CN105998091A - 一种牛樟芝三萜类物质的提取方法及提取物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种在超声条件下，利用乙醇提取‑水沉淀对牛樟芝中三萜类物质进行提取的方法以及根据该方法获得的提取物。本发明的提取方法避免使用毒性较大的有机溶剂，工艺简单、设备要求低、成本低、产品得率高，所获得的提取物中三萜类物质成分含量高、可直接用于食用或药用，具有较高的药用价值。

Description

一种牛樟芝三萜类物质的提取方法及提取物

技术领域

本发明属于中药提取技术领域，具体而言，涉及一种三萜类物质的提取方法以及利用该方法获得的提取物，特别是一种牛樟芝三萜类物质的提取方法及利用该方法获得的提取物。

背景技术

牛樟芝又名牛樟菇，拉丁名为Antrodia camphorata，属于非褶菌目、多孔菌科、多年生蕈菌。该菌为中国台湾特有真菌，仅生长于牛樟树(Cinnamomum kanehirai)上，被誉为“森林红宝石”。牛樟芝在中国台湾被尝试作为药物有几十年的历史，而真正进入大众视线则仅有十几年的时间。其药用价值高，产量又稀少，目前众多研究机构正对其有效成分的提取、分离及应用展开研究。

牛樟芝含有多糖类、固醇类、三萜类、腺苷类、不饱和脂肪酸、免疫蛋白等多种组分，有抗癌防癌、抗炎、抗氧化、保肝护肝等功效，有广泛的保健和药用价值。迄今为止，已经从牛樟芝中分离到包括三萜类物质、多糖体、腺苷等在内的70多种化合物，研究表明其功效主要来自于三萜类物质和多糖体。三萜类化合物是牛樟芝苦味的主要来源，1995年首次从牛樟芝子实体中分离出3种以麦角甾醇为骨架的三萜类化合物，分别将其命名为樟芝酸(zhankuic acid)A(化学名称为4α-甲基麦角甾-8,24(28)-二烯-3,7,11-三酮-26-酸)、樟芝酸B(化学名称为3α-羟基-4α-甲基麦角甾-8,24(28)-二烯-7,11-二酮-26-酸)和樟芝酸C(化学名称为3α,12α-二羟基-4α-甲基麦角甾-8,24(28)-二烯-3,7,11-三酮-26-酸)。动物试验发现，樟芝酸A具有对鼠P-388白血病细胞株的毒性作用，樟芝酸B具有微弱的抗5-羟色胺能和抗胆碱能活性。后来的研究者又分别在牛樟芝子实体中分离到以麦角甾醇和羊毛甾醇为骨架的两大类共计14种三萜类化合物。

牛樟芝中含有一些特有的三萜类物质，这些三萜类物质是发挥其功效的主要成分，且具有不溶于水或难溶于水而易溶于有机溶剂的特点。 现有的提取技术包括有机溶剂(甲醇、乙醚、氯仿等)萃取、二氧化碳超临界萃取和半仿生提取等，但其具有以下缺陷：

1.采用甲醇、乙醚、氯仿等有机溶剂进行萃取，虽然能够获得较高的得率，但上述有机溶剂均具有毒性，其使用存在较大的安全隐患；

2.二氧化碳超临界萃取设备和萃取技术要求高，工艺复杂，并且萃取过程需要在很高的压力下进行，对设备以及整个管路系统的耐压性能要求较高；

3.提取成本高。

例如，专利申请CN104324057A公开了一种三萜类化合物的萃取方法，其采用毒性相对较低的无水乙醇作为提取溶液在超声波辅助下对三萜类化合物进行提取，然而，其后处理过程中仍需使用氯仿等毒性较大的溶剂，且提取物中三萜类化合物的含量不高；再如，专利申请CN101530436B公开了一种对灵芝子实体中的灵芝三萜与灵芝多糖进行综合提取的方法，同样在超声波的辅助下采用乙醇对其中的灵芝三萜进行提取，但是其不经后处理而采用将乙醇提取液直接喷雾干燥的方法获得提取物，提取物中灵芝三萜的含量均在52wt％以下，且提取效率不高。

因此，有必要通过改进获得新的提取工艺，研究牛樟芝中三萜类物质的提取新方法。

发明内容

为了克服上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种新的牛樟芝三萜类物质的提取方法，避免使用毒性较大的有机溶剂，并且工艺简单、设备要求低、成本低、产品得率高，所获得的提取物中三萜类物质成分含量高并且可直接用于食用或药用。

