CN105963709B - 一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法 - Google Patents
一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105963709B CN105963709B CN201610401909.7A CN201610401909A CN105963709B CN 105963709 B CN105963709 B CN 105963709B CN 201610401909 A CN201610401909 A CN 201610401909A CN 105963709 B CN105963709 B CN 105963709B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cluster
- folic acid
- copper nano
- preparation
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/34—Copper; Compounds thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法，它包括铜纳米簇原液的制备、叶酸的活化、叶酸标记铜纳米簇的制备等步骤。本发明制备的铜纳米簇具有显著的抑制MCF‑7肿瘤细胞的增殖作用，并且能促进MCF‑7细胞凋亡，证明其具有一定的抗乳腺癌肿瘤细胞的活性，动物实验结果表明，本发明能抑制MCF‑7细胞裸鼠成瘤，进一步证明了其抗肿瘤细胞活性。由于本发明的铜纳米簇采用了叶酸进行标记，因此还具有明显的靶向性，可用于乳腺癌的临床靶向治疗。
Description
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法。
背景技术
乳腺癌长期以来严重影响人类公共健康。目前，乳腺癌的治疗方法有很多种，主要包括内分泌治疗、放化疗、手术切除治疗以及靶向治疗。内分泌治疗相对经济，疗效好，能被大众接受，但容易复发。放化疗通常针对性较差，病人生活质量严重下降，非首选治疗方案。手术切除可以根治乳腺癌，疗效非常好，安全性高，但影响美观，难以接受。靶向治疗和放化疗相比，提高了安全性和针对性，是目前较好的治疗方案。
叶酸受体是一种跨膜单链糖蛋白，在大部分人体肿瘤细胞表面过度表达，包括乳腺癌，但其在正常细胞中表达水平很低甚至不表达。因此叶酸受体介导的抗肿瘤药物分子设计是目前肿瘤靶向治疗的热点。本发明设计合成了一种叶酸标记的铜纳米簇，能在体外体内抑制乳腺癌细胞的增殖，迁移，诱导乳腺癌细胞凋亡。为临床靶向治疗乳腺癌提供了新的思路。
发明内容
本发明的目的是提供一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法，采用该方法制备的铜纳米簇可抑制乳腺癌肿瘤细胞，可用于制备抗乳腺癌药物。
本发明提供的制备方法包括以下步骤：
1)铜纳米簇原液的制备：将BSA溶解在水中配成浓度为15～20mg/ml的澄清透明溶液，按照BSA∶Cu2+重量比为(10～40)∶(1～10)的比例加入铜离子，混合均匀，边搅拌边调节pH至碱性，在37～60℃下搅拌反应6～8h，然后再调节溶液pH至酸性，生成铜纳米簇沉淀，将铜纳米簇沉淀离心、分离、清洗后重新溶解在Tris-HCl缓冲液中并调节pH至碱性，即获得铜纳米簇原液；
2)叶酸的活化：将叶酸溶解在DMSO中配成浓度为0.2～0.5mg/ml的叶酸溶液，然后按体积分别加入0.5～2％的10～50mg/ml的EDC水溶液和10～50mg/ml的NHS水溶液，在黑暗、40～60℃条件下陈化10～15h，得活化的叶酸溶液；
3)叶酸标记铜纳米簇的制备：将活化的叶酸溶液与5～20倍体积的Tris-HCl缓冲液混合，然后再与步骤1)得到的铜纳米簇原液混合，所述铜纳米簇原液的体积为活化的叶酸溶液体积的15～30倍，在黑暗，40～60℃下反应10～15h，然后调节pH至3～6，生成叶酸标记的铜纳米簇沉淀，将沉淀离心、分离、清洗后重新分散在Tris-HCl缓冲液中形成澄清透明的溶液，调节溶液的pH值至9～12，即获得叶酸标记铜纳米簇。
优选地，步骤1)中，所述的BSA：Cu2+重量比为25∶5。
优选地，步骤2)中，将叶酸溶解在DMSO中配成浓度为0.4mg/ml的叶酸溶液，然后按体积分别加入1％的30mg/ml的EDC水溶液和20mg/ml的NHS水溶液。
优选地，步骤3)中，所述铜纳米簇原液的体积为活化的叶酸溶液体积的20倍。
本发明的有益效果是：本发明制备的铜纳米簇具有显著的抑制MCF-7肿瘤细胞的增殖作用，并且能促进MCF-7细胞凋亡，证明其具有一定的抗乳腺癌肿瘤细胞的活性，动物实验结果表明，本发明能抑制MCF-7细胞裸鼠成瘤，进一步证明了其抗肿瘤细胞活性。由于本发明的铜纳米簇采用了叶酸进行标记，因此还具有明显的靶向性，可用于乳腺癌的临床靶向治疗。
