CN105938102A - 一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，利用刚果红法和氢氧化钠‑间苯二酚法测定有机磷农药、用2，6‑二氯醌‑4‑氯亚胺作显色剂的化学显色法测定氨基甲酸酯类农药，本发明还包括高效液相色谱串联质谱法。本发明在确定的色谱条件下，分别对蔬菜和水果进行了分析检测，线性关系良好，表明高效液相色谱串联质谱法能够满足果蔬中农药残留的定性定量分析，通过对精密度、重复性、稳定性、加标回收率和检出限与定量限的测定，结果表明仪器的灵敏度高，操作简便，结果准确，方法的可靠性和重复性好，可用于蔬菜和水果中农药残留量的测定。

Description

一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法

技术领域

本发明属于果蔬中农药残留测定技术领域，尤其涉及一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法。

背景技术

随着国家经济的发展，人们生活水平的不断提高，人们对日常食物的安全性的意识也越来越高。由于蔬菜、水果是人们生活中必不可少的，为了保证广大消费者的身体健康，研究快速、全面测定果蔬中有机磷农药残留和氨基甲酸酯类农药残留的测定具有非常重要的意义。

气相色谱作为经典传统的方法广泛运用于生活中，但是对于检测食品中的有机磷农药残留含量还是具有一定的缺陷。比如对易分解的高沸点有机物就无法给出准确的检测结果，不能直接给出定性结果。免疫法比较前几种具有一定的优势，但是在我国这种方法还不完善，不能广泛的运用到生活中去。而酶抑制法虽说操作简便，仪器便宜，速度快，特别适合大批样品的筛选检测以及现场检测，但是酶这种原材料很贵，制备工序也很麻烦，对于实验室研究来说不具有实践性。

发明内容

本发明为解决背景技术中所述的问题，提供了一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法。

本发明是这样实现的，一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，该化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法包括利用刚果红法和氢氧化钠-间苯二酚法测定有机磷农药、用2，6-二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法测定氨基甲酸酯类农药；

利用刚果红法和氢氧化钠-间苯二酚法测定有机磷农药：建立刚果红法和氢氧化钠-间苯二酚法对敌敌畏、敌百虫、乐果、甲胺磷、对硫磷5种有机磷农药和10种蔬菜、8种水果中有机磷农药残留进行检测；

用2，6-二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法测定氨基甲酸酯类农药：用2，6—二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法来测定西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威5种氨基甲酸酯类农药和常见的10种市售蔬菜、8种市售水果中的氨基甲酸酯类农药残留。

进一步，分别配制不同浓度的敌敌畏、敌百虫、乐果、甲胺磷和对硫磷标准溶液，分别取上述溶液各一滴于表面皿中，再取刚果红溶液一滴与其混合，观察其显色反应结果，以此方法得到各农药的刚果红法检测下限，依次为：敌敌畏6.5mg/L，敌百虫5.0mg/L，乐果7.33mg/L，甲胺磷11.45mg/L，对硫磷13.43mg/L。

进一步，分别配制不同浓度的敌敌畏、敌百虫和对硫磷标准溶液，分别取上述溶液各一滴于表面皿中，再取氢氧化钠-间苯二酚的混合溶液一滴与其混合，观察其显色反应结果，以此方法得到各农药的氢氧化钠-间苯二酚法检测下限，依次为：敌敌畏7.14mg/L，敌百虫6.67mg/L，对硫磷8.84mg/L。

进一步，所述用2，6—二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法为：分别配制不同浓度的西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威标准溶液，分别取上述溶液各一滴于表面皿中，再取2，6—二氯醌-4-氯亚胺溶液一滴与上述配制的不同浓度的西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威标准溶液混合，观察其显色反应结果，来测定西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威5种氨基甲酸酯类农药中检测下限分别为西维因7.80mg/L，叶蝉散6.49mg/L，涕灭威7.33mg/L，呋喃丹9.45mg/L，异索威11.50mg/L。

进一步，该化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法还包括HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法，该方法为：

对蔬菜和水果中的5种有机磷农药和5种氨基甲酸酯类农药进行分析测定，

对流动相体系、流速、波长、柱温进行选择与优化，

最终确定最佳的分析条件，采用与质谱串联对样品种各农药残留进行定性。

进一步，HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法包括有机磷农药定性定量分析方法，该有机磷农药定性定量分析方法为：

将待测果蔬取小块置于小烧杯中，加蒸馏水50ml，于超声波清洗仪中超声5min，再将清洗液用微孔滤膜过滤，上机测试；

高效液相色谱条件：色谱柱：Eclipse XDB-C18；流动相：甲醇：水＝1:1；流速：1mL/min^-1；柱温：25℃；检测器：DAD检测器；检测波长：200nm；进样量：10μL；

质谱条件：电离源：电喷雾电离源；ESI正负离子模式检测；锥孔电压30V；毛细管电压2.8kV；雾化气压力：40.0psi；干燥气流速：5mL·min^-1；干燥气温度：350℃。质量扫描范围150～900m/z。

进一步，HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法还包括氨基甲酸酯类农药检测方法，该氨基甲酸酯类农药检测方法为：

将待测果蔬取小块置于小烧杯中，加蒸馏水50ml，于超声波清洗仪中超声5min，再将清洗液用微孔滤膜过滤，上机测试；

液相色谱条件：色谱柱：ZORBAY Eclipse XDB-C18；流动相：100％甲醇；流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：10uL；检测器：DAD检测器；检测波长：210nm；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；雾化气压力：40psi；干燥气流速：8L/min；干燥气温度：350℃。

本发明提供的高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点：①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点。

高效液相具有简便、快速、分辨率高、检测限低、重复性好，定量精度高等特点的同时，还必将会在提高检测质量和速度上有更大的发展前景。

高效液相色谱法近几年发展很快，并且在逐渐完善。现在已经得到很好的发展和应用，在生活中的应用很广泛。高效液相色谱法具有高压、高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快、载液流速快等优点。

