CN117402203B - 一种大蒜渣中降血脂型皂苷的提取与鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种自大蒜渣中提取的降血脂型大蒜皂苷，属于天然产物提取技术领域。本发明所述大蒜皂苷自大蒜渣中提取得到，制备方法包括乙醇溶液提取，大孔树脂分离，硅胶色谱柱分离纯化等步骤，采用该方法得到的大蒜皂苷纯度较高，同时对该大蒜皂苷进行了药效学实验，实验结果证实该大蒜皂苷具有较高的降血脂作用。
Description
技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，涉及一种大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的应用及提取、检测方法。
背景技术
大蒜为百合科葱属植物蒜的地下鳞茎，目前世界各地均有种植。大蒜是人类日常生活中不可缺少的佐料，同时具有抗菌、消炎、杀虫、降血脂、降血压、抗风湿、抗肿瘤、调节机体免疫力和抗氧化等多种重要生理功效，是药食同源的宝贵资源。大蒜中还含有人体中所必需的多种微量元素(如硒、锗、锌等)、维生素和氨基酸等。近年来，国际上对大蒜油的需求不断增加，故产生了大量的大蒜渣。研究表明，提取大蒜油后的剩余大蒜渣(约占大蒜总重量的99.5％左右)均被遗弃掉，这不仅造成了极大的资源浪费，且由于大蒜渣具有较强的刺激性臭味，严重污染了环境。
已有研究结果表明，提取大蒜油后的大蒜渣含有人体所必须的矿物质、多种维生素、17种氨基酸及微量元素硒、锗、碘、锌和SOD(超氧化物歧化酶)，还含有少量的大蒜素，具有很强的抗菌、消炎、降血压、降血脂能力，对动脉硬化、心肌梗赛、血栓症、糖尿病有非常好的疗效，且有抗病毒、抑制血小板凝聚、防治癌症和肿瘤、增强免疫功能、延缓衰老等功效，有很高的开发利用价值，并具有良好的经济效益和社会效益，因此对大蒜渣的开发利用迫在眉睫。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种自大蒜渣中提取的大蒜皂苷，该大蒜皂苷具有较好的降血脂的作用，同时，本发明还提供该大蒜皂苷的液相-质谱分析检测方法及薄层色谱检测方法。本发明所提供的大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷，所述大蒜皂苷的结构式为式Ⅰ所示：
其中，式Ⅰ中R为式Ⅱ所表示的基团：
本发明还提供了上述大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的制备方法，包含以下步骤：
提取，大蒜渣用乙醇溶液提取，提取液浓缩，得大蒜皂苷粗提物；
分离，大蒜皂苷粗提物采用大孔树脂进行吸附，先采用蒸馏水进行洗脱，后采用乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，除去乙醇，得浓缩液；
纯化，浓缩液采用正丁醇萃取，收集正丁醇萃取液，除去正丁醇，萃取物经硅胶色谱柱分离，以氯仿-甲醇-水梯度洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，即为降血脂型大蒜皂苷。具体的，
所述的提取步骤为：向大蒜渣中加入乙醇溶液，密封，在60℃温度条件进行浸泡提取，提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物；或向大蒜渣中加入乙醇溶液，回流提取1-2次，提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物；其中所述乙醇溶液为80-95％乙醇溶液；大蒜渣与乙醇溶液的质量-体积比，按照g/mL计，为1:(5-10)。
所述的分离步骤为大蒜皂苷粗提物采用大孔树脂进行吸附，先采用蒸馏水进行洗脱，后采用70-95％乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩液；其中大蒜皂苷粗提物与乙醇溶液的质量-体积比，以g/mL计，为1:(10-15)；其中所述的大孔树脂为D101大孔树脂；所述D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的5-8倍。
所述的纯化步骤为浓缩液采用正丁醇萃取，收集正丁醇萃取液，除去正丁醇，萃取物经硅胶色谱柱分离，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，即为降血脂型大蒜皂苷。
本发明还提供上述大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的液相色谱串联质谱检测方法，其中液相色谱分析所用流动相中A相为甲醇，B相为含0.1％甲酸的水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为0～2.5min，5％～55％A；2.5～5min，55％～95％A；5～15min，保持95％A等度洗脱
质谱条件为：离子源：离子化方式为电喷雾(ESI)，正离子监测模式，自动多级质谱模式；离子源温度：650℃；质量监控范围，m/z 400～1400，干燥气为高纯氮气，干燥温度350℃，氮气流速l.0L/min，雾化压力为345kPa，碎裂电压为1.0V。
本发明还提供上述大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的薄层色谱检测方法，所述检测方法的展开剂为正丁醇:乙酸乙酯:水＝1:1:2的上层溶液；显色剂为茴香醛-浓硫酸；所述茴香醛-浓硫酸显色剂制备方法为将135ml无水乙醇、3.7ml大茴香醛、1.5ml冰乙酸、5ml浓硫酸剧烈搅拌，混匀，现用现配。
