CN106011250B - 一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法 - Google Patents

一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106011250B
CN106011250B CN201610393611.6A CN201610393611A CN106011250B CN 106011250 B CN106011250 B CN 106011250B CN 201610393611 A CN201610393611 A CN 201610393611A CN 106011250 B CN106011250 B CN 106011250B
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
pyrosequencing
base
kit
genotype
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610393611.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106011250A (zh
Inventor
张毅
劳兰兰
肖炜
俞英
唐韶青
刘林
王雅春
孙东晓
张胜利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing General Station Of Animal Husbandry
China Agricultural University
Original Assignee
Beijing General Station Of Animal Husbandry
China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing General Station Of Animal Husbandry, China Agricultural University filed Critical Beijing General Station Of Animal Husbandry
Priority to CN201610393611.6A priority Critical patent/CN106011250B/zh
Publication of CN106011250A publication Critical patent/CN106011250A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106011250B publication Critical patent/CN106011250B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/124—Animal traits, i.e. production traits, including athletic performance or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种检测牛SMC2基因隐性致死突变的方法，涉及分子生物学领域，本发明方法基于焦磷酸测序技术，采用一对引物、一条通用引物和一条测序引物，核苷酸序列如SEQ ID No.1、2、3、4所示，对牛8号染色体95410507bp位点的单核苷酸多态性进行分析，结果发现野生型纯合子在突变位点处为T/T基因型，焦磷酸测序结果图显示T碱基与C碱基的峰高比例为3:1；而致死突变携带者峰图在突变位点处为T/C基因型，焦磷酸测序结果图显示T碱基与C碱基的峰高比例为5:3。本发明提供的方法操作简单，灵敏度高，准确性强，通量高，检测成本低，在牛的保种、育种过程中具有重要应用价值。