附图说明

图1是本发明实施例提供的HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

近些年，随着人民生活水平的不断提高，人们对健康食品的推崇也日益增高，食品的安全已成为人们关注的焦点，越来越多的人开始关注果蔬的质量安全问题，尤其是果蔬中的农药残留量超标问题，直接影响消费者的身体健康。随着人们对环保问题的日益关注和食品多样化，以及新农药品种不断进入市场，人们日益关注农药残留快速检测方法来亲自确认所购买的新鲜果蔬是否为绿色食品，且对农药残留检测限的要求会更低。面对21世纪果蔬安全的巨大挑战，除了政府有力的监管工作之外，还需要运用新的鉴定方法来检测果蔬中的农药残留。因此开发更加简便、快速、有效测定农药残留的方法，研究更加灵敏可靠的检测技术，加大在新型、低毒、高效农药研制和推广方面的投入，淘汰对人体危害较大的剧毒、高残留农药，研发推广快速的农药降解技术，减少或消除农药残留对人类的威胁，具有重要的意义。

下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。

本发明分别建立了化学显色法和高效液相色谱串联质谱法测定蔬菜水果中有机磷农药和氨基甲酸酯类农药残留，优化了各自的检测条件，对市场上部分蔬菜和水果进行了检测，

本发明提供一种建立化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，

利用刚果红法和氢氧化钠-间苯二酚法测定有机磷农药。

建立了刚果红法和氢氧化钠-间苯二酚法对敌敌畏、敌百虫、乐果、甲胺磷、对硫磷5种有机磷农药和10种蔬菜、8种水果中有机磷农药残留进行检测。检测下限分别为(1)刚果红法：敌敌畏6.5mg/L，敌百虫5.0mg/L，乐果7.33mg/L，甲胺磷11.45mg/L，对硫磷13.43mg/L；(2)氢氧化钠-间苯二酚法：敌敌畏7.14mg/L，敌百虫6.67mg/L，对硫磷8.84mg/L。通过上述两种方法的检测，虽然对含高农药残留的果蔬样品检测效果较好，现象明显，但对于有机磷农药含量较低的果蔬产品，仍旧检测不出，所以单独使用该方法，只适用于快速测定高含量农药残留的果蔬，而不适用于含农药量较低的果蔬样品。

本发明建立用2，6-二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法测定氨基甲酸酯类农药，

建立了用2，6—二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法来测定西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威5种氨基甲酸酯类农药和常见的10种市售蔬菜、8种市售水果中的氨基甲酸酯类农药残留。检测下限分别为西维因7.80mg/L，叶蝉散6.49mg/L，涕灭威7.33mg/L，呋喃丹9.45mg/L，异索威11.50mg/L。实验结果表明该方法对于高农残的检测效果明显，操作简单，快速。

上述化学显色法，虽然对含高农药残留的果蔬样品检测效果较好，现象明显，但对于有机磷农药含量较低的果蔬产品，仍旧检测不出，所以单独使用该方法，只适用于快速测定高含量农药残留的果蔬，而不适用于含农药量较低的果蔬样品。如需对农药含量较低的样品进行检测，可借助实验室大型仪器的准确定量检测，如高效液相色谱。

如图1所示：本发明建立HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法，

S101：采用高效液相串联质谱(HPLC-MS)对蔬菜和水果中的5种有机磷农药和5种氨基甲酸酯类农药进行分析测定；

S102：对流动相体系、流速、波长、柱温进行了选择与优化，

S103：最终确定了最佳的分析条件，采用与质谱串联对样品种各农药残留进行定性。

建立了高灵敏度的测定蔬菜和水果中两大类农药残留的测定方法。

本发明有机磷农药部分

(1)高效液相色谱条件：色谱柱：Eclipse XDB-Cl8(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：甲醇-水＝1:1；流速：1mL/min^-1；柱温：25℃；检测器：DAD检测器；检测波长：200nm；进样量：10μL。

(2)质谱条件：电离源：电喷雾电离源(ESI)；ESI正负离子模式检测；锥孔电压30V；毛细管电压2.8kV；雾化气压力：40.0psi(高纯液氮)；干燥气流速：5mL·min^-1；干燥气温度：350℃。质量扫描范围150～900m/z。

该方法对蔬菜和水果中的5种有机磷农药的检测分析都具有分离度高、快速、简便、准确的特点，适用于有机磷农药的定性、定量分析。

本发明氨基甲酸酯类农药部分

(1)液相色谱条件：色谱柱：ZORBAY Eclipse XDB-C18；流动相：100％甲醇；流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：10uL；检测器：DAD检测器；检测波长：210nm。

(2)质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；雾化气压力：40psi(1psi＝6.895kPa)；干燥气流速：8L/min；干燥气温度：350℃。

该方法对蔬菜和水果中的5种氨基甲酸酯类农药的检测准确度高，精密度高，分离度高，可用于果蔬氨基甲酸酯类农药的检测。

本发明在确定的色谱条件下，分别对蔬菜和水果样品种敌敌畏、敌百虫、乐果、甲拌磷、对硫磷5种有机磷农药和西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威5种氨基甲酸酯类农药进行了分析检测，线性关系良好，表明高效液相色谱串联质谱法能够满足果蔬中农药残留的定性定量分析。通过对精密度、重复性、稳定性、加标回收率和检出限与定量限的测定，结果表明仪器的灵敏度高，操作简便，结果准确，方法的可靠性和重复性好，可用于蔬菜和水果中农药残留量的测定。

本发明化学显色法与目前通用的酶试剂法相比，具有价格低廉和更加简便实用的优势；与仪器法相比，具有快速简便、大大降低了分析时间的优势。同时制作了测定有机磷农药和氨基甲酸酯类农药的标准比对卡片，大大提高检测速率。

