以例如配制用于将组合物经皮递送到贴剂或向皮肤递送活性组分的其它装置（例如加压气体装置）中。

对于口腔含化给药，该组合物可以采取以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可配制为栓剂，例如含有常规栓剂基料，如可可脂或其它甘油酯。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可配制用于通过推注（bolusinjection）或连续输注肠胃外给药，并可表现为单位剂量形式，例如作为安瓿、小瓶、小容量输液剂或预装填注射器，或在含有添加的防腐剂的多剂量容器中。该组合物可以采取如在水性或非水性载体中的溶液、悬浮液或乳剂之类的形式，并可含有配制剂，如抗氧化剂、缓冲剂、抗微生物剂和/或张力调节剂。或者，该活性成分可以是在使用前用合适的载体，例如无菌无热原水构造的粉末形式。可通过将无菌粉末无菌填充到独立无菌容器中或通过将无菌溶液无菌填充到各容器中并冷冻干燥来制备干固体呈现形式。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可作为佐剂与疫苗一起配制以调节它们的活性。这样的组合物可含有一种或多种抗体或一种或多种抗体片段或抗原组分，包括但不限于蛋白质、DNA、活或死细菌和/或病毒或病毒样颗粒，以及一种或多种具有佐剂活性的组分，包括但不限于铝盐、油和水乳剂、热休克蛋白、脂质A制剂和衍生物、糖脂、其它TLR激动剂，如CpG DNA或类似试剂，细胞因子，如GM-CSF或IL-12或类似试剂。

在本发明的进一步方面中，提供包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的疫苗佐剂。

进一步提供包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐和抗原或抗原组合物的疫苗组合物。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以单独或与其它治疗活性剂组合使用。本发明在进一步方面中提供包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐以及至少一种其它治疗活性剂的组合。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐和其它一种或多种治疗活性剂可以一起或分开给药，并在分开给药时，给药可以同时或以任何顺序相继进行发生。将选择一种或多种式(I)的化合物或其一种或多种药物上可接受的盐和其它一种或多种治疗活性剂的量和给药的相对时间安排以实现所需的联合治疗效果。式(I)的化合物或其药物上可接受的盐与其它治疗剂的组合的给药可以通过在包含这两种化合物的单一药物组合物或各自包含化合物之一的分开的药物组合物中同时给药。或者，该组合可以分开以相继方式给药，其中一种治疗剂先给药，接着是另一种，或反之亦然。这样的相继给药可以在时间上接近或在时间上远离。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以与一种或多种可用于预防或治疗病毒感染的试剂组合使用。这样的试剂的实例包括但不限于：聚合酶抑制剂，如WO 2004/037818-A1中公开的那些以及WO 2004/037818和WO 2006/045613中公开的那些；JTK-003、JTK-019、NM-283、HCV-796、R-803、R1728、R1626以及WO 2006/018725、WO 2004/074270、WO2003/095441、US2005/0176701、WO 2006/020082、WO 2005/080388、WO 2004/064925、WO2004/065367、WO 2003/007945、WO 02/04425、WO 2005/014543、WO 2003/000254、EP1065213、WO 01/47883、WO 2002/057287、WO 2002/057245中公开的那些和类似试剂；复制抑制剂，如阿昔洛韦、泛昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦、拉米夫定和类似试剂；蛋白酶抑制剂，如HIV蛋白酶抑制剂沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦、奈非那韦、安普那韦、福沙那韦、brecanavir、阿扎那韦、替拉那韦、帕利那韦、拉西那韦和HCV蛋白酶抑制剂BILN2061、VX-950、SCH503034；和类似试剂；核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂，如齐多夫定、地达诺新、拉米夫定、扎西他滨、阿巴卡韦、司他夫定、阿德福韦、阿德福韦酯、福齐夫定（fozivudine）、todoxil、恩曲他滨、阿洛夫定、氨多索韦（amdoxovir）、elvucitabine和类似试剂；非核苷逆转录酶抑制剂（包括具有抗氧化活性的试剂，如怡妙康（immunocal）、奥替普拉等），如奈韦拉平、地拉韦定、依法韦仑、洛韦胺、怡妙康、奥替普拉、卡普韦林、TMC-278、TMC-125、依曲韦林和类似试剂；进入（entry）抑制剂，如恩夫韦地（T-20）、T-1249、PRO-542、PRO-140、TNX-355、BMS-806、5-Helix和类似试剂；整合酶抑制剂，如L-870、180和类似试剂；芽殖抑制剂，如PA-344和PA-457和类似试剂；趋化因子受体抑制剂，如vicriviroc（Sch-C）、Sch-D、TAK779、马拉维若（UK-427,857）、TAK449以及WO 02/74769、WO 2004/054974、WO 2004/055012、WO 2004/055010、WO 2004/055016、WO 2004/055011和WO 2004/054581中公开的那些和类似试剂；神经氨酸苷酶抑制剂，如CS-8958、扎那米韦、奥司他韦、帕拉米韦和类似试剂；离子通道阻滞剂，如金刚烷胺或金刚乙胺和类似试剂；和干扰RNA和反义寡核苷酸和如ISIS-14803和类似试剂；作用机制待定的抗病毒剂，例如WO 2005/105761、WO 2003/085375、WO 2006/122011中公开的那些、利巴韦林和类似试剂。式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可以与一种或多种可用于预防或治疗病毒感染的其它试剂，例如免疫疗法（例如干扰素或其它细胞因子/趋化因子、细胞因子/趋化因子受体调节剂、细胞因子激动剂或拮抗剂和类似试剂）；和治疗性疫苗、抗纤维化剂、抗炎剂，如皮质类固醇或NSAID（非甾族抗炎剂）和类似试剂组合使用。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以与一种或多种可用于预防或治疗过敏性疾病、炎性疾病、自身免疫病的其它试剂，例如抗原免疫疗法、抗组织胺、类固醇、NSAID、支气管扩张剂（例如β2激动剂、肾上腺素能激动剂、抗胆碱能剂、茶碱）、氨甲蝶呤、白三烯调节剂和类似试剂；单克隆抗体疗法，如抗-IgE、抗-TNF、抗-IL-5、抗-IL-6、抗-IL-12、抗-IL-1和类似试剂；受体疗法，例如依那西普和类似试剂；抗原非特异性免疫疗法（例如干扰素或其它细胞因子/趋化因子、细胞因子/趋化因子受体调节剂、细胞因子激动剂或拮抗剂、TLR激动剂和类似试剂）组合使用。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐可以与一种或多种可用于预防或治疗癌症的其它试剂，例如化疗药物，如烷基化剂、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、抗有丝分裂剂、激酶抑制剂和类似试剂；单克隆抗体疗法，如曲妥珠单抗、吉妥珠单抗和其它类似试剂；和激素疗法，如他莫昔芬、戈舍瑞林和类似试剂组合使用。