Description

一种检测牛SMC2基因隐性致死突变的方法
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及用于牛SMC2基因型检测的SNP分子标记、以及检测牛SMC2基因隐性致死突变的方法。
背景技术
单核苷酸多态性标记(SNP)，主要是指基因组上由单个核苷酸突变所引起的DNA序列多态性。通过检测单核苷酸多态性标记检测基因型是近些年兴起的一种方法。分子标记在动物育种中的应用已有一段时间，相比传统育种方法，分子育种大大加快了选育效率，节省了育种时间，使得育种学家可以在分子水平上不断探索并选育更优良的家畜品种。
已有多种方法可用于SNP检测，目前比较常用的有基因芯片方法、DNA测序法、质谱法、以及TaqMan荧光定量方法等。不同方法根据所依据的原理不同适用于不同的研究。芯片和质谱技术适用于大规模的多态信息检测。而测序和Taqman技术适用于高精度、高准确性的判定SNP多态信息。在多种测序技术中，焦磷酸测序是一种基于酶级联反应的新型DNA测序技术。是目前少数能够得到定量序列结果的技术之一，其准确度高，重复性好，广泛用于多种遗传多态性分析。
焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是一种新型的酶联级联测序技术，焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美，而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力，为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphisms，SNPs)研究和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。该技术进行改进后可以满足上百个核苷酸序列的测序工作，这样该技术又可以满足对重要微生物的鉴定与分型，特定DNA片段的突变检测和克隆鉴定等方面的应用。焦磷酸测序技术的原理是：引物与模板DNA退火后，在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase)、荧光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)等4种酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来，通过检测荧光的释放和强度，达到实时测定DNA序列的目的。焦磷酸测序技术的反应体系由反应底物、待测单链、测序引物和4种酶构成。反应底物为5’-磷酰硫酸(adenosine-5’-phosphosulfat，APS)、荧光素(1uciferin)。在每一轮测序反应中，反应体系中只加入一种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。如果它刚好能和DNA模板的下一个碱基配对，则会在DNA聚合酶的作用下，添加到测序引物的3’末端，同时释放出一个分子的焦磷酸(PPi)。在ATP硫酸化酶的作用下，生成的PPi可以和APS结合形成ATP,在荧光素酶的催化下，生成的ATP又可以和荧光素结合形成氧化荧光素，同时产生可见光。通过微弱光检测装置及处理软件可获得一个特异的检测峰，峰值的高低则和相匹配的碱基数成正比。如果加入的dNTP不能和DNA模板的下一个碱基配对，则上述反应不会发生，也就没有检测峰。反应体系中剩余的dNTP和残留的少量ATP在Apyrase的作用下发生降解。待上一轮反应完成后，加入另一种dNTP，使上述反应重复进行，根据获得的峰值图即可读取准确的DNA序列信息。焦磷酸测序技术可以用来研究单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism，SNP)，分子诊断细菌与病毒分型、甲基化分析、法医鉴定及药物基因组学等方面都有广泛的应用。该技术不需要凝胶电泳，也不需要对DNA样品进行任何特殊形式的标记和染色，具有大通量、低成本、快速、直观的特点。
近年来，随着全基因组标记技术的广泛应用，一些影响奶牛繁殖力的基因位点被发现。2011年，美国科学家VanRaden等人在分析牛SNP芯片数据的基因型信息时发现，有5种单倍型从来没有以纯合状态出现在牛群中，由此推断该5中单倍型纯合时导致个体死亡(VanRaden等，2011)。其中，在荷斯坦牛品种中发现的3种单倍型被命名为HH1(HolsteinHaplotype 1)、HH2(Holstein Haplotype 2)和HH3(Holstein Haplotype 3)。研究发现，2011年北美荷斯坦牛群中HH1携带率为4.5％，由HH1导致的妊娠率降低3.1％，死胎率为0.7％，对奶牛产业造成了巨大的经济损失(VanRaden等，2011)。
2014年，McClure等人通过外显子捕获技术和二代测序技术，揭示了HH3的致病机理是牛8号染色体第24外显子上的SMC2(structural maintenance of chromosomes 2)基因上的T/C突变，导致编码的氨基酸由苯丙氨酸突变为丝氨酸，SMC2基因在染色体结构的维持和DNA的修复中起关键作用，突变导致SMC2基因功能异常，最终导致胚胎死亡(McClure等，2014)。该突变物理位置为牛UMD3.1全基因组序列上8号染色体的95410507位点。VanRaden等(2011)报道了基于SNP单倍型的HH3检测方法。该方法需要首先对待检样本进行SNP芯片检测，然后通过统计学方法推断单倍型，进而判定个体携带HH3的概率。此方法不仅因依赖芯片检测而成本很高，同时还需事先建立参考群体的基因型数据库；另外，由于其本质上是利用周围SNP标记对致病突变位点基因型的间接推断，所以结果并非100％准确。因此需要一种能够大通量、低成本、快速、直观且准确地检测牛8号染色体SMC2基因上的C/T突变的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测牛SMC2基因隐性致死突变的方法。
为达到上述目的，本发明根据位于牛8号染色体95410507bp位点处牛SMC2基因隐性致死突变的SNP分子标记，该SNP分子标记的多态性为T/C，提供了用于检测该SNP分子标记的引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