本发明还提供上述大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的具体用途，即其在制备具有降血脂作用的食品或保健食品中的用途，以及在制备治疗高脂血症药物中的用途。
本发明具有以下有益效果：
1.本发明首次自大蒜渣中提取并鉴定出具有降血脂作用的大蒜皂苷，探索出大蒜渣的新的开发途径，促进了大蒜渣中活性成分的开发利用和大蒜及大蒜渣深加工技术的应用，为提升大蒜及大蒜渣的资源利用率、加大大蒜等农副产品综合利用研究提供了参考。
2.本发明提供了一种自大蒜渣中提取的降血脂型大蒜皂苷，并采用液相-质谱串联检测方法对该大蒜皂苷进行了结构表征，并结合核磁共振波谱表征(1H NMR、13CNMR)确定其结构。
3.本发明提供了一种大蒜渣总降血脂型大蒜皂苷的制备方法，该方法可针对性得到该降血脂型大蒜皂苷，且纯度较高。
4.本发明对得到的大蒜皂苷进行了药效学实验，对其降血脂的作用进行了验证，实验结果显示，该大蒜皂苷可明显降低高血脂模型大鼠血清中甘油三酯及胆固醇的含量，具有显著的降血脂作用。
5.本发明明确了大蒜皂苷中具有降血脂作用的一种大蒜皂苷的种类及结构，对未来大蒜皂苷在食品及药品的中的开发利用提供了方向，具有较好的应用前景。
附图说明
图1：实施例1所得大蒜皂苷的红外光谱图。
图2：实施例1所得大蒜皂苷的HPLC-MS总离子流图
图3：实施例1所得大蒜皂苷的高效液相色谱图。
图4：实施例1所得大蒜皂苷的ESI一级质谱。
图5：实施例1所得大蒜皂苷的ESI基峰757(m/z)的二级质谱。
图6：实施例1所得大蒜皂苷的ESI谱中595(m/z)峰二级质谱。
图7：实施例1所得大蒜皂苷的1H-NMR.
图8：实施例1所得大蒜皂苷的13C-NMR。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请权利要求所保护的范围。
以下所用干燥大蒜渣和生大蒜渣均为日照市某大蒜脱水厂提供，已去除大蒜挥发油。
实施例1干燥大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷制备
提取：取100g干燥大蒜渣置于1000ml大烧杯中，加400mL的95％乙醇溶液，密封，放入预先设置好的60℃水浴锅中浸泡24h，抽滤；滤渣再加200mL的95％乙醇溶液再次浸泡24h，抽滤，合并两次提取液；提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
分离：将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，粗提物水溶液以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的7倍，粗提物水溶液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用95％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，95％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的12倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜总皂苷。
纯化：将大蒜总皂苷上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，得降血脂型大蒜皂苷。
实施例2干燥大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷制备
提取：取100g干燥大蒜渣置于1000ml大烧杯中，加300mL的90％乙醇溶液，密封，放入预先设置好的60℃水浴锅中浸泡24h，抽滤；滤渣再加200mL的90％乙醇溶液再次浸泡24h，抽滤，合并两次提取液；提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
分离：将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，粗提物水溶液以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的7倍，粗提物水溶液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用80％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，80％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的15倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜总皂苷。
纯化：将大蒜总皂苷上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，得降血脂型大蒜皂苷。
实施例3干燥大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷制备
提取：取100g干燥大蒜渣置于1000ml大烧杯中，加600mL的85％乙醇溶液，密封，放入预先设置好的60℃水浴锅中浸泡24h，抽滤；滤渣再加400mL的85％乙醇溶液再次浸泡24h，抽滤，合并两次提取液；提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
