一种替曲朵辛肠溶缓释微丸、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及药物制剂技术及应用领域,具体涉及一种替曲朵辛肠溶缓释微丸及其制备方法。
背景技术
替曲朵辛(河豚毒素)是一种主要从河豚鱼内脏中提取获得的海洋生物毒素,为高度选择性的钠离子通道阻断剂,具有戒毒、镇痛等作用。替曲朵辛活性高、毒性大,临床使用剂量为微克级,因此,制备成注射液或冻干制剂具有含量均匀度较好,剂量易于准确控制等优点。
现有国内外临床研究中替曲朵辛药物的剂型设计大多为注射剂,用以肌注或静注给药。
据文献报道,替曲朵辛肌注给药后,药物在体内的半衰期较短,有效血药浓度仅能维持2小时左右。为维持药效,需频繁肌注给药,难以适应大多数患者治疗的需要,临床顺应性差。同时,替曲朵辛临床使用肌注剂量通常不高于30微克,如此低微的含量,采用现有技术如混合制粒法制备口服片剂或胶囊难以解决替曲朵辛药物制剂含量均匀性差的难题,从而制约了口服制剂的应用研究。
本发明要解决的技术问题是替曲朵辛药物开发中存在的药物半衰期短,临床应用注射剂顺应性差(不能口服给药)等问题。通过提供一种既能拓展替曲朵辛临床应用治疗窗,又可口服给药,临床顺应性好的制剂来解决上述技术问题。
发明内容
本发明的目的一在于提供一种安全性好、具有长周期镇痛作用且释药可控的替曲朵辛肠溶缓释微丸;本发明目的二是提供一种适于极低规格替曲朵辛肠溶缓释微丸的制备方法。
为实现上述本发明的目的一,本发明采用的技术方案如下:
一种替曲朵辛肠溶缓释微丸,所述肠溶缓释微丸由内到外依次包括空白丸芯、上药层、缓释层、隔离层、肠溶层;所述上药层为含有助溶剂、粘合剂的替曲朵辛,按照重量比,缓释层重量为上药后微丸重量的20%~40%,隔离层重量为缓释微丸重量的2%~8%,肠溶层重量为隔离微丸重量的10%~30%。
在其中一个实施例中,所述替曲朵辛用量为空白丸芯的0.0025%~0.3%,助溶剂用量为替曲朵辛的20%~300%,粘合剂用量为空白丸芯的0.1875%~1.6875%
在其中一个实施例中,所述助溶剂选自枸橼酸、醋酸、盐酸、抗坏血酸中的一种或多种,优选枸橼酸。
在其中一个实施例中,所述粘合剂为选自羟丙基甲基纤维素((HPMC E5)、聚维酮(PVP)、糖浆、淀粉浆、羧甲纤维素钠、明胶、阿拉伯胶、甲基纤维素中的一种或多种,优选羟丙基甲基纤维素或聚维酮。
在其中一个实施例中,所述空白丸芯为蔗糖丸芯或微晶纤维素丸芯。
在其中一个实施例中,所述缓释层的材料为药用丙烯酸树脂,所述药用丙烯酸树脂优选为丙烯酸乙酯与甲基丙烯酸甲酯共聚物(商品名Eudragit NE30D)。
在其中一个实施例中,所述隔离层的材料为羟丙基甲基纤维素。
在其中一个实施例中,所述缓释层还包含抗粘剂。
在其中一个实施例中,所述肠溶层,按肠溶层重量100%计,包含5%~10%的抗粘剂、2%~4%的增塑剂、85%~95%的肠溶层材料;所述肠溶层的材料为药用丙烯酸树脂,所述肠溶层材料优选为甲基丙烯酸与丙烯酸乙酯共聚物(商品名Eudragit L30D-55)。
在其中一个实施例中,肠溶层重量为隔离微丸重量的10%~30%。
在其中一个实施例中,所述抗粘剂为滑石粉、硬脂酸镁、二氧化硅,优选滑石粉;
在其中一个实施例中,所述增塑剂为柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯,优选柠檬酸三乙酯
所述替曲朵辛肠溶缓释微丸可装填于胶囊或添加适宜辅料后压成片剂后给药,其给药方式为口服给药。所述替曲朵辛肠溶缓释微丸,具有长周期镇痛作用,释药可控。
为实现上述本发明的目的二,本发明采用的技术方案如下:
一种替曲朵辛肠溶缓释微丸的制备方法,其包括如下步骤:
(1)含药微丸的制备
按配方称取替曲朵辛,加入配方量的助溶剂溶液溶解,然后溶于包含有粘合剂的水溶液中配制成含药层包衣液;将配方量的空白丸芯置于流化床中进行包衣,包衣液喷完后,流化干燥;
(2)缓释微丸的制备:
抗粘剂和水高速乳化均质后倒入缓释层材料溶液中,过筛制得缓释层包衣液;将含药微丸置于流化床中进行包衣,缓释层包衣液喷完后,进行流化干燥;
(3)隔离微丸的制备:
加入配方量的抗粘剂和隔离层材料水溶液,高速乳化均质后,过筛得隔离层包衣液;将缓释微丸置于流化床中进行包衣,隔离层包衣液喷完后,进行流化干燥;