因此，在一个方面，本发明提供了一种牛樟芝三萜类物质的提取方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将牛樟芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；

(2)按照质量(g)体积(mL)比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，搅拌得混合物；

(3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.5h-6h，获得提取液；

(4)对所述提取液进行离心分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3)对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，搅拌混合，获得悬浊液；

(6)对所述悬浊液进行离心分离，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛樟芝三萜类物质的提取物粉末。

另一方面，本发明还提供了根据上述提取方法获得的提取物。

通过以下段落[1]-[10]对本发明进行具体说明：

[1]一种牛樟芝三萜类物质的提取方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将牛樟芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；

(2)按照质量(g)体积(mL)比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，搅拌得混合物；

(3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.5h-6h，获得提取液；

(4)对所述提取液进行离心分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3)对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，搅拌混合，获得悬浊液；

(6)对所述悬浊液进行离心分离，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛樟芝三萜类物质的提取物粉末。

[2]如段落[1]所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述牛樟芝原料为牛樟芝子实体或栽培边料；优选地，将牛樟芝原料烘干至水分含量为7wt％以下、优选5wt％以下，更优选地，将烘干的原料粉碎至10目-40目。

[3]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇为食品级乙醇，优选地，其乙醇的体积百分含量为80％以上，优选地，所述粗粉与乙醇的质量(g)体积(mL)比为1:20-1:40、更优选1:30。

[4]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，超声波功率为300W-400W。

[5]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，对所述提取液以2000r/min-5000r/min的速率离心分离10min-30min。

[6]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)中，所述水为蒸馏水，优选地，向合并的上清液中加入3-4倍量的水。

[7]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(6)中，对所述悬浊液以2000r/min-5000r/min的速率离心分离10min-30min。

[8]如段落[1]或[2]所述的提取方法，其特征在于，步骤(7)中，将所述沉淀物在40℃-80℃下干燥至水分含量在5wt％以下，优选地，将所述沉淀物粉碎至100目。

[9]根据段落[1]-[8]中任一段所述的提取方法获得的提取物。

[10]如段落[9]所述的提取物，其特征在于，所述提取物中三萜类物质的含量在80wt％以上。

本发明的上述技术方案实现了如下技术效果：

根据三萜类物质不溶于水或难溶于水而易溶于乙醇等有机溶剂的特点，本发明采用毒性较低的乙醇作为提取溶剂，在超声条件下对牛樟芝原料中的三萜类物质进行提取，再用水使其沉淀析出。该方法工艺简单、设备要求低、成本低、产品得率高，避免使用甲醇、氯仿等毒性较大的有机溶剂，可直接用于食用或药用，并且所获得的提取物粉末中三萜类物质的含量高达80wt％以上，具有较高的药用价值。另一方面，本发明的方法还可用于对牛樟芝栽培边料进行提取，综合提高牛樟芝栽培的经济效益。

附图说明

图1为本发明所使用的牛樟芝原料的照片。

图2为三萜类物质含量的标准曲线。

图3为根据本发明的提取方法所获得的提取物。

具体实施方式

在本发明中，术语“牛樟芝子实体”是指牛樟芝段木栽培形成的产孢构造，即果实体，由已组织化了的菌丝体组成。

在本发明中，术语“牛樟芝栽培边料”是指牛樟芝栽培初期，菌丝体在段木表面形成的菌皮。

在本发明中，术语“食用级乙醇”又称食用乙醇、食用酒精、发酵性蒸馏酒精，主要是利用薯类、谷物类、糖类作为原料经过蒸煮、糖化、发酵等处理而得的供食品工业使用的酒精。

在一个实施方式中，本发明涉及牛樟芝三萜类物质的提取方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将牛樟芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；

(2)按照质量(g)体积(mL)比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，搅拌得混合物；

(3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.5h-6h，获得提取液；

(4)对所述提取液进行离心分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3)对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，搅拌混合，获得悬浊液；

(6)对所述悬浊液进行离心分离，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛樟芝三萜类物质的提取物粉末。

