CN105902695B - 一种制备双丁注射液的新方法 - Google Patents

一种制备双丁注射液的新方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，包括以下步骤：a、将蒲公英和紫花地丁切段、粉碎，加入到提取罐中；b、向提取罐中加入纯化水，然后升温至80~85℃，浸泡后再降温至45~55℃，调节PH值为酸性，加入植物崩解组合酶，恒速搅拌，静置分解；c、对提取罐内混合物进行煎煮、过滤，得最终滤液；d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液；e、将上清液采用纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为0.95‑1.05g/ml。采用本发明方法制备双丁注射液可有效提取、收集蒲公英和紫花地丁中有效成分。

Description

一种制备双丁注射液的新方法
技术领域
本发明属于生物制药领域，涉及双丁注射液，具体的涉及一种制备双丁注射液的新方法。
背景技术
双丁注射液是收录在《兽药地方标准上升国家标准》第三册P118的一种主治奶牛临床型乳房炎的纯中药注射液。主要成分为蒲公英（又名黄花地丁）和紫花地丁。
蒲公英全草入药，性味：苦甘、寒；入肝、胃经。功能：清热解毒，利尿散结。主治：急性乳腺炎、淋巴腺炎、疔毒疮肿、急性结膜炎、感冒发热，急性扁桃体炎、急性支气管炎、胃炎、肝炎、胆囊炎、尿路感染等。蒲公英全草含蒲公英甾醇、胆碱、蒲公英赛醇、蒲公英若素、咖啡酸、菊糖、果胶等。蒲公英提取物对金黄色葡萄球菌耐药菌株、溶血性链球菌有较强的杀菌作用，对肺炎双球菌、脑膜炎球菌、白喉杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及其它球菌也有一定杀菌作用。
紫花地丁全草入药，心寒味苦，有清热解毒的功效，主治黄疸、痢疾、乳腺炎、目赤肿痛、咽炎；外敷治跌打损伤、痈肿、毒蛇咬伤等。紫花地丁所含黄酮疳类及有机酸对金色葡萄球菌、猪巴氏杆菌、大肠杆菌、链球菌和沙门氏菌都有较强的抑菌作用。
因为中药材的有效成分大多存在于植物细胞内，植物细胞的细胞壁成分主要为纤维、果胶等，中药材的有效成分受到细胞壁的阻挡释放不完全，影响药材有效成分的充分提取、利用。又由于双丁注射液中所含的有效成分菊糖、果胶、黄酮疳类、有机酸类等成分的分子量都小于1000，采用传统的醇沉法通常会造成这些小分子量物质的流失，影响药效的发挥。
发明内容
本发明为解决现有技术问题，提供了一种能更好提取、收集蒲公英和紫花地丁中有效成分的制备双丁注射液的新方法。
本发明采用的技术方案为：一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、粉碎，加入到提取罐中；
b、向提取罐中加入纯化水，然后升温至80~85℃，浸泡20~50分钟后再降温至45~55℃，调节PH值为酸性，加入植物崩解组合酶，以60±10rpm/min恒速搅拌3~8分钟，静置分解；
c、对提取罐内混合物进行煎煮、过滤，得最终滤液；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液；
e、将上清液进行浓缩，采用截留分子量在100~1000Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为0.95-1.05g/ml。
进一步的，所述b步骤中的植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.4~0.7：1。
进一步的，所述a步骤中将蒲公英和紫花地丁切段、粉碎过程之间还包括挤压过程；同时所述b步骤中的植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.2~0.4：1。
进一步的，所述b步骤中的植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35%、纤维素酶35%，半纤维素酶20%、果胶酶10%。
进一步的，所述步骤b中加入纯化水的重量为蒲公英和紫花地丁总重量的6~10倍。
进一步的，所述c步骤煎煮、过滤的次数为两次，具体为首先对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量4~6倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为45~65分钟、温度均为80~85℃。
进一步的，所述d步骤中的絮凝剂为0.5~1%的壳聚糖溶液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1：10。
进一步的，所述挤压过程的挤压力为2.5~5吨/时。
进一步的，所述b步骤中的PH值为5.0~6.5，静置分解的时间为1~1.5小时。
进一步的，所述e步骤中对上清液进行浓缩前还可对上清液进行醇沉工艺，具体为向上清液中加入乙醇，使含醇量达到15~16%，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味。
本发明获得的有益效果为：采用本发明方法制备双丁注射液可有效提取、收集蒲公英和紫花地丁中有效成分。
本发明首先将蒲公英和紫花地丁切段、挤压、粉碎，有效成分容易被进出；挤压方式会物理性的破坏部分植物细胞壁，提取有效成分时加入植物崩解组合酶可分解植物细胞壁，使药材中的有效成分得到充分释放。
采用纳滤膜进行减压纳滤浓缩，可有效缩短浓缩时间，最大程度保留药材有效成分，可省去醇沉工艺或减少醇沉工艺中乙醇的用量，避免传统醇沉法流失菊糖、果胶、黄酮疳类、有机酸类等小分子物质，且纳滤设施操作简便，可实现自动化作业，稳定性好、维护方便。
滤液中加入絮凝剂可将滤液中的大分子蛋白、胶体、淀粉、树脂等絮凝、沉淀、离心后，上清液再经过减压纳滤浓缩，可有效减小纳滤膜的清洗难度， 提高纳滤膜的使用寿命，节约成本。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明
实施例1：一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，制备方法包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、粉碎，加入到提取罐中；
b、向提取罐中加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量6倍的纯化水，然后升温至80℃，浸泡20分钟后再降温至45℃，调节PH值为5.0，加入植物崩解组合酶，以60rpm/min恒速搅拌3分钟，静置分解1小时；其中植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.7：1，植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35%、纤维素酶35%，半纤维素酶20%、果胶酶10%；
c、对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量4倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为45分钟、温度均为80℃；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液，其中絮凝剂为0.5%的壳聚糖溶液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1：10
e、将上清液进行浓缩，采用截留分子量在100Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为0.95g/ml。
实施例2：一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，制备方法包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、挤压、粉碎，加入到提取罐中，其中挤压力为5吨/时；
b、向提取罐中加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量10倍的纯化水，然后升温至85℃，浸泡50分钟后再降温至55℃，调节PH值为6.5，加入植物崩解组合酶，以70rpm/min恒速搅拌3~8分钟，静置分解1.5小时；其中植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.4：1，植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35%、纤维素酶35%，半纤维素酶20%、果胶酶10%；
c、对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量6倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为65分钟、温度均为85℃；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液，其中絮凝剂为0.5~1%的壳聚糖溶液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1：10
e、将上清液进行浓缩，采用截留分子量在1000Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为1.00g/ml。
实施例3：一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，制备方法包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、挤压、粉碎，加入到提取罐中，其中挤压力为3吨/时；
b、向提取罐中加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量8倍的纯化水，然后升温至83℃，浸泡30分钟后再降温至50℃，调节PH值为6.0，加入植物崩解组合酶，以65rpm/min恒速搅拌6分钟，静置分解1.2小时；其中植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.3：1，植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35%、纤维素酶35%，半纤维素酶20%、果胶酶10%；
c、对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量5倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为55分钟、温度均为83℃；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液，其中絮凝剂为0.8%的壳聚糖溶液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1：10
e、向上清液中加入乙醇，使含醇量达到15%，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，再将滤液采用截留分子量在500Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为1.05g/ml。
实施例4：一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，制备方法包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、挤压、粉碎，加入到提取罐中，其中挤压力为3吨/时；
b、向提取罐中加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量7倍的纯化水，然后升温至81℃，浸泡25分钟后再降温至48℃，调节PH值为5.5，加入植物崩解组合酶，以65rpm/min恒速搅拌4分钟，静置分解1.1小时；其中植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.2：1，植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35%、纤维素酶35%，半纤维素酶20%、果胶酶10%；
c、对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量4.5倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为50分钟、温度均为81℃；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液，其中絮凝剂为0.6%的壳聚糖溶液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1：10
e、向上清液中加入乙醇，使含醇量达到16%，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，再将滤液采用截留分子量在300Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为0.98g/ml。
实施例5：一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1:1，制备方法包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、挤压、粉碎，加入到提取罐中，其中挤压力为4.8吨/时；
b、向提取罐中加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量9倍的纯化水，然后升温至84℃，浸泡45分钟后再降温至54℃，调节PH值为5.0~6.5，加入植物崩解组合酶，以68rpm/min恒速搅拌7分钟，静置分解1.3小时；其中植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.3：1，植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35%、纤维素酶35%，半纤维素酶20%、果胶酶10%；
c、对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量5倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为63分钟、温度均为84℃；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液，其中絮凝剂为0.8%的壳聚糖溶液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1：10
e、向上清液中加入乙醇，使含醇量达到18%，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，再将滤液采用截留分子量在800Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度1.03g/ml。