进一步地，用于检测该SNP分子标记的引物还包括一条5’端添加生物素标记的通用引物和一条焦磷酸测序引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3-4所示。
本发明提供了上述SNP分子标记在牛育种中的应用。
本发明提供了上述SNP分子标记在牛种质资源改良中的应用。
本发明提供了一种用于检测牛SMC2基因隐性致死突变的试剂盒，含有1对引物，一条通用引物和一条焦磷酸测序引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-4所示。
进一步地，本发明试剂盒利用焦磷酸测序法对牛8号染色体95410507bp位点的核苷酸进行SNP检测。
优选地，本发明检测牛SMC2基因隐性致死突变试剂盒的工作步骤如下：
(1)提取待测牛的基因组DNA，以其为模板，以SEQ ID NO.1-3所示的引物为扩增引物，进行PCR反应；
(2)以步骤(1)的扩增产物为模板，以SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列为测序引物进行焦磷酸测序，根据突变位点的峰图来判断基因型，当焦磷酸测序结果图上显示T碱基与C碱基的峰高比例为3:1时，突变位点为T/T基因型，为野生型纯合子；当焦磷酸测序结果图上显示T碱基与C碱基的峰高比例为5:3时，突变位点为T/C基因型，为致死突变携带者。
其中，步骤(1)中PCR扩增的反应体系为：总体积40μL，其中含dNTP、Mg2+的2×PCRbuffer 20μL，浓度20μM的上游引物1μL，浓度20μM的下游引物0.1μL，浓度10μM的通用引物0.9μL，基因组DNA模板1μg，加水补至40μl反应体系。
步骤(1)中PCR反应条件为：95℃预变性8min；95℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸30sec，45个循环；72℃终延伸10min。
本发明提供了上述试剂盒在牛育种中的应用。
本发明提供了上述试剂盒在牛种质资源改良中的应用。
本发明还提供一种检测牛SMC2基因型的方法，是利用焦磷酸测序法对8号染色体95410507bp位点的核苷酸进行SNP检测。
进一步地，上述方法包括以下步骤：
(1)提取待测牛的基因组DNA，以其为模板，以SEQ ID NO.1-3所示的引物为扩增引物，进行PCR反应；
(2)以步骤(1)的扩增产物为模板，以SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列为测序引物进行焦磷酸测序，根据突变位点的峰图来判断基因型，当焦磷酸测序结果图上显示T碱基与C碱基的峰高比例为3:1时，突变位点为T/T基因型，为野生型纯合子；当焦磷酸测序结果图上显示T碱基与C碱基的峰高比例为5:3时，突变位点为T/C基因型，为致死突变携带者。
本发明提供的一种检测牛SMC2基因型的方法，SNP分子标记，试剂盒可应用于选育不携带APAF1致死基因的牛只。
本发明利用牛SMC2基因隐性致死突变的SNP位点设计特异性引物，进行焦磷酸测序，根据T/G峰值判断牛SMC2基因的基因型可实现对牛SMC2基因隐性致死突变携带者个体的快速检测，克服了常规PCR-RFLP方法检测SNP位点时必须有酶切位点的要求，从而大大地提高牛育种和保种效率；本发明的检测方法可高通量实现牛SMC2基因隐性致死突变的检测，且操作简单，费用低廉，准确度高。
附图说明
图1为本发明所用引物及测序序列在牛SMC2基因序列上的位置(基因组序列来源于Ensembl牛基因序列UMD3.1)。下划线显示引物所在位置，其中直线为上下游引物，波浪线为测序引物；阴影处为测序序列，阴影处从左向右第9个碱基为T/C突变位点。
图2为牛SMC2基因隐性致死突变携带者部分测序结果。箭头处为突变位点(T/C突变)。该突变的基因组物理位置为牛8号染色体95410507bp位(牛UMD 3.1基因组图谱http://www.ensembl.org)。
图3为PCR产物电泳胶图。泳道1-6显示PCR产物为单一的245bp条带；M为DNAMarker。
图4为利用本发明方法检测SMC2基因隐性致死突变位点的基因型。图4A为野生型纯合子，突变位点处T碱基与C碱基的峰高比例为3:1；图4B为致死突变携带者,突变位点处T碱基与C碱基的峰高比例为5:3。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1检测牛SMC2基因隐性致死突变的焦磷酸测序方法的建立
1、基因组DNA提取采用高盐法从牛冻精中提取基因组DNA。
2、引物筛选与PCR扩增
从ensembl数据库(http://asia.ensembl.org/)获取目标DNA序列(UMD3.1:8:95410307:95410707:1)，设计PCR扩增引物和测序引物。下述引物及测序序列在牛SMC2基因序列上的位置见图1。
表1检测牛SMC2基因隐性致死突变的引物组合
其中，上游引物(SMC2-F)、下游引物(SMC2-R)将扩增出包含隐性致死突变位点的SMC2基因片段；通用引物(SMC2-U)序列与下游引物(SMC2-R)的前20bp完全一致，其作用是在PCR产物的5’端添加生物素标记，最终得到5’端带有生物素标记的245bp DNA片段；进行焦磷酸测序时，加入测序引物(SMC2-S)进行测序，根据突变位点的峰图来判断基因型。理论上野生型纯合子峰图在突变位点处T与C的比例为3:1；而致死突变携带者峰图在突变位点处T与C的比例为5:3。因此，通过测序峰图，可以准确区分野生型纯合子和致死突变携带者。突变纯合子的胚胎不可存活，在妊娠期流产，因此试验中不会观察到突变纯合子的基因型。
野生型纯合子在突变位点处为T/T基因型，在焦磷酸测序结果图上，显示T碱基与C碱基的峰高比例为3:1；而致死突变携带者峰图在突变位点处为T/C基因型，在焦磷酸测序结果图上，显示T碱基与C碱基的峰高比例为5:3，见图2。
PCR反应体系：总体积40μL，其中2×PCR buffer(包含dNTP、Mg2+)20μL，上游引物(浓度20μM)1μL，下游引物(浓度20μM)0.1μL，通用引物(浓度10μM)0.9μL，基因组DNA模板1μg，加水补至40μL。
PCR反应条件：95℃预变性8min；然后45个循环，95℃变性30sec，60℃复性30sec，72℃延伸30sec；最后72℃延伸10min。
仪器为Applied Biosystems 9700型PCR仪。
(3)PCR产物的凝胶电泳检测