根据本发明的药物组合物也可以单独或与至少一种其它治疗剂组合用于其它治疗领域，例如胃肠疾病。根据本发明的组合物也可以与基因替代疗法组合使用。

本发明在进一步方面中包括包含式(I)的化合物或其药物上可接受的盐以及至少一种其它治疗活性剂的组合。

上文提到的组合可方便地以药物组合物的形式供给使用，因此包含如上定义的组合以及至少一种药物上可接受的稀释剂或载体的药物组合物代表本发明的另一方面。

式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的治疗有效量将取决于许多因素。例如，接受者的物种、年龄和体重、需要治疗的确切状况及其严重程度、该组合物的性质和给药途径都是要考虑的因素。治疗有效量最终应由主治医师裁量。无论如何，用于治疗虚弱人类的本发明的化合物的有效量通常应该在每日0.0001至100毫克/千克接受者体重的范围内。更通常，有效量应该在每日0.001至10毫克/千克体重的范围内。因此，对于70千克成年人，每日实际量的一个实例通常是7至700毫克。对于鼻内和吸入给药途径，用于70千克成年人的典型剂量应该在每日0.1微克至1毫克的范围内，例如1微克、10微克或100微克。该量可以以每日单剂量或每日多个（例如两个、三个、四个、五个或更多个）分剂量给出以使总日剂量相同。可作为式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的有效量本身的比例确定式(I)的化合物的药物上可接受的盐的有效量。类似剂量应该适合于治疗本文中提到的其它状况。

式(I)的化合物及其药物上可接受的盐也可以以任何适当的频率，例如每周1-7次给药。确切剂量方案当然取决于如治疗迹象、患者年龄和状况和所选的特定给药途径之类的因素。在本发明的一个方面中，式(I)的化合物或其药物上可接受的盐可以每周一次给药4至8周，例如4、5、6、7或8周。

药物组合物可表现为每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂量的形式。作为一个非限制性实例，这样的单位可根据治疗的状况、给药途径和患者年龄、体重和状况含有0.5毫克至1克式(I)的化合物或其药物上可接受的盐。优选的单位剂量组合物是含有如上文列举的日剂量或分剂量或其适当分数的活性成分的那些。这样的药物组合物可通过制药行业中公知的任何方法制备。

还提供制备这样的药物组合物的方法，其包括将式(I)的化合物或其药物上可接受的盐与一种或多种药物上可接受的赋形剂掺和。

参考下列实施例举例说明本发明的方面，不无论如何不受其限制。

实施例

分析方法

¹H NMR

在都在400 MHz下运行的Bruker DPX 400或Bruker Avance DRX, Varian Unity400波谱仪或JEOL Delta上在CDCl₃或DMSO-d ₆ 中记录¹H NMR波谱。所用内标是四甲基硅烷或残余质子化溶剂，对CDCl₃而言为7.25 ppm或对DMSO-d ₆ 而言为2.50 ppm。

LCMS

系统A

柱: 50mm x 2.1mm ID, 1.7μm Acquity UPLC BEH C₁₈

流量: 1mL/min.