Claims (4)

1.一种制备双丁注射液的新方法，所述双丁注射液原料以蒲公英和紫花地丁干燥全草入药，蒲公英与紫花地丁的重量比为1∶1，其特征在于：制备方法包括以下步骤：
a、将蒲公英和紫花地丁切段、粉碎，加入到提取罐中；
b、向提取罐中加入纯化水，然后升温到80～85℃，浸泡20～50分钟后再降温至45～55℃，调节PH值为酸性5.0～6.5，加入植物崩解组合酶，以60±10rpm/min恒速搅拌3～8分钟，静置1～1.5小时分解；
c、对提取罐内混合物进行煎煮、过滤，得最终滤液，
具体为首先对提取罐内混合物进行一次煎煮、过滤得第一滤液；然后再加入重量为蒲公英和紫花地丁总重量4～6倍的纯化水，进行二次煎煮、过滤得第二滤液；将第一滤液、第二滤液混合后得到最终滤液；其中第一、第二次煎煮时间均为45～65分钟、温度均为80～85℃；
d、向最终滤液加入絮凝剂，对其进行离心絮凝，得到上清液；
e、将上清液进行浓缩，采用截留分子量在100～1000Dal的纳滤膜进行减压纳滤浓缩，浓缩终点浓度为0.95-1.05g/ml；
所述b步骤中的植物崩解组合酶按重量百分比包括：木聚糖酶35％、纤维素酶35％，半纤维素酶20％、果胶酶10％；所述b步骤中的植 物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.4～0.7∶1；所述步骤b中加入纯化水的重量为蒲公英和紫花地丁总重量的6～10倍；所述d步骤中的絮凝剂为0.5～1％的壳聚糖熔液，絮凝剂与最终滤液的体积比为1∶10。
2.根据权利要求1所述一种制备双丁注射液的新方法，其特征在于：所述a步骤中将蒲公英和紫花地丁切段、粉碎过程之间还包括挤压过程；同时所述b步骤中的植物崩解组合酶与蒲公英和紫花地丁总重量的重量比为0.2～0.4∶1。
3.根据权利要求2所述一种制备双丁注射液的新方法，其特征在于：所述挤压过程的挤压力为2.5～5吨/时。
4.根据权利要求1所述一种制备双丁注射液的新方法，其特征在于：所述e步骤中对上清液进行浓缩前还可对上清液进行醇沉工艺，具体为向上清液中加入乙醇，使含醇量达到14～20％，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味。
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