在优选的实施方式中，可以采用牛樟芝子实体或栽培边料作为牛樟芝原料，其中，牛樟芝子实体(干物质)中三萜类物质的含量约为12wt％，栽培边料(干物质)中三萜类物质的含量约为4wt％。更优选地，在提取前对牛樟芝原料进行预处理，即，将新鲜采摘的牛樟芝子实体或栽培边料在30℃-70℃下烘干至水分含量在7wt％以下、甚至在5wt％以下(如图1所示)，然后用粉碎机将其粉碎至10目-40目的粗粉，以便于后续投料操作。

在优选的实施方式中，使用食品级乙醇作为提取溶剂对牛樟芝原料粗粉进行提取。一方面，乙醇为目前常用的有机溶剂，较甲醇、乙醚、氯仿等而言具有较低的毒性，同时能够达到较好的提取效果；另一方面，食品级乙醇通常由粮食发酵而成，不含工业酒精中难以避免而混入的甲 醇、苯等对人体危害较大的化合物，由此提取获得的提取物可直接用于食用或药用，更加安全。在本发明中，对上述食品级乙醇中乙醇的含量不作限制，但优选的是，其中乙醇的体积百分含量在80％以上，更优选无水乙醇。

可以理解的是，在用乙醇对牛樟芝三萜类物质进行提取的过程中，当乙醇的量过少时，则使得三萜类物质提取不充分，影响提取效率；当乙醇的量过多时，则需要更大量的水对提取液进行沉淀，造成不必要的浪费。因此，在本发明优选的实施方式中，牛樟芝原料粗粉与乙醇的质量(g)体积(mL)比为1:5-1:50、优选1:20-1:40、更优选1:30。

本发明采用超声技术对牛樟芝三萜类物质进行提取，超声波功率设定为100W-500W、优选300W-400W。为进一步提高提取效率，对牛樟芝粗粉和乙醇的混合物进行加热，使得在乙醇回流条件下(常压下约为78℃-79℃)进行提取，根据投料量的不同，提取进行0.5h-6h，以获得固液混合状态的提取液。

在上述提取液中，大部分三萜类物质溶解于乙醇中，而不溶于乙醇的其它物质则保留为固态。本发明采用离心的方式对该提取液进行分离，获得上清液和固体部分，收集上清液。对离心的速率和时间不作限制，达到分离的目的即可，通常，离心速率可以设定为2000r/min-5000r/min，根据投料量的不同，离心分离10min-30min。为了能更充分、更完全地提取牛樟芝原料中的三萜类物质，可以向分离得到的固体部分中加入新的乙醇，在同样的超声、加热条件下进行重复提取，重复2次-3次。收集并合并各次获得的上清液。

利用三萜类物质不溶于水或难溶于水的特性，向收集的上清液中加入2-5倍量、优选3-4倍量的水，将三萜类物质沉淀析出，获得悬浊液。再次通过离心的方式对悬浊液进行分离，获得沉淀物。

在优选的实施方式中，将所述沉淀物在40℃-80℃条件下干燥，使其水分含量降低至5wt％以下，并粉碎过100目筛，得到含有牛樟芝三萜类物质的提取物粉末。

在另一实施方式中，本发明还涉及根据上述任意提取方法获得的提 取物，优选地，所述提取物中三萜类物质的含量在80wt％以上，具有较高的药用价值。

分析方法

本发明采用以下分析方法，对各样品中三萜类物质的含量进行分析：

1、原理

三萜类物质在高氯酸作用下，与香草醛反应生成有色物质。在545nm波长下，其吸光度大小与三萜类物质含量成正比。以齐墩果酸为对照品，用比色法测定三萜类物质的含量。

2、试剂

氯仿(分析纯)、香草醛(分析纯)、高氯酸(分析纯)、无水乙醇(分析纯)；齐墩果酸(对照品)，购自大连美仑生物技术有限公司。

齐墩果酸储备液(0.1mg/mL)：称取在95℃下干燥2h的齐墩果酸对照品10.0mg，用无水乙醇溶解并定容至100mL。

5wt％香草醛-冰乙酸溶液：临用前配制。

3、仪器

紫外可见光分光光度计(石英比色皿)、分析天平(感量为±0.1mg)、水浴锅、干燥箱、常用玻璃仪器(如容量瓶、具塞比色管、圆底烧瓶等)。

4、分析步骤

(1)制作标准曲线

分别吸取齐墩果酸储备液4.0mL、8.0mL、12.0mL、16.0mL和20.0mL于25mL具塞比色管中，常压水浴蒸干溶剂；分别加入0.20mL新配制的5wt％香草醛-冰乙酸溶液和0.80mL高氯酸，摇匀；在70℃水浴中加热15min，取出，冷却至室温；分别加入5.0mL冰乙酸，摇匀；以试剂空白做对照，在30min内于545nm紫外光下测定吸光度值。以吸光度为纵坐标，以三萜类物质含量为横坐标，绘制标准曲线(参见附图2)，并得出回归方程：

y＝-0.00574+0.010488x

相关系数R＝0.99988，p＜0.0001(n＝6)

