CN105900840B - 一种芒果花诱导愈伤组织的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种芒果花诱导愈伤组织的方法，涉及植物组织培养领域。所述方法具体为：剪取花未开的芒果花穗；流水洗净后，用多菌灵溶液进行表面消毒，再用流水冲掉花穗表面的消毒液；而后在无菌条件下用质量浓度为0.1％～0.2％的HgCl2溶液浸泡灭菌，再用无菌水冲洗，得无菌芒果花穗；剪下无菌芒果花穗上的花苞，将单个花苞接种的培养基上，恒温恒湿条件下黑暗培养直至获得愈伤组织。本发明通过芒果花诱导愈伤组织的途径获得芒果再生组织，补充了芒果组织培养技术途径，且该方法愈伤组织诱导率高，获得的愈伤组织的器官分化率高。
Description
【技术领域】
本发明属于植物组织培养领域，涉及一种芒果花诱导愈伤组织的方法。
【技术背景】
芒果(mangifera indica)属于漆树科(anacardiaceae)芒果属(meagifera)，是热带优质水果之一，是世界第二大热带水果。芒果肉质细嫩，风味浓郁，营养丰富，具有十二种必需氨基酸，维生素A和C、胡萝卜素等含量较高。食用芒果具有抗癌、美化肌肤、防止高血压、动脉硬化、防止便秘、止咳、清肠胃的功效，是消费者非常喜爱的热带亚热带著名水果，素有“热带果王”之美誉。中国是仅次于印度的第二大芒果生产国，芒果栽培地区主要分布于海南、广西、广东、云南和四川的金沙江干热河谷区域，广西百色市则以盛产芒果而闻名，具有很高的经济价值和社会价值。
芒果是基因高度杂合的木本植物，种子的存活期不长，用传统的育种方法改良芒果较困难。因此建立成熟的芒果离体培养再生植株技术体系有利于芒果优良品种性状得到大量繁殖，并且有利于芒果种质资源的搜集和保存。但目前芒果的离体培育技术仍较薄弱，已有采用芒果茎段诱导培养无菌芽的相关研究，但仍未见采用芒果花诱导培养愈伤组织的相关研究和报道。
【发明内容】
鉴于以上内容，本发明提供了一种芒果花诱导愈伤组织的方法，该方法是经过大量实验研究得出的，其利用芒果花苞作为外植体进行组织培养，摸索并筛选出了最适宜芒果花诱导培养愈伤组织的培养基和培养条件，实现了芒果花诱导培养愈伤组织，得到无菌体系的作用，且愈伤组织诱导率高，获得的愈伤组织的器官分化率高，可进行规模化、工业化生产。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种芒果花诱导愈伤组织的方法，所述方法包括以下步骤：
1)外植体的剪取：剪取新长且花未开的芒果花穗；
2)预处理：用流水将步骤1)剪取的芒果花穗冲洗干净，而后用多菌灵溶液进行表面消毒，再用流水冲洗；
3)灭菌：将经步骤2)处理后的芒果花穗置于无菌超净工作台上，用HgCl2溶液浸泡灭菌，再用无菌水冲洗，得无菌芒果花穗；
4)接种、培养：在无菌超净工作台上将步骤3)的无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞接种到培养基上进行愈伤组织培养，获得芒果愈伤组织；其中，所述培养基为1/2MS+1.0～5.0mg/L 2,4-D+30～120mg/L PVP，pH为5.8。
进一步地，在步骤2)中，所述多菌灵溶液的质量浓度为0.1％～0.5％。
进一步地，所述步骤2)的预处理过程包括：用流水冲洗步骤1)所剪取的芒果花穗5min，而后用多菌灵溶液浸泡10～15min，再用流水冲洗10min。
进一步地，在步骤3)中，所述HgCl2溶液的质量浓度为0.1％～0.2％。
进一步地，所述步骤3)的灭菌过程包括：将经步骤2)处理后的芒果花穗放在无菌超净工作台上，用HgCl2溶液浸泡灭菌5～10min，而后采用无菌水冲洗5次，每次1～2min。
进一步地，在步骤4)中，所述培养基为1/2MS+3.0mg/L 2,4-D+70mg/L PVP，pH为5.8。
进一步地，在步骤4)中，所述愈伤组织培养为在温度为26～28℃、湿度为70％的恒温恒湿条件下暗培养。
