CN106008443A - 一种紫玉米花青素的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种紫玉米花青素的提取方法，具体以紫玉米籽粒作为原料，进行预处理后，先对紫玉米籽粒中的花青素进行粗提取，随后依次经超滤、纳滤、大孔树脂吸附、乙醇洗脱、二次纳滤，并经真空冷冻干燥后获得紫玉米花青素。本发明提供的紫玉米花青素提取方法，选择性好，可有效分离紫玉米花青素中的多糖、有机酸和蛋白等杂质，萃取率高，产品质量高，即使是微量也可以提取，提取速度快，操作简单，废液排放量少。

Description

一种紫玉米花青素的提取方法

技术领域

本发明涉及植物功能天然活性成分的提取技术领域，具体涉及一种紫玉米花青素的提取方法。

背景技术

花青素(Anthocyanidin)在植物界中广泛存在，其颜色鲜艳、无毒性、在酸性条件下呈红色或紫色，在碱性条件下呈蓝色。它是一种水溶性色素，属于酚类化合物中的类黄酮类(flavonoids)。基本结构包含二个苯环，并由一3碳的单位连结(C6-C3-C6)。花青素由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，其中由许多酵素调控催化。在自然状态下，花青素在植物体内与各种单糖结合形成花色苷。花色苷类色素的花青素是一种强有力的抗氧化剂，能够保护人体免受自由基的有害损伤，能够增强血管弹性，改善循环系统，抑制炎症和过敏，增强关节的柔韧性，具有抗突变、减轻肝功能障碍及抗坏血酸的功能。

因此，花青素具有独特的营养价值和药用价值，对维持正常的人体生理功能具有重要作用。但目前所用的色素多为合成色素，几乎都有不同程度的毒性，长期使用会危害人的健康，因此，天然色素的开发利用越来越受到科研领域的重视，降低花青素的提取成本，提取高纯度的花青素，对于提高人类身体健康以及疾病的防治水平具有重大意义。

花青素提取方法的选择决定于提取的目的和花青素本身的组成，用于定性或定量分析时应选择的色素尽可能处于天然状态的提取方法，用于食物着色时应关注色素的最大产率、着色力和稳定性。国内外应用最多的花色苷的提取方法是溶剂提取法。但这些传统方法提取色素时，有机溶剂毒副作用大，且提取效率低下、操作耗费时间、消耗能量大，提取成本较高。

紫玉米(purple corn，学名Zea mays L)，原产南美山区，在我国紫玉米现在各大地区都有种植，其来源广泛，价格低廉，富含花青素，提取所得的色素色泽鲜艳，是提取花青素天然色素的良好的来源。生产上如果能兼顾紫玉米籽粒产量和作为花青素提取原料的干物质质量，不但可以生产粮食，而且还可以降低天然花青素提取成本，综合提高紫玉米的生产效益。

目前，紫玉米中花青素提取工艺多是采用热水浸提法或直接酸解浸提法，有机溶剂萃取法等传统方法法从紫玉米中提取花青素，但这些传统方法提取色素时，有机溶剂毒副作用大，且提取效率低下、操作耗费时间、消耗能量大，提取成本较高。

发明内容

超声波辅助提取技术，是建立在超声波热学原理、超声波的机械作用和空化作用的基础上结合传统提取工艺强化了提取过程的传质速率和效率而发展的新型萃取技术。超声波辅助提取法是超声波空化会产生极大的压力和产生局部高温，提高细胞壁的通透性，使细胞中的有效成分快速释放而溶解在溶剂中，目标组分的萃取完全。由于超声波辅助提取具有极好的细胞破碎性、溶液渗透性和毛细管效应，提取具有简便、快速，更节约成本且更容易应用于工业生产，等优点，因此在植物化学领域应用广泛。