制作浓度为2％的琼脂糖凝胶，取每个样品的PCR产物3μL点样，在TAE缓冲液中120V电压下电泳15min。在凝胶成像系统中观察电泳结果，为单一的约245bp条带，见图3。
(4)PCR产物的焦磷酸测序
本实施例所用试剂为QIANGEN公司生产的退火缓冲液(PyroMark AnnealingBuffer)、结合缓冲液(PyroMark Binding Buffer)、测序反应试剂(PyroMark GoldQ96Reagents试剂盒(包含酶混合物、底物混合物及四种碱基)，以及GE公司(GeneralElectric Company)生产的链霉亲和素琼脂糖珠(Streptavidin Sepharose HighPerformance)。具体步骤为：
1)在37μL标记有生物素的PCR产物中加入200μg链霉亲和素琼脂糖珠和3μL结合缓冲液，室温下震荡20min，使生物素与链霉亲和素充分结合，将PCR产物吸附到琼脂糖珠上。
2)用过滤吸头将吸附了PCR产物的琼脂糖珠吸起，然后在70％乙醇中清洗5s；变性缓冲液(0.2M NaOH)中清洗5s；清洗缓冲液(0.01M Tris-Acetate，PH＝7.6)中清洗15s；最后将过滤吸头悬空30s(仰角>90°)，由此得到单链PCR产物。
3)将吸头置于酶标板正上方，关掉吸泵开关，待压强变为0时将过滤吸头放入含有1μL测序引物和40μL退火缓冲液的酶标板中，轻轻摇动15s，使单链PCR产物进入酶标板。将装有样品的酶标板放入80℃烘箱2min，再冷却到室温，使测序引物(SMC2-S)与单链PCR产物结合。
4)将装有样品的酶标板放入焦磷酸测序仪，将酶、底物和四种碱基分别加入试剂舱中，打开PyroMark Q96软件，选定SNP检测方法，输入待测序列(TACTCATTT/CCACACA)，设置相关参数后运行程序进行检测。
5)根据测序峰图进行基因型判型
在PyroMark Q96软件中观察测序结果，见图4A和图4B。根据测序峰图判定每个样品的基因型：野生型纯合子峰图在突变位点处T碱基与C碱基的峰高比例为3:1；而致死突变携带者峰图在突变位点处T碱基与C碱基的峰高比例为5:3。
本发明研发过程中设计了多对引物，但效果均不如上述引物效果好。例如下述引物:
经过琼脂糖凝胶电泳，结果发现该对引物扩增后有杂带，不符合实验要求，故而舍弃。经过筛选比较后，发现本发明表1的引物组合能够获得最佳的检测效果，能够准确、特异、高效地检测牛APAF1基因隐性致死突变。
实施例3本发明方法的实际应用
利用本发明实施例1所记载的方法对北京奶牛中心的152头荷斯坦公牛进行了临床检测，共发现致死突变携带者15头，携带者所占比例为9.9％。根据检测结果，制定了这些公牛的选种和选配方案，从而逐步淘汰有害基因携带者，显著提高了选种效率。
上文虽然已对本发明以及其实施方式做了详尽的描述，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以对相应的条件等做一些改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种用于检测牛SMC2基因隐性致死突变的SNP分子标记的引物组合，该SNP分子标记位于牛8号染色体95410507bp位点处，其多态性为T/C，其特征在于，所述引物组合由核苷酸序列如SEQ ID NO.1-4所示的引物组成。
2.一种用于检测牛SMC2基因隐性致死突变的试剂盒，其特征在于，含有1对引物，一条通用引物和一条焦磷酸测序引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-4所示。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒利用焦磷酸测序法对牛8号染色体95410507bp位点的核苷酸进行SNP检测。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，其工作步骤如下：
(1)提取待测牛的基因组DNA，以其为模板，以SEQ ID NO.1-3所示的引物为扩增引物，进行PCR反应；
(2)以步骤(1)的扩增产物为模板，以SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列为测序引物进行焦磷酸测序，根据突变位点的峰图来判断基因型，当焦磷酸测序结果图上显示T碱基与C碱基的峰高比例为3:1时，突变位点为T/T基因型，为野生型纯合子；当焦磷酸测序结果图上显示T碱基与C碱基的峰高比例为5:3时，突变位点为T/C基因型，为致死突变携带者。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤(1)中PCR扩增的反应体系为：总体积40μL，其中含dNTP、Mg2+的2×PCR buffer 20μL，浓度20μM的上游引物1μL，浓度20μM的下游引物0.1μL，浓度10μM的通用引物0.9μL，基因组DNA模板1μg，加水补至40μl反应体系。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，步骤(1)中PCR反应条件为：95℃预变性8min；95℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃延伸30sec，45个循环；72℃终延伸10min。
7.权利要求1所述的引物组合在牛育种中的应用。
8.权利要求2-6任一所述试剂盒在牛育种中的应用。
CN201610393611.6A 2016-06-06 2016-06-06 一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法 Active CN106011250B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610393611.6A CN106011250B (zh) 2016-06-06 2016-06-06 一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610393611.6A CN106011250B (zh) 2016-06-06 2016-06-06 一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106011250A CN106011250A (zh) 2016-10-12
CN106011250B true CN106011250B (zh) 2019-08-30