分离：将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，粗提物水溶液以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的7倍，粗提物水溶液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用70％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，70％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的12倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜总皂苷。
纯化：将大蒜总皂苷上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，得降血脂型大蒜皂苷。
实施例4生大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷制备
提取：取100g生大蒜渣置于1000ml大烧杯中，加400mL的95％乙醇溶液，密封，放入预先设置好的60℃水浴锅中浸泡24h，抽滤；滤渣再加400mL的95％乙醇溶液再次浸泡24h，抽滤，合并两次提取液；提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
分离：将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，粗提物水溶液以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的7倍，粗提物水溶液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用90％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，90％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的12倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜总皂苷。
纯化：将大蒜总皂苷上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，得降血脂型大蒜皂苷。
实施例5生大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷制备
提取：取40g生大蒜渣装入提取瓶中，第一次加160mL的95％乙醇溶液回流提取1.5h，第二次加80mL的95％乙醇溶液回流提取1h，抽滤，合并两次提取液；提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
分离：将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物的7倍，穿透液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用95％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，90％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的12倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜总皂苷。
纯化：将大蒜总皂苷上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，得降血脂型大蒜皂苷。
对比实施例1干燥大蒜渣中大蒜皂苷制备
取100g干燥大蒜渣置于1000ml大烧杯中，加600mL的95％乙醇溶液，密封，室温浸泡48h，抽滤，合并滤液；滤液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，粗提物水溶液以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的7倍，粗提物水溶液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用95％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，95％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的12倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜皂苷。
对比实施例2干燥大蒜渣中大蒜皂苷制备
提取：取40g干燥大蒜渣装入提取瓶中，第一次加160mL的95％乙醇溶液回流提取1.5h，第二次加80mL的95％乙醇溶液回流提取1h，抽滤，合并两次提取液；提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物。
分离：将大蒜皂苷粗提物用水溶解后，滤去不溶物，粗提物水溶液以2BV/h的流速通过处理好的D101大孔树脂柱，D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的7倍，粗提物水溶液重复吸附3次，静置30min后进行洗脱。首先采用蒸馏水进行洗脱，除去糖类、蛋白质、鞣质等水溶性杂质，洗脱至水清；然后采用95％乙醇洗脱(按照料液比g/mL计，95％乙醇用量为大蒜皂苷粗提物质量的12倍)，流速为2BV/h，收集洗脱液；洗脱液浓缩回收乙醇至无醇味后加正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，回收正丁醇至干，加入少量无水乙醇溶解，60℃真空干燥，得大蒜总皂苷。