本发明建立了高效液相色谱-质谱联用技术对果蔬中农药残留进行定性定量检测，方法简便易行、结果准确，精密度和准确度均满足分析样品的要求。

下面结合实验分析对本发明进一步说明。

1.1有机磷农药部分

1.1.1材料与方法

1.1.1.1实验仪器和试剂

(1)主要仪器及设备

Agilent 1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司，包括Agilent 1100系列在线真空脱气机、二元高压梯度泵、手动进样器、恒温柱温箱、二极管阵列检测器)，采用Agilent化学工作站和数据处理软件对信号进行采集和数据处理

Agilent 1100LC/MSD Trap VL液质联用仪(配有DAD检测器)；采用Agilent化学工作站和数据处理软件对信号进行采集和数据处理

AR1140电子天平(精确到0.0001g)(梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司)

DHG-9075A电热鼓风干燥箱(上海和羽良电子科技有限公司)

DZKW-4电热恒温水浴锅(北京中兴伟业有限公司)

UP-Ⅱ型优普超纯水机(成都超纯科技有限公司)

玻璃仪器：移液管；烧杯；10mL、50mL、100mL容量瓶

(2)主要试剂

表3-1 主要试剂

(Table3-1 Experiment Reagent)

1.1.1.2实验条件

(1)液相色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C_l8(4.6mm×150mm，5μm)；

流动相：甲醇：水＝1:1；

流速：1mL/min^-1；

柱温：25℃；

检测器：DAD检测器；

检测波长：200nm；

进样量：10μL。

(2)质谱条件

电离源：电喷雾电离源(ESI)；

ESI正负离子模式检测；

锥孔电压30V；

毛细管电压2.8kV；

雾化气压力：40.0pa(高纯液氮)；

干燥气流速：5mL·min^-1；

干燥气温度：350℃。

1.1.2实验步骤

1.1.2.1溶液的配制

(1)标准溶液的配制

分别准确配制敌敌畏，敌百虫，乐果，甲拌磷，对硫磷5种有机磷农药的甲醇溶液0mg/L，2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L配制成5组系列标准溶液，现用现配。

(2)样品溶液的配制

超声波振荡法：分别称取白萝卜、西红柿、黄瓜、苦瓜、青椒、豆角、白菜、芹菜、小油菜、茼蒿10种市售蔬菜以及苹果、桃子、橘子、梨、樱桃、西瓜、草莓、葡萄8种常见水果各5.00g于100mL的烧杯中，加入乙腈使其淹没样品，超声波震荡20min，分别加入10g无水硫酸钠静置20min，每种样品均分为两批。第一批样品分别加入5g活性炭脱色，经超声波震荡后静置过夜，过滤，取滤液，待测；第二批样品不作处理，作为对照。分别将第一批、第二批样品溶液用40℃恒温水浴锅浓缩至干，滤渣用甲醇溶解，定容到5mL，待测。

1.1.2.2样品的测定

将已配好的5种标准溶液和36个样品溶液按已设定的高效液相色谱-质谱分析条件采样，开机待仪器稳定后，采用六通阀手动进样器进样测定，进样量为10μL。

1.1.2.3定性测定

对于标准品溶液，按照1.1.1.2中所设定的高效液相色谱分析条件进行测定。

对于样品溶液，先利用液相色谱对样品中的待测物进行分离，再利用质谱对分离后的物质进行定性鉴定。(1)在相同液相检测条件下，可以根据物质的保留时间来定性，通过对比色谱峰的保留时间与标准溶液色谱峰的保留时间是否一致，来判断样品中是否存在所检测的5种有机磷农药。(2)再根据样品的质谱图做进一步定性判断，采用全扫描和选择性扫描模式分别对标准溶液和样品溶液进行质谱扫描，通过不同物质的质荷比来判定样品中是否含有5种有机磷农药。

1.1.2.4定量测定

(1)标准溶液的测定和标准曲线的绘制

本发明采用色谱定量分析中，特别是高效液相色谱定量分析中较常用的一种方法-标准曲线法(外标法的一种)进行定量测定，此方法是一种简便、快速的定量分析方法。用敌敌畏，敌百虫，乐果，甲拌磷，对硫磷的标准溶液系列，按照上述设定的液相分析条件，分别进样10μL，分别用所得色谱图的峰面积对农药的质量浓度做出5种有机磷农药溶液的标准曲线。

(2)样品溶液的测定

分析样品溶液时，按同样的分析条件对36个样品溶液分别进样10μL，用所得的峰面积对照5组农药的标准曲线，求出各样品溶液中所含5种有机磷农药的浓度，由以下公式计算含量。

$X=\frac{C\×V}{m\×1000}\×100\%$

式中：X为样品中被测组分的含量(％)；

C为根据标准曲线上得出被测组分的浓度(μg·mL^-1)；

V为样品溶液的体积(mL)；

m为样品的质量(mg)；

1.1.2.5精密度实验

分别精密吸取所配制的5组标准溶液中的4mg/L的溶液，按所设定的液相色谱分析条件，分别进样10μL，重复进样6次，计算以下公式精密度RSD。见表3-2。

RSD＝S/s

式中：S—峰面积相对标准偏差

s—峰面积平均值

表3-2 5种有机磷农药的精密度

(Table 3-2 Data of precision of 5 kinds of organophosphate pesticide residues)

1.1.2.6重复性实验

分别精密吸取36个样品溶液，按所设定的液相色谱条件分别进样10μL，测定5种有机磷农药的含量，根据所得色谱图的峰面积值，计算各样品溶液中农药浓度。每一样品分别重复进样6次，取农药浓度含量的平均值。

1.1.2.7稳定性试验

分别精密吸取同一样品溶液10μL，分别在间隔0、2、4、8、12、24h内进行进样测定，重复进样6次，根据色谱峰得敌敌畏，敌百虫，乐果，甲拌磷，对硫磷的平均峰面积，计算各自的精密度RSD值，判断待测物质的稳定性。

1.1.2.8加标回收率实验

本实验采用样品中添加标准品溶液的方法，对蔬菜和水果样品进行加标回收实验，分别添加三个质量浓度水平的标样溶液：1.5μg/mL、3.0μg/mL、4.5μg/mL，按照以上设定的实验方法，分别测定其含量，按以下公式计算出各样品溶液的加标回收率，不同浓度水平样品进行6次重复实验，计算加标回收率的平均值。