温度: 40^oC

UV检测范围: 210至350nm

质谱: 在质谱仪上使用交替扫描正和负模式电喷雾电离记录

溶剂: A:0.1% v/v甲酸/水

B:0.1% v/v甲酸乙腈

梯度: 时间(min.) A% B%

0 97 3

1.5 0 100

1.9 0 100

2.0 97 3。

系统B

柱: 50mm x 2.1mm ID, 1.7μm Acquity UPLC BEH C₁₈

流量: 1mL/min.

温度: 40^oC

UV检测范围: 210至350nm

质谱: 在质谱仪上使用交替扫描正和负模式电喷雾电离记录

溶剂: A: 10mM碳酸氢铵/水，用氨溶液调节至pH10

B: 乙腈

梯度: 时间(min.) A% B%

0 99 1

1.5 3 97

1.9 3 97

2.0 99 1。

质量定向自动制备型（Autopreparative）HPLC (MDAP)

在下文给出的条件下进行质量定向自动制备型HPLC。UV检测是来自210nm至350nm波长的平均信号并在质谱仪上使用交替扫描正和负模式电喷雾电离记录质谱。

方法A

在Sunfire C₁₈柱（通常150mm x 30mm i.d. 5μm填充直径）上在环境温度下进行方法A。所用溶剂是：

A = 0.1% v/v甲酸在水中的溶液

B = 0.1% v/v甲酸在乙腈中的溶液。

方法B

在XBridge C₁₈柱（通常100mm x 30mm i.d. 5μm填充直径）上在环境温度下进行方法B。所用溶剂是：

A = 10 mM碳酸氢铵水溶液，用氨溶液调节至pH 10

B = 乙腈。

缩写

下列列表提供本文所用的某些缩写的定义。要认识到，该列表不是穷举的，但本领域技术人员将容易看出下文没有定义的那些缩写的含义。

DCM 二氯甲烷

DMF N, N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

THF 四氢呋喃

EtOAc 乙酸乙酯

MeOH 甲醇

EtOH 乙醇

MeCN 乙腈

HCl 盐酸

HPLC 高效液相色谱法

MDAP 质量定向自动制备型HPLC

SPE 固相萃取

MeOH 甲醇

TBME 叔丁基甲基醚

TFA 三氟乙酸

DIPEA N, N-二异丙基乙胺。

反应中间体

中间体1: 3-乙脒基（acetimidamido）-5-甲基-1H-吡咯-2-甲酸乙酯

向3-氨基-5-甲基-1H-吡咯-2-甲酸乙酯（10.876克，64.7毫摩尔）在乙腈（200毫升）中的悬浮液中加入在二氧杂环己烷中的4M HCl（81毫升，323毫摩尔）。将其在氮气气氛下在60℃下加热4天。将反应混合物过滤以产生灰白色固体形式的标题化合物（12.738克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.45, 0.47 min；MH⁺ 210。

中间体2: 2,6-二甲基-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮

向3-乙脒基-5-甲基-1H-吡咯-2-甲酸乙酯盐酸盐（12.7克，51.7毫摩尔）在乙醇（200毫升）中的悬浮液中一次性加入5M NaOH（41.4毫升，207毫摩尔）。将其置于氮气气氛下并加热至90℃ 2小时。将反应混合物在真空中浓缩并向其中加入5%柠檬酸水溶液（200毫升）直至中和pH。在pH 7下出现固体，将其过滤并用水洗涤以产生浅棕色固体形式的标题化 合物（6.806克）。

LCMS (系统B):t_RET = 0.45 min；MH⁺ 164

将滤液在真空中浓缩并过滤以提供另一批标题化合物（0.5克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.45 min；MH⁺ 164。

中间体3: 4-氯-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶

在圆底烧瓶中引入2,6-二甲基-3H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4(5H)-酮（6.15克，37.7毫摩尔）并将其溶解在POCl₃（70.3毫升，754毫摩尔）中。然后将反应混合物加热至90℃ 30小时。将反应混合物在真空中蒸发以产生棕色油。将其溶解在甲苯中并再蒸发以除去该混合物中的剩余POCl₃。然后将残留物在水（50毫升）中稀释并向其中加入碳酸氢钠直至pH达到7-8。出现白色沉淀物并过滤，然后用水洗涤。将其干燥2小时以产生白色固体形式的标题 化合物（5.617克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.59 min；MH⁺ 182 / 184

将滤液在真空中浓缩、过滤、洗涤并干燥以提供另一批标题化合物（0.22克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.59 min；MH⁺ 182 / 184。

中间体4: 4-氯-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶

在氮气下在室温下向4-氯-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶（6.68克，36.8毫摩尔）在四氢呋喃（100毫升）中的搅拌溶液中逐份加入N-碘代琥珀酰亚胺（9.52克，42.3毫摩尔）。将反应混合物在氮气下在室温下搅拌1小时。然后用TBME稀释该反应混合物。将其用硫代硫酸钠溶液（150毫升）和盐水洗涤。然后将有机层经过疏水玻璃料并在真空中浓缩。将该样品预吸收在florosil上并在二氧化硅（750克）上使用超过11倍柱体积的0-100% TBME-环己烷梯度提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生黄色固体形式的标题化合物（9.854克）。