(4)肠溶微丸的制备:
按配方量称取的抗粘剂、水、增塑剂,高速乳化均质后搅拌下缓慢倒入肠溶层材料的水溶液中,过筛得肠溶层包衣液;将隔离微丸置于流化床中进行包衣;肠溶层包衣液喷完后,流化干燥。
步骤(1)流化床参数设置为风机风量150~180m3·h-1,供液泵转速2~7r·min-1,物料温度控制在25~40℃,雾化压力0.16MPa;
在其中一个实施例中,步骤(2)所述流化床包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5~15r·min-1,物料温度控制在23~28℃,雾化压力0.3MPa;包衣液喷完后,于30℃下流化干燥15min;
在其中一个实施例中,步骤(3)所述流化床包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5~15r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa,包衣液喷完后,于30℃流化干燥15min;
在其中一个实施例中,步骤(4)所述流化床包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5~15r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa;包衣液喷完后,于30℃流化干燥15min。
进一步地,步骤(1)、步骤(2)、步骤(3)或步骤(4)所述包衣液喷完后,于30℃下,流化干燥15min。
本发明上下文中,含药微丸是指空白丸芯喷上上药层包衣液,干燥之后的微丸;缓释微丸是指含药微丸喷上缓释层包衣液,干燥之后的微丸,同样的,隔离微丸是指缓释微丸喷上隔离层包衣液,干燥之后的微丸;肠溶微丸是指隔离微丸喷上肠溶包衣液,干燥之后的微丸。
本发明优点:
本发明针对替曲朵辛药物开发中存在的药物半衰期短,临床应用注射剂顺应性差等问题,基于微丸制剂的显著优点,以空白丸芯为药物载体,采用流化床上药法制备替曲朵辛载药微丸,然后依次喷上缓释层、隔离层、肠溶层制得替曲朵辛肠溶缓释微丸,所述替曲朵辛肠溶缓释微丸具有释药可控、具有长周期镇痛作用、临床使用顺应性好、安全性高等优点。此外,该空白丸芯流化床上药包衣法适于极低规格替曲朵辛药物口服缓释制剂的制备、上药率高、含量均匀性好。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的上述内容作详细的说明,但不应将此理解为本发明技术方案仅限于以下实施例。
实施例1 配方1
蔗糖空白丸芯400g
上药层:替曲朵辛10mg,枸椽酸10mg,羟丙基甲基纤维素(HPMC E5)0.75g;
缓释层:滑石粉40g,Eudragit NE30D 134g;
隔离层:滑石粉4.8g,HPMC E5 9.6g;
肠溶层:滑石粉14g,柠檬酸三乙酯5.4g,Eudragit L30D-55 181g;
水894.4g
制备方法:
(1)含药微丸的制备:按配方称取替曲朵辛10mg,加入0.1%枸椽酸溶液10mL溶解,然后溶于含有HPMC E5(0.75g)的纯水溶液中配制成上药溶液150g。将空白丸芯400g置于流化床中,启动流化床,上药参数设置为风机风量150m3·h-1,供液泵转速2r·min-1,物料温度控制在25~40℃,雾化压力0.16MPa。上药完成后,含药微丸于30℃流化干燥15min;
(2)缓释微丸的制备:按配方量称量纯水146g,加入滑石粉40g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入Eudragit NE30D分散体134g中,过60目筛得缓释层包衣液。含药微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5r·min-1,物料温度控制在23~28℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