加标回收率％＝(C₃-C₁)/C₂*100％

式中：C₁—样品中敌敌畏(敌百虫)的含量，单位mg；

C₂—加入敌敌畏(敌百虫)标准液的含量，单位mg；

C₃—总敌敌畏(敌百虫)的含量，单位mg。

1.1.2.9检出限与定量限

检出限(Limit of Detection,LOD)，分为最低检出限和最低定量限，最低检出限(LOD)是在色谱图上能清楚确认的分析目标物色谱峰的下限值，一般以3倍噪声(S/N＝3)来计算；而最低定量限(LOQ)是指方法能够准确定量的最低浓度，通常以10倍噪声(S/N＝10)来计算。本发明对所绘标准曲线以S/N＝3和S/N＝10来计算最低检出限(LOD)和最低定量限(LOQ)。

1.1.3实验结果

1.1.3.1高效液相色谱测定结果

(1)标准溶液的测定

按照上述选择的液相色谱分析条件，开机待仪器稳定后，采用安捷伦六通阀进样器手动进样测定，进样量为10μL，对标准溶液进行分析测定。4mg/L的敌敌畏，敌百虫，乐果，甲拌磷，

5种有机磷农药有效成分的保留时间分别为敌敌畏6.715min，敌百虫1.428min，乐果6.152min，甲拌磷6.758min，对硫磷3.133min，按样品溶液出峰时间与标准溶液出峰时间对比，则可对样品溶液进行定性分析。

(2)标准曲线的绘制及线性范围

检测器的线性范围是指检测信号与被测物质量或浓度呈线性关系的范围。线性范围越大，越有利于测定大量组分或是微量组分，进行准确定量。线性范围内，用输出信号的大小来进行定量分析测定既方便又准确。用标准品溶液的响应值对含量作标准曲线，通常选择的是线性拟合，在一些特殊情况下，待测组分的响应值与浓度的变化不成线性关系时，可以用响应值对待测物浓度平方的倒数、浓度的倒数等作标准曲线。在实际实验中，通常标准曲线的线性范围比较窄，难以达到足够高的数量级。一般线性范围与所使用仪器的灵敏度相关，当仪器的灵敏度较高时，样品溶液配制的浓度不能太高。在确定线性范围之前，可以先配制不同浓度梯度的对照品对仪器的灵敏度进行考察。

标准曲线法分析同类的大批试样比较方便，但标准溶液的组成与浓度应尽量与试验接近，如果仪器设置条件或是操作条件发生变化，则需校正曲线，或重新制标准曲线。

准确配制5种农药的标准溶液系列0mg/L，2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，按照上述设定的高效液相分析条件，分别进样10μL，记录每种样品溶液的峰面积，以峰面积对各有机磷农药的质量浓度进行线性回归，

5个标准曲线的线性回归方程及相关系数见表3-3。结果表明，5种有机磷农药在其相应的线性范围内，峰面积与农药的浓度呈良好的线性关系。

表3-3 5种有机磷农药的线性回归方程、线性范围和线性相关系数

(Table3-3 Regression equations,linear ranges and correlation(R²)of 5 organophosphate pesticideresidues)

(3)样品溶液的测定结果

按照上述液相色谱分析条件，对每种蔬菜和水果溶液平行测定两次，进样量为10μL。是否使用活性炭脱色对白菜样品溶液的测定并无太大影响。

按照上述样品的制备方法分别制备各蔬菜和水果的样品溶液，根据液相色谱分析条件检测各个样品溶液，测得峰面积，带入回归方程，计算得到蔬菜样品中有机磷农药含量结果见表3-4、水果样品中有机磷农药含量见表3-5。

表3-4 蔬菜样品中有机磷农药的检测结果

(Table 3-4 results of organophosphate pesticide residues in Vegetables)

注：“ND”表示未检测出

表3-5 水果样品中有机磷农药的检测结果

(Table 3-5 results of organophosphate pesticide residues in Fruits)

由表3-4和表3-5可知在蔬菜样品中检测出的除虫剂(如敌敌畏，敌百虫)较多，除草剂(甲拌磷，对硫磷)较少；而在水果样品中检测出除虫剂和除草剂都在使用。

由表3-4和表3-5还可得出使用活性炭脱色对本身有颜色的样品的检测结果影响较大，如草莓、樱桃、橘子、茼蒿等。以樱桃为例，在未使用活性炭脱色检测结果为4.35mg/L，使用活性炭脱色检测结果为2.37mg/L，使用活性炭对检测结果影响较大。而对于本身颜色较浅的样品，是否使用活性炭，对检测结果影响不大，如苹果，桃子，白菜等。以白菜为例，在未使用活性炭脱色检测结果为2.04mg/L，使用活性炭脱色检测结果为2.03mg/L，使用活性炭对检测结果影响不大。

1.1.3.2质谱定性分析结果

液相色谱-质谱联用仪主要有质谱仪、色谱柱、接口、记录系统、电子系统和计算机等六大部分组成。待测样品进入色谱仪后，经液相色谱柱得到分离，从色谱仪流出的被分离组分一次通过液质联用接口进入质谱仪。在质谱仪中，待测溶液首先经过离子源被高压离子化，然后离子在加速电压作用下进入质谱质量分析器进行质量分离。分离后的离子碎片按质量的大小，先后由收集器收集，形成质谱图。根据质谱图中质谱峰的出峰位置和离子强度可对样品的成分和结构构成进行分析。

分别将制备的敌敌畏、敌百虫、乐果、甲拌磷、对硫磷标准溶液与蔬菜和水果样品溶液，在负离子和正离子两种电离模式下优化目标化合物的母离子和特征碎片离子。结果表明，敌敌畏、敌百虫在正负模式下的响应都能满足要求，但乐果、甲胺磷、对硫磷在正离子模式下响应不好。本实验采用正负两种电离模式来进行定性。本实验的质谱条件：电喷雾电离源；m/z范围100～900amu；雾化气压力：40psi；干燥气流速：8.0L/min；干燥气温度：350℃。

