CN105985405A - 3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸衍生物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的化合物，具有以下结构通式：

Description

3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸衍生物及其应用

技术领域

本发明属于化学合成技术领域，具体涉及3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸衍生物及其应用。

背景技术

上海来益生物药物研究开发中心有限责任公司的ZL 201110076554.6号中国发明专利公开了从CGMCC No.4027的代谢产物中分离得到了以下结构式(1)的化合物，命名为：3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸(3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-valyl-isoleucine)：

ZL 201110076555.0号中国发明专利中，进一步公开了该化合物具有氨肽酶N抑制活性，可用于制备氨肽酶N抑制剂。

发明内容

本申请的发明人在进一步的研发中，在3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸，即结构式(1)的母体化合物，的基础上，合成了一系列衍生化合物，经过对这些衍生物的氨肽酶N抑制活性进行研究后发现，这些衍生物的氨肽酶N抑制活性相比结构式(1)的母体化合物均有了实质性的提高。

因此，本发明的第一个目的，在于提供一种结构式(1)的化合物的衍生物，所述衍生物具有以下结构通式：

其中，R选自：H、直链或支链C1-C4烷基、直链或支链的C1-C4羟烷基、直链或支链的C1-C4巯基烷基、直链或支链的C1-C4烷基羧基、以及C1-C4烷基酰胺基。

本发明的另一个目的，在于提供上述通式化合物的应用，用于制备氨肽酶N抑制剂。

本发明的上述结构式(1)的衍生物，对于氨肽酶N的抑制活性相比结构式(1)的化合物均有显著的提升，IC₅₀普遍提高了一个数量级以上，对于开发氨肽酶N抑制剂具有非常重要的意义。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明的3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸衍生物的合成以及氨肽酶N抑制活性作进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

一、合成实施例

以结构式(1)为母体化合物，合成一系列的衍生物，具体如下：

实施例1

反应式如下：

合成步骤如下：

1、100ml三口烧瓶中，投入4.07g(0.01mol)化合物(1)，22ml四氢呋喃，冰水浴下滴加22ml的氢氧化钠溶液(1mol/l)，搅拌20min，滴加0.011mol苄氧羰基氯，自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩，得到化合物(2)4g，摩尔收率为73.9％。

2、100ml三口烧瓶中，N2置换保护下，投入化合物(2)4g和2.9g L-异亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐，2.4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降温至0℃，缓缓滴入3.4ml二异丙基乙胺，滴加完毕后自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后倒入冰水中，分层，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩得到化合物(3)4.8g，摩尔收率为87％。

3、100ml单口烧瓶中，投入4.8g化合物(3)，50ml甲醇，0.24g钯碳，氢气球置换三次，在氢气保护条件下常温搅拌反应，TLC跟踪，反应完毕后，抽滤滤掉钯碳，甲醇洗涤两次，滤液浓缩，二氯甲烷打浆得到2.6g化合物(4)，摩尔收率为77.5％。¹H NMR(500MHz，DMSO)δ：0.8(m,18H)，1.4(m,2H)，1.7(m,2H)，2.0(m,2H)，2.5(m,3H)，2.8(m,1H)，3.2(m,1H)，3.8(s,1H)，4.0(m,1H)，4.3(m,2H)，7.3(m,5H)，7.8(s,2H)，8.0(m,1H)；ESI-MS m/z：521[M+H⁺]。

实施例2

反应式如下：

合成步骤如下：

1、100ml三口烧瓶中，投入4.07g(0.01mol)化合物(1)，22ml四氢呋喃，冰水浴下滴加22ml的氢氧化钠溶液(1mol/l)，搅拌20min，滴加0.011mol苄氧羰基氯，自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩，得到化合物(2)4g，摩尔收率为73.9％。

2、100ml三口烧瓶中，N₂置换保护下，投入化合物(2)4g和2.9g L-亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐，2.4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降温至0℃，缓缓滴入3.4ml二异丙基乙胺，滴加完毕后自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后倒入冰水中，分层，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩得到化合物(5)5g，摩尔收率为90％。

3、100ml单口烧瓶中，投入5g化合物(5)，50ml甲醇，0.25g钯碳，氢气球置换三次，在氢气保护条件下常温搅拌反应，TLC跟踪，反应完毕后，抽滤滤掉钯碳，甲醇洗涤两次，滤液浓缩，二氯甲烷打浆得到2.7g化合物(6)，摩尔收率为77％。¹H NMR(500MHz，DMSO)δ：0.8(m,18H)，1.5(m,2H)，1.7(m,2H)，2.0(m,2H)，2.5(m,3H)，2.8(m,1H)，3.2(m,1H)，4.0(m,1H)，4.1(m,1H)，4.2(m,2H)，7.3(m,5H)，7.8(s,2H)，8.0(m,1H)；ESI-MS m/z：521[M+H⁺]。