(3)隔离微丸的制备:按配方量称量滑石粉4.8g,加入2.5%HPMC E5水溶液384g(含HPMC E5 9.6g),高速乳化均质10分钟,过60目筛得隔离层包衣液。缓释微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
(4)肠溶微丸的制备:按配方量称取滑石粉14g,加入纯水180g,柠檬酸三乙酯5.4g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入含Eudragit L30D-55分散体181g,纯水54g的混合液中,过60目筛得肠溶层包衣液。隔离微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
实施例2 配方2
蔗糖空白丸芯 400g
上药层:替曲朵辛60mg、枸椽酸60mg、HPMC E5 1.5g;
缓释层:滑石粉80g、Eudragit NE30D 267g;
隔离层:滑石粉9.3g、HPMC E5 18.7g;
肠溶层:滑石粉22g、柠檬酸三乙酯8.8g、Eudragit L30D-55 294g;
纯水 1531.8g
制备方法:
(1)含药微丸的制备:按配方称取替曲朵辛60mg,加入0.3%枸椽酸溶液20mL溶解,然后溶于含有HPMC E5(1.5g)的纯水溶液中配制成上药溶液150g。将空白丸芯400g置于流化床中,启动流化床,上药参数设置为风机风量150m3·h-1,供液泵转速2r·min-1,物料温度控制在25~40℃,雾化压力0.16MPa。上药完成后,含药微丸于30℃流化干燥15min。
(2)缓释微丸的制备:按配方量称量纯水293g,加入滑石粉80g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入Eudragit NE30D分散体267g中,过60目筛得缓释层包衣液。将含药微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5r·min-1,物料温度控制在23~28℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
(3)隔离微丸的制备:按配方量称量滑石粉9.3g,加入2.5%HPMC E5溶液748g(其中含HPMC E5 18.7g),高速乳化均质10分钟,过60目筛得隔离层包衣液。缓释微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
(4)肠溶微丸的制备:按配方量称取滑石粉22g,加入纯水293g,柠檬酸三乙酯8.8g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入含Eudragit L30D-55分散体294g,纯水88g的混合液中,过60目筛得肠溶层包衣液。隔离微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
实施例3 配方3
蔗糖空白丸芯400g;
上药层:替曲朵辛120mg、枸椽酸120mg、HPMC E5 4.5g;
缓释层:Eudragit NE 30D 333g、滑石粉100g;
隔离层:HPMC E5 32g、滑石粉16g;
肠溶层:Eudragit L30D-55 400g、滑石粉30g、柠檬酸三乙酯12g;
纯水 2258.5g;
制备方法:
(1)含药微丸的制备:按配方称取替曲朵辛120mg,加入0.6%枸椽酸溶液20mL溶解,然后溶于含有HPMC E5(4.5g)的纯水溶液中配制成上药溶液150g。将空白丸芯400g置于流化床中,启动流化床,上药参数设置为风机风量150m3·h-1,供液泵转速2r·min-1,物料温度控制在25~40℃,雾化压力0.16MPa。上药完成后,于30℃流化干燥15min。
(2)缓释微丸的制备:按配方量称量纯水367g,加入滑石粉100g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入Eudragit NE30D分散体333g中,过60目筛得缓释层包衣液。含药微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5r·min-1,物料温度控制在23~28℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,含药微丸于30℃流化干燥15min;