质谱分析结果表明黄瓜、白菜、芹菜、小油菜、茼蒿等常见茎叶类蔬菜中含有敌敌畏或敌百虫等除虫剂，不含除草剂；除西瓜外，其余7种水果中检测出含有敌敌畏、敌百虫或甲拌磷。

1.1.3.3加标回收率的测定

本实验采用空白蔬菜、水果样品中添加标准溶液的方法，分别添加3个质量浓度水平：1.5μg/mL、3.0μg/mL、4.5μg/mL的标准溶液1mL于5mL的容量瓶中，用空白样品定容，按照上述的液相色谱条件，分别进样10μL测定，，每个浓度水平进行6次重复性实验，计算样品的回收率，结果见表3-6。蔬菜和水果样品中5种有机磷农药的加标回收率在84.6％-102.3％之间，相对标准偏差小于5％。结果表明，该方法的相对标准偏差和回收率满足分析样品的要求，可以用于蔬菜、水果中有机磷农药的检测。

表3-6 蔬菜和水果中有机磷农药的加标回收率实验结果(n＝6)

(Table 3-6 The recovery results of organophosphate pesticide residues in Fruits and Vegetables(n＝6))

1.1.3.4精密度实验

精密吸取上述5种标准溶液，分别进样10μL，重复进样6次，记录每种样品的色谱图，测得5种甜味剂的色谱峰面积，计算RSD结果为：敌敌畏2.34％，敌百虫1.37％，乐果2.79％，甲拌磷3.89％，对硫磷1.99％；RSD(n＝6)在1.37％-3.89％之间，结果表明使用高效液相色谱串联质谱法的精密度较好。

1.1.3.5稳定性实验

将配制好5种有机磷的4mg/L的标准溶液，按上述设定的液相色谱分析方法进行分析，每隔一定时间(0h、2h、4h、8h、12h、24h)进样一次检测，测定其峰面积，计算各有机磷农药的RSD：敌敌畏为1.67％,敌百虫为3.32％，乐果为4.09％，甲拌磷为2.83％，对硫磷为3.12％。结果显示4mg/L的标准溶液在24h内稳定性良好。

1.1.3.6重复性实验

分别取白菜、茼蒿、草莓、苹果4种样品溶液按上述设定的液相色谱条件，分别进样10μL，测定5种有机磷农药的峰面积值，其中敌敌畏的RSD为4.04％，敌百虫的RSD为4.94％，甲拌磷3.75％，对硫磷4.17％，乐果为4.03％。结果表明该方法的重现性较好，满足果蔬中有机磷农药残留的检测。

1.1.3.7检出限和定量限

取已知浓度的农药标准溶液，用甲醇以不同比例稀释后测定，分别以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标。以S/N＝3和S/N＝10计算，测得检出限：敌敌畏为1.3μg/L,敌百虫为1.7μg/L,乐果为1.5μg/L,甲拌磷为1.3μg/L,对硫磷为1.6μg/L；定量限为敌敌畏2.1μg/L，敌百虫为2.6μg/L，乐果2.2μg/L，甲拌磷为2.5μg/L，对硫磷为2.7μg/L。

1.1.4实验讨论

1.1.4.1液相色谱分离条件的优化

高效液相色谱分析的目的是将目标物与杂质分离，并获得目标物的有效数据。因此，必须确定最适宜的分离条件：选择合适的色谱柱，有效的调节色谱条件，其中包括流动相的组成、比例，流速的选择，适宜的柱温，以及目标物的最大紫外吸收波长，尽量使样品中的不同组分能以最短的分析时间、最大的分离度、最小的流动相消耗、最高的检测灵敏度达到最佳分离。

1.1.4.2波长的选择

实验通过高效液相色谱DAD检测器在波长200nm～400nm下对5种有机磷农药标准溶液进行全扫描。结果表明，5种有机磷农药标准溶液的最大吸收波长在200nm至250nm之间，根据5种农药的响应值，本实验选用检测波长200nm。

1.1.4.3色谱柱的选择

在高效液相各种模式中，反相高效液相色谱的应用最为广泛，据统计，在高效液相色谱分析的样品中，其中反相液相色谱占所有液相色谱分析模式总数的80％以上。反相高效液相色谱采用极性流动相和非极性固定相对样品进行分离，具有很强的分离能力，对样品分析的使用性也很广。在反相色谱中色谱柱多为C₁₈或C₈键合硅胶填料，这种填料具有较大的微孔，并能把键合以后残余的硅醇基用三甲基氯硅烷封闭起来。ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈色谱柱采用先进的硅胶键合、处理以及封端技术，能够对各类化合物提供完善的峰型和较高的柱效。C₁₈柱反相键合相使用的柱填料是疏水性的，常以乙腈-水、甲醇-水等作为流动相的反相模式来分离中等极性或是非极性的样品。本实验采用ZORBAX EclipseXDB-C₁₈色谱柱作为样品的分析色谱柱，所分析样品均获得较好的分离度。

1.1.4.4流动相体系的选择及优化

高效液相色谱中流动相的作用是为了携带待测物前进，提供样品一种分配相，从而调节样品的选择性以使待测组分得到较好的分离度。因此,流动相的构成以及比例对待测物组分的分离起着关键性的作用。色谱分离中增加流动相中有机溶剂的比例可加快谱带流出，但也常常会导致分离度降低；相反，降低有机溶剂的比例，则会延长保留时间，但分离效果往往会更好^]。因此，改变流动相的组成，可以使样品中单一组分或是几种组分得到最佳的分离。高效液相反相色谱分离中，甲醇与乙腈是常见流动相组成，在进行离子对色谱分离中，为了增加配对离子在流动相中的溶解度，通常采用甲醇和水的流动相体系,有利于形成离子对，庚烷磺酸钠是一种典型的离子对试剂，三羟甲基氨基甲烷也有离子对试剂类似的作用。