本发明提供的制备方法反应充分，产物收率和纯度高，杂质少，周期短。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行详细地说明。
实施例1
1)铜纳米簇原液的制备：将BSA(牛血清白蛋白)溶解在水中配成浓度为16mg/ml的澄清透明溶液，按照BSA∶Cu2+重量比为25∶5的比例加入铜离子，混合均匀，边搅拌边加氢氧化钠调节pH值至11，在50℃下搅拌反应8h，然后再用冰醋酸调节溶液pH至4，生成铜纳米簇沉淀，将铜纳米簇沉淀离心、分离、去离子水清洗3次后重新溶解在Tris-HCl缓冲液中并用氢氧化钠调节溶液的pH值至11，即获得铜纳米簇原液；
2)叶酸的活化：将叶酸溶解在DMSO(二甲基亚砜)中配成浓度为0.4mg/ml的叶酸溶液，然后按体积分别加入1％的30mg/ml的EDC(碳二亚胺)水溶液和20mg/ml的NHS(N-羟基硫代琥珀酰亚胺)水溶液，在黑暗、50℃条件下陈化12h，得活化的叶酸溶液；
3)叶酸标记铜纳米簇的制备：将活化的叶酸溶液与10倍体积的Tris-HCl缓冲液混合，然后再与步骤1)得到的铜纳米簇原液混合，所述铜纳米簇原液的体积为活化的叶酸溶液体积的20倍，在黑暗，50℃下反应12h，然后再用冰醋酸调节pH至4，生成叶酸标记的铜纳米簇沉淀，将沉淀离心、分离、去离子水清洗3次后重新分散在Tris-HCl缓冲液中形成澄清透明的溶液，用氢氧化钠调节溶液的pH值至11，即获得叶酸标记铜纳米簇。
实施例2叶酸标记铜纳米簇体外抑制MCF-7细胞增殖试验
取生长良好的对数生长期MCF-7细胞，胰蛋白酶消化后接种到96孔板，置细胞培养箱37度，5％二氧化碳条件培养24小时。设计5个药物浓度，每个浓度4个复孔，以空白培养基为对照。给药后48小时按照MTT实验标准步骤，酶标仪测定OD值，计算细胞生长抑制率。结果如表1所示。
表1叶酸标记铜纳米簇对MCF-7细胞增殖的抑制作用
| 药物浓度(μg/ml) | 抑制率 |
| 1 | 5％ |
| 2 | 8％ |
| 5 | 19％ |
| 10 | 37％ |
| 20 | 60％ |
以上实验结果表明：本发明制备的铜纳米簇对MCF-7细胞的增殖具有显著抑制作用，抑制率随浓度增加而增加，当浓度达到20μg/ml时，抑制率显著增加。
实施例3叶酸标记铜纳米簇促进MCF-7细胞凋亡试验
培养MCF-7细胞，分别以1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml叶酸标记铜纳米簇处理细胞24小时，采用Annexin V-FITC/PI染色的方法，经流式细胞仪检测细胞凋亡情况。凋亡率见表2。
表2叶酸标记铜纳米簇诱导MCF-7细胞凋亡
| 叶酸标记铜纳米簇浓度 | 0μg/ml | 1μg/ml | 5μg/ml | 10μg/ml |
| 细胞凋亡率(％) | 1.93±0.21 | 2.82±0.38 | 4.76±0.24 | 7.34±0.49 |
实验结果表明，本发明制备的铜纳米簇可显著诱导MCF-7细胞的凋亡，而且呈浓度依赖性。
实施例4体内裸鼠成瘤实验
造模：取对数生长期的MCF-7细胞，用PBS调整细胞浓度为108/ml。在无菌条件下将0.2ml细胞接种于Balb/c裸鼠右腋下皮下。接种后观察肿瘤生长状况，肿瘤体积长到100mm3左右进行分组，每组6只，包括模型对照组，低(1μg/ml)中(5μg/ml)高(10μg/ml)计量组。实验组每周两次瘤内注射给药，三周后剥离肿瘤组织，考察相关参数。
表3叶酸标记铜纳米簇对MCF-7细胞裸鼠成瘤的抑制
| 实验分组 | 肿瘤重量 | p值(VS对照组) |
| 对照组 | 0.75±0.26 | - |
| 1μg/ml给药组 | 0.68±0.21 | <0.05 |
| 5μg/ml给药组 | 0.42±0.20 | <0.01 |
| 10μg/ml给药组 | 0.36±0.14 | <0.01 |
实验结果表明：本发明制备的铜纳米簇给药组肿瘤重量明显低于对照组。
Claims (4)
1.一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)铜纳米簇原液的制备：将牛血清白蛋白溶解在水中配成浓度为15～20mg/ml的澄清透明溶液，按照牛血清白蛋白∶Cu2+重量比为(10～40)∶(1～10)的比例加入铜离子，混合均匀，边搅拌边调节pH至11，在37～60℃下搅拌反应6～8h，然后再调节溶液pH至4，生成铜纳米簇沉淀，将铜纳米簇沉淀离心、分离、清洗后重新溶解在Tris-HCl缓冲液中并调节pH至11，即获得铜纳米簇原液；
2)叶酸的活化：将叶酸溶解在DMSO中配成浓度为0.2～0.5mg/ml的叶酸溶液，然后按体积分别加入0.5～2％的10～50mg/ml的EDC水溶液和10～50mg/ml的NHS水溶液，在黑暗、40～60℃条件下陈化10～15h，得活化的叶酸溶液；