为此，本发明针对上述问题的不足，旨在提供一种行之有效的制备方法，具体利用超声波波辅助提取紫玉米花青素，并优化提取方法，能够进行快速、便捷的提取紫玉米中的花青素。

具体的，本发明提供的紫玉米花青素的提取方法，包括如下步骤：

S1：以紫玉米籽粒作为原料，进行低温烘干，再将其粉碎成20-60目的细粉；

S2：以体积比为4∶1-2∶2-5的60-95％乙醇、0.05-0.4mol/L柠檬酸和水的混合液作为提取液，对所述细粉进行超声波辅助提取，所述细粉和所述提取液的料液比为1∶5-10，超声波功率350-450W，提取温度35-45℃，提取时间为30-45min；

S3：对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000-10000rpm/min的速度下离心5-10min，随后分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次离心，将滤液混合；

S4：将得到的滤液在35-40℃下真空旋转蒸发，获得浓缩液；

S5：将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的1/3-2/3，控制流速为1.0-1.5mL/min，随后对大孔树脂进行洗脱，收集洗脱液；

S6：用旋转蒸发仪在35-40℃下将洗脱液进行浓缩，之后冷冻干燥，得到紫玉米的花青素。

优选地，所述S3和S4之间还包括S33，所述S33具体为：将所述滤液通过截留分子量为3000Da有机物的超滤膜设备进行超滤过滤，操作压力0.3Mpa，过滤时间8-10h，过滤温度为室温；

所得超滤流出液之后再进行S4的操作。

更优选地，所述S33和S4之间还包括S34，所述S34具体为：将S33得到的超滤流出液通过截留分子量为200Da的纳滤膜进行浓缩，操作压力为0.2Mpa，过滤5h，收集截留液；

所得截留液之后再进行S4的操作。

更优选地，所述S5和S6之间还包括S56，所述S56具体为：将洗脱液放入截留分子量为200Da的纳滤膜分离设备中，控制操作压力为0.2Mpa，使溶液保持室温，收集紫玉米花青素纳滤流出液，并通过反渗透回收洗脱液中的乙醇；

所得纳滤流出液之后再进行S6的操作。

更优选地，S6中，所述纳滤流出液经旋转蒸发仪浓缩后，放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，冷冻干燥的真空度控制在15Pa以下，温度控制在-40℃以下。

优选地，S1中，所述低温烘干温度为35-40℃。

优选地，S2中，所述乙醇的浓度为90-95％，所述柠檬酸的浓度为0.1-0.3mol/L。

更优选地，本发明提供的紫玉米花青素的提取方法，包括如下步骤：

S11：以紫玉米籽粒作为原料，进行35℃烘干，然后粉碎成40目的细粉；

S21：以体积比为4∶1∶3的95％乙醇、0.1mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，对所述细粉进行超声波辅助提取，所述细粉和所述提取液的料液比为1∶10，超声波功率400W，提取温度40℃，提取时间为30min；

S31：对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000rpm/min的速度下离心10min，分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次离心，将滤液混合；

S41：将得到的滤液通过截留分子量为3000Da有机物的超滤膜设备进行超滤过滤，操作压力0.3Mpa，过滤时间10h，过滤温度为室温，得到超滤流出液；

S51：将超滤流出液通过截留分子量为200Da的纳滤膜进行浓缩，操作压力为0.2Mpa，过滤5h，收集截留液；

S61：将截留液在35℃下用真空旋转蒸发，获得浓缩液；

S71：将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的1/2，控制流速为1.2mL/min，随后对大孔树脂依次采用水洗和醇洗，收集洗脱液；

S81：将洗脱液放入截留分子量为200Da的纳滤膜分离设备中，控制操作压力为0.2Mpa，使溶液保持室温，收集紫玉米花青素纳滤流出液，并通过反渗透回收洗脱液中的乙醇；

S91：用旋转蒸发仪在35℃下将纳滤流出液进行浓缩，随后放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，控制真空度在15Pa以下，温度为-40℃以下，干燥完全后得到紫玉米花青素。