本发明提供了一种芒果花诱导愈伤组织的方法，相对于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明通过采用芒果花诱导愈伤组织的方法培育获得芒果再生组织。其利用芒果花苞作为外植体进行组织培养，相对于已经开放的芒果花，愈伤组织的分化能力更强，分化率更高，且未开放的花苞对消毒剂更敏感，剪取外植体后，先用一定浓度的多菌灵溶液作为消毒剂进行消毒，再采用一定浓度的HgCl2溶液进行灭菌，消毒剂和灭菌剂的种类和浓度均根据芒果花的特性进行选择，同时消毒和灭菌时间严格控制，一方面可保证外植体消毒和灭菌充分，另一方面确保外植体的组织结构不被破坏，消毒和灭菌效果好，为下一步处理做好充足准备；然后，根据培养对象的营养要求，通过研究摸索筛选出适宜芒果花诱导愈伤组织的培养基的种类和浓度，并严格控制培养的温度和湿度，在本发明培养条件下进行诱导培育，愈伤组织形成快(相对于温度在26℃以下，或28℃以上，愈伤组织形成时间可以缩短2-3天)，诱导率高，且愈伤组织的活力高，器官分化率高。
总之，本发明为芒果组织培养技术寻求到了一条新途径，该方法科学合理，诱导培育出的愈伤组织活力高，愈伤组织诱导率高，获得的愈伤组织的器官分化率高，可进行规模化、工业化生产。
【具体实施方式】
以下实施例对本发明作进一步说明，其可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1：
芒果花愈伤组织诱导培养基的筛选和优化实验
具体实验方法为：剪取新长且花未开的芒果花穗；用流水冲洗5min，而后用质量浓度为0.1％的多菌灵溶液浸泡15min进行表面消毒，再用流水冲洗10min；然后将芒果花穗放在无菌超净工作台上，用质量浓度为0.2％的HgCl2溶液浸泡灭菌5min，再用无菌水冲洗5次，每次1min，得无菌芒果花穗；进而将无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞分别接种到添加不同浓度的2,4-D、pH为5.8的MS培养基和添加不同浓度的2,4-D和PVP、pH为5.8的1/2MS培养基上，再置于温度为26℃、湿度为70％的恒温恒湿培养箱中暗培养，培养25d后统计并计算出愈伤组织诱导率以及褐化率，各处理重复3次。具体诱导结果如下表1所示。
表1不同培养基对愈伤组织的诱导结果
从上表1可看出，采用MS培养基诱导培养芒果花愈伤组织，未观察到愈伤组织的形成，愈伤组织诱导率为0，而采用1/2MS培养基进行芒果花愈伤组织诱导培养，则可培养出愈伤组织，故选择1/2MS培养基作为诱导培养芒果花愈伤组织的基本培养基；另外，从表1还可看出，培养基中未添加PVP，外植体均发生褐化，在培养基中添加PVP可抑制褐化；再有，在1/2MS培养基中添加1～5mg/L 2,4-D和30～120mg/L PVP，可抑制外植体褐化，诱导培育出芒果花愈伤组织，其中，添加了3mg/L 2,4-D和70mg/L PVP的1/2MS培养基中愈伤组织的诱导率最高，达40％。
实施例2
一种芒果花诱导愈伤组织的方法，所述方法包括以下步骤：
1)外植体的剪取：剪取新长且花未开的芒果花穗；
2)预处理：用流水冲洗步骤1)所剪取的芒果花穗5min，而后用质量浓度为0.1％的多菌灵溶液浸泡15min，再用流水冲洗10min；
3)灭菌：将经步骤2)处理后的芒果花穗放在无菌超净工作台上，用质量浓度为0.2％的HgCl2溶液浸泡灭菌5min，而后采用无菌水冲洗5次，每次1min，得无菌芒果花穗；
4)接种、培养：在无菌超净工作台上将步骤3)的无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞接种到培养基上，而后置于温度为26℃、湿度为70％的恒温恒湿培养箱中暗培养，直至获得芒果愈伤组织；其中，所述培养基为1/2MS+1.0mg/L 2,4-D+30mg/L PVP，pH为5.8。
实施例3
一种芒果花诱导愈伤组织的方法，所述方法包括以下步骤：
1)外植体的剪取：剪取新长且花未开的芒果花穗；
2)预处理：用流水冲洗步骤1)所剪取的芒果花穗5min，而后用质量浓度为0.3％的多菌灵溶液浸泡12min，再用流水冲洗10min；
3)灭菌：将经步骤2)处理后的芒果花穗放在无菌超净工作台上，用质量浓度为0.15％的HgCl2溶液浸泡灭菌8min，而后采用无菌水冲洗5次，每次2min，得无菌芒果花穗；
4)接种、培养：在无菌超净工作台上将步骤2)的无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞接种到培养基上，而后置于温度为27℃、湿度为70％的恒温恒湿培养箱中暗培养，直至获得芒果愈伤组织；其中，所述培养基为1/2MS+3.0mg/L 2,4-D+70mg/L PVP，pH为5.8。