(3)隔离微丸的制备:按配方量称量滑石粉16g,加入2.5%HPMC E5溶液1280g(含HPMC E5 32g),高速乳化均质10分钟,过60目筛得隔离层包衣液。缓释微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后于30℃流化干燥15min。
(4)肠溶微丸的制备:按配方量称取滑石粉30g,加入纯水398g,柠檬酸三乙酯12g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入含Eudragit L30D-55分散体400g,纯水120g的混合液中,过60目筛得肠溶层包衣液。隔离微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
实施例4 处方4
蔗糖空白丸芯400g;
含药层:替曲朵辛1200mg、枸椽酸1200mg、HPMC E5 0.75g;
缓释层:Eudragit NE30D 267g、滑石粉80g;
隔离层:HPMC E5 18.7g、滑石粉9.3g;
肠溶层:滑石粉22g、柠檬酸三乙酯8.8g、Eudragit L30D-55 294g;
纯水 1532.55g;
制备方法:
(1)流化床底喷上药:按配方称取替曲朵辛1200mg,加入6%枸椽酸溶液20mL溶解,然后溶于含有HPMC E5(0.75g)的纯水溶液中配制成上药溶液150g。将空白丸芯400g置于流化床中,启动流化床,上药参数设置为风机风量150m3·h-1,供液泵转速2r·min-1,物料温度控制在25~40℃,雾化压力0.16MPa。上药完成后,于30℃流化干燥15min。
(2)流化床包衣-缓释层:按配方量称量纯水293g,加入滑石粉80g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入Eudragit NE30D分散体267g中,过60目筛得缓释层包衣液。含药微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速5r·min-1,物料温度控制在23~28℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
(3)流化床包衣-隔离层:按配方量称量滑石粉9.3g,加入2.5%HPMC E5 748g(含HPMC E5 18.7g),高速乳化均质10分钟,过60目筛得隔离层包衣液。缓释微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
(4)流化床包衣-肠溶层:按配方量称取滑石粉22g,加入纯水293g,柠檬酸三乙酯8.8g,高速乳化均质10分钟,搅拌下缓慢倒入含Eudragit L30D-55分散体294g,纯水88g的混合液中,过60目筛得肠溶层包衣液。隔离微丸置于流化床中包衣,包衣参数设置为风机风量180m3·h-1,供液泵转速7r·min-1,物料温度控制在25~30℃,雾化压力0.3MPa。包衣完成后,于30℃流化干燥15min。
为了说明所述的替曲朵辛肠溶缓释微丸制剂具有临床使用安全性高等特点,我们采用急性毒性试验加以说明:
实验方法
SPF级SD大鼠,雌雄各半,180-220g,在SPF屏障系统饲养环境下适应3天,动物称重、标记、分组,每组10只,缓释微丸分5个剂量组如下:1466μg·kg-1、1100μg·kg-1、825μg·kg-1、618μg·kg-1、464μg·kg-1,1mL/100g水灌胃送服,给药后观察7d,记录中毒症状和死亡动物。采用Bliss法进行运算,计算LD50,结果见表1。
表1替曲朵辛肠溶缓释微丸急性毒性实验结果
采用bliss法进行运算:
LD50=840.13μg/kg
LD50的95%可信限为706.32~999.28μg/kg
动物中毒症状观察:
替曲朵辛缓释微丸给药后无明显中毒反应,2hr后高剂量组动物逐渐出现少动,喘息,眼睑无力,肌颤,死亡多发生在3-8hr,持续到20hr,之后无死亡,且动物状态较正常。死亡动物大体解剖,未观察到明显变化。
