CN105878525A - 一种鱼腥草冻干超微粉颗粒剂制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了鱼腥草冻干超微粉颗粒的制备方法，它涉及一味中药材的加工工艺，其方法是预处理、冷冻干燥、超微粉碎、制粒制得鱼腥草冻干超微粉颗粒剂。本发明采用真空冷冻干燥技术和超微粉碎技术相结合制备颗粒，有效保护鱼腥草的有效成分，提高了药物有效成分的溶出速度和溶出量，易于被机体吸收，起效快功效高，制备成颗粒工艺简单，可进一步加工成片剂、胶囊剂，方便保存、服用与运输；且产品质量、颗粒有效成分含量同一性强，便于实现机械化、规模化批量生产。

Description

一种鱼腥草冻干超微粉颗粒剂制备方法

技术领域

本发明属于重要的制药技术领域，具体涉及一种鱼腥草冻干超微粉颗粒的制备工艺。

技术背景

中药，人类出现和医学活动的原始产物，有着数千年的发展历史，是人类与疾病做斗争的锐利武器，肩负着保障人类繁衍、健康、长寿的历史使命。在当今时代的预防和治疗新老疾病中也起着着不可或缺的支柱性作用。但是中药的近现代发展缓慢，中药材及其炮制加工工艺尚趋于传统、简单、落后，对药材中的有效成分造成严重的破坏和损失，降低了药材的治疗效果。

鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的全草，其性味辛、寒，具有清热解毒、消肿排脓、利尿通淋及止痰化咳等功效。临床主要用于肿痈吐脓、痰热咳喘、热痢热淋、臃肿疮毒等，治疗效果显著。鱼腥草有效成分主要有癸酰乙醛(鱼腥草素)甲基壬酮、月桂醛等挥发性成分，槲皮素、槲皮苷、金丝桃苷等黄酮类物质，以及一些有机酸、脂肪酸和无机盐类等成分。一般中药材炮制工艺容易对鱼腥草中挥发性油类成分与黄酮类物质造成严重损失，因此提供一种工艺简单方便，使用更加广泛，品质更高的鱼腥草制备工艺显得非常重要。

发明内容

本发明的目的在于将现代的冷冻干燥技术、超微粉碎技术和颗粒制备工艺相结合，提供一种可以有效保留鱼腥草药材的有效活性成分，增加中药的溶出率和生物利用度、减少中药的用量、增强药理作用、改善颗粒的均匀性，使用灵活方便、易于储藏，且便于实行工业化规模化生产的鱼腥草冻干超微粉颗粒的制备工艺。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：鱼腥草冻干超微粉颗粒的制备工艺，它包括以下步骤：

(1)前处理阶段：将检验合格的鱼腥草，去泥沙并用清水洗净，然后沥干水，放入速冻间进行预冻；

(2)冷冻干燥阶段：将步骤(1)鱼腥草放入速冻箱，保持2～4小时，开始抽真空，加热，升华干燥，在升华干燥的整个过程中，应始终保持水在三相点一下，以保证鱼腥草始终保持在冻结状态，升华干燥过程约48小时。在所有冰晶完成后，升至适当温度，在真空的状态下进行解析干燥，约8小时解析干燥完成，水分为1～4％。

(3)超微粉碎阶段：将步骤(2)中制得鱼腥草先初步粉碎，得到粉末粒径在60目左右，然后再将初步粉碎得到鱼腥草粉末置于超微粉碎机中进行超微粉碎，所得粉末粒径小于40微米。

(4)制粒阶段：将(3)中制得的鱼腥草超微粉与辅料按比例倒入混合机，混合均匀至色泽一致。采用干法制粒将上述混合均匀物料以适当比例乙醇制成一定湿度的软材，然后倒入颗粒机，将鱼腥草超微颗粒制成粒度为12～24目的颗粒。

本发明的的有益效果是：本发明的鱼腥草冻干超微粉颗粒的制备工艺的改进，采用将冷冻干燥、超微 粉碎、制作颗粒等现代化生产技术进行组合，总结出较为适宜的鱼腥草制剂工艺参数，制备出适应目前社会需求的口服制剂形式。本发明充分利用三项现代化生产技术的优点，即冷冻干燥和超微粉碎技术比其它提取工艺更多保留药材中的有效活性成分，提高有效活性成分溶出率，又有利于机体活性成分的吸收利用，减少服用剂量，从而降低中药资源浪费。制成颗粒剂，工艺简单，且可以进一步加工成片剂、胶囊剂，方便保存、运输和服用。

具体实施方式

实施例1鱼腥草冻干超微粉颗粒的制备工艺，它包括以下步骤：

(1)将检验合格的鱼腥草，去泥沙并用清水洗净，然后沥干水，取2kg放入速冻间进行预冻；

(2)冷冻干燥阶段：将步骤(1)鱼腥草放入速冻箱，保持4小时，开始抽真空，加热，升华干燥，在升华干燥的整个过程中，应始终保持水在三相点一下，以保证鱼腥草始终保持在冻结状态，升华干燥过程约48小时。在所有冰晶完成后，升至适当温度，在真空的状态下进行解析干燥，约8小时解析干燥完成，水分为4％。

(3)超微粉碎阶段：将步骤(2)中制得鱼腥草先初步粉碎，得到粉末粒径在60目左右，然后再将初步粉碎得到鱼腥草粉末置于超微粉碎机中进行超微粉碎，所得粉末粒径在40微米左右。

(4)制粒阶段：将(3)中制得的鱼腥草超微粉与辅料蔗糖按适当投料比例倒入混合机，混合均匀至色泽一致。采用干法制粒将上述混合均匀物料以75％的乙醇制成适宜湿度的软材，然后倒入颗粒机，将鱼腥草超微颗粒制成粒度为24目的颗粒。

实施例2药学品质试验-冻干超微粉颗粒技术对鱼腥草中黄酮类物质(金丝桃苷)溶出的影响

实验材料

仪器：Agilent Technologies 1260Infinity高效液相色谱仪，紫外可见光检测器，色谱处理工作站，分析天平，超声清洗机。

试药：金丝桃苷标准品(中国兽医药品监察所)、HPLC级乙腈、冰醋酸、甲醇、蒸馏水、鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草超微粉颗粒(未冷冻干燥)、鱼腥草冻干颗粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒(沈阳伟嘉牧业技术有限公司自制)。

实验方法

色谱条件：色谱柱：C18(250mm×4.6mm，5μm)、流动相∶乙腈-1％冰醋酸(16∶84)、检验波长为360nm、柱温为室温，流速1.0ml/min。

对照品溶液的制备：精密称取干燥的金丝桃苷对照品6.0mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释定容只刻度，摇匀，配成浓度为120μg的对照品储备液。

供试品溶液的制备：

供试液1的制备：分别取鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草超微粉颗粒(未冷冻干燥)、鱼腥草冻干颗粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒1g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，95℃水浴上回流提取至无色，挥发甲醇至40ml以下，放冷后通过微孔滤膜(0.45μm)滤过，移入50ml容量瓶，并用甲醇定容至刻度，摇匀，即为供试品溶液1。

供试液2的制备：分别取鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草冻干颗粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒1g，各精密称取4分，分别置于具塞锥形瓶中，加入50ml甲醇，密塞，静置浸泡，分别于5、10、30、60min时通过微孔滤膜(0.45μm)滤过，移入50ml容量瓶，并用甲醇定容至刻度，摇匀，即为供试品溶液2。

系统适应性试验：按供试液1的制备项方法制备供试品溶液，取该溶液20ml，注入高效液相色谱仪，金丝桃苷的保留时间为21.9min。理论塔板数不低于7000，金丝桃苷色谱峰与相邻未知色谱峰的分离度不低于2。

线性关系考察：按照上述色谱条件，精密吸取对照品0.25、0.5、1、1.5、2ml置于10ml的容量瓶中定容至刻度，按照顺序命名为A、B、C、D、E混合对照品，依次注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求其回归方程和相关系数。

精密度实验：精密吸取金丝桃苷C对照品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，重复5次，测其峰面积利RSD。

稳定性实验：取鱼腥草冻干超微粉颗粒供试品溶液1，再室温下放置，分别在0，2，4，12，24，h进样，测其RSD。

回收率实验：取鱼腥草冻干超微粉颗粒已知含量样品与0.5g，共6份，分别精密加入金丝桃苷，按照上述供试液1配制项下制备供试品溶液，将所得6份供试品溶液按照上述色谱条件进行测定，每分样品测定3次，计算其金丝桃苷加样回收率。

样品测定：分别精密称取鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草超微粉颗粒(未冷冻干燥)、鱼腥草冻干颗粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒1g，按要求配制成供试品溶液1、2，并按色谱条件，测定供试样品中金丝桃苷含量。

重复性试验：取鱼腥草冻干超微粉颗粒样品按照供试品溶液1配制要求平行制备5份溶液，取20μl进样，按样品测定方法进行测定，测定金丝桃苷RSD。

结果与分析

金丝桃苷标准曲线的绘制：在本实验条件下，金丝桃苷进样量在3-24μg范围内，得回归方程为y＝22659x-674.46(r＝0.9995)。

金丝桃苷精密度试验：精密吸取上述对照品溶液20μl，重复进样5次，测得金丝桃苷峰面积积分值，RDS＝2.09％(n＝5)，表明仪器精密度练好，结果见下表。

表1精密度试验结果(n＝5)

金丝桃苷稳定性试验：取上述供试品溶液，分别于0、2、4、12、24、时间点进样20μl，测得金丝桃苷的RDS为2.51％，表明供试品溶液在24h内稳定，结果见表2。

表2稳定性试验结果

样品重现性试验：取鱼腥草冻干超微粉颗粒样品5份，精密陈定1.00g，按上述供试品溶液制备法操作，各进样20μl，测得峰面积得金丝桃苷RSD＝0.93％，表明该方法的重现性良好，结果见表3。

表3重现性试验结果

金丝桃苷回收率试验结果(见表4)：

表4回收率试验结果(n＝6)

样品金丝桃苷含量测定结果(见表5)：

表5样品中金丝桃苷含量测定结果(n＝4)

样品金丝桃苷溶出速率测定结果(见表6)：

表6样品中金丝桃苷溶出速率(n＝3)

表5的结果显示，2、3、4号样品的金丝桃苷含量、RDS均高于1号样品，其中4号样品含量、RDS最高。且2、3号样品与1号样品比较，3号明显优于2号。这说明超微粉碎工艺能够提高黄酮类成分金丝桃苷的溶出量，加之冷冻干燥技术的应用，更好的保证率鱼腥草中黄酮类成分金丝桃苷的含量。

表6的结果显示，6号样品的溶出速率大大加快，且在30min左右含量不在变化，基本完全溶出。

因此，将鱼腥草经冷冻干燥、超微粉碎技术加工后，提高了鱼腥草颗粒中黄酮类物质金丝桃苷的溶出量与溶出速率。

实施例3药学品质试验-冻干超微粉颗粒技术对鱼腥草中挥发油成分(甲基正壬酮)溶出的影响

实验材料

仪器：Agilent6890N气相色谱仪，HP-5毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，电子分析天平。

试药：甲基正壬酮(中国兽医药品监察所)、正己烷(分析纯)、鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草超微粉颗粒(未冷冻干燥)、鱼腥草冻干颗粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒(沈阳伟嘉牧业技术有限公司自制)。

实验方法

色谱条件：HP-5毛细管填充柱(30m×0.32mm×0.25μm)；FID检测器温度250℃；进样口温度250℃；程序升温：初温80℃(保留2min)，以5℃/min升至100℃，然后以2℃/min升至120℃，最后以40℃/min，至末温220℃(保留20min)；分流比50∶1；进样量为2μl；恒流模式。

对照品溶液的制备：精密称定甲基正壬酮对照品39.8mg置于50ml容量瓶中，用正己烷溶解并定容到50ml，配成796μg/mL标准液备用。

供试品溶液的制备：分别鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草超微粉颗粒(未冷冻干燥)、鱼腥草冻干颗 粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒40g左右，置于2000ml圆底烧瓶中，加水400ml，连接挥发油提取器，从提取器上端加水至最高刻线，并加入正己烷2ml，然后链接冷凝管加热回流6h停止加热，待沸腾消失后，准备移取正己烷到10ml容量瓶中，提取器壁上挥发油残留部分用正己烷润洗干净，润洗液导入10ml容量瓶中，最后用正己烷定容至刻度，备用。

线性关系考察：分别精密称取配制完成标准液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml置10ml容量瓶中，用正己烷溶解并定容到10ml，配成不同浓度标准液系列，进样2μl。以峰面积之比(y)对进样量(g)做回归计算，求其回归方程和相关系数。

精密度实验：精密吸取甲基正壬酮标准液，按照色谱条件连续进样5次，求其相对峰面积和RDS。

稳定性实验：取鱼腥草冻干超微粉颗粒供试品溶液一份，再室温下放置，分别在0，2，4，8，12，24，h进样，测其RSD。

加样回收率实验：取鱼腥草冻干超微粉颗粒5份，每份约40g，将一定量的对照品加入已知含量的鱼腥草冻干超微粉颗粒中，按对照品与供试品溶液制备方法，提取测定，计算加样回收率。

样品测定：分别取鱼腥草颗粒(传统工艺)、鱼腥草超微粉颗粒(未冷冻干燥)、鱼腥草冻干颗粒(未超微粉碎)、鱼腥草冻干超微粉颗粒供试品溶液，按色谱条件进样2μL，得峰面积，由标准曲线方程计算得样品中甲基正壬酮含量。

重复性试验：精密取鱼腥草冻干超微粉颗粒样品按照供试品溶液配制要求平行制备5份溶液，按色谱条件连续进样5次，求其RSD。

结果与分析

甲基正壬酮标准曲线的绘制：在本实验条件下，甲基正壬酮回归方程y＝0.5378x-4.3825(r＝0.9991)，线性范围分别为39.8-398μg/ml。

甲基正壬酮精密度试验结果：

表1精密度试验结果(n＝5)

甲基正壬酮稳定性试验结果：

表2稳定性试验结果

样品重现性试验结果：

表3重现性试验结果

甲基正壬酮回收率试验结果(见表4)：

表4回收率试验结果(n＝6)

样品甲基正壬酮含量测定结果(见表5)：

表5样品中甲基正壬酮含量测定结果(n＝3)

表5的结果显示，2、3、4号样品的甲基正壬酮含量、RDS均高于1号样品，其中4号样品含量、RDS最高。且2、3号样品与1号样品比较，2号明显优于3号。这说明冷冻干燥工艺对挥发油类成分甲基正壬酮较好的保留能力，加之超微粉碎技术的综合应用，更好的保证鱼腥草中挥发油类成分甲基正壬酮的含量。因此，将鱼腥草经冷冻干燥、超微粉碎能有效保留挥发油活性成分甲基正壬酮含量。

实施例4药效学试验——解热效果实验

实验材料

试剂：鲜啤酒酵母(某啤酒厂提供)。

药物：鱼腥草颗粒(传统工艺制备)、鱼腥草冻干超微粉颗粒，均由沈阳伟嘉牧业技术有限公司自制。使用时，用蒸馏水稀释成设计药物浓度的溶液灌胃服用。

动物：Wistar大白鼠由辽宁长生生物技术有限公司提供，生产许可SCXK(辽)2010-0001。实验前需进行为期一周的观察。

2方法

2.1啤酒酵母引起大白鼠发热模型的制造

实验选用健康Wistar大白鼠，体重150-190g，雌雄各半，雌性未孕。

实验前各大白鼠先测基础体温，剔除体温低于36.5℃和高于38.4℃动物。随机分为模型对照组、鱼腥草颗粒对照组、鱼腥草冻于超微粉颗粒高、中、低三个剂量组。各大白鼠从背部皮下注射10％的鲜啤酒酵母混悬液5ml/kg，病每隔1小时测量体温一次，待体温升高1℃左右时(大概4-6小时)，按表1中不同组别给药一次后，再每隔30分钟测量体温一次。比较给药后不同时间体温的变化情况。

3结果

3.1对鲜啤酒酵母引起大白鼠发热模型的影响

结果进行统计学处理后列于表1。

表1鱼腥草制剂对鲜啤酒酵母引起大白鼠发热模型的影响(X±S)