(2)样品处理

称取待测试样0.2g±0.1mg；置于150mL圆底烧瓶中，加入30mL氯仿，在60℃±1℃水浴中回流2h，常压过滤，收集滤液，滤渣加入30mL氯仿再回流1h；合并滤液，常压蒸干；加入约40mL无水乙醇，70℃水浴加热使其溶解；冷却至室温后用无水乙醇定容至50mL，为待测液。

(3)测定

吸取待测液1.00mL于25mL具塞比色管中，常压水浴蒸干溶剂；加入新配制的5wt％香草醛-冰乙酸溶液0.20mL和高氯酸0.80mL，摇匀；在70℃下水浴加热15min，取出，冷却至室温；加入冰乙酸5.00mL稀释，摇匀；以试剂空白为对照，在30min内于545nm紫外光下测定其吸光度。通过线性回归方程计算待测样中三萜类物质的含量。

5、结果计算

试样中三萜类物质的含量按下面公式进行计算：

$X=\frac{m_2}{m_1(1-x)\×\frac{v_2}{v_1}\×1000}\×100$

式中：X：试样中三萜类物质的含量(g/100g)；

m₁：试样的质量(g)；

m₂：通过线性回归方程算得的待测液中三萜类物质的质量(mg)；

v₁：待测液定容后的体积(mL)；

v₂：测定用的溶液体积(mL)；

x：试样的含水量(g/100g)。

计算结果保留三位有效数字。

6、精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

实施例

下面通过具体实施例对本发明进行进一步的阐述，以下实施例将帮助更好地理解本发明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。

实施例1

根据如下提取方法对牛樟芝原料中的三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入3L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得产物14g，产物中三萜类物质含量达86wt％。

实施例2

根据如下提取方法对牛樟芝原料中的三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在5wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入5L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为500W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取0.5h，获得提取液；

(4)以2000r/min的速率对提取液离心分离30min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取3次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入2倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析 出，获得悬浊液；

(6)以2000r/min的速率对悬浊液离心分离30min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得产物10g，产物中三萜类物质含量达80.1wt％。

实施例3

根据如下提取方法对牛樟芝原料中的三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝栽培边料在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入5L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为500W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取0.5h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入5倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于80℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得产物4.1g，产物中三萜类物质含量达82wt％。

实施例4

根据如下提取方法对牛樟芝原料中的三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝栽培边料在50℃下烘干至水分含量在5wt％以下，并粉碎至10目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入500mL体积百分含量为80％食品级乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为100W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取6h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入5倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于80℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得产物3.4g，产物中三萜类物质含量达80.3wt％。

比较例1

根据如下提取方法对牛樟芝原料中三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入3L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为600W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得16g固体粉末，该固体粉末中三萜类物质的含量为 65wt％。

在该条件下进行提取，与实施例1相比，其提取过程中采用了更高的超声功率(600W)，然而，可能由于使原料中更多其它物质溶于乙醇，进而被提取出来，造成产物中混有的其它物质较多(纯度下降)，三萜类物质含量下降，从而不利于三萜类物质的进一步分离或直接使用。

比较例2

根据如下提取方法对牛樟芝原料中三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入3L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为90W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取3次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得8g固体粉末，该固体粉末中三萜类物质的含量为68wt％。

该条件下进行提取，与实施例1相比，其提取过程中采用了较低的超声功率(90W)，对产品收率及三萜类物质含量造成了较大影响。

比较例3

根据如下提取方法对牛樟芝原料中三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以 下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入6L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入6倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得10.3g固体粉末，该固体粉末中三萜类物质的含量为67wt％。

