CN105998089B - 冬虫夏草在制备预防和/或治疗胰腺纤维化的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及冬虫夏草的药物用途，提供了一种冬虫夏草在制备预防和/或治疗胰腺纤维化的药物中的应用，所述药物包括作为活性成分的冬虫夏草和一种或多种可药用辅料，所述冬虫夏草选自天然冬虫夏草、冬虫夏草发酵菌丝体、以及天然冬虫夏草和冬虫夏草发酵菌丝体的提取物，所述提取物选自水提取物、醇提取物、酯提取物、醚提取物、氯仿提取物中的一种或几种的组合。本发明通过实验考察了冬虫夏草对大鼠胰腺纤维化的影响，证实了冬虫夏草具有抗胰腺纤维化的作用。因此，冬虫夏草可作为活性成分用于制备抗胰腺纤维化的药物，具有巨大的社会效益和研究价值。

Description

冬虫夏草在制备预防和/或治疗胰腺纤维化的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及冬虫夏草的药物用途，尤其涉及其在制备预防和/或治疗胰腺纤维化的药物中的应用。

背景技术

近年来慢性胰腺炎发病率日益增高。其主要病理学改变为胰腺纤维化，胰腺纤维化主要是由于胰腺组织中以胶原为主的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)合成与沉积增加，降解减少，两者失去动态平衡所致。这种沉积不仅由ECM合成增多引起，更大程度上是由降解减少引起。其中胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell，PSC)的活化被公认为是胰腺纤维化发生的始动环节，胰腺损伤后腺泡细胞的坏死修复过程可导致胰腺星状细胞的活化、增殖并分泌大量的细胞外基质，最终导致胰腺纤维化，胰腺星状细胞通过激活、转化，促进细胞外基质的形成，进而导致胰腺纤维化。转化生长因子-β1(TGF-β1)是胰腺纤维化发生、发展中最重要的细胞因子，是激活胰腺星状细胞(PSCs)并促进其表达ECM和分泌基质金属蛋白酶(MMP-1)，金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)关键因素。此外，急性胰腺炎时，ROS迅速增加，引起直接的胰腺组织损伤，加重病变。反复的急性胰腺炎发作可能因腺泡破坏、氧化应激而激活PSC，使细胞外基质合成增加、降解减少，最终导致基质沉积和纤维化发生。目前尚缺乏治疗胰腺纤维化的有效药物。

冬虫夏草是一种天然存在的稀有中药材，富含了虫草多糖、虫草素、虫草酸、虫草多肽、麦角甾醇等多种单体活性成分。天然冬虫夏草生长条件苛刻，自然寄生率低，加上人们的滥采，导致天然资源紧缺，价格昂贵。

现代研究证明冬虫夏草以其调节阴阳、肺肾双补之特性，补而不峻、温而不火之优势，广泛应用于免疫、心血管、呼吸、泌尿生殖、消化、神经系统疾病，备受关注。但尚未有文献报导过其具有预防和治疗胰腺纤维化的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种冬虫夏草在制备预防和/或治疗胰腺纤维化的药物中的应用。

进一步地，所述药物包括作为活性成分的冬虫夏草和一种或多种可药用辅料。

进一步地，所述冬虫夏草选自天然冬虫夏草、冬虫夏草发酵菌丝体、以及天然冬虫夏草和冬虫夏草发酵菌丝体的提取物。所述提取物选自水提取物、醇提取物、酯提取物、醚提取物、氯仿提取物中的一种或几种的组合，优选天然冬虫夏草和冬虫夏草发酵菌丝体的水提取物。

进一步地，所述冬虫草夏发酵菌丝体为冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis(Berkeley)Sacc)中蝙蝠蛾拟青霉、中华被毛孢(Hirsutela sinensis)、中华头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉和/或中华束丝孢菌采用工业化发酵生产的冬虫夏草菌丝体。