3)叶酸标记铜纳米簇的制备：将活化的叶酸溶液与5～20倍体积的Tris-HCl缓冲液混合，然后再与步骤1)得到的铜纳米簇原液混合，所述铜纳米簇原液的体积为活化的叶酸溶液体积的15～30倍，在黑暗，40～60℃下反应10～15h，然后调节pH至3～6，生成叶酸标记的铜纳米簇沉淀，将沉淀离心、分离、清洗后重新分散在Tris-HCl缓冲液中形成澄清透明的溶液，调节溶液的pH值至9～12，即获得叶酸标记铜纳米簇。
2.如权利要求1所述的叶酸标记铜纳米簇的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述的牛血清白蛋白：Cu2+重量比为25∶5。
3.如权利要求1所述的叶酸标记铜纳米簇的制备方法，其特征在于：步骤2)中，将叶酸溶解在DMSO中配成浓度为0.4mg/ml的叶酸溶液，然后按体积分别加入1％的30mg/ml的EDC水溶液和20mg/ml的NHS水溶液。
4.如权利要求1所述的叶酸标记铜纳米簇的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述铜纳米簇原液的体积为活化的叶酸溶液体积的20倍。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610401909.7A CN105963709B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610401909.7A CN105963709B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105963709A CN105963709A (zh) | 2016-09-28 |
| CN105963709B true CN105963709B (zh) | 2019-01-11 |
Family
ID=57010498
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610401909.7A Expired - Fee Related CN105963709B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105963709B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004003558A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-01-08 | Georgia Tech Research Corporation | Nano-sized optical fluorescence labels and uses thereof |
| CN105670612A (zh) * | 2016-02-26 | 2016-06-15 | 湖北大学 | 一种对pH敏感的荧光纳米铜簇凝胶的制备方法 |
| CN105750561A (zh) * | 2016-03-17 | 2016-07-13 | 湖北大学 | 一种提纯铜纳米簇的方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7361410B2 (en) * | 2003-12-29 | 2008-04-22 | Intel Corporation | External modification of composite organic inorganic nanoclusters comprising raman active organic compound |
| CN103222961B (zh) * | 2013-04-26 | 2015-06-24 | 沈阳药科大学 | 治疗肿瘤的注射用Cu(DDC)2蛋白纳米粒制剂及其制备方法 |
-
2016
- 2016-06-08 CN CN201610401909.7A patent/CN105963709B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004003558A1 (en) * | 2002-06-27 | 2004-01-08 | Georgia Tech Research Corporation | Nano-sized optical fluorescence labels and uses thereof |
| CN105670612A (zh) * | 2016-02-26 | 2016-06-15 | 湖北大学 | 一种对pH敏感的荧光纳米铜簇凝胶的制备方法 |