本发明提供的方法具有如下有益效果：

(1)由于紫玉米中的花青素稳定的存在于植物细胞内，受到细胞壁的保护，并且在细胞内还与其他多种有机物形成共轭体，因此难以提取。本发明采用的超声波辅助提取法是利用超声波热学原理、超声波的机械作用和空化作用促使植物细胞组织破壁或变形，使提取更充分，提取率比传统工艺显著提高达50-500％；

(2)该方法选择性好，可有效分离紫玉米花青素中的多糖、有机酸和蛋白等杂质，萃取率高，产品质量高，即使是微量也可以提取，提取速度快，操作简单，废液排放量少；

(3)超声波辅助提取会产生极大的压力和产生局部高温，提高细胞壁的通透性，使细胞中的有效成分快速释放而溶解在溶剂中，通常在24-40min即可获得最佳提取率，提取时间较传统方法大大缩短，加热速度快，物料的受热时间短，因而有利于花青素的萃取；

(4)超声波辅助提取具有极好的细胞破碎性、溶液渗透性和毛细管效应，提取的最佳温度在40℃左右，对花青素有保护作用，同时大大节能能耗，因而过程易于控制，处理批量较大，萃取效率高，省时。与传统的溶剂提取法相比，提取具有简便、快速；

(5)由于超声波提取杂质少，可使目标组分与基体直接分离开来，从而可提高萃取效率和产品纯度。

附图说明

图1为本发明实施例中紫玉米的花青素酸性乙醇液的吸收光谱图；

图2为本发明实施例中紫玉米花青素酸性乙醇扫描图的峰值检出图。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。

以下实施例中所用到的试剂均为常规试剂。

一、紫玉米籽粒中花青素的测定

对紫玉米籽粒所提取的花青素含量的测定方法有pH示差法，HPLC法和HPLC/MS法等，本发明中对紫玉米籽粒所提取的花青素含量的测定采用pH示差法，以矢车菊素-3-葡萄糖苷作为花青素标准，测得的总花青素含量以矢车菊素-3-葡萄糖苷含量表示。具体如下：

配制pH值为1.0的缓冲液：准确称取1.49g KCl用dd H₂O溶解定容至100ml，准确量取1.7ml盐酸(分析纯)用dd H₂O定容至100ml，配成0.2mo1/L盐酸溶液，将盐酸溶液与KCl溶液以25∶67的比例混合，用KCl溶液调pH 1.0。

配制pH值为4.5的缓冲液：准确称取1.64gNaAc用dd H₂O溶解定容至100ml，用盐酸调pH4.5。紫玉米中花青素的主要成分为矢车菊花素-3-葡萄糖苷(Cyd-3-glu)，由于花青素的的色调和色度随pH值的不同而发生改变，而干扰物质特征光谱不随pH的改变而改变。pH为1时，花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在，pH为4.5时，花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。结合朗伯-比尔定律可得出，在两个不同的pH值下，花青素溶液的吸光度的差值与花青素的含量成比例。

准确称取0.1g的紫玉米花青素干粉，用稀醇溶解，用dd H₂O定容到100ml。然后取10ml样液两份，分别用pH值为1.0和4.5的缓冲液定容至10mL；室温下放置15min，以dd H₂O作对照，用紫外可见分光光度计在480～700nm扫描最大吸收峰，并测定在最大吸收峰处和700nm处的吸光度值，计算花青素含量：

C(mg/g)＝(A/εL)×Mw×DF×V/Wt

A：吸光度；ε：矢车菊-3-葡萄糖苷的摩尔吸收系数(26900)；MW：花青素的摩尔质量(449.2)；DF：稀释倍数；V：体积(mL)；Wt：样品质量(mg)；L：光路路径长度(1cm)。dd H₂O作参比；用A_700nm来消除样液混浊的影响。A＝(A_520nmpH1.0-A_700nmpH1.0)-(A_520nmpH4.5-A₇₀₀nmpH4.5)

