CN105878374A - 一种含丹参脂溶性成分和辅酶q10的组合物及其制备方法及采用该组合物的药物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物及其制备方法及采用该组合物的药物，组合物包括有以下重量百分比的各组分：丹参脂溶性成分8％～24％、辅酶Q10 16％～23％、维生素K 1.2％～3％、玉米油50％～74％。本发明的组合物能纠正机体的脂代谢失衡，减少脂质过氧化物的生成，减少炎症因子的激活，从而改善主动脉粥样硬化和认知功能障碍，具有改善脂代谢紊乱、抗氧化、舒张血管平滑肌、修复血管内皮细胞和保护缺血缺氧引起的神经细胞损伤的功效；另外，本发明的组合物用于制备药物，能有效预防或/和治疗心血管疾病和血管性痴呆症。

Description

一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物及其制备方法及采用该组合物的药物
技术领域
本发明涉及一种组合物，属于药物技术领域，尤其是指一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物及其制备方法及采用该组合物制备的用于治疗和预防心脑血管疾病和血管性痴呆症的药物。
背景技术
心血管疾病及由此引起的血管性痴呆症对老年人身体健康与生活质量构成了严重的威胁，从高脂血症、高胆固醇血症到脂肪沉积形成的动脉粥样硬化被认为是导致肺心病发病和血管性痴呆的关键因素。
丹参作为传统的药食同源的药材，用于防治心脑血管方面的应用由来已久。现代药理研究进一步发现了丹参脂溶性有效成分主成分为丹参酮IIA，具有舒张血管平滑肌、修复血管内皮细胞等良心血管保护作用，并且也能通过保护缺血缺氧引起的神经细胞损伤。而辅酶Q10是在食品、药品、化妆品等领域具有广泛应用的原料，具有良好的抗氧化性和清除自由基能力，通常用于抗衰老和保护心血管等方面。
但是，目前尚未发现有丹参脂溶性成分与辅酶Q10联用的配方或组合物在防治心血管病及继发的血管性痴呆症的应用。如何将两者进行合理的优化、配方，以使该组合物能更好地适应食品、功能性食品以及制药行业等的应用要求，有效提高和强化防治心血管疾病及血管性痴呆症，正是本发明所要解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，该组合物具有改善脂代谢紊乱、抗氧化、舒张血管平滑肌、修复血管内皮细胞和保护缺血缺氧引起的神经细胞损伤的功效。
本发明的第二个目的在于提供上述含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供采用上述组合物制备的用于治疗和预防心脑血管疾病和血管性痴呆症的药物。
为了实现第一个目的，本发明按照以下技术方案实现：
一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，其包括有以下重量百分比的各组分：丹参脂溶性成分8％～24％、辅酶Q10 16％～23％、维生素K 1.2％～3％、玉米油50％～74％。
进一步，所述一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，其包括有以下重量百分比的各组分：丹参脂溶性成分24％、辅酶Q1023％、维生素K3％、玉米油50％。
进一步，所述丹参脂溶性成分中的主要有效物丹参酮IIA计其含量范围为18％-42％。
为了实现第二个目的，本发明按照以下技术方案实现：
一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物制备方法，按比例分别称取辅酶Q10和维生素K加入到丹参脂溶性成分中，搅拌，使其溶解均匀，加入适量的玉米油，并最终使丹参脂溶性成分的质量分数达到组合物质量的8％～24％，即为所得组合物。
进一步，所述丹参脂溶性成分的制备方法包括以下步骤：
S1、取丹参药材，粉碎，过40目筛，得到丹参粉末；
S2、将丹参粉末按1：1的比例加入90％乙醇浸泡8h后，再加入8倍体积的90％乙醇，以40kHZ、50℃超声3次，每次30min，抽滤，合并滤液，减压浓缩成干浸膏；
S3、将干浸膏充分分散于4-6倍体积的2％NaHCO3溶液中，室温25℃下静置24h，后3000rpm/min离心10min，弃上清，保留沉淀物；
S4、沉淀物再分散于2-4倍体积的95％乙醇中，4℃下静置12h，后3000rpm/min离心10min，减压浓缩至无醇味，后加入2-3倍体积的玉米油充分震荡萃取2次，分取，合并玉米油层，即为所述丹参脂溶性成分。
为了实现第三个目的，本发明按照以下技术方案实现：
一种采用含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物制备的用于治疗和预防心脑血管疾病和血管性痴呆症的药物，所述药物包括有药物成分和制药辅料，该药物成分采用权利要求1所述的含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物。