| CN105750561A (zh) * | 2016-03-17 | 2016-07-13 | 湖北大学 | 一种提纯铜纳米簇的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Copper Quantum Clusters in Protein Matrix: Potential Sensor of Pb2+ Ion;Nirmal Goswami等;《Anal. Chem.》;20111103;第83卷;第9676-9680页 |
| Folate Receptor-Targeting Gold Nanoclusters as Fluorescence Enzyme Mimetic Nanoprobes for Tumor Molecular Colocalization Diagnosis;Dehong Hu等;《Theranostics》;20140102;第4卷(第2期);第142-153页 |
| 铜纳米簇的合成与应用研究;李婷等;《化学传感器》;20160331;第36卷(第1期);第17-26页 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105963709A (zh) | 2016-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108892700B (zh) | 一类新型抗肿瘤化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN104223115B (zh) | 鱼鳞胶原蛋白多肽的新用途 | |
| CN111437297A (zh) | 用于预防及治疗癌因性疲乏的组合物及其用途 | |
| CN106165905B (zh) | 一种钙加维生素软胶囊及制备方法 | |
| CN104829596A (zh) | 吡咯取代吲哚酮类衍生物、其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途 | |
| CN105963709B (zh) | 一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法 | |
| CN108358839A (zh) | 一种酪氨酸激酶抑制剂及其应用 | |
| CN111253462B (zh) | 一种白桦脂醇衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN114369060B (zh) | 吲哚胺2，3-双加氧酶抑制剂及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN107349417A (zh) | 一种治疗食管鳞癌的ecm复合物以及其在制备治疗食管鳞癌的药物中的用途 | |
| CN107441076B (zh) | 一种治疗癌症的联合用药物 | |
| CN108578407B (zh) | 莲心碱高氯酸盐在制备抗结直肠癌药物中的应用 | |
| CN105147707B (zh) | 一种帕米磷酸二钠葡萄糖注射液及其制备方法 | |
| LU500790B1 (en) | Molecular structure and synthesis method of a novel anti-triple-negative breast cancer drug | |
| CN108358840A (zh) | 一种酪氨酸激酶抑制剂及其用途 | |
| CN116549478B (zh) | 一种药物组合物及其制备方法和用途 | |
| CN109251224A (zh) | 同时具有化疗和光疗抗肿瘤作用的铱配合物及其制备方法和应用 | |
| CN104232714A (zh) | 龟甲胶多肽的制备方法和制药新用途 | |
| CN103750916A (zh) | 一种小鼠胃癌模型的建立方法 | |
| CN104922698B (zh) | 人干细胞生长因子注射液及其制备方法 | |
| Yagisawa et al. | Novel approach for bladder cancer treatment using sulfoquinovosylacylpropanediol as a radiosensitizer. | |
| CN109453385A (zh) | 一种用于治疗癌症的组合物及其应用 | |
| CN110448555B (zh) | 多环化合物在制备抗肿瘤药物中的应用及抗肿瘤药物 | |
| CN102772696A (zh) | 硒环肽·脂肪酸合剂及其制备方法 | |
| CN112546048B (zh) | HKL-5-61与Osimertinib的药物组合及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190111 Termination date: 20210608 |