LCMS (系统A): t_RET = 0.75 min；MH⁺ 308 / 310。

中间体5: 5-((苄氧基)甲基)-4-氯-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶

经5分钟向用冰浴冷却的4-氯-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶（1.098克，3.57毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（25毫升）中的溶液中逐份加入氢化钠（0.286克，7.14毫摩尔）。在添加苄基氯甲基醚（0.891毫升，6.43毫摩尔）之前将反应混合物搅拌30分钟。将反应混合物在室温下在氮气气氛下搅拌1小时。将该反应混合物用水（50毫升）猝灭并在乙酸乙酯（200毫升）和水（200毫升）之间分配。将有机层用水和盐水（200毫升）洗涤并经过疏水玻璃料，然后在真空中浓缩。将样品溶解在二氯甲烷中并在二氧化硅盒（silicacartridge）（70 g）上使用0-25%乙酸乙酯-环己烷梯度经40分钟提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生白色固体形式的标题化合物（1.4克）。

LCMS (系统A): t_RET = 1.18 min；MH⁺ 428 / 430。

中间体6: 5-((苄氧基)甲基)-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺

将5-((苄氧基)甲基)-4-氯-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶（3.458克）分开在3个20毫升微波小瓶中。向各微波小瓶中加入1.15克起始材料并将其用IPA（10毫升）稀释，然后各加入0.88氨（2.5毫升）。密封小瓶并在微波（Biotage）中在150℃（High Power）下加热5小时。通过LCMS监测表明该反应在这三个微波密封小瓶的两个中达到完全：向含有未反应起始材料的小瓶中加入额外的0.88氨（2.5毫升）并将该混合物在微波中加热另外5小时。合并这三个小瓶的反应混合物并用IPA洗涤小瓶。然后将其在真空中浓缩以产生橙色油，将其用TBME（15毫升）研制以产生黄色固体形式的标题化合物（2.352克）。

LCMS (系统A): t_RET = 0.69 min；MH⁺ 409

将滤液在真空中浓缩并用TBME（10毫升）再研制以产生第二批黄色固体形式的标 题化合物（267毫克）。

LCMS (系统A): t_RET = 0.67 min；MH⁺ 409。

中间体7: 1-(己-5-炔-1-基)哌啶

将6-氯己-1-炔（5毫升，41.3毫摩尔）、哌啶（4.08毫升，41.3毫摩尔）和碳酸氢钠（4.16克，49.5毫摩尔）在DMF（50毫升）中的溶液回流16小时。将该反应在真空中浓缩并将残留物在醚（150毫升）和水（150毫升）之间分配。分离有机物，并将水相用二乙醚（50毫升）反萃取。将合并的有机物用盐水（150毫升）洗涤，干燥（MgSO₄），过滤并在真空中浓缩以产生标题化合物的粗样品（3.74克）。将草酸（2.161克，24毫摩尔）添加到粗产物中。将所得固体从乙醇中重结晶，通过过滤收集并在真空中干燥以产生1-(己-5-炔-1-基)哌啶草酸盐（4.66克）。将该固体在二乙醚（150毫升）和饱和碳酸氢钠水溶液（150毫升）之间分配。分离有机物并干燥（MgSO₄），过滤和在真空中浓缩以产生黄色油形式的标题化合物（1.93克）。

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ ppm 2.31 - 2.52 (m, 6 H) 2.18 - 2.26 (m, 2H) 1.92 - 1.96 (m, 1 H) 1.40 - 1.72 (m, 10 H)。

中间体8: 5-((苄氧基)甲基)-2,6-二甲基-7-(6-(哌啶-1-基)己-1-炔-1-基)- 5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺

向5-((苄氧基)甲基)-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（407毫克，0.997毫摩尔）、碘化铜(I)（27.5毫克，0.145毫摩尔）和双(三苯基膦)二氯化钯(II)（49.0毫克，0.070毫摩尔）的搅拌脱气悬浮液中加入在无水DMF（8毫升）中的三乙胺（0.221毫升，1.595毫摩尔）。使该溶液搅拌30分钟，然后经5分钟逐滴加入1-(5-己炔-1-基)哌啶（247毫克，1.495毫摩尔）在DMF（2毫升）中的溶液。将该反应在55℃下搅拌2小时，接着在60℃下搅拌1小时。加入另一份1-(5-己炔-1-基)哌啶（247毫克，1.495毫摩尔）并将该反应在60℃下搅拌1.5小时，然后将其在室温下搅拌过夜。将该反应在真空中浓缩以产生棕色油。将该油在DCM（100毫升）和水（100毫升）之间分配，分离有机相，并将水相用DCM（100毫升）反萃取。将合并的有机萃取物使用疏水玻璃料干燥并在真空中浓缩以产生深橙色油（902毫克）。将该粗材料溶解在二氯甲烷中并在二氧化硅盒（100 g）上使用0-25%甲醇-二氯甲烷梯度经60分钟提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生两批标题化合物。