二、紫玉米的花青素的测定中最大吸收波长的确定

具体包括如下步骤，精确称取已制备好的过40目筛的紫玉米籽粒粉10.0g，置于锥形瓶中，向其中加入体积比为4∶1∶3的95％乙醇、0.1mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，混合均匀形成100mL混合液，在温度为40℃，超声波萃取处理35min，在浸提后进行离心，离心速度为8000rpm/min，离心时间10min，分离滤渣和滤液，然后用提取溶剂作为参比溶液，在400～700nm(每间隔1nm)进行扫描，并记录最大OD值。进行统计学分析，找出紫玉米花青素的最大吸收波长。

对酸性乙醇所提取的花青素溶液进行400-700nm(每间隔1nm)自动扫描，花青素溶液的吸收光谱如图1所示，峰值检出如图2所示，得出最佳吸收波长为520nm。

实施例1

晋黑玉2号玉米籽粒中花青素的提取

以晋黑玉2号籽粒作为原料，进行35℃低温烘干，然后粉碎成40目的细粉，准确称量10.0g破碎好的晋黑玉2号玉米细粉，置于锥形瓶中，以体积比为4∶1∶3的95％乙醇、0.1mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，向锥形瓶中加入100ml的提取液，混合均匀后，在提取温度40℃，超声波功率为400W的超声波辅助作用下对晋黑玉2号玉米细粉进行花青素提取30min；对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000rpm/min的速度下离心10min，随后分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次8000rpm/min的速度下离心，将两次滤液混合；将滤液在旋转蒸发器中进行真空浓缩，操作条件为温度35℃，真空度0.04MPa，获得浓缩液；将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积(这里所指的体积指的是填充体积，以下相同)的1/2，控制流速为1.2mL/min，随后对大孔树脂采用水洗和醇洗，收集洗脱液；最后用旋转蒸发仪在35℃下将洗脱液进行浓缩，之后放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，冷冻干燥的真空度控制在15Pa以下，温度控制在-40℃以下，得到紫玉米的花青素冻干粉。

采用pH示差法对得到的花青素含量进行测定，具体数据如表1所示

表1 A的测定

A＝(A_520nmpH1.0-A_700nmpH1.0)-(A_520nmpH4.5-A₇₀₀nmpH4.5)＝(0.821-0.065)-(0.798-0.072)＝0.030

紫玉米米中花青素的含量C(mg/g)＝(A/εL)×MW×DF×V/Wt100

＝{[(0.821-0.065)-(0.798-0.072)]/26900×1}×449.2×10×100/(0.1×1000)×100

＝0.501mg/g

实施例2

涿紫1号玉米籽粒中花青素的提取

以涿紫1号玉米籽粒作为原料，进行35℃低温烘干，然后粉碎成60目的细粉，准确称量10g破碎好的涿紫1号玉米细粉，置于锥形瓶中，以体积比为4∶2∶5的90％乙醇、0.2mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，向锥形瓶中加入100ml的提取液，混合均匀后，在提取温度45℃，超声波功率为450W的超声波辅助作用下对涿紫1号玉米细粉进行花青素提取35min；对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000rpm/min的速度下离心8min，随后分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次8000rpm/min的速度下离心，将两次滤液混合；将滤液在旋转蒸发器中进行真空浓缩，操作条件为温度40℃，真空度0.04MPa，获得浓缩液；将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的1/3，控制流速为1.0mL/min，随后对大孔树脂采用水洗和醇洗，收集洗脱液；最后用旋转蒸发仪在40℃下将洗脱液进行浓缩，之后放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，冷冻干燥的真空度控制在15Pa以下，温度控制在-40℃以下，得到紫玉米的花青素冻干粉。

采用pH示差法对得到的花青素含量进行测定，具体数据如表2所示

表2 A的测定

A＝(A_520nmpH1.0-A_700nmpH1.0)-(A_520nmpH4.5-A₇₀₀nmpH4.5)＝(0.831-0.069)-(0.799-0.070)＝0.033

