CN103750916A

CN103750916A - 一种小鼠胃癌模型的建立方法

Info

Publication number: CN103750916A
Application number: CN201410038030.1A
Authority: CN
Inventors: 支小飞; 徐皓; 杨力; 徐泽宽
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-01-26
Filing date: 2014-01-26
Publication date: 2014-04-30
Anticipated expiration: 2034-01-26
Also published as: CN103750916B

Abstract

本发明公开了一种小鼠胃癌模型的建立方法。取4周龄C57BL/6小鼠，将小鼠至于能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置中，每天6～8小时，持续25～30天为一个应激周期，每个应激周期间隔5～7天，共2-3个应激周期；在应激的同时，给予小鼠含有N-亚硝基化合物的饮水，给药一周间隔一周再给药，给药间期给予正常饮水，总共给药5周；给药结束后常规饲养35周，获得胃癌小鼠。以往文献报道单纯MNU处理C57BL/6小鼠后胃癌的形成率约为30%左右，本发明将MNU处理和应激处理相结合后，C57BL/6小鼠的胃癌形成率上升至60%。

Description

一种小鼠胃癌模型的建立方法

技术领域

本发明属于实验技术领域，涉及一种小鼠胃癌模型的建立方法。

背景技术

目前，小鼠胃癌模型分为自发成瘤模型和移植瘤模型。移植瘤模型采用的是免疫缺陷小鼠（如无胸腺裸鼠、SCID小鼠），将肿瘤细胞或瘤块移植进免疫缺陷鼠体内后形成肿瘤。小鼠胃癌自发瘤模型又分为基因工程小鼠胃癌模型和环境因子刺激胃癌模型。现在世界上共有3种基因工程小鼠胃癌模型：INS-GAS小鼠、TFF-1knockout小鼠和RunnX3knockout小鼠。这些小鼠均是利用小鼠胚胎干细胞的基因同源重组，将特定基因在小鼠基因组上敲除或敲入。目前，已经成功在小鼠体内诱导发生胃癌的环境因子包括：幽门螺杆菌（Cancer Res65:10709–10715）、亚硝基化合物MNNG（Gann70:343–352）和MNU（Jpn J Cancer Res84:1258–1264）。幽门螺杆菌在体外扩增后，给小鼠进行灌胃来使其定植于胃内。MNNG和MNU是混在小鼠的饮水中，给小鼠连续饮用诱发胃癌。

小鼠移植瘤胃癌模型一直都饱受争议，因为移植物并非小鼠自身形成的肿瘤，并不能反映体内成瘤的真正过程。此外，目前的肿瘤领域研究发现，机体的免疫系统微环境在肿瘤形成过程中起到了重要作用，而免疫缺陷鼠缺乏正常的免疫系统，因此，利用这个模型进行研究势必会产生误差。

自发成瘤模型因其类似人体内肿瘤的发生过程而被广泛认可，胃癌的形成是一个多因素的过程，包括了基因的突变、环境的刺激等，而基因工程小鼠胃癌模型仅将一个基因进行突变，未将重要的环境因素纳入，因此，环境因子刺激胃癌模型比基因工程小鼠模型更接近人体胃癌的自然形成过程。

目前，仅一篇文献报道了成功利用幽门螺杆菌在小鼠体内诱导胃癌，且主要为上皮内瘤变（Cancer Res65:10709–10715）。MNNG用于小鼠胃癌诱导模型的成功率在文献中报道不一，有两篇文献报道了诱导成功（Methods Cancer Res7:245–308，Gann70:343–352），其余均未诱导成功。MNU目前被证实具有较稳定的成瘤率，在C57BL/6小鼠中的成瘤率约为30%左右（Carcinogenesis29(8):1648-1654）。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一种小鼠胃癌模型的建立方法。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种小鼠胃癌模型的建立方法，取4周龄C57BL/6小鼠，将小鼠至于能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置中，每天6～8小时，持续25～30天为一个应激周期，每个应激周期间隔5～7天，共2-3个应激周期；在应激的同时，给予小鼠含有N-亚硝基化合物的饮水，给药一周间隔一周再给药，给药间期给予正常饮水，总共给药5周；给药结束后常规饲养30～35周，获得胃癌小鼠。