进一步地，所述发酵的培养基选自大米、小米、玉米、小麦、大麦、荞麦、土豆汁、糊精、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、麸皮、蚕蛹粉、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氯化钠、氯化镁、氯化锰、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸亚铁、硫酸锰中的一种或几种。

进一步地，所述可药用辅料包括但不限于：填充剂如淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、山梨醇等；粘合剂如纤维素衍生物(甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠)、海藻酸钠、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等；湿润剂如水、乙醇、甘油等；崩解剂如干淀粉、羧甲基淀粉钠、羟丙甲纤维素、交联聚维酮、泡腾崩解剂、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠等；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇等；注射溶剂如注射用水、植物油、油酸乙酯、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、甘油、苯甲醇等；缓冲剂如醋酸-醋酸钠、枸橼酸-枸橼酸钠、酒石酸-酒石酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、碳酸氢钠-碳酸钠等；抑菌剂如苯甲醇、羟丙丁酯/甲酯、苯酚、三氯叔丁醇等；局麻剂利多卡因、苯甲醇、三氯叔丁醇等；等渗调节剂如氯化钠、葡萄糖、甘油等；抗氧剂如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠等；助悬剂如明胶、甲基纤维素、果胶等；保护剂乳糖、蔗糖、麦芽糖等；乳化剂如吐温、司盘、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、脂肪酸甘油酯；基质如PEG6000、PEG4000、硬脂酸钠、氢化植物油、虫蜡等。另外还包括色素、香味剂、甜味剂、助溶剂、吸收促进剂等。

进一步地，所述药物中冬虫夏草的含量为0.1-99.9％重量百分比，优选为1-95％重量百分比、10-85％重量百分比、15-70％重量百分比、20-60％重量百分比或25-50％重量百分比。

进一步地，所述药物通过肠道或者非肠道途径给药。给药制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂、滴丸、混悬剂等。给药途径包括皮下、皮内、动脉内、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、病灶内、颅内注射或输注，或者，口服、局部、直肠、经鼻、经颊、阴道、舌下、皮内、粘膜、气管、尿道给药，或者通过吸入气雾或植入蓄积或者针刺方式给药。

进一步地，所述给药制剂可以按照药学领域的常规生产方法制备，例如使冬虫夏草与一种或多种辅料混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明通过实验考察了冬虫夏草对大鼠胰腺纤维化的影响，证实了冬虫夏草具有抗胰腺纤维化的作用。因此，冬虫夏草可作为活性成分用于制备抗胰腺纤维化的药物，具有巨大的社会效益和研究价值。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

本发明所要解决的技术问题在于通过设计动物实验方法，研究冬虫夏草的抗胰腺纤维化作用。采用两种动物模型：第一种，模型组及药物组采用胰胆管中注入2％三硝基苯磺酸溶液(TNBS)的方法，制备慢性胰腺炎模型；第二种，模型组和药物组采用腹腔注射二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)(500mg/kg体重)建立氧化损伤导致的胰腺纤维化模型。观察不同剂量的冬虫夏草对该模型损伤的修复作用。

实施例1

冬虫夏草菌(Cordyceps sinesis)中华被毛孢(Hirsutela sinensis)菌株经液体发酵培养所得菌丝体，干燥粉碎制得冬虫夏草发酵菌丝体粉末，备用。

实施例2

将天然冬虫夏草烘干，经超微粉碎，制得冬虫夏草极细粉，备用。

实施例3

动物选用Wistar大鼠，雄性，体重180-200g，分为对照组，模型组，给药组(高、中、低)。

实施例1-2制得的粉末用0.5％羧甲基纤维素钠溶液作为溶剂配制成三个剂量的混悬液：0.75g/(kg·d)、1.5g/(kg·d)、3.0g/(kg·d)，37℃预温备用。