批次1透明油(42 mg)

LCMS (系统B): t_RET = 1.08 min；MH⁺ 446

批次2浅黄色固体(117 mg)

LCMS (系统B): t_RET = 1.11 min；MH⁺ 446。

中间体9: 5-((苄氧基)甲基)-7-(5-氯戊-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并 [3,2-d]嘧啶-4-胺

在氮气气氛下在室温下向5-((苄氧基)甲基)-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（300毫克，0.735毫摩尔）在无水N,N-二甲基甲酰胺（7毫升）中的氮气脱气溶液中加入碘化铜(I)（30.8毫克，0.162毫摩尔）、双(三苯基膦)二氯化钯(II)（61.9毫克，0.088毫摩尔）和最后三乙胺（0.205毫升，1.470毫摩尔）。将该混合物在室温下在氮气气氛下搅拌10分钟，然后加入5-氯戊-1-炔（151毫克，1.470毫摩尔）在无水N,N-二甲基甲酰胺（5毫升）中的溶液。将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将该反应在真空中蒸发以产生棕色油。将该油在水/盐水(1:1)（100毫升）和DCM（100毫升）之间分配。分离有机层，经过疏水玻璃料并在真空中蒸发以产生深橙色油（538毫克）。将该材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（6 x 1ml）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生浅黄色固体形式的标题化 合物（132毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 1.10 min；MH⁺ 383。

中间体10:5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并 [3,2-d]嘧啶-4-胺

在氮气气氛下在室温下向5-((苄氧基)甲基)-7-碘-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（482.7毫克，1.182毫摩尔）在无水N,N-二甲基甲酰胺（7毫升）中的氮气脱气溶液中加入碘化铜(I)（49.5毫克，0.260毫摩尔）、双(三苯基膦)二氯化钯(II)（100毫克，0.142毫摩尔）和最后三乙胺（0.330毫升，2.365毫摩尔）。将该混合物在室温下在氮气气氛下搅拌10分钟，然后加入6-氯己-1-炔（276毫克，2.365毫摩尔）在无水N,N-二甲基甲酰胺（1毫升）中的溶液。将反应混合物在65℃下搅拌15小时，然后将反应混合物在真空中浓缩。将粗产物溶解在DMSO中并通过反相柱色谱法（120 g C18柱）使用超过12倍柱体积的35至90%乙腈 + 0.1%氨 / 用氨溶液调节至pH10的水中的10mM碳酸氢铵梯度提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生浅黄色固体形式的标题化合物（215毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 1.15 min；MH⁺ 397。

实施例制备

实施例1: 2,6-二甲基-7-(6-(哌啶-1-基)己基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺

将5-((苄氧基)甲基)-2,6-二甲基-7-(6-(哌啶-1-基)己-1-炔-1-基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（159毫克，0.357毫摩尔）在乙醇（15毫升）和乙酸（1.5毫升）中的过滤溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1 mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。将该溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1 mL/min流量）和相同的10% Pd/C CatCart30作为催化剂再氢化。将该溶液在真空中浓缩。将该固体溶解在50:50 DMSO/MeOH（2 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提出。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生乳脂固体形式的标 题化合物（62毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.80 min；MH⁺ 330。

实施例2: 2,6-二甲基-7-(5-(吡咯烷-1-基)戊基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺 马来酸盐

向5-((苄氧基)甲基)-7-(5-氯戊-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（251毫克，0.656毫摩尔）在无水乙腈（4毫升）中的溶液中加入吡咯烷（0.164毫升，1.967毫摩尔）和三乙胺（0.274毫升，1.967毫摩尔）。将该反应在70℃下搅拌22小时。加入另一份吡咯烷（1.5当量）和三乙胺（1.5当量）并将该混合物搅拌另外24小时。该反应在真空中浓缩以产生棕色油。将该油在EtOAc和水之间分配。分离有机相，并将水相用EtOAc反萃取。将合并的有机萃取物使用疏水玻璃料干燥并在真空中浓缩以产生棕色油（315毫克）。将该粗产物溶解在乙醇（40毫升）中并使用H-cube（设置：25℃，充满H₂，1 mL/min流量）和10%Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。将该溶液在真空中浓缩以产生浅黄色油（275毫克）。将该材料溶解在二氯甲烷中并在二氧化硅盒（20 g）上使用0-50%甲醇-二氯甲烷梯度经40分钟提纯。合并含所需产物的级分并在真空中浓缩以产生174毫克黄色油。将该材料再溶解在EtOH（25毫升）和乙酸（2.5毫升）中并流经H cube（设置：60℃，充满H₂, 1 mL/min流量）和作为催化剂的10% Pd/C CatCart 30。使该溶液流经H cube直至反应达到完全并已完全除去BOM基团（使用相同设置3次）。将该乙醇溶液蒸发至干燥以产生透明油（149毫克）。将该材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（2 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生白色固体形式的标题化合物的游离碱（60毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.65 min；MH⁺ 302