纯化：将大蒜总皂苷上硅胶色谱柱，以氯仿-甲醇-水＝60:5:50下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，得大蒜皂苷。
一、降血脂型大蒜皂苷的薄层色谱检测
取上述实施例1、对比实施例1、对比实施例2所得大蒜皂苷，加甲醇溶解，制成浓度为1.0mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
在距薄层板一端1cm处用铅笔轻画一横线作为起始线，取管口平整的毛细管吸取供试品溶液适量，点于硅胶G板上(样点直径不超过2mm)；以正丁醇:乙酸乙酯:水(1:1:2)上层溶液为展开剂，展开取出，晾干；置于茴香醛-浓硫酸(135ml无水乙醇、3.7ml大茴香醛、1.5ml冰乙酸、5ml浓硫酸，剧烈搅拌，混匀，现用现配)显色剂中浸润薄层板，放于105℃加热至斑点显色清晰。
结果显示实施例1显示单一淡红色斑点，未见杂质斑点。对比实施例1中出现多个淡红色斑点，且存在拖尾现象，在与实施例1斑点相同位置斑点颜色较浅；对比实施例2显示两个淡红色斑点，但中与实施例1斑点相同位置未出现斑点。
二、降血脂型大蒜皂苷的红外光谱分析
准确称取实施例1所得淡黄色粉末2.0mg与200mg溴化钾(碎晶)混合并研磨均匀，压片成厚度约1mm的透明锭片，放入红外光谱仪样品室测定，每片随机扫3个不同的点，再取其平均谱图作为最后的样品谱图。扫描范围4000～400cm-1，光谱分辨率4cm-1，扫描累积次数32次。甾体皂苷的红外光谱中，在863～857(A)、899～894(B)、920～915(C)、986～982(D)cm-1四条谱带，25-D系甾体皂苷的特征是B吸收带比C吸收带强2倍。结果见图1。
三、降血脂型大蒜皂苷检测及结构鉴定
取上述实施例1所得淡黄色粉末，精密称定，加甲醇溶解，制成浓度为1.0mg/ml的溶液，作为供试品溶液，注入高效液相色谱-质谱仪按照以下色谱条件和质谱条件进行检测，并根据质谱结果继续进行结构鉴定：
液相色谱条件：
C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；
流动相为甲醇(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，梯度洗脱；
梯度洗脱程序如下：0～2.5min，5％～55％A；2.5～5min，55％～95％A；5～15min，保持95％A等度洗脱。
每次进样前预平衡6min，再进行洗脱程序。
流速为1mL/min，柱温30℃，进样量10μL，示差折光检测器。
质谱条件：
离子源:离子化方式为电喷雾(ESI)，正离子监测模式，正离子监测模式，自动多级质谱模式，离子源温度:650℃。
质量监控范围，m/z 400～1400，干燥气为高纯氮气，干燥温度350℃，氮气流速l.0L/min，雾化压力为345kPa，碎裂电压为1.0V。
大蒜皂苷的HPLC-MS总离子流图见图2。
液相色谱检测结果显示，样品显示为单峰，面积归一化法显示该峰相对百分含量大于95％。结果见图3。
质谱结构鉴定：
按照上述质谱分析条件，对大蒜皂苷样品进样分析，所得的保留时间t1＝5.13min，t2＝17.38min。由于大蒜皂苷分子对阳离子具有较强的亲合性，在联用的电喷雾质谱正离子检测图谱中，主要组分得到较好分离。由图6可以看出，在一级质谱中，可观察到1243[M+H]+，1283[M+Na+H2O]+等准分子离子峰，但不同的皂苷分子加合分子离子峰情况有所差别。分子离子峰为1243[M+H]+，基峰为757[M+H-3×162]+，其他为1081[M+H-162]+和595[M+H-4×162]+，由二级质谱图7中有595[M+H-4×162]+和433[M+H-5×162]+。[M+H]+(m/z1243)离子在一定能量碰撞下，连续失去一系列的glc糖基碎片(162)，故皂苷的分子量为1242。二级质谱图8中有m/z 271、289、253、432，其中m/z 432为皂苷元的分子量。结果见图4、5、6。
经初步推断，可能的结构为：
其中，R为下述结构的基团：
为进一步验证本发明中降血脂型大蒜皂苷的结构，本发明还对提取分离得到的大蒜皂苷进行了核磁共振波谱表征(1HNMR、13CNMR)，鉴定其结构。核磁推断结果证明了质谱得到的结构信息的可靠性。
1H-NMR[400MHz，DMSO-d6]：δ1.0(J＝6.52Hz)附近显示较强的信号，18、19、27、21位的甲基及-CH2信号；3.5(5H，d，J＝6.52Hz，Glc 1-H)显示有5个端基质子信号，说明分子中有5个糖存在。结果见图7。
13C-MNR[400MHz，DMSO-d6]化学位移数据见图8，显示有δ109.8的螺甾特征吸收，δ56.5是C14的特征，δ19.0是18-CH3、19-CH3、21-CH3和27-CH3的特征，δ39.5—40.5是其他碳原子的骨架特征。结果见图8。
四、本发明所得大蒜皂苷的降血脂作用验证
为验证本发明所制备的大蒜皂苷的降血脂作用，本发明在参考现有相关药效学实验的基础上开展了相关的试验。
1.材料与方法
1.1实验动物
选用体重180-220g SD大鼠，雌雄各半，临沂卫生学校实验动物中心提供，实验前适应性喂养一周。
1.2药物及使用剂量
按照实施例1、实施例2所述制备方法制得的降血脂型大蒜皂苷；对比实施例1、对比实施例2所述制备方法值得的大蒜皂苷。
实施例1设置3组不同剂量，分别为0.2g/kg(低剂量组)、0.4g/kg(中剂量组)、1.2g/kg(高剂量组)；
实施例2剂量为0.4g/kg
1.3实验过程
大鼠随机分为高脂对照组、实施例1高剂量组、实施例1中剂量组、实施例1低剂量组、实施例2组、对比实施例1组、对比实施例2组，每组10只。
在实验环境下各组大鼠喂饲基础饲料观察一周，一周后禁食12h，取尾血，测血清总胆固醇(TC)含量，观察指标的正常值。