紫玉米米中花青素的含量C(mg/g)＝(A/εL)×MW×DF×V/Wt100

＝{[(0.831-0.069)-(0.799-0.070)＝0.033]/26900×1}×449.2×10×100/(0.1×1000)×100

＝0.551mg/g

实施例3

紫珍珠紫玉米籽粒中花青素的提取

以紫珍珠紫玉米籽粒作为原料，进行35℃低温烘干，然后粉碎成20目的细粉，准确称量20.0g破碎好的紫珍珠紫玉米细粉，置于锥形瓶中，以体积比为4∶1∶2的95％乙醇、0.3mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，向锥形瓶中加入100ml的提取液，混合均匀后，在提取温度35℃，超声波功率为350W的超声波辅助作用下对紫珍珠紫玉米细粉进行花青素提取45min；对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在10000rpm/min的速度下离心5min，随后分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次10000rpm/min的速度下离心，将两次滤液混合；将滤液在旋转蒸发器中进行真空浓缩，操作条件为温度40℃，真空度0.04MPa，获得浓缩液；将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的2/3，控制流速为1.5mL/min，随后对大孔树脂采用水洗和醇洗，收集洗脱液；最后用旋转蒸发仪在35℃下将洗脱液进行浓缩，之后放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，冷冻干燥的真空度控制在15Pa以下，温度控制在-40℃以下，得到紫玉米的花青素冻干粉。

采用pH示差法对得到的花青素含量进行测定，具体数据如表3所示

表3 A的测定

A＝(A_520nmpH1.0-A_700nmpH1.0)-(A_520nmpH4.5-A₇₀₀nmpH4.5)＝(0.812-0.059)-(0.789-0.068)＝0.032

紫玉米米中花青素的含量C(mg/g)＝(A/εL)×MW×DF×V/Wt100

＝{[(0.812-0.059)-(0.789-0.068)]/26900×1}×449.2×10×100/(0.1×1000)×100

＝0.534mg/g

实施例4

晋黑玉2号玉米籽粒中花青素的提取

以晋黑玉2号籽粒作为原料，进行35℃低温烘干，然后粉碎成40目的细粉，准确称量10.0g破碎好的晋黑玉2号玉米细粉，置于锥形瓶中，以体积比为4∶1∶3的95％乙醇、0.1mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，向锥形瓶中加入100ml的提取液，混合均匀后，在提取温度40℃，超声波功率为400W的超声波辅助作用下对晋黑玉2号玉米细粉进行花青素提取30min；对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000rpm/min的速度下离心10min，随后分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次8000rpm/min的速度下离心，将两次滤液混合；将离心后得到的滤液通过截留分子量为3000Da有机物的超滤膜设备进行超滤过滤，操作压力0.3Mpa，过滤时间10h，过滤温度为室温，得到超滤流出液；再将超滤流出液通过截留分子量为200Da的纳滤膜进行浓缩，操作压力为0.2Mpa，过滤5h，收集截留液；将截留液在旋转蒸发器中进行真空浓缩，操作条件为温度35℃，真空度0.04MPa，获得浓缩液，将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的1/2，控制流速为1.2mL/min，随后对大孔树脂采用水洗和醇洗，收集洗脱液；将洗脱液放入截留分子量为200 Da的纳滤膜分离设备中，控制操作压力为0.2Mpa，使溶液保持室温，收集紫玉米花青素纳滤流出液，并通过反渗透回收洗脱液中的乙醇；最后用旋转蒸发仪在35℃下将洗脱液进行浓缩，之后放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，冷冻干燥的真空度控制在15Pa以下，温度控制在-40℃以下，得到紫玉米的花青素冻干粉。

采用pH示差法对得到的花青素含量进行测定，具体计算方法和实施例1相同，经计算得出紫玉米米中花青素的含量的0.68mg/g，能够充分对玉米籽粒中的花青素进行提取。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，其保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内，本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (8)

1.一种紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：以紫玉米籽粒作为原料，进行低温烘干，再将其粉碎成20-60目的细粉；