将2,6-二甲基-7-(5-(吡咯烷-1-基)戊基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（11.3毫克，0.037毫摩尔）溶解在MeOH/DCM中并加入马来酸（6.53毫克，0.056毫摩尔）。将该溶液蒸发至干燥以产生透明油形式的作为马来酸盐的标题化合物（16.7毫克）

LCMS (系统B): t_RET = 0.66 min；MH⁺ 302。

实施例3: 2,2'-((5-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)戊基) 亚氨基)二乙醇甲酸盐

向5-((苄氧基)甲基)-7-(5-氯戊-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（132毫克，0.345毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（3毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.144毫升，1.034毫摩尔）和二乙醇胺（109毫克，1.034毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热22小时。向反应混合物中进一步加入二乙醇胺（109毫克，1.034毫摩尔）和三乙胺（0.144毫升，1.034毫摩尔）并在70℃下继续加热48小时。将该反应混合物在真空中浓缩，并将残留物溶解在MeOH（25毫升）中并加入乙酸（2毫升）。将该溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。使该甲醇溶液再流经使用与上述相同的设置的H-cube。将该甲醇溶液蒸发至干燥并将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（6 x1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生白色固体形式的标题化合物（82毫克）。

LCMS (系统B):t_RET = 0.59 min；MH⁺ 336。

实施例4: 2,2'-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基) 亚氨基)二乙醇甲酸盐

类似于实施例3由5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺和二乙醇胺制备。

LCMS (系统B):t_RET = 0.64 min；MH⁺ 350。

实施例5: 2-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)(2- 甲氧基乙基)氨基)乙醇

向5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（215毫克，0.542毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（4毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.226毫升，1.625毫摩尔）和2-((2-甲氧基乙基)氨基)乙醇（0.191毫升，1.625毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热40小时。向反应混合物中进一步加入2-((2-甲氧基乙基)氨基)乙醇（0.191毫升，1.625毫摩尔）和三乙胺（0.226毫升，1.625毫摩尔）并在75℃下继续加热24小时。该反应混合物在真空中浓缩，并将残留物溶解在MeOH（25毫升）中，然后加入乙酸（2毫升）。将该溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。

使该溶液再流经使用与上述相同的设置的H-cube3次。在真空中蒸发溶剂。将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（4 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生浅黄色油（93毫克）。将该油通过MDAP（方法B）再提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生标题化合物（27毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.70 min；MH⁺ 364。

实施例6: 7-(6-(双(2-甲氧基乙基)氨基)己基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d] 嘧啶-4-胺

向5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（315.6毫克，0.795毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（5毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.332毫升，2.385 毫摩尔）和双(2-甲氧基乙基)-胺（0.349毫升，2.385毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热20小时. 向反应混合物中进一步加入双(2-甲氧基乙基)-胺（0.349毫升，2.385毫摩尔）和三乙胺（0.332毫升，2.385毫摩尔）并在70℃下继续加热32小时。将该反应混合物在真空中浓缩，并将残留物溶解在MeOH（40毫升）中并加入乙酸（4毫升）。将该溶液使用H-cube（设置：65℃，充满H₂，1mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。使该溶液再流经使用与上述相同的设置的H-cube 3次并且每次流经时改变catcart。在真空中蒸发甲醇。将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（3 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生标题化合物（84.5毫克）。

LCMS (系统B):t_RET = 0.82 min；MH⁺ 378。

实施例7: 2-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)氨 基)乙醇

向5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（220.6毫克，0.556毫摩尔）在乙腈（4毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.232毫升，1.667毫摩尔）和2-氨基乙醇（0.101毫升，1.667毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热21小时。向反应混合物中进一步加入2-氨基乙醇（0.101毫升，1.667毫摩尔）和三乙胺（0.232毫升，1.667毫摩尔）并在70℃下继续加热46小时。将该反应混合物在真空中浓缩，并将残留物溶解在MeOH（25毫升）中并加入乙酸（2毫升）。将该溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。使该甲醇溶液再流经使用与上述相同的设置的H-cube两次。在真空中蒸发甲醇。将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（5 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生透明油形式的标题 化合物（43.7毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.55 min；MH⁺ 306。

实施例8: (3R,5S)-1-(6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己 基)哌啶-3,5-二醇

向5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（215毫克，0.542毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（4毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.226毫升，1.625毫摩尔）和(3R,5S)-哌啶-3,5-二醇（250毫克，1.625毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热16小时。向反应混合物中进一步加入(3R,5S)-哌啶-3,5-二醇（250毫克，1.625毫摩尔）和三乙胺（0.226毫升，1.625毫摩尔）并在75℃下继续加热72小时。将该反应混合物在真空中浓缩，并将残留物溶解在甲醇（45毫升）中并加入乙酸（5毫升）。将该溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1 mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。使该甲醇溶液再流经使用与上述相同的设置的H-cube两次，然后在真空中蒸发。将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（8 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生乳脂固体形式的标题化合物（160.7毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.60 min；MH⁺ 362。

实施例9: (3R,5R)-1-(6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己 基)哌啶-3,5-二醇