所述的小鼠胃癌模型的建立方法，优选将小鼠至于能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置中，每天6小时，持续28天为一个应激周期。

所述的能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置优选为管身戳有5-10个洞的50ml离心管，或其类似装置。

所述的N-亚硝基化合物优选n-甲基-n-亚硝基脲。

所述的含有n-甲基-n-亚硝基脲的饮水中n-甲基-n-亚硝基脲的浓度优选240～300ppm，进一步优选24ppm。对饮水的总量不进行控制。

有益效果：

应激在肿瘤形成过程中具有重要的，但目前还没有应激在胃癌中形成中的相关研究。本发明的发明点在于发现了应激具有促进胃癌发生的作用，并以此为基础辅以特定剂量的N-亚硝基化合物，特别是MNU建立了小鼠胃癌模型，该方法具有以下优点：

1.小鼠慢性应激反应明显：该模型使小鼠产生明显的行动抑制，体重增加，血浆中皮质酮升高。

2.小鼠胃癌形成率升高：以往文献报道单纯MNU处理C57BL/6小鼠后胃癌的形成率约为30%左右，本发明在应急处理的基础上结合N-亚硝基化合物处理后，C57BL/6小鼠的胃癌形成率上升至60%。

3.本法明的在N-亚硝基化合物中优选MNU，因为其诱导胃癌稳定性好。剂量优选240～300ppm，因为大剂量的MNU会产生消化道其他部位肿瘤，且小鼠很难耐受其毒性。应激周期选3个周期，以利于诱导慢性应激。

附图说明

图1小鼠束缚模型

图2小鼠胃癌标本

图3小鼠胃癌组织切片HE染色

具体实施方式

实施例1

1.胃癌诱导化合物：MNU（n-甲基-n-亚硝基脲，N-methyl-Nnitrosourea）。给药途径：溶于小鼠饮水中。剂量：240ppm。

2.应激模具：50ml离心管（戳5-10个小洞）

3.步骤：

取4周龄C57BL/6小鼠，将小鼠放进50ml离心管中（戳5-10个小洞），束缚其活动，每只离心管放一只小鼠，每天6小时，持续28天为一个应激周期，每个应激周期间隔5天，共3个应激周期。在应激的同时，给予小鼠含有MNU的饮水，给药一周间隔一周再给药，给药间期给予正常饮水，总共给药5周。同时设置仅给予小鼠含有MNU的饮水不进行应激处理的MNU组和仅按照上述方法进行应激处理的应激组。给药结束后常规饲养35周，再断颈处死小鼠，取出胃组织，HE染色确定病变性质，并且测定小鼠的体重、胃组织中皮质酮、测量肿瘤大小，计算成瘤率，结果见图1和表1。由表1可见，本发明联合使用MNU和应激较之单独使用MNU成瘤率显著提高，能够更好地诱导胃癌的发生。

表1

肿瘤大小不能随时间观察，因为太小，影像学不能准确看出来。最终的肿瘤大小计算方法为(width²×length)/2。

Claims

1.一种小鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于取4周龄C57BL/6小鼠，将小鼠至于能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置中，每天6～8小时，持续25～30天为一个应激周期，每个应激周期间隔5～7天，共2-3个应激周期；在应激的同时，给予小鼠含有N-亚硝基化合物的饮水，给药一周间隔一周再给药，总共给药5周，给药间期给予正常饮水；给药结束后常规饲养30～35周，获得胃癌小鼠。

2.根据权利要求1所述的小鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于将小鼠至于能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置中，每天6小时，持续28天为一个应激周期。

3.根据权利要求1或2所述的小鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的能够束缚其活动但能够自由呼吸的管状装置为管身戳有5-10个洞的50ml离心管，或其类似装置。

4.根据权利要求1所述的鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的N-亚硝基化合物为n-甲基-n-亚硝基脲。

5.根据权利要求4所述的鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的含有n-甲基-n-亚硝基脲的饮水中n-甲基-n-亚硝基脲的浓度为200～280ppm。

6.根据权利要求5所述的鼠胃癌模型的建立方法，其特征在于所述的含有n-甲基-n-亚硝基脲的饮水中n-甲基-n-亚硝基脲的浓度为240ppm。