S2：以体积比为4∶1-2∶2-5的60-95％乙醇、0.05-0.4mol/L柠檬酸和水的混合液作为提取液，对所述细粉进行超声波辅助提取，所述细粉和所述提取液的料液比为1∶5-10，超声波功率350-450W，提取温度35-45℃，提取时间为30-45min；

S3：对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000-10000rpm/min的速度下离心5-10min，随后分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次离心，将滤液混合；

S4：将得到的滤液在35-40℃下真空旋转蒸发，获得浓缩液；

S5：将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的1/3-2/3，控制流速为1.0-1.5mL/min，随后对大孔树脂进行洗脱，收集洗脱液；

S6：用旋转蒸发仪在35-40℃下将洗脱液进行浓缩，之后冷冻干燥，得到紫玉米的花青素。

2.根据权利要求1所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，所述S3和S4之间还包括S33，所述S33具体为：将所述滤液通过截留分子量为3000Da有机物的超滤膜设备进行超滤过滤，操作压力0.3Mpa，过滤时间8-10h，过滤温度为室温；

所得超滤流出液之后再进行S4的操作。

3.根据权利要求2所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，所述S33和S4之间还包括S34，所述S34具体为：将S33得到的超滤流出液通过截留分子量为200Da的纳滤膜进行浓缩，操作压力为0.2Mpa，过滤5h，收集截留液；

所得截留液之后再进行S4的操作。

4.根据权利要求3所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，所述S5和S6之间还包括S56，所述S56具体为：将洗脱液放入截留分子量200Da的纳滤膜分离设备中，控制操作压力为0.2Mpa，使溶液保持室温，收集紫玉米花青素纳滤流出液，并通过反渗透回收洗脱液中的乙醇；

所得纳滤流出液之后再进行S6的操作。

5.根据权利要求1所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，S6中，所述洗脱液经旋转蒸发仪浓缩后，放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，冷冻干燥的真空度控制在15Pa以下，温度控制在-40℃以下。

6.根据权利要求1所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，S1中，所述低温烘干温度为35-40℃。

7.根据权利要求1所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，S2中，所述乙醇的浓度为90-95％，所述柠檬酸的浓度为0.1-0.3mol/L。

8.根据权利要求4所述的紫玉米花青素的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

S11：以紫玉米籽粒作为原料，进行35℃烘干，然后粉碎成40目的细粉；

S21：以体积比为4∶1∶3的95％乙醇、0.1mol/L柠檬酸和蒸馏水的混合液作为提取液，对所述细粉进行超声波辅助提取，所述细粉和所述提取液的料液比为1∶10，超声波功率400W，提取温度40℃，提取时间为30min；

S31：对超声波辅助提取后的混合物用高速离心机在8000rpm/min的速度下离心10min，分离滤渣和滤液，进行二次提取，提取时间减半，再次离心，将滤液混合；

S41：将得到的滤液通过截留分子量为3000Da有机物的超滤膜设备进行超滤过滤，操作压力0.3Mpa，过滤时间10h，过滤温度为室温，得到超滤流出液；

S51：将超滤流出液通过截留分子量为200Da的纳滤膜进行浓缩，操作压力为0.2Mpa，过滤5h，收集截留液；

S61：将截留液在35℃下用真空旋转蒸发，获得浓缩液；

S71：将获得的浓缩液加入到填充有大孔树脂的层析柱中，所述浓缩液的加入体积为大孔树脂体积的1/2，控制流速为1.2mL/min，随后对大孔树脂依次采用水洗和醇洗，收集洗脱液；

S81：将洗脱液放入截留分子量为200Da的纳滤膜分离设备中，控制操作压力为0.2Mpa，使溶液保持室温，收集紫玉米花青素纳滤流出液，并通过反渗透回收洗脱液中的乙醇；

S91：用旋转蒸发仪在35℃下将纳滤流出液进行浓缩，随后放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥至水分含量在5％以下，控制真空度在15Pa以下，温度为-40℃以下，干燥完全后得到紫玉米花青素。