该条件下进行提取，与实施例1相比，在提取过程中采用了更高比例的提取溶剂无水乙醇(粗粉和乙醇的质量体积比1:60)，然而，在收率未随之增加的情况下，反而使产物中三萜类物质的含量降低；另一方面，随着提取溶剂乙醇用量的增加，不单单增加了提取成本，同时还增加了进行沉淀时的用水量，为后续处理造成困难，增加了工艺难度。

比较例4

根据如下提取方法对牛樟芝原料中三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入400mL食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入3倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得9.2g固体粉末，该固体粉末中三萜类物质的含量为61wt％。

该条件下进行提取，与实施例1相比，在提取过程中采用了较少的无水乙醇(粗粉和乙醇的质量体积比1:4)，产物收率和产物中三萜类物质的含量均下降。

比较例5

根据如下提取方法对牛樟芝原料中三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入3L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入6倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过 100目筛，可获得产物12g，产物中三萜类物质含量为68wt％。

该条件下进行提取，与实施例1相比，其沉淀过程中采用了更大量的水(6倍量)，然而，加大的水量使得给离心操作带来困难。这种情况下，可以将悬浊液静置沉淀，弃去上清液，然后再进行离心，但这样则导致延长工艺时间，降低工艺效率，并且产物收率和产物中三萜类物质的含量并不理想。

比较例6

根据如下提取方法对牛樟芝原料中三萜类物质进行提取：

(1)将采收后的牛樟芝子实体在50℃下烘干至水分含量在7wt％以下，并粉碎至40目，获得粗粉；

(2)称取100g粗粉于圆底烧瓶中，加入3L食品级无水乙醇，搅拌下混合均匀；

(3)将圆底烧瓶置于超声波条件下进行提取，超声波功率设定为300W，圆底烧瓶上连接有冷凝管，加热使乙醇回流，提取3h，获得提取液；

(4)以5000r/min的速率对提取液离心分离10min，获得上清液和固体部分，收集上清液，将固体部分按步骤(2)和(3)重复提取2次，合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入1.5倍量的蒸馏水，搅拌混合使三萜类物质析出，获得悬浊液；

(6)以5000r/min的速率对悬浊液离心分离10min，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将沉淀物于40℃下干燥处理，使水分降至5wt％以下，粉碎过100目筛，可获得产物8g，产物中三萜类物质含量为68wt％。

该条件下进行提取，与实施例1相比，其沉淀过程中采用更少量(1.5倍量)的水，三萜类物质不能很好地析出，从而影响产物收率，并且产物中三萜类物质的含量也不理想。

Claims (10)

1.一种牛樟芝三萜类物质的提取方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将牛樟芝原料烘干并粉碎，获得粗粉；

(2)按照质量体积比1:5-1:50的比例，向所述粗粉中加入乙醇，搅拌得混合物；

(3)在超声波功率100W-500W、乙醇回流条件下，对所述混合物提取0.5h-6h，获得提取液；

(4)对所述提取液进行离心分离，获得上清液和固体部分，按照步骤(2)和步骤(3)对所述固体部分重复提取2次-3次，收集并合并各次获得的上清液；

(5)向合并的上清液中加入2-5倍量的水，搅拌混合，获得悬浊液；

(6)对所述悬浊液进行离心分离，弃去上清液，获得沉淀物；

(7)将所述沉淀物进行干燥并粉碎，获得含有牛樟芝三萜类物质的提取物粉末。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述牛樟芝原料为牛樟芝子实体或栽培边料；优选地，将牛樟芝原料烘干至水分含量为7wt％以下、优选5wt％以下，更优选地，将烘干的原料粉碎至10目-40目。

3.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇为食品级乙醇，优选地，其乙醇的体积百分含量为80％以上，优选地，所述粗粉与乙醇的质量体积比为1:20-1:40、更优选1:30。

4.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，超声波功率为300W-400W。

5.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，对所述提取液以2000r/min-5000r/min的速率离心分离10min-30min。

6.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(5)中，所述水为蒸馏水，优选地，向合并的上清液中加入3-4倍量的水。

7.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(6)中，对所述悬浊液以2000r/min-5000r/min的速率离心分离10min-30min。

8.如权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，步骤(7)中，将所述沉淀物在40℃-80℃下干燥至水分含量在5wt％以下，优选地，将所述沉淀物粉碎至100目。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的提取方法获得的提取物。

10.如权利要求9所述的提取物，其特征在于，所述提取物中三萜类物质的含量在80wt％以上。