实施例4
一种芒果花诱导愈伤组织的方法，所述方法包括以下步骤：
1)外植体的剪取：剪取新抽、花未开的芒果花穗；
2)预处理：用流水冲洗步骤1)所剪取的芒果花穗5min，而后用质量浓度为0.5％的多菌灵溶液浸泡10min，再用流水冲洗10min；
3)灭菌：将经步骤2)处理后的芒果花穗放在无菌超净工作台上，用质量浓度为0.1％的HgCl2溶液浸泡灭菌10min，而后采用无菌水冲洗5次，每次2min，得无菌芒果花穗；
4)接种、培养：在无菌超净工作台上将步骤2)的无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞接种到培养基上，而后置于温度为28℃、湿度为70％的恒温恒湿培养箱中暗培养，直至获得芒果愈伤组织；其中，所述培养基为1/2MS+5.0mg/L 2,4-D+120mg/L PVP，pH为5.8。
上述芒果茎段无菌系体系建立的方法打破传统的以体细胞胚发生途径获得芒果再生植株，同时能够传承母株的优良性状，获得大量芒果组培苗，实现了芒果茎段培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。
Claims (3)
1.一种芒果花诱导愈伤组织的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)外植体的剪取：剪取新长且花未开的芒果花穗；
2)预处理：用流水将步骤1)剪取的芒果花穗冲洗5min，而后用多菌灵溶液浸泡10～15min，再用流水冲洗10min，而后用多菌灵溶液进行表面消毒，再用流水冲洗，所述多菌灵溶液的质量浓度为0.1～0.5％；
3)灭菌：将经步骤2)处理后的芒果花穗置于无菌超净工作台上，用质量浓度为0.1～0.2％的HgCl2溶液浸泡5～10min，而后采用无菌水冲洗5次，每次1～2min，再用无菌水冲洗，得无菌芒果花穗；
4)接种、培养：在无菌超净工作台上将步骤3)的无菌芒果花穗上的花苞剪下，将单个花苞接种到培养基上进行愈伤组织培养，获得芒果花愈伤组织；其中，所述培养基为1/2MS+1.0～5.0mg/L 2,4-D+30～120mg/L PVP，pH为5.8。
2.根据权利要求1所述的芒果花诱导愈伤组织的方法，其特征在于：在步骤4)中，所述培养基为1/2MS+3.0mg/L 2,4-D+70mg/L PVP，pH为5.8。
3.根据权利要求1所述的芒果花诱导愈伤组织的方法，其特征在于：在步骤4)中，所述愈伤组织培养为在温度为26～28℃、湿度为70％的恒温恒湿条件下暗培养。
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|---|
| In-vitro regeneration of explants of Keitt, Jaffna and local varieties if Mango(Mangifera indica L.);Ousman, Dauda Jarju;《College of Agric and Natural Resources》;20120219;第1页摘要 * |
| 杧果组织培养研究进展;张越阳等;《热带作物学报》;20100228;第31卷(第2期);第325-331页，尤其是第327页第2.2节 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105900840A (zh) | 2016-08-31 |
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Application publication date: 20160831 Assignee: Guangxi Liyuan Agricultural Technology Co.,Ltd. Assignor: BAISE University Contract record no.: X2023980045569 Denomination of invention: A Method for Inducing Callus from Mango Flowers Granted publication date: 20180130 License type: Common License Record date: 20231105 |