造模方法：模型组及给药组采用胰胆管中注入2％TNBS的方法，制备慢性胰腺炎模型造模；空白对照组为正常大鼠。

分组及给药方法：大鼠随机分为模型组，实施例1-2的粉末0.75g/(kg·d)、1.5g/(kg·d)、3.0g/(kg·d)三个剂量组，另设空白对照组。造模后，给药组大鼠于造模后第5周开始灌胃不同浓度冬虫夏草粉混悬液(0.75g/(kg·d)、1.5g/(kg·d)、3.0g/(kg·d))。空白对照组、模型组均灌胃等量生理盐水，各组大鼠均于造模后第8周处死。

检测指标：

1.胰腺组织学观察：将三组大鼠胰腺组织病理切片进行纤维化评分。高倍镜下进行形态学分析，观察胰腺组织中腺泡细胞萎缩、小叶内或小叶间纤维化以及炎症细胞浸润等病理改变，胰腺纤维化的评分标准为0分：无上述病理改变；1分：上述损伤轻微且局限于小叶内(不超过50％)；2分：小叶内有较广泛的上述损伤(超过50％)；3分：上述损伤广泛存在于小叶间和小叶内，或者小叶结构破坏。结果见表1。

表1大鼠胰腺纤维化评分

与对照组比较，^*P＜0.01；与对模型比较，^#P＜0.01。

结果显示，对照组大鼠胰腺无明显病理改变，而模型组大鼠的胰腺明显萎缩，间质胶原纤维增生，腺泡萎缩，给药组较模型组纤维化程度明显减少。将三组大鼠胰腺组织病理切片进行纤维化评分，发现模型组大鼠胰腺纤维化程度高于对照组，有显著性差异。

2.胰腺组织免疫组化检查：以胞质及核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，根据阳性细胞分布情况，每例切片随机观察3个不重叠的100倍视野，采用Imag-pro-plus图像分析系统计算TGF-β1，MMP-1，TIMP-1阳性表达部位染色面积与视野内胰腺间质总面积的比值，并取平均值作为每个样本的检测值，然后通过统计学方法进行半定量分析。结果见表2。

表2胰腺组织中TGF-β1、MMP-1、TIMP-1的表达

与对照组比较，^*P＜0.01；与对模型比较，^#P＜0.01。

结果显示，与对照组比较，模型组TGF-β1、TIMP-1免疫组化表达明显增强(P＜0.01)；与模型组比较，给药组TGF-β1、TIMP-1免疫组化表达显著减弱，有显著性差异，给药前后MMP-1表达无显著变化。

实施例4

动物选用Wistar大鼠，雄性，体重180-200g，分为对照组，模型组，给药组(高、中、低)。

实施例1-2制得的粉末用0.5％羧甲基纤维素钠溶液作为溶剂配制成三个剂量的混悬液：0.75g/(kg·d)、1.5g/(kg·d)、3.0g/(kg·d)，37℃预温备用。

造模方法：模型组和药物组采用腹腔注射二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)(500mg/kg体重)，建立氧化损伤导致的胰腺纤维化模型。

分组及给药方法：大鼠随机分为模型组，实施例1-2的粉末0.75g/(kg·d)，1.5g/(kg·d)3.0g/(kg·d)三个剂量组，另设空白对照组；模型组和给药组采用腹腔注射二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDC)(500mg/kg体重)建立氧化损伤导致的胰腺纤维化模型，每周2次，连续6周，对照组注射等量生理盐水。

检测指标：采用酶标法和分光光度法测定大鼠胰腺组织中MDA、SOD、LDH及GSH含量，结果见表3-4。

表3实施例1给药组大鼠胰腺组织中SOD、MDA、GSH及LDH的含量

与对照组比较，^*P＜0.01；与对模型比较，^#P＜0.01。

表4实施例2给药组大鼠胰腺组织中SOD、MDA、GSH及LDH的含量

与对照组比较，^*P＜0.01；与对模型比较，^#P＜0.01。

结果显示，与正常组比较，模型组胰腺组织中SOD活力明显降低、MDA含量明显升高、GSH含量明显降低、LDH活力明显升高，有统计学差异(P＜0.01)；与模型组相比，各剂量药物治疗组SOD活力升高、MDA含量降低、GSH含量升高，LDH活力降低，差异均具有统计学意义(P＜0.01)，且均以高剂量组效果最显著(P＜0.01)。