本实验为了选择最佳离子对试剂，分别对甲醇+水、甲醇+庚烷磺酸钠溶液、甲醇+甲酸铵缓冲溶液、甲醇+乙酸铵缓冲溶液，甲醇+三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液，乙腈+磷酸二氢钠、乙腈+三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液进行试验，实验表明，5种有机磷农药在用甲醇-水作为流动相时分离效果最优，由于磷酸二氢钠不易挥发，不适合质谱分析。所以本实验选择易挥发的流动相进行5种有机磷农药的液质联用分析。以甲醇-乙酸铵和甲醇-甲酸铵为流动相下，敌敌畏未见出峰，以甲醇和庚烷磺酸钠缓冲溶液和甲醇+三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液为流动相时，敌百虫、乐果出峰但响应值低，而敌敌畏、甲胺磷、对硫磷在该体系下不出峰。甲醇+水作为流动相体系，五种有机磷农药均具有相对较好的分离度、响应值。当乙腈+三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液为流动相时，5种农药也均能出峰，但是配对的离子在高浓度的乙腈中溶解度低，且乙腈的毒性较大，价格较贵，因此甲醇更适合本实验的分离体系，故本实验选择甲醇和水作为色谱的流动相。

(1)流动相配比的选择

反相液相色谱流动相为极性，通常是水与具有极性的有机溶剂混合物，水的极性最大，其洗脱强度最弱。流动相的强度随水中有机溶剂的增加而增加，乙腈和甲醇是液相色谱中最强的洗脱剂，也是中等强度的流动相，流动相通常由配制不同比例的乙腈-水、甲醇-水的混合物，或是使用由水配制的缓冲溶液而得到。乙腈和甲醇由于在常见的紫外波长范围内吸收相对较弱，粘度较低，可以与水以任何比例互溶，容易得到纯度高的产品的特点，所以是反相色谱中最常见的有机溶剂。

本实验采用甲醇-水作为流动相体系，对流动相中甲醇的比例进行优化，改变流动相中甲醇的含量：3％、5％、8％、10％、15％、20％、35％、40％、50％、65％、70％、80％、90％、100％对标准溶液进行实验。结果表明，当流动相组成中甲醇的含量低于40％时样品出峰时间较长，峰形拖尾严重，甲醇比例为50％时，5种农药组分分离度高，峰型较好，甲醇比例高于60％时，样品的色谱峰型发生变化，样品中出现较多杂峰从而干扰待测物的检测分离，故本实验选择流动相中甲醇比例为50％，即甲醇：水＝1:1。

(2)流动相流速的选择

色谱分离时，流动相的流速主要对溶质与固定相和流动相的相互作用有影响，从而改变待测组分的保留时间。流速太快，可能导致柱压过高，引起漏液；流速太慢，会增加样品的保留时间，容易引起色谱峰拖尾的现象。所以实验过程中要选择合适的流速，保持其他条件不变，分别调整流动相的流速为0.5mL/min、0.6mL/min、0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min进行实验。实验结果表明，流速低于0.8mL/min时出峰时间延迟，有拖尾现象，流速超过1.2mL/min时出峰过快，分离效果不佳，柱压过高。综合考虑样品的分离度和分析时间，最终选定流速为1.0mL/min,在该流速下，5种有机磷农药均能完全分离。

1.1.4.5柱温的选择

色谱柱的柱温对分离效果影响较大，温度过高可能导致分离不出待测的成分，温度过低可能使样品中几种物质不能完全分离，互相干扰。提高色谱柱的柱温可以改善气相和液相的传质速度，加快传质过程，有利于提高柱效，缩短样品的分析时间，但是提高柱效能也加剧色谱峰的纵向扩散。所以，一般选择柱温接近被分析物质的平均沸点或更低。实验主要考察了20℃、25℃、30℃、35℃、40℃时样品的分离效果，结果表明，当柱温大于30℃时，色谱峰有重叠的现象，分离度降低，柱温为25℃时，5种农药都有较好的峰形，故本试验选择色谱柱温为25℃。

1.1.4.6进样量的选择

进样量对色谱峰有较大影响，进样量太大，可能会出现平头峰，峰型变宽，进样量太小，导致峰的响应值变小，部分杂质就没有不响应，带来实验误差。本实验中，进样量太小，敌敌畏的峰太小，实验分别采用不同的进样量：5μL、8μL、10μL、15μL、20μL，结果表明，当进样量为10μL时峰型最佳。

1.1.4.7确定色谱分离条件

具体色谱条件如下：

流动相：甲醇-水＝50％：50％

色谱柱：Eclipse XDB-C_l8(4.6mm×150mm，5μm)

流速：1.0mL·min^-1

柱温：25℃

进样量：10μL

检测波长：200nm

1.2氨基甲酸酯类农药部分

1.2.1材料与方法

1.2.1.1实验仪器及药品

(1)实验仪器

表3-7 实验仪器

(Table3-7 Experimental Apparatus)

(2)实验药品

表3-8 实验药品

(Table3-8 Experimental Drugs)

1.1.1.2实验条件

(1)液相色谱条件

色谱柱：ZORBAY Eclipse XDB-C₁₈

流动相：100％甲醇

流速：0.8mL/min

柱温：35℃

进样量：10uL

检测器：DAD检测器

检测波长：210nm

(2)质谱条件

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子扫描

雾化气压力：40psi(1psi＝6.895kPa)

干燥气流速：8L/min

干燥气温度：350℃

1.2.2实验步骤

1.2.2.1溶液的制备

(1)标准溶液的配制

分别准确配制西维因，叶蝉散，涕灭威，呋喃丹，异索威5种氨基甲酸酯类农药的甲醇溶液0mg/L，2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L配制成5组系列标准溶液，现用现配。

(2)样品溶液的配制

同1.1.2.1中样品溶液的配制方法。

1.2.2.2样品的测定

将已配好的5种氨基甲酸酯类农药标准溶液和36个样品溶液按已设定的高效液相色谱-质谱分析条件采样，开机待仪器稳定后，采用六通阀手动进样器进样测定，进样量为10μL。