向5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（165毫克，0.416毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（3毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.174毫升，1.247毫摩尔）和(3R,5R)-哌啶-3,5-二醇（192毫克，1.247毫摩尔）（Tetrahedron 67(7), 1485, 2011）。将所得混合物在70℃下加热32小时。向反应混合物中加入另外的(3R,5R)-哌啶-3,5-二醇（192毫克，1.247毫摩尔）和另外的三乙胺（0.174毫升，1.247毫摩尔）并在75℃下继续加热5小时。将该反应混合物在真空中浓缩，并将残留物溶解在MeOH（30毫升）中并加入乙酸（3毫升）。将该溶液使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。使该甲醇溶液再流经使用与上述相同的设置的H-cube两次，然后在真空中蒸发。将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（7 x 1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生透明油形式的标题化合 物（95.2毫克）。

LCMS (系统B): t_RET = 0.62 min；MH⁺ 362。

实施例10: 7-(6-(二甲基氨基)己基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-]嘧啶-4-胺

向5-((苄氧基)甲基)-7-(6-氯己-1-炔-1-基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺（183.7毫克，0.463毫摩尔）在N,N-二甲基甲酰胺（3毫升）中的搅拌溶液中加入三乙胺（0.194毫升，1.388毫摩尔）和2-氨基乙醇（0.084毫升，1.388毫摩尔）。将所得混合物在70℃下加热18小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（3 x1mL）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并含所需产物的级分并浓缩以产生浅黄色油（73毫克）。将该油溶解在MeOH（20毫升）中并使用H-cube（设置：60℃，充满H₂，1mL/min流量）和10% Pd/C CatCart 30作为催化剂氢化。在真空中蒸发甲醇并将该粗材料溶解在50:50 DMSO/MeOH（1毫升）中并通过MDAP（方法B）提纯。合并适当的级分并在真空中蒸发以产生乳脂固体形式的标题化合物（24.2毫克）。

LCMS (系统B):t_RET = 0.66 min；MH⁺ 290。

生物评估

根据下列测定法测试本发明的化合物的体外生物活性。

使用新鲜人类全血(WB)测定干扰素-α和TNF-α的诱导

化合物制备

在平底微滴定板中在1.5微升体积下在DMSO中以100x所需浓度制备化合物。第1-10列含有受试化合物的1比4连续稀释。在各板上包含TLR7/8激动剂雷西莫特的连续稀释作为标准，且第11列含有1.5微升的200μM雷西莫特（得出2μM最终浓度，用于限定对雷西莫特的近似最大响应）。对于各供体一式两份测定各化合物。

培养和对干扰素-α和TNF-α的测定

将来自三个人类供体的血样收集到肝素钠（10U/ml）中。将150微升全血分配到含有1.5微升在DMSO中的受试化合物或标准的测定板的Col 1至11中。将板在培养器中放置过夜（37℃，95%空气，5% CO₂）。在培养过夜后，将板从培养器中取出并在定轨摇床上混合大约1分钟。将100微升的0.9%盐水添加到各孔中并将板在定轨摇床上再次混合。然后将板离心（2500rpm，10 min），此后使用Biomek FX移除血浆样品并使用MSD（Mesoscale Discovery）电化学发光测定平台测定IFN-α和TNF-α两者。IFN-α测定类似于上文所述进行。TNF-α测定根据试剂盒说明书（Cat No K111BHB）进行。

释放的细胞因子作为2μM雷西莫特对照物（第11列）的百分比表示。将该百分比相对于化合物浓度和通过非线性最小二乘法曲线拟合测定的响应pEC₅₀绘图。对于IFN-α响应，通常选择4参数逻辑模型。对于TNF-α响应——其中获得清楚的最大响应（即在该响应中观察到界限分明的平台），则通常使用4参数模型。如果该曲线的上渐近线不是界限分明的，则通常将该曲线拟合约束到100%的最大响应（即约束到对2µM雷西莫特的响应）或如果这大于雷西莫特响应，则约束到最高受试浓度的响应。一些曲线对一种或这两种细胞因子而言是钟形的并通常从该拟合中排除该钟形响应的向下斜线上的细胞因子数据（即产生最大响应的那些浓度上方的浓度），通常刚刚高于峰值响应的浓度除外。曲线拟合由此集中在该剂量响应曲线的向上斜线上。

结果

实施例1至10具有≤ 5.7的对IFN-α的平均pEC₅₀。

实施例1至10具有≤ 4.3的对TNF-α的平均pEC₅₀。

使用新鲜人类外周血单核细胞(PBMC)测定干扰素-α和TNF-α的诱导

化合物制备

在DMSO中以100x所需浓度分配化合物（在平底96孔细胞培养板中1微升/孔）。对于各供体一式两份测定各化合物。各板含有TLR7/8激动剂雷西莫特的稀释系列作为标准，第11列含有1微升的200μM雷西莫特（得出2μM最终浓度，用于限定对雷西莫特的近似最大响应）。