实施例5冬虫夏草胶囊

取冬虫夏草粉15g，加入淀粉150克，用PVP溶液制粒后，装胶囊。

实施例6冬虫夏草软胶囊

将冬虫夏草发酵菌丝体干燥粉碎后，称取5g与食用玉米油50g混合，充分搅匀制得软胶囊内容物；称取明胶、甘油和水各适量(质量比为明胶∶甘油∶水＝1∶0.5∶1)制备囊材胶液；采用旋转模压法，将内容物和囊材胶液装入自动旋转制囊机中，压制得软胶囊，适量液状石蜡作为润滑剂。

实施例7冬虫夏草混悬液

取冬虫夏草干燥细粉5g，用0.5％羧甲基纤维素钠溶液作为溶剂配制成浓度为20％混悬液。

实施例8冬虫夏草滴丸

称取冬虫夏草发酵菌丝体干燥粉末200g，加入PEG4000 1Kg作为基质，适量液体石蜡为冷却剂；药液温度50℃，滴速为每分钟10滴，滴距4.0cm，冷却柱长25cm，滴口内径2.0cm，冷却剂温度0℃(冰水浴)。

最后应说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.冬虫夏草在制备治疗胰腺纤维化的药物中的应用，所述药物包括作为活性成分的冬虫夏草和一种或多种可药用辅料，所述可药用辅料包括填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、注射溶剂、缓冲剂、抑菌剂、局麻剂、等渗调节剂、抗氧剂、助悬剂、保护剂、乳化剂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述冬虫夏草选自天然冬虫夏草、冬虫夏草发酵菌丝体、以及天然冬虫夏草和冬虫夏草发酵菌丝体的提取物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述提取物选自水提取物、醇提取物、酯提取物、醚提取物、氯仿提取物中的一种或几种的组合。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述冬虫草夏发酵菌丝体为冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis(Berkeley)Sacc)中蝙蝠蛾拟青霉、中华被毛孢(Hirsutelasinensis)、中华头孢菌、蝙蝠蛾被孢霉和/或中华束丝孢菌发酵生产的冬虫夏草菌丝体。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物中冬虫夏草的含量为0.1-99.9％重量百分比。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述填充剂为淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、山梨醇中的一种或几种；粘合剂为纤维素衍生物、海藻酸钠、明胶、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种；湿润剂为水、乙醇、甘油中的一种或几种；崩解剂为干淀粉、羧甲基淀粉钠、羟丙甲纤维素、交联聚维酮、泡腾崩解剂、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠中的一种或几种；吸收促进剂为季铵化合物；表面活性剂为十六烷醇；吸附载体为高岭土和皂粘土；润滑剂为滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁和聚乙二醇中的一种或几种；注射溶剂为注射用水、植物油、油酸乙酯、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、甘油、苯甲醇中的一种或几种；缓冲剂为醋酸-醋酸钠、枸橼酸-枸橼酸钠、酒石酸-酒石酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、碳酸氢钠-碳酸钠中的一种或几种；抑菌剂为苯甲醇、羟丙丁酯/甲酯、苯酚、三氯叔丁醇中的一种或几种；局麻剂为利多卡因、苯甲醇、三氯叔丁醇中的一种或几种；等渗调节剂为氯化钠、葡萄糖、甘油中的一种或几种；抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠中的一种或几种；助悬剂为明胶、甲基纤维素、果胶中的一种或几种；保护剂为乳糖、蔗糖、麦芽糖中的一种或几种；乳化剂为吐温、司盘、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、脂肪酸甘油酯中的一种或几种。