Family

ID=57090749

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610393611.6A Active CN106011250B (zh) 2016-06-06 2016-06-06 一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106011250B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109055566A (zh) * 2018-07-11 2018-12-21 北京奶牛中心 母牛群体hh型遗传缺陷基因的检测方法及其用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110029255A (ko) * 2009-09-15 2011-03-23 대한민국(농촌진흥청장) 복제소의 개체식별 표시인자 및 개체식별방법
CN102732625A (zh) * 2012-06-18 2012-10-17 中国检验检疫科学研究院 奶牛白细胞黏附缺陷症焦磷酸测序检测方法
CN103290004A (zh) * 2013-05-24 2013-09-11 中国农业大学 一种检测奶牛乳房炎抗性的dna甲基化的分子标记

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110029255A (ko) * 2009-09-15 2011-03-23 대한민국(농촌진흥청장) 복제소의 개체식별 표시인자 및 개체식별방법
CN102732625A (zh) * 2012-06-18 2012-10-17 中国检验检疫科学研究院 奶牛白细胞黏附缺陷症焦磷酸测序检测方法
CN103290004A (zh) * 2013-05-24 2013-09-11 中国农业大学 一种检测奶牛乳房炎抗性的dna甲基化的分子标记

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bovine Exome Sequence Analysis and Targeted SNP Genotyping of Recessive Fertility Defects BH1, HH2, and HH3 Reveal a Putative Causative Mutation in SMC2 for HH3;M C McClure等;《PLoS One》;20140325;第9卷(第3期);第e92769页
登录号：XM_002689875.2;佚名;《GenBank》;20111211;第3345位
登录号：XP_002689921.2;佚名;《GenBank》;20111211;第1135位

Also Published As

Publication number Publication date
CN106011250A (zh) 2016-10-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110191965B (zh) 猪全基因组50k snp芯片及应用
WO2019218743A1 (zh) 一种近交系遗传质量监控的snp快速检测方法和snp位点及其引物
CN113308562B (zh) 棉花全基因组40k单核苷酸位点及其在棉花基因分型中的应用
CN112626257B (zh) 一套检测向日葵品种纯度的snp分子标记及其应用
CN107619870B (zh) 能预示和鉴定绵羊羊毛长度的分子标记及其特异性引物对和应用
CN110029178A (zh) 与绵羊单胎多羔性状相关的snp分子标记及其检测引物组、检测试剂盒和应用
WO2023001212A1 (zh) 分析绵羊产奶性能的基因芯片、分子探针组合、试剂盒及应用
WO2023001211A1 (zh) 一种分析绵羊毛用性状的基因芯片、分子探针组合、试剂盒及应用
CN111979350A (zh) 一种鉴别西葫芦品种真伪性的方法
WO2023001209A1 (zh) 分析绵羊脂尾的基因芯片、分子探针组合、试剂盒及应用
CN114959059B (zh) 一种与细毛羊羊毛纤维直径变异系数相关的snp位点组合及其应用
CN110541041B (zh) 与中国家马矮小性状相关的snp标记及其应用
CN107988385B (zh) 一种检测肉牛PLAG1基因Indel标记的方法及其专用试剂盒
CN106011250B (zh) 一种检测牛smc2基因隐性致死突变的方法
AU2023280943A1 (en) Snp locus combinations related to diameter of fine wool sheep wool fibers, and use
CN116377082A (zh) 绵羊lcorl基因单核苷酸多态性标记在生长性状选择中的应用
CN109706247B (zh) 利用微卫星技术对近交系小鼠进行遗传质量监测的方法
CN114150068B (zh) 一种与猪背膘厚相关的snp标记及其应用
CN114606335A (zh) 玉米抗甘蔗花叶病毒病基因的kasp分子标记的开发及应用
CN105838821B (zh) 一种检测牛apaf1基因隐性致死突变的方法
CN110423826B (zh) 一种c57bl/6亚系小鼠kasp遗传检测试剂盒及引物
CN114292924A (zh) 梅花鹿全基因组snp分子标记组合、snp芯片及应用
CN108315396B (zh) 一种简单便捷检测snp的新方法
CN107287301B (zh) 利用核仁磷酸蛋白基因选择山羊生长性状的分子标记方法
TWI417545B (zh) 檢測豬隻分子標記之基因型的方法及套組

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant