CN105884942B - 一种聚丙烯酸‑胱胺二盐酸盐‑维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种聚丙烯酸‑胱胺二盐酸盐‑维生素e琥珀酸酯聚合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种聚丙烯酸‑胱胺二盐酸盐‑维生素E琥珀酸酯聚合物，该聚合物是维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述聚合物的结构式如(I)所示。该聚丙烯酸‑胱胺二盐酸盐‑维生素E琥珀酸酯聚合物具有亲水性和对GSH还原响应性的特点，可作为一个优良的抗肿瘤药物载体。其制备方法简单、条件温和；所使用的材料新颖，具有较低的临界胶束浓度，良好的生物相容性和生物可降解性，载体材料在水中能自组装形成胶束，可以用来增大水不溶性药物的溶解度并改善其体内分布。

Description

一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物及其 制备方法和应用
技术领域
本发明属于聚合物合成及纳米材料技术领域，具体涉及一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物及其制备方法，以及在抗肿瘤药物载上的应用。
背景技术
目前大量的抗癌药物存在水溶性差，半衰期短，需频繁大量给药，且靶向性差产生很多毒副作用，因此药物载体开始被广泛研究。难溶于水的药物被装载与合适的载体上，改变药物的吸收分布等过程，将药物输送到靶器官，从而达到更好的抗癌作用。
但是目前的抗癌化疗药物并不稳定，在到达肿瘤细胞部位之前就已经释放，导致药物生物利用度低，副作用较大。因此研究出一种能够对细胞环境不同做出相应的刺激响应型纳米胶束具有重大意义。根据刺激信号的不同，应激响应型纳米胶束可分为pH敏感型、温度敏感型，酶敏感型，以及还原敏感型等类型。其中还原敏感型胶束除具有传统的“核-壳”结构之外，其结构中还含“S-S”键，其可对肿瘤细胞部位的高浓度还原型谷胱甘肽(GSH)做出响应，有研究表明，细胞内的GSH可以控制细胞内氧化还原电位的变化，因而影响控制着氧化还原刺激机制，在肿瘤部位GSH的浓度比正常细胞中药高出4倍。利用其电位变化刺激，可用于抗癌药物的控释。
发明内容
本发明目的是提供一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，是以聚丙烯酸为亲水端，维生素E琥珀酸酯为疏水端，合成聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的聚合物，该聚合物具有亲水性和对GSH还原响应性的特点，具有能够装载抗癌药物，在水中自组装形成载药纳米胶束，用于肿瘤治疗等优势。制备方法简单、条件温和；所使用的材料新颖，具有较低的临界胶束浓度，良好的生物相容性和生物可降解性，载体材料在水中能自组装形成胶束，可以用来增大水不溶性药物的溶解度并改善其体内分布。
本发明采用的技术方案为：
一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，该聚合物是维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述聚合物的结构式如(I)所示：
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，制备方法如下：
1)胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于无水有机溶剂中，在催化剂作用下，与胱胺二盐酸盐发生酰化反应，得到胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯；
2)聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成：将聚丙烯酸溶于无水有机溶剂中，加入催化剂，搅拌至反应结束，然后向其中缓慢滴加胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯溶液，至反应完成后，将反应液转移至透析袋中至透析结束，并通过冷冻干燥，得到聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物。
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，制备方法中所述无水有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；优选地，所述无水有机溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺。
所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑中的一种或两种以上组合。优选地，所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(HOBT)的混合。
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，步骤1)中维生素E琥珀酸酯与N,N-二甲基甲酰胺的质液比g/mL为0.53：20；
所述维生素E琥珀酸酯与胱胺二盐酸盐的投料摩尔比为1:1-1:20，优选地为1:3。
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，步骤1)中所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(HOBT)的混合，所述维生素E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐投料摩尔比为1:1-1:5，优选地为1:1.2；维生素E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑投料摩尔比为1:1-1:5，优选地为1:1.2。