进一步，所述药物软胶囊剂、乳剂、口服液。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明的组合物能纠正机体的脂代谢失衡，减少脂质过氧化物的生成，减少炎症因子的激活，从而改善主动脉粥样硬化和认知功能障碍，具有改善脂代谢紊乱、抗氧化、舒张血管平滑肌、修复血管内皮细胞和保护缺血缺氧引起的神经细胞损伤的功效；另外，本发明的组合物用于制备药物，能有效预防或/和治疗心血管疾病和血管性痴呆症。
为了能更清晰的理解本发明，以下将详细阐述本发明的具体实施方式。
具体实施方式
本发明所述含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，其包括有以下重量百分比的各组分：丹参脂溶性成分24％、辅酶Q10 23％、维生素K3％、玉米油50％。
通过HPLC法测得的9批丹参脂溶性成分中的主要有效物丹参酮IIA计其含量范围为18％-42％。
上述含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物的制备方法为：取丹参脂溶性成分240mL，并按比例分别往其中加入辅酶Q10 230g和维生素K 30g，搅拌，使其溶解均匀，再加入500mL玉米油，并最终使组合物总体积为1000mL。
其中，所述丹参脂溶性成分的制备方法包括有以下步骤：取丹参药材1.0kg，粉碎，过40目筛，置圆底烧瓶中备用；加入1000mL 90％乙醇浸泡8h，再加入8000mL90％乙醇，以40kHZ、50℃超声3次，每次30min，抽滤，合并滤液，减压浓缩得干浸膏183.6g；将干浸膏充分分散于900mL的2％NaHCO3溶液中，室温25℃下静置24h，后3000rpm/min离心10min，弃上清，干燥后，得沉淀物124.7g；将沉淀物分散于360mL的95％乙醇中，在4℃下静置12h，后3000rpm/min离心10min，减压浓缩至无醇味，得浓缩液102mL，加入250mL玉米油充分震荡萃取2次，分取，合并玉米油层，得丹参脂溶性成分182mL。
将上述含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物用于制备治疗和预防心脑血管疾病和血管性痴呆症的药物，所述药物包括有药物成分和制药辅料，该药物成分采用上述配比的含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物。进一步，所述药物软胶囊剂、乳剂、口服液。
实验一：组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠主动脉粥样硬化斑块病变及血脂的影响
1.1实验方法
1.1.1实验动物分组及模型建立
取SPF级SD大鼠40只，雌雄各半，体重250-300g，随机分为4组，每组10只，分别为：空白对照组、模型组、组合物高剂量组25mL/kg、低剂量组 12.5mL/kg。其中模型组和组合物各组给予高脂饲料(73.4％原粮、5.5％糖、21％猪油、1％胆固醇)，同时在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D3 70IU/Kg，空白对照组予普通饲料喂养和注射等剂量生理盐水。12周后，模型组和组合物各组采用双侧颈总动脉夹闭再灌注方法制备大鼠血管性痴呆模型，对照组进行假手术。组合物各剂量组自给予高脂饲料起灌胃给药，空白对照组和模型对照组灌以相应的生理盐水量，手术期间停药1周，1次/d，连续24周。末次给药后，大鼠禁食不禁水24小时后麻醉取血,常规制备血清，留取整条主动脉，检测相关指标。
1.1.2主动脉AS斑块面积的测定
打开大鼠胸腔及腹腔，分离整条主动脉，10％福尔马林固定，次日常规脱水、石蜡包埋并连续切片，HE染色并镜检、拍照，采用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统，检测动脉粥样硬化斑块面积及主动脉管腔面积，计算两者之比。
1.1.3血清指标检测
全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，采用分光光度法检测血清中MDA、SOD和GSH水平,具体按试剂盒说明进行操作。
1.1.4数据处理
应用SPSS18.0软件对实验数据进行单因素方差分析，结果以x±s表示，以P<0.05为差异有统计学意义。
1.2实验结果
1.2.1组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠动脉粥样硬化形态学的影响
与模型组相比，给予组合物各剂量组粥样硬化斑块面积、斑块面积与管腔面积比均有显著下降(P<0.05)。(结果见表1)。
表1.组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠动脉粥样硬化形态学的影响(n＝10)
a P<0.01，与空白对照组相比较；ab P<0.05,b P<0.01，与模型组相比较。
1.2.2组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠血脂的影响
与模型组相比，给予组合物各剂量组血脂中的TC、TG、LDL-C含量均有明显下降(P<0.05)，而HDL-C的含量则显著上升。(结果见表2)。