实施例3

反应式如下：

合成步骤如下：

1、100ml三口烧瓶中，投入4.07g(0.01mol)化合物(1)，22ml四氢呋喃，冰水浴下滴加22ml的氢氧化钠溶液(1mol/l)，搅拌20min，滴加0.011mol苄氧羰基氯，自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后，倒入冰水中，乙酸乙酯提取，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩，得到化合物(2)4g，摩尔收率为73.9％。

2、100ml三口烧瓶中，N₂置换保护下，投入化合物(2)4g和2.8g L-缬氨酸苄酯对甲苯磺酸盐，2.4gTBTU，60ml二氯甲烷，冰水浴下降温至0℃，缓缓滴入3.4ml二异丙基乙胺，滴加完毕后自然升温反应，TLC跟踪，反应完毕后倒入冰水中，分层，有机层用饱和盐水洗涤，干燥，抽滤，滤液浓缩得到化合物(7)4.8g，摩尔收率为89％。

3、100ml单口烧瓶中，投入4.8g化合物(7)，50ml甲醇，0.25g钯碳，氢气球置换三次，在氢气保护条件下常温搅拌反应，TLC跟踪，反应完毕后，抽滤滤掉钯碳，甲醇洗涤两次，滤液浓缩，二氯甲烷打浆得到2.6g化合物(8)，摩尔收率为78％。¹H NMR(500MHz，DMSO)δ：0.8(m,18H)，1.4(m,1H)，1.7(m,1H)，2.0(m,2H)，2.5(m,3H)，2.8(m,1H)，3.2(m,1H)，3.9(s,1H)，4.0(m,1H)，4.3(m,2H)，7.3(m,5H)，7.8(s,2H)，8.1(m,1H)；ESI-MS m/z：507.3[M+H⁺]。

参照以上方法合成了一系列衍生物，具体如表1所示。

对于本领域的技术人员来说，参照以上实施例1-3的方法很容易获得表1中所列结构式(9)～(24)的化合物，因此这里不再逐一描述。另外，虽然以上实施例在第二步反应中均使用了L-型氨基酸基团，但D-型氨基酸基团同样适用，这对于本领域的技术人员来说是显而易见的，因此同样属于本发明涵盖的范围。

二、氨肽酶N抑制活性实施例

实施例4

本实施例以上述合成的结构式(4)、(6)、(8)～(24)的化合物(表1所列)为例，验证这些化合物对氨肽酶N的抑制活性，同时以母体化合物(结构式(1)的化合物)为对照，具体如下：

测定方法(参照ZL201110076555.0号中国发明专利)

在96孔板中加入底物(L-亮氨酰对硝基苯胺)100μl(1mg/ml，溶于0.1M Tris-HCl,pH 7.0)，不同浓度梯度的待测化合物20μl(0.1M Tris-HCl，pH 7.0)，37℃，3min反应，再加入氨肽酶N(L5006-25UN，Sigma)溶液20μl(2mU，0.1M Tris-HCl，pH 7.0)，37℃，反应30min，后于405nm波长处测定吸收值。

按照如下公式计算抑制率：

抑制率＝(A-B)/A*100％

其中A为不含抑制剂的反应体系测得的吸收度，B为含有不同浓度待测化合物的反应体系测得的吸收度，用0.1M Tris-HCl，pH 7.0的缓冲液调零。在所得数据系列中找出抑制率在50％左右所对应的各化合物浓度，即为其半数抑制浓度IC₅₀。

按上述方法试验获得的一系列衍生物的氨肽酶N抑制活性结果如表2所示：

表2、氨肽酶N抑制活性

*平均值，取自3组重复实验结果

由以上表1的结果可见，本发明合成的结构式(1)的一系列衍生物，其氨肽酶N抑制活性相比母体化合物(结构式(1))都有了显著的提升，IC₅₀普遍提高了一个数量级以上，对于开发新的氨肽酶N抑制剂具有非常重要的意义。

Claims (2)

1.一种新化合物，其特征在于，所述化合物具有以下结构通式：

其中，R选自：H、直链或支链C1-C4烷基、直链或支链的C1-C4羟烷基、直链或支链的C1-C4巯基烷基、直链或支链的C1-C4烷基羧基、以及C1-C4烷基酰胺基。

2.如权利要求1所述的化合物的应用，其特征在于，用于制备氨肽酶N抑制剂。