与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。

表1结果显示，鱼腥草颗粒与鱼腥草冻干超微粉颗粒对鲜啤酒酵母引起的大白鼠发热模型均有一定的解热作用，与模型对照组比较P＜0.05-0.01。鱼腥草冻干超微粉颗粒与等剂量的鱼腥草颗粒比较，鱼腥草冻干超微粉颗粒作用解热作用更强，且随着给药剂量额增加，对发热大鼠解热的时间越早，降温幅度越大。因此，说明鱼腥草冻干超微粉颗粒，对鲜啤酒酵母引起的大鼠发热的缓解速度与程度，显著或极显著优于传统工艺鱼腥草颗粒剂，冻干、超微粉及颗粒技术的综合应用对鱼腥草药效有显著的提高作用。

实施例5药效学试验——抗炎效果实验

1实验材料

试剂：二甲苯。

药物：鱼腥草颗粒(传统工艺制备)、鱼腥草冻干超微粉颗粒，均由沈阳伟嘉牧业技术有限公司自制。使用时，用蒸馏水稀释成设计药物浓度的溶液灌胃服用。

动物：Wistar大白鼠由辽宁长生生物技术有限公司提供，生产许可SCXK(辽)2010-0001。实验前需进行为期一周的观察。

器材：打孔器、分析天平。

2方法

2.1小自鼠二甲苯性耳廓肿胀模型的制造

实验选用健康SPF级小白鼠，体重25-30g，雌雄各半。随机分为模型对照组、鱼腥草颗粒对照组、鱼腥草冻干超微粉颗粒高、中、低三个剂量组。每组20只。实验前按表格2中剂量给药3天，实验当日再给药一次后30分钟，于每鼠右耳廓双面涂二甲苯0.05ml/只，1小时后处死动物，用直径8mm的打孔器，取下双耳同部位的耳片，立即至分析天平上称重，右耳片重量减去左耳片重量为耳廓肿胀度。

2.3统计处理 结果进行统计学处理分析。

3结果

3.1对小白鼠二甲苯性耳廓肿胀的影响

结果进行统计学处理后列于表1。

表1鱼腥草制剂对小白鼠二甲苯性耳廓肿胀模型的影响(X±S)

与模型对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。

表2结果显示，鱼腥草颗粒与鱼腥草冻干超微粉颗粒对小白鼠二甲苯性耳廓肿胀模型均有抑制作用，与模型对照组比较P＜0.05-0.01。鱼腥草冻干超微粉颗粒与等剂量的鱼腥草颗粒比较，鱼腥草冻干超微粉颗粒的抑制肿胀作用更强，且随着给药剂的增加，抑制率越高。因此，说明在本次试验条件下，鱼腥草冻干超微粉颗粒，对小白鼠二甲苯性耳廓肿胀炎症的抑制率，显著或极显著优于传统工艺鱼腥草颗粒剂，冻干、超微粉及颗粒技术的综合应用对鱼腥草药效有显著的提高作用。

Claims (2)

1.一种鱼腥草冻干超微粉颗粒剂制备方法，其特征在于制备步骤如下：

(1)前处理阶段：将检验合格的鱼腥草，去泥沙并用清水洗净，然后沥干水，放入速冻间进行预冻；(2)冷冻干燥阶段：将步骤(1)鱼腥草放入速冻箱，保持2～4小时，开始抽真空，加热，升华干燥，在升华干燥的整个过程中，应始终保持水在三相点一下，以保证鱼腥草始终保持在冻结状态，升华干燥过程约48小时。在所有冰晶完成后，升至适当温度，在真空的状态下进行解析干燥，约8小时解析干燥完成，水分为1～4％。

(3)超微粉碎阶段：将步骤(2)中制得鱼腥草先初步粉碎，得到粉末粒径在60目左右，然后再将初步粉碎得到鱼腥草粉末置于超微粉碎机中进行超微粉碎，所得粉末粒径小于40微米。

(4)制粒阶段：将(3)中制得的鱼腥草超微粉与辅料按比例倒入混合机，混合均匀至色泽一致。采用干法制粒将上述混合均匀物料以适当比例乙醇制成一定湿度的软材，然后倒入颗粒机，将鱼腥革超微颗粒制成粒度为12～24目的颗粒。

2.依据权利要求1所述的鱼腥草冻干超微粉颗粒制备方法，其特征在于步骤(2)、(3)、(4)中所述：将步鲜鱼腥草经冷冻干燥技术处理后产物，经超微粉碎技术制成粒径在40微米左右的超微粉，在将鱼腥草超微粉经干法制粒工艺制成颗粒大小为12～24目的颗粒。