仿照1.1.2.3-1.1.2.9中有机磷农药部分的实验步骤分别对5种氨基甲酸酯类农药标准溶液和36个样品溶液进行定性测定、定量测定、精密度实验、重复性实验、稳定性实验、加标回收率实验、检出限与定量限的测定实验。

1.2.3实验结果

1.2.3.1高效液相色谱测定结果

(1)标准溶液

按照上述选择的液相色谱分析条件，开机待仪器稳定后，采用安捷伦六通阀进样器手动进样测定，进样量为10μL对标准溶液进行分析测定。浓度为4mg/L的西维因，叶蝉散，涕灭威，呋喃丹，可知5种氨基甲酸酯类农药有效成分的保留时间分别为西维因4.414min，叶蝉散3.851min，涕灭威12.233min，呋喃丹2.491min，异索威12.634min。可根据样品溶液的色谱峰与标准溶液色谱峰的保留时间进行对比，来进行定性分析。

(2)标准曲线的绘制及线性范围

准确配制5种氨基甲酸酯类农药的标准溶液系列0mg/L，2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L按照上述设定的高效液相分析条件，分别进样10μL，记录每种样品溶液的峰面积，以峰面积对各有机磷农药的质量浓度进行线性回归，

5个标准曲线的线性回归方程及相关系数见表3-9。结果表明，5种氨基甲酸酯类农药在其相应的线性范围内，峰面积与农药的浓度呈良好的线性关系。

表3-9 5种氨基甲酸酯类农药的线性回归方程、线性范围和线性相关系数

(Table3-9 Regression equations,linear ranges and correlation(R²)of 5 N-methyl carbamate pesticides)

(3)样品溶液

按照上述液相色谱分析条件，对每种蔬菜和水果溶液平行测定2次，进样量为10μL。

按照上述样品的制备方法分别制备各蔬菜和水果的样品溶液，根据液相色谱分析条件检测各个样品溶液，测得峰面积，带入回归方程，计算得到蔬菜样品中农药残留量结果见表3-10、水果样品中农药残留量见表3-11。

表3-10 蔬菜样品中氨基甲酸酯类农药的检测结果

(Table 3-10 results of N-methyl carbamate pesticides in Vegetables)

注：“ND”表示未检测出

表3-11 水果样品中氨基甲酸酯类农药的检测结果

(Table 3-11 results of N-methyl carbamate pesticides in Fruits)

注：1-第一批样品，即经活性炭脱色的样品；2-第二批样品，即未经活性炭脱色的样品

由表3-10可以得出茎叶类蔬菜中氨基甲酸酯类农药含量较高，如白菜、芹菜、小油菜、茼蒿等蔬菜都检测出了呋喃丹的存在。由表3-11可得出苹果、桃、梨、樱桃、草莓等可带皮吃或果肉直接裸露在外的水果中氨基甲酸酯类农药残留量较高。

1.2.3.2质谱定性分析结果

分别将制备的西维因，叶蝉散，涕灭威，呋喃丹，异索威标准溶液与蔬菜和水果样品溶液，在正离子电离模式下优化目标化合物的母离子和特征碎片离子。结果表明，5种氨基甲酸酯类农药在正离子模式下扫描结果都较好。

1.2.3.3加标回收率的测定

本实验采用空白蔬菜、水果样品中添加标准溶液的方法，分别添加3个质量浓度水平：1.5μg/mL、3.0μg/mL、4.5μg/mL的标准溶液1mL于5mL的容量瓶中，用空白样品定容，按照上述的液相色谱条件，分别进样10μL测定，，每个浓度水平进行6次重复性实验，计算样品的回收率，结果见表3-12。蔬菜和水果样品中5种氨基甲酸酯类农药的加标回收率在83.7％-102.3％之间，相对标准偏差小于5％。结果表明，该方法的相对标准偏差和回收率都符合国内外的相关标准，可以用于蔬菜、水果中氨基甲酸酯类农药残留的检测。

表3-12 蔬菜水果中氨基甲酸酯类农药的加标回收率实验结果(n＝6)

(Table 3-12 The recovery results of N-methyl carbamate pesticides in Fruits and Vegetables(n＝6))

1.2.3.4精密度实验

精密吸取上述5种标准溶液，分别进样10μL，重复进样6次，记录每种样品的色谱图，测得5种氨基甲酸酯类农药的色谱峰面积，计算RSD结果为：西维因1.05％，叶蝉散3.17％，涕灭威1.85％，呋喃丹3.25％，异索威3.77％；RSD(n＝6)在1.05％-3.77％之间，结果表明该方法的精密度较好。

1.2.3.5稳定性实验

分别取4mg/L的5种氨基甲酸酯类农药的标准溶液，在相同的分析条件下，每隔一定时间(0h、2h、4h、8h、12h、24h)进样一次检测，测定其峰面积，计算RSD：西维因3.35％，叶蝉散2.83％，涕灭威1.34％，呋喃丹2.76％，异索威1.57％。结果显示5种氨基甲酸酯类农药标准溶液在24h内稳定性良好。

1.2.3.6重复性实验

分别取白菜、茼蒿、草莓、苹果4种样品溶液按上述设定的液相色谱条件，分别进样10μL，测定5种氨基甲酸酯类农药的峰面积值，其中西维因的RSD为3.07％，叶蝉散2.87％，呋喃丹3.30％。结果表明该方法的重现性较好，满足果蔬中氨基甲酸酯类农药残留的检测。

1.2.3.7检出限和定量限

取已知浓度的农药标准溶液，用甲醇以不同比例稀释后测定，分别以峰面积为纵坐标，氨基甲酸酯类农药的质量浓度为横坐标。以S/N＝3和S/N＝10计算，测得检出限：西维因为1.6μg/L，叶蝉散为1.2μg/L，涕灭威为1.5μg/L，呋喃丹为1.9μg/L，异索威为1.4μg/L；定量限为西维因为1.2μg/L，叶蝉散为1.4μg/L，涕灭威为1.5μg/L，呋喃丹为1.8μg/L，异索威为1.3μg/L。