自正式实验开始各组动物用高脂饲料喂饲40天，40天后禁食12h，取尾血，测定血脂以确定是否形成高脂血症。
各组小鼠继续给予高脂饲料喂饲30天，其中实施例1高、中、低剂量组、实施例2组、对比实施例1组、对比实施例2组分别给予相应剂量的大蒜皂苷，每日1次，定期称量体重，30天后禁食12h，取尾血，测定血脂各项指标。
2.血清指标测定
将各组小鼠各时间点采集的血样以3000r/min，离心15min，制备血清，按照总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)试剂盒的说明书进行含量的测定。
3.实验结果
3.1大蒜皂苷提取物对大鼠体重的影响
试验期间，各组动物生长情况良好，无异常行为。给药前各组大鼠体重稳步增长，每周平均体质量均无显著性组间差异。
3.2大蒜皂苷对大鼠血清TC、TG含量的影响
经给予大蒜皂苷后，实施例1高、中、低三个剂量组与实施例2组SD大鼠血清胆固醇及甘油三酯含量整体呈现下降趋势或增加不明显，显示该组大蒜皂苷对高血脂模型大鼠具有较好的治疗作用，可明显降低血清中TC、TG含量，调节血脂。对比实施例1组、对比实施例2组、高脂对照组，血清中胆固醇及甘油三酯含量均呈现升高趋势。结果见表2、表3。
表2不同来源皂苷对SD大鼠血清胆固醇的影响
表3不同来源皂苷对SD大鼠甘油三酯的影响
Claims (10)
1.大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷，所述大蒜皂苷的结构式为式Ⅰ所示：
其中，式Ⅰ中R为式Ⅱ所表示的基团：
2.一种权利要求1所述的大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的制备方法，包含以下步骤：
提取，大蒜渣用乙醇溶液提取，提取液浓缩，得大蒜皂苷粗提物；
分离，大蒜皂苷粗提物采用大孔树脂进行吸附，先采用蒸馏水进行洗脱，后采用乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，除去乙醇，得浓缩液；
纯化，浓缩液采用正丁醇萃取，收集正丁醇萃取液，除去正丁醇，萃取物经硅胶色谱柱分离，以氯仿-甲醇-水梯度洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，即为权利要求1所述的降血脂型大蒜皂苷。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的提取步骤为：
向大蒜渣中加入乙醇溶液，密封，在60℃温度条件进行浸泡提取，提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物；或向大蒜渣中加入乙醇溶液，回流提取1-2次，提取液浓缩回收乙醇至无醇味，得大蒜皂苷粗提物；其中所述乙醇溶液为80-95％乙醇溶液；大蒜渣与乙醇溶液的质量-体积比，按照g/mL计，为1:(5-10)。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的分离步骤为大蒜皂苷粗提物采用大孔树脂进行吸附，先采用蒸馏水进行洗脱，后采用70-95％乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩液；其中大蒜皂苷粗提物与乙醇溶液的质量-体积比，以g/mL计，为1:(10-15)；其中所述的大孔树脂为D101大孔树脂；所述D101大孔树脂的用量为大蒜皂苷粗提物质量的5-8倍。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的纯化步骤为浓缩液采用正丁醇萃取，收集正丁醇萃取液，除去正丁醇，萃取物经硅胶色谱柱分离，以氯仿-甲醇-水＝60:30:10下层溶液洗脱，收集流分，干燥，得淡黄色粉末，即为降血脂型大蒜皂苷。
6.一种权利要求1所述的大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，采用权利要求2所述制备方法制备得到降血脂型大蒜皂苷，将制备得到的降血脂型大蒜皂苷采用液相色谱串联质谱进行检测；所述液相色谱分析条件为：流动相中A相为甲醇，B相为含0.1％甲酸的水溶液；梯度洗脱，洗脱程序为0～2.5min，5％～55％A；2.5～5min，55％～95％A；5～15min，保持95％A等度洗脱。
7.如权利要求6所述的液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述的质谱条件为：
离子源：离子化方式为电喷雾ESI，正离子监测模式，自动多级质谱模式；离子源温度：650℃；质量监控范围，m/z 400～1400，干燥气为高纯氮气，干燥温度350℃，氮气流速l.0L/min，雾化压力为345kPa，碎裂电压为1.0V。
8.一种权利要求1所述的大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷的薄层色谱检测方法，其特征在于，采用权利要求2所述制备方法制备得到降血脂型大蒜皂苷，将制备得到的降血脂型大蒜皂苷采用薄层色谱进行检测；所述检测方法的展开剂为正丁醇:乙酸乙酯:水＝1:1:2的上层溶液；显色剂为茴香醛-浓硫酸；所述茴香醛-浓硫酸显色剂制备方法为将135ml无水乙醇、3.7ml大茴香醛、1.5ml冰乙酸、5ml浓硫酸剧烈搅拌，混匀，现用现配。
9.一种权利要求1所述的大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷在制备具有降血脂作用的食品或保健食品中的用途。
10.一种权利要求1所述的大蒜渣中降血脂型大蒜皂苷在制备治疗高脂血症药物中的用途。
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