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，步骤2)中所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和1-羟基苯并三唑(HOBT)的混合，所述胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的投料比为1:1-1:5，优选地为1:1.2；胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑的投料比为1:1-1:5，优选地为1:1.2。
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，步骤2)中聚丙烯酸中羧基与胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的投料摩尔比为1:5-1:20，优选地为1:5。所述的聚丙烯酸平均分子量为3000Da。透析袋截留分子量为1000Da。
所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物在作为抗肿瘤药物载体上的应用。
所述的应用，所述药物载体为纳米药物载体，包括胶束、微乳、微球和纳米粒中一种或两种以上组合，所述纳米药物载体为聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物胶束可通过透析法，溶剂挥发法或薄膜水化超声法制备。
所述的应用，通过透析法制备具体为：将聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的反应液转移至透析袋中，于含有水的烧杯中透析3-5天，透析结束后，过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
所述的应用，通过溶剂挥发法制备具体为，将聚合物冻干粉末溶于四氢呋喃中，在搅拌的条件下，将其逐滴加入含有水的烧杯中。在室温下挥发5h后，4000r/min离心10min，得到澄清的载药纳米胶束溶液。
所述的应用，通过薄膜水化超声法制备具体为，将聚合物冻干粉末加入甲醇溶解，旋蒸除去甲醇，加入水，水化2h，将聚合物的水溶液用超声探头处理2min，超声脉冲开2s，停2s，然后将所得胶体溶液过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
一种抗癌药物，选自抗肿瘤基因、蛋白，更优选地选自索拉非尼。紫杉醇、羟基喜树碱、姜黄素、小檗碱及其组合。
本发明具有以下有益效果：
本发明用含有二硫键的胱胺二盐酸盐对维生素E琥珀酸酯进行修饰，并将其作为疏水段，与亲水性聚丙烯酸结合，得到的聚丙烯酸胱胺二盐酸盐维生素E琥珀酸酯聚合物具有亲水性和对GSH还原响应性的特点。以期作为一个优良的抗肿瘤药物载体。且具有较低的临界胶束浓度，良好的生物相容性和生物可降解性，载体材料在水中能自组装形成胶束，可以用来增大水不溶性药物的溶解度并改善其体内分布。
本发明通过在聚丙烯酸分子上接枝亲脂性的维生素E琥珀酸酯，对其进行疏水性改造，合成了聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物。该聚合物在水溶液中可自组装成为具有核-壳结构的纳米粒，并在内核包载难溶性的抗癌药物，以增加药物的溶解度并改善其体内分布。
本发明制备方法的优点在于合成工艺简单、条件温和；所使用的材料具有良好的生物相容性和生物可降解性，而且材料中含有二硫键，因为肿瘤细胞中谷胱甘肽GSH含量高于正常细胞，因此对正常细胞不产生作用，但对谷胱甘肽GSH含量较高的肿瘤细胞敏感，因此纳米粒具有良好的稳定性。并且提高了治疗的安全性和有效性。
聚丙烯酸为一种生物黏附性材料，黏附性来自羧基与黏膜之间的相互作用。利用聚丙烯酸作为纳米载体材料一方面能促进药物的口服吸收，另一方面聚丙烯酸作为亲水性材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性。
维生素E琥珀酸酯是天然维生素E的衍生物。其对肿瘤细胞有显著的杀伤作用，而对正常细胞没有明显的毒性作用。已有相关文献报道维生素E琥珀酸酯能诱导人淋巴瘤的凋亡，随后也发现其能选择性的人乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞生长。可将肿瘤细胞周期阻断在G1期，且能一直肿瘤细胞的增殖和分化，遏制肿瘤细胞DNA的合成，增加转移生长因子β(TGF-β)的分泌与活化并使TGF-βII型受体表达增加，还可诱导肿瘤细胞凋亡。维生素E琥珀酸酯是一种亲脂性良好的物质，因此可将其作为纳米载体的疏水段。
胱胺二盐酸盐结构中含有二硫键，其应用于聚合物合成中具有如下优势，一方面，可以作为维生素E琥珀酸酯与聚丙烯酸连接的桥链。另一方面，胱胺二盐酸盐结构中的二硫键，对谷胱甘肽较敏感，而肿瘤细胞内的GSH量又会比正常细胞的多。又可稳定纳米胶束。
附图说明
图1为实施例1制备的胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的核磁共振氢谱；
图2为实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的核磁共振氢谱；
图3为实施例5制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯纳米胶束的粒径图；
图4为实施例5制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯纳米胶束的透射电镜照片；
图5聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯纳米胶束的临界胶束浓度；
图6载药胶束的体外释放曲线；
图7载药胶束的药代动力学曲线
具体实施方式
一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，该聚合物是维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述的聚合物具有如下的结构式：
该聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的合成方法，包括如下步骤：
(1)胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于无水N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBT)，室温下搅拌反应2-4h，然后向其中加入胱胺二盐酸盐，三乙胺，室温下避光搅拌反应12h，反应完成后，在搅拌的情况下，将反应液逐滴加入含有冰水的烧杯中，加入完毕后析出白色固体，过滤，冻干后即得胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯产物。
(2)聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成：将聚丙烯酸溶于无水N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)，1-羟基苯并三唑(HOBT)，室温下搅拌反应6h，然后逐滴向其中加入胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的N,N-二甲基甲酰胺溶液，室温下避光搅拌反应12h。反应结束后，将反应液转移至透析袋中，室温透析3-5天，冷冻干燥得白色粉末，即聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯。
上述合成方法中，步骤(1)所述的维生素E琥珀酸酯与胱胺二盐酸盐的投料摩尔比为1:1-1:20，优选地为1:3。维生素E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)的投料摩尔比为1:1-1:5，优选地为1:1.2；维生素E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑(HOBT)投料摩尔比为1:1-1:5，优选地为1:1.2。
步骤(2)所述的胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)的投料摩尔比为1:1-1:5，优选地为1:1.2；胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑(HOBT)的投料摩尔比为1:1-1:5，，优选地为1:1.2。聚丙烯酸中的羧基与所述胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的投料摩尔比为1:5-1:20，其中最优选地为1:5。聚丙烯酸平均分子量为3000Da。透析袋截留分子量为1000Da。
该聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物可作为抗肿瘤药物载体。该药物载体为纳米药物载体，任选地，所述的纳米药物载体选自胶束、微乳、微球、纳米粒及其组合。其中纳米药物载体为聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束。
上述聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束的制备方法包括透析法，溶剂挥发法，薄膜水化超声法。
上述聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的自组装纳米胶束的制备包括如下方法：
(1)透析法：聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的反应液转移至透析袋中，于含有1L水的烧杯中透析，透析3-5天透析结束后，过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒溶液。
(2)溶剂挥发法:其特征是将聚合物冻干粉末溶于2mL四氢呋喃中，在搅拌的条件下，将其逐滴加入含有20mL水的烧杯中。在室温下挥发后0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒溶液。
(3)薄膜水化超声法:其特征是，将聚合物冻干粉末加入5mL甲醇溶解，旋蒸除去甲醇，加入20mL水，水化2h，将聚合物的水溶液用超声探头处理2min，超声脉冲开2s，停2s，然后将所得胶体溶液过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒溶液。
实施例1.胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成
1)将维生素E琥珀酸酯(VES,0.53g,1mmol)溶于20mL无水N,N-二甲基甲酰胺中，置于50mL圆底烧瓶中，待溶解后，依次加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI，0.23g，1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBT,0.18g,1.2mmol)，室温下搅拌反应2-4h，然后向其中加入胱胺二盐酸盐(0.675g,3mmol)，1mL三乙胺，室温下避光搅拌反应12h，反应完成后，在搅拌的情况下，将反应液逐滴加入含有200mL冰水的烧杯中，加入完毕后析出白色固体，过滤，冻干后，即得胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯溶液。
采用核磁共振氢谱确定实施例1中的化合物结构，选用溶剂为CDCl3，结果如图1所示。化学位移为6.5ppm为酰胺键中-NH-CO-中的H，2.5ppm和3.5ppm分别为胱胺二盐酸盐中-CH2中的H，3.0ppm以下为维生素E琥珀酸酯中的典型H峰，因此由图1可知，实施例1合成了胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯。
实施例2.聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成