1.2.4实验讨论

1.2.4.1提取溶剂的选择

提取溶剂的选择主要取决于被测物质的性质，同时考虑被测样品的性质。氨基甲酸酯类农药的提取溶剂常用的有二氧甲烷、石油醚、甲醇、丙酮、乙腈、丙酮-二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇-乙酸乙酯等。而本次实验选择了对5种氨基甲酸酯类农药的提取效果都相对较好的有机溶剂乙腈作为提取溶剂。

1.2.4.2浓缩温度的选择

氨基甲酸酯是一类热不稳定的化合物，浓缩的温度和时间对回收率的影响都较大，一般在较高的浓缩温度如40℃-45℃时，目标物的稳定性很差，故本实验中各蔬菜水果样品溶液的浓缩时温度都不超过40℃。而另一方面，如果浓缩时间过长，目标物的损失也会增大，故此次实验采用的浓缩温度为40℃。

1.2.4.3流动相的选择

通常反相液相色谱的流动相是水作基础溶剂和一定量的能与水互溶的极性溶剂相结合使用。常用的极性溶剂有甲醇、乙腈、四氢呋喃等。采用液相色谱检测氨基甲酸酯类农药多采用甲醇-水、乙腈-水及少量缓冲溶液作为流动相。而本次实验过程中。当逐渐增加甲醇-水的比例时，发现当甲醇浓度过低时，峰形不是很理想，而水的含量影响着峰形。而当甲醇含量为100％时，5种氨基甲酸酯类农药出峰效果均较好，分离效果较好，10min左右即能完全出峰，能很好的根据其峰面积进行定量分析。故本次实验所采用的流动相为100％甲醇。

1.2.4.4进样量的选择

流速对样品中物质的分离效果的影响较大，流速过快，流动相过快的经过色谱柱进入检测器，被检物质保留时间短，达不到最佳的分离效果，从而导致结果产生偏差；而流速过低时，样品分析时间较长，保留时间大，增加实验时间，造成操作人员疲累。因此要适当控制流速。在本实验中用进口甲醇作为流动相，通过对0.1mL/min-1.0mL/min流速按0.1mL/min递增，当流速为0.8mL/min时，其分离效果最好，出峰的峰形较好。所以选用0.8mL/min为本次实验的流速。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，该化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法：

采用刚果红法和氢氧化钠-间苯二酚法测定有机磷农药；采用2，6-二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法测定氨基甲酸酯类农药。

2.如权利要求1所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，所述刚果红法为：分别配制不同浓度的敌敌畏、敌百虫、乐果、甲胺磷和对硫磷标准溶液，分别取配制的不同浓度的敌敌畏、敌百虫、乐果、甲胺磷和对硫磷标准溶液各一滴于表面皿中，再取刚果红溶液一滴与配制的不同浓度的敌敌畏、敌百虫、乐果、甲胺磷和对硫磷标准溶液混合，根据显色反应结果，得到各农药的刚果红法检测下限。

3.如权利要求1所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，所述氢氧化钠-间苯二酚法为：分别配制不同浓度的敌敌畏、敌百虫和对硫磷标准溶液，分别取配制的不同浓度的敌敌畏、敌百虫和对硫磷标准溶液各一滴于表面皿中，再取氢氧化钠-间苯二酚的混合溶液一滴与配制的不同浓度的敌敌畏、敌百虫和对硫磷标准溶液混合，根据显色反应结果，得到各农药的氢氧化钠-间苯二酚法检测下限。

4.如权利要求1所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，所述采用2，6—二氯醌-4-氯亚胺作显色剂的化学显色法为：分别配制不同浓度的西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威标准溶液，分别取配制的不同浓度的西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威标准溶液各一滴于表面皿中，再取2，6—二氯醌-4-氯亚胺溶液一滴与配制的不同浓度的西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威标准溶液混合，根据显色反应结果，来测定西维因、叶蝉散、涕灭威、呋喃丹、异索威5种氨基甲酸酯类农药中检测下限。

5.如权利要求1所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，该化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法还采用HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法，该采用HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法为：

对蔬菜和水果中的5种有机磷农药和5种氨基甲酸酯类农药进行分析测定；

对流动相体系、流速、波长、柱温进行选择与优化；

最终确定最佳的条件，采用与质谱串联对样品种各农药残留进行定性。

6.如权利要求5所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法采用有机磷农药定性定量分析方法，该有机磷农药定性定量分析方法为：

将待测果蔬取小块置于小烧杯中，加蒸馏水50ml，于超声波清洗仪中超声5min，再将清洗液用微孔滤膜过滤，上机测试；

高效液相色谱条件：色谱柱：Eclipse XDB-Cl8；流动相：甲醇：水＝1:1；流速：1mL/min^-1；柱温：25℃；检测器：DAD检测器；检测波长：200nm；进样量：10μL；

质谱条件：电离源：电喷雾电离源；ESI正负离子模式检测；锥孔电压30V；毛细管电压2.8kV；雾化气压力：40.0psi；干燥气流速：5mL·min^-1；干燥气温度：350℃；质量扫描范围150m/z～900m/z。

7.如权利要求5所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，HPLC-MS联用法检测果蔬中农药残留的方法还采用氨基甲酸酯类农药检测方法，该氨基甲酸酯类农药检测方法为：

将待测果蔬取小块置于小烧杯中，加蒸馏水50ml，于超声波清洗仪中超声5min，再将清洗液用微孔滤膜过滤，上机测试；

液相色谱条件：色谱柱：ZORBAY Eclipse XDB-C18；流动相：100％甲醇；流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：10uL；检测器：DAD检测器；检测波长：210nm；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；雾化气压力：40psi；干燥气流速：8L/min；干燥气温度：350℃。

8.如权利要求2-4任意一项所述的化学显色法快速测定果蔬中农药残留的方法，其特征在于，所述的不同浓度为：2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L。