为了说明所述的替曲朵辛肠溶缓释微丸制剂具有长周期镇痛作用的效果,我们采用如下药理实验加以说明:
(1)热板法评价替曲朵辛肠溶缓释微丸对热刺激的镇痛作用
实验方法
雌性大鼠180~220g,给药前筛选动物,热板温度53°±0.5°,以动物出现舔后足的时间作为痛阈值,痛阈值在5-30s为合格,剔除痛反应异常动物及痛阈值不在此区间动物。合格动物隔15min再测一次取均值,作为基础痛阈值。称重,分组,标记,灌胃给以替曲朵辛肠溶缓释微丸受试药物,水送服1ml/100g,对照组给空白制剂水送服1ml/100g,阳性药采用布洛芬对应制剂。给药后计时,分别于给药后不同时间点测定痛阈值。若60s内无痛反应,避免烫伤立即取出,按60s计算。进行组间对照t-检验,比较各组间的差异。计算镇痛百分率。
痛阈提高率(%)=(药后痛反应时间-药前痛反应时间均值)/药前痛反应时间均值×100%
数据处理及作用评价
计算各组痛阈提高百分率,进行组间对照t-检验,比较各组间的差异。结果用Mean±SEM表示,采用组间对照t-test进行两两比较,p<0.05为有显著性差异。
药效评价原则:组间统计有统计学意义,同时满足镇痛百分率大于50%时,才能认为有较好的镇痛效力。
实验结果
实验结果见表2所示,空白制剂在各时间点痛阈提高百分率无明显变化,在较低水平下波动。20μg/kg缓释微丸低剂量组略有作用,40μg/kg缓释微丸3~9hr痛阈提高百分率均能在50%以上,60μg/kg作用更强,痛阈提高百分率3~18hr均在50%以上,80μg/kg组给药后,2hr左右即达到50%,持续到12hr左右。
表2热板法评价替曲朵辛肠溶释微丸对热刺激的镇痛作用
(2)扭体法评价替曲朵辛肠溶缓释微丸对内脏痛的镇痛作用
实验方法
SD大鼠180~220g,称重,分组,标记,灌胃给以替曲朵辛速释微丸受试药物,水送服1ml/100g,对照组给空白制剂水送服1ml/100g,阳性药采用布洛芬对应制剂。给药后计时,分别于给药后1.5h、3h、6h、9h、12h、18h和24h时间点给以2%醋酸溶液,记录30min内大鼠出现的扭体次数。进行组间对照t-检验,比较各组间的差异。并计算镇痛作用抑制百分率。
镇痛作用抑制百分率(%)=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数×100%
数据处理及作用评价
计算各组潜伏期,各时间点扭体次数,进行组间对照t-检验,比较各组间的差异。结果用Mean±SEM表示,采用组间对照t-test进行两两比较,p<0.05为有显著性差异。
药效评价原则:组间统计有统计学意义,同时满足镇痛抑制百分率大于50%时,才能认为有较好的镇痛效力。
实验结果
实验结果如表3所示,40,60,80μg/kg缓释微丸在给药后1.5-18hr对扭体抑制抑制百分率均达到50%以上,除60μg/kg的9hr、12hr特殊点以外。3~6hr作用最强,剂量依赖性地增加镇痛百分率。整体趋势随时间延长,药效减弱,但60μg/kg和80μg/kg两个剂量组9~12hr后,抑制率又重新升高到70%以上,提示了这两个剂量更强的镇痛作用潜力,可能与药物分布或其他作用机制有关。
表3扭体法评价替曲朵辛肠溶缓释微丸对内脏痛的镇痛作用
结合替曲朵辛肠溶缓释微丸制剂的口服LD50为840.13μg/kg,本实验结果提示,替曲朵辛肠溶缓释微丸在LD50的1/40-1/20即具有较好的镇痛作用,属于较安全的剂量,同时,镇痛作用持续时间≧12h,说明替曲朵辛肠溶缓释制剂临床使用顺应性好、安全性高且具有长周期镇痛作用。
为了说明所述的替曲朵辛肠溶缓释微丸制剂具有释药可控等特点,我们通过体外释放度试验对制备的微丸制剂进行研究。
结合CP2O10年版二部附录XD“释放度测定法”第二法方法2和CP2010年版二部附录XC“溶出度测定法”第三法对微丸制剂的替曲朵辛释放度进行了考察。结果如表4所示,各配方组微丸样品在酸中释放2小时,替曲朵辛释放度均小于10%,在pH5.8的缓冲液中可控缓慢释放12小时,详见表4;说明制备的替曲朵辛肠溶缓释制剂具有在胃中不释放,进入小肠端后开始缓慢释放,具有释药可控等特点。
表4替曲朵辛肠溶缓释微丸体外释放度试验