2)将聚丙烯酸(0.18g，2.5mmol)溶于20mL无水N,N-二甲基甲酰胺中，依次加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,0.115g，0.6mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT，0.09g，0.6mmol),，室温下搅拌反应6h得混合液，然后逐滴向混合液中加入5mL胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯(0.332g，0.5mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液，室温下避光搅拌反应12h。反应结束后，将反应液转移至透析袋中，室温透析3-5天，冷冻干燥得白色粉末，即聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯。
采用核磁共振测定1HNMR来确定实施例2中化合物的结合，采用DMSO-d6为溶剂，结果如图2所示，化学位移0.8-1.0ppm为维生素E琥珀酸酯中的-CH3峰，而化学位移3-3.5ppm为聚丙烯酸中峰。根据维生素E琥珀酸酯的-CH3峰和聚丙烯酸中峰的积分面积之比，得出所制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物中的维生素E琥珀酸酯的取代度为20％。
实施例3.透析法制备聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物纳米胶束
将实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的反应液转移至透析袋中，于含1L水的烧杯中透析，透析3-5天透析结束后，过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
实施例4.溶剂挥发法制备聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物纳米胶束
称取2mg实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物冻干粉末溶于2mL四氢呋喃中，在搅拌的条件下，将其逐滴加入含有20mL水的烧杯中，在室温下挥发5h后0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
实施例5.薄膜水化超声法制备聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物纳米胶束
称取2mg实施例2制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物冻干粉末溶于5mL甲醇溶解，旋蒸除去甲醇，加入20mL水，水化2h，将聚合物的水溶液用超声探头处理2min，超声脉冲开2s，停2s，然后将所得胶体溶液过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
用Malvern Zetasizer Nano-ZS 90测定纳米粒的粒径及Zeta电位，粒径结果如图3所示，纳米粒的平均粒径为40nm，多分散性系数PDI为0.2，Zeta电位为-22mV。图4是聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米粒经磷钨酸染色后在H-7000型透射电镜下的观察结果。由图可以看出纳米粒呈较规整的球形，用Malvern Zetasizer Nano-ZS90测定纳米粒的粒径及Zeta电位，粒径结果如图4所示，纳米粒的平均粒径为40nm，多分散性系数PDI为0.2，Zeta电位为-22mV。
因此，本发明所制备的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束可以作为良好的疏水性抗癌药物载体，以增加药物的溶解度，改变其体内分布，提高化疗的安全性和有效性。如本发明所合成的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯自组装纳米粒可以成功荷载索拉非尼，HPLC测定结果表明，载药量可以达到20％以上。
实施例6.聚合物胶束的临界胶束浓度值测定
采用芘探针法测定聚合物胶束的临界胶束浓度。取100μL的芘丙酮溶液(1×10-4mol/L)于9个离心管中，在氮气流下挥干丙酮，并向其中加入5mL 2×10-1,4×10-2,2×10-2,4×10-3,2×10-3，4×10-4，2×10-4，4×10-5，2×10-5mg/mL的胶束溶液，使得芘的最终浓度为2×10-6mol/L，涡旋混合1min后，超声40min，室温下避光静置平衡24h。并应用荧光分光光度计来测定各溶液的荧光强度。
采用芘探针法测定实施例2中所得聚合物的临界胶束浓度值。以logC为横坐标，在芘固定激发波长334nm，发射波长在383nm和373nm下荧光强度比值为纵坐标作图。结果如图5所示，曲线拐点处即为聚合物胶束的临界胶束浓度(CMC)值，CMC值为6.3μg/mL。
实施例7.溶剂挥发法制备载药纳米胶束溶液
称取16mg聚合物冻干粉末，8mg索拉非尼溶于2mL四氢呋喃中，在搅拌的条件下，将其逐滴加入含有20mL水的烧杯中，在室温下挥发5h后，4000r/min离心10min，得到澄清的载药纳米胶束溶液。
实施例8 载药胶束的体外释放
采用透析法测定载药胶束的体外释放特征。精密量取载药胶束1mL置于透析袋中，将其置于10mL不同浓度(0mM,2μM,10mM,40mM)的谷胱甘肽的pH 7.4磷酸盐缓冲液中，于37℃恒温振荡器中以100rpm/min进行透析。每批样品平行3次。分别于0.25h，0.5h，1h，2h，4h，6h，8h，10h，12h，24h，36h，48h取样1mL,并补充1mL相应的释放介质，并将样品经过0.45μm微孔滤膜过滤，进液相分析测定。
由图6可知，索拉非尼载药胶束的药物体外释放具有一定的谷胱甘肽浓度依赖性，其浓度越大，药物累积释放量越多。且药物的释放具有一定的缓释作用。
实施例9 载药胶束的细胞实验
以1×104cells/孔的密度将Hela细胞接种到96孔培养板中，培养24h待细胞贴壁后，弃去培养液，在每孔中分别加入等浓度的索拉非尼和实施例4的载药胶束100μL(实验组)，以只加培养液作为空白对照组，分别于细胞培养箱中培养24h，再向每孔中加入MTT10μL，培养4h，吸出培养液，向每孔中分别加入100μL DMSO，在590nm下用酶标仪检测每孔的吸光度值(OD)，细胞存活率公式如下：