PBMC的制备

将来自三个人类供体的血样收集到肝素钠（10U/ml）中。将25毫升体积的全血覆盖到Leucosep管中的15毫升Histopaque上，将该管在400g下离心30分钟，并将血浆/histopaque界面处的条带（band）小心移除到无菌50毫升锥形管中。用无菌DPBS（Dulbecco的磷酸盐缓冲盐水，-CaCl₂/MgCl₂）将管中的体积补充至50毫升并在300g下离心10分钟。将该细胞团块再悬浮在20毫升培养基（RPMI 1640（低内毒素），补充10% v/v胎牛血清（FCS，低内毒素）100U/mL青霉素G、100μg/mL链霉素、10mM L-谷氨酰胺和1x非必需氨基酸）中并使用Nucleoview 3000（Chemometec, Via-1 Cassette）计数细胞。调节PBMC浓度以产生2x10⁶/mL的最终浓度并将100微升该细胞悬浮液添加到含有1微升稀释的受试化合物的孔中。

干扰素-α和TNF-α的培养和测定

将该细胞制品培养24小时（37℃，95%空气，5% CO₂），此后使用Biomek FX移除上清液样品并使用MSD（Mesoscale Discovery）电化学发光测定平台测定IFN-α和TNF-α两者。IFN-α测定类似于上文所述进行。TNF-α测定根据试剂盒说明书（Cat No K111BHB）进行。

释放的细胞因子作为2μM雷西莫特对照物（第11列）的百分比表示。将该百分比相对于化合物浓度和通过非线性最小二乘法曲线拟合测定的响应pEC₅₀绘图。对于IFN-α响应，通常选择4参数逻辑模型。对于TNF-α响应——其中获得清楚的最大响应（即在该响应中观察到界限分明的平台），则通常使用4参数模型。如果该曲线的上渐近线不是界限分明的，则通常将该曲线拟合约束到100%的最大响应（即约束到对2µM雷西莫特的响应）或如果这大于雷西莫特响应，则约束到最高受试浓度的响应。一些曲线对一种或这两种细胞因子而言是钟形的并通常从该拟合中排除该钟形响应的向下斜线上的细胞因子数据（即产生最大响应的那些浓度上方的浓度），通常刚刚高于峰值响应的浓度除外。曲线拟合由此集中在该剂量响应曲线的向上斜线上。

结果

实施例1至9具有5.4至6.3的对IFN-α的平均pEC₅₀。

实施例1至9具有≤ 4.3的对TNF-α的平均pEC₅₀。

Claims (13)

1.式(I)的化合物或其盐：

其中：

R¹是氢、甲基或–(CH₂)₂OR³，

R²是甲基或–(CH₂)₂OR⁴，或

R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成5-或6-元杂环基，其中所述6-元杂环基任选被两个羟基取代基取代；

R³和R⁴各自独立地为氢或甲基；且

n是具有5或6的值的整数。

2.根据权利要求1的化合物或其盐，其中R¹是氢、甲基或–(CH₂)₂OR³，且R²是甲基或–(CH₂)₂OR⁴。

3.根据权利要求1的化合物，其中R¹和R²与它们相连的氮原子一起连接形成5-或6-元杂环基，其中所述6-元杂环基任选被两个羟基取代基取代。

4.根据权利要求1至3任一项的化合物，其中n是5。

5.根据权利要求1至3任一项的化合物，其中n是6。

6.一种化合物或其盐，所述化合物选自：

2,6-二甲基-7-(6-(哌啶-1-基)己基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺；

2,6-二甲基-7-(5-(吡咯烷-1-基)戊基)-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺；

2,2'-((5-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)戊基)亚氨基)二乙醇；

2,2'-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)亚氨基)二乙醇；

2-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)(2-甲氧基乙基)氨基)乙醇；

7-(6-(双(2-甲氧基乙基)氨基)己基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-胺；

2-((6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)氨基)乙醇；

(3R,5S)-1-(6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)哌啶-3,5-二醇；

(3R,5R)-1-(6-(4-氨基-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)己基)哌啶-3,5-二醇；或

7-(6-(二甲基氨基)己基)-2,6-二甲基-5H-吡咯并[3,2-]嘧啶-4-胺。

7.根据权利要求1至3和6任一项的化合物，其是药物上可接受的盐的形式。

8.根据权利要求1至3和6任一项的化合物，其是游离碱的形式。

9.一种药物组合物，其包含如权利要求1至6任一项中所述的化合物或其药物上可接受的盐和一种或多种药物上可接受的赋形剂。

10.一种疫苗组合物，其包含如权利要求1至6任一项中所述的化合物或其药物上可接受的盐和抗原或抗原组合物。

11.如权利要求1至3和6任一项中所述的化合物或其药物上可接受的盐，其用于治疗。

12.如权利要求1至3和6任一项中所述的化合物或其药物上可接受的盐，其用于治疗或预防过敏性疾病或其它炎性状况、传染病或癌症。

13.如权利要求1至6任一项中所述的化合物或其药物上可接受的盐在制造用于治疗或预防过敏性疾病或其它炎性状况、传染病或癌症的药物中的用途。