Cell viability(％)＝OD(空白组)-OD(实验组)/OD(空白组)×100％
其中索拉非尼的IC50值为70μmol/L，载药胶束的IC50为30μmol/L，空白材料没有毒性。
实施例10 载药胶束的大鼠体内药动学研究
雄性大鼠12只，随机分为2组，给药前禁食12h，分别尾静脉注射给予索拉非尼溶液剂(SFN-Sol)和实施例4所制备的载药胶束(SFN-NP),分别于0.083h，0.16h，0.25h，0.5h，1h，2h，4h，6h，8h，10h，12h，24h眼眶取血0.2mL于肝素管中，14000r/min,离心10min，取上清100μL并加入15μL内标(瑞格非尼)加入300μL乙腈，涡旋3min，混匀后于14000r/min,离心10min，取上清进液相分析。所测定的药时曲线如图7所示。由图7可知：给予索拉非尼载药胶束后，与索拉非尼溶液相比，延长了索拉非尼的体内循环时间，而且显著增加了其血药浓度，更好地提高了药效。

Claims (11)

1.一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，该聚合物是维生素E琥珀酸酯通过双胺基桥链接到主链聚丙烯酸上，所述聚合物的结构式如(I)所示：
2.如权利要求1所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，制备方法如下：
1)胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成：将维生素E琥珀酸酯溶于无水有机溶剂中，在催化剂作用下，与胱胺二盐酸盐发生酰化反应，得到胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯；
2)聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的合成：将聚丙烯酸溶于无水有机溶剂中，加入催化剂，搅拌至反应结束，然后向其中缓慢滴加胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯溶液，至反应完成后，将反应液转移至透析袋中至透析结束，并通过冷冻干燥，得到聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物。
3.如权利要求2所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，制备方法中所述无水有机溶剂为无水N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑中的一种或两种以上组合。
4.如权利要求3所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，步骤1)中维生素E琥珀酸酯与N,N-二甲基甲酰胺的质液比g/mL为0.53：20；所述维生素E琥珀酸酯与胱胺二盐酸盐的投料摩尔比为1:1-1:20。
5.如权利要求3所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，步骤1)中所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的混合；维生素E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐投料摩尔比为1:1-1:5，维生素E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑投料摩尔比为1:1-1:5。
6.如权利要求3所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，步骤2)中所述催化剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑的混合；胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯与1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的投料比为1:1-1:5，胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯与1-羟基苯并三唑的投料比为1:1-1:5。
7.如权利要求2所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物，其特征在于，步骤2)中聚丙烯酸中羧基与胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯的投料摩尔比为1:5-1:20。
8.如权利要求1所述的一种聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物在作为抗肿瘤药物载体上的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物载体为纳米药物载体，包括胶束、微乳、微球和纳米粒中一种或两种以上组合。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述纳米药物载体为聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物胶束，其可通过透析法，溶剂挥发法或薄膜水化超声法制备。
11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，通过透析法制备具体为：将聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物的反应液转移至透析袋中，于含有水的烧杯中透析3-5天，透析结束后，过0.22μm微孔滤膜，得到澄清的聚丙烯酸-胱胺二盐酸盐-维生素E琥珀酸酯聚合物自组装纳米胶束溶液。
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