表2.组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠血脂的影响(n＝10)
a P<0.01，与空白对照组相比较；ab P<0.05,b P<0.01，与模型组相比较。
1.2.3组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠血清脂质过氧化物的影响
与模型组相比，组合物各剂量组的GSH水平和SOD活力均有显著提高 (P<0.05)，而MDA含量则较模型组有明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。(结果见表3)。
表3.组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠血清中脂质过氧化物的影响(n＝10)
a P<0.01，与空白对照组相比较；ab P<0.05,b P<0.01，与模型组相比较。
结论，本发明的组合物能抑制脂质过氧化物水平，调节脂质代谢紊乱，从而改善模型大鼠的动脉粥样硬化水平。
实验二：组合物对高脂血症血管性痴呆模型大鼠认知能力障碍的改善作用
2.1实验方法
2.1.1实验动物分组及模型建立
模型建立及分组同3.1.1项，行为学测试自第10周起进行适应训练，第14周起进行正式测试，每2周1次，分别将第16周、第20周、第24周的数据进行统计分析。
2.1.2实验动物水迷宫行为学测试
行为学试验包括两方面：(1)定位航行实验(place navigation)，将大鼠面对池壁放入迷宫中，入水点分别为Ⅱ、Ⅳ象限的中点，实验过程中随机固定入水点顺序，每只大鼠每次测试连续训练2次，每次从水池的相对象限入水，每次90s，记录90s内大鼠找到平台并停留2s的潜伏期；若90s内没有找到，潜伏期为90s， 并由操作者引导其在平台停留15s。观察大鼠逃避潜伏期的变化情况。(2)空间搜索实验(spatial probe test)，实验过程的最后一天，撤去平台，其他条件不变，进行空间探索实验，将大鼠从第I，III象限中点各入水一次，持续90s。记录大鼠穿越平台次数等指标的变化情况。数据采集和处理由Morris水迷宫图像自动监视处理系统完成。
2.1.3组织病理学检查
大鼠麻醉取血后，迅速于冰上断头取脑，用4℃预冷的生理盐水洗去血液，吸干多余水分，左半脑组织用4％多聚甲醛固定，脑组织石蜡包埋，切片，常规HE染色后于光学显微镜下观察肝组织病理学改变。用Image-Pro plus 6.0软件进行图像分析，分别测定50倍视野下海马CA1区神经元固缩数量及其百分比，以表示神经元细胞凋亡情况。
2.1.4免疫组化染色测定脑组织组织GFAP的表达
参考GFAP免疫组化试剂盒说明书，以辣根过氧化物酶标记链霉卵白素(SABC)法进行；DAB显色，苏木紫复染，中性树胶封片，倒置荧光显微镜观察，拍照。每组均用PBS代替一抗作为阴性对照。GFAP免疫组化阳性细胞(星形胶质细胞)有亮绿色荧光信号，显示出细胞类似星状的轮廓。图像用Image-Pro Plus6.0分析软件进行分析，分别测定50倍视野下海马区GFAP的表达，每张切片取5个视野，计算GFAP蛋白阳性产物的积分光密度(integrated optical density,IOD)值，取平均值表示GFAP表达水平。IOD值越大表示目的蛋白表达越强。
2.1.5数据处理
实验数据均以表示，组间比较采用单因素方差分析，所有数据均应用SPSS18.0软件分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.2实验结果
2.2.1组合物对模型大鼠空间学习记忆障碍的保护作用
从第20w开始至实验结束的第28W，各组大鼠的逃避潜伏期开始拉开距离，模型组大鼠的逃避潜伏期显著高于其它各组大鼠(P<0.01)，且出现随饲养时间的增加而延长的趋势，组合物各剂量组大鼠的逃避潜伏期均显著低于模型组大鼠(P<0.05)，且随着时间的增加其趋势变化不明显。从大鼠搜索平台的情形来看，与模型组大鼠相比较，组合物各剂量组大鼠会在原平台位置附近反复搜索多次，穿越平台次数明显增加，表现出寻找水下平台的目的性、针对性很强(结果见表4)。
表4.组合物对的高脂血症血管性痴呆模型大鼠空间学习记忆障碍的影响(n＝8)
a P<0.01，与空白对照组相比较；ab P<0.05,b P<0.01，与模型组相比较。
2.2.2组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠海马CA1区组织形态学的影响
HE染色后，光镜下观察可见空白对照组大鼠脑海马CA1区内细胞间隙小，细胞排列整齐，细胞形态完整，细胞核未见明显空泡化；模型组海马CA1区神 经细胞胞体形态不规则，神经元细胞核呈固缩状，可见较明显的空泡化。而组合物高、低剂量组的大鼠神经元细胞形态较模型组大鼠明显改善，核固缩数量也明显少于模型组(P<0.05)。(结果见表5)。
表5.各组大鼠海马CA1区神经元核固缩率(n＝10)
a P<0.01，与空白对照组相比较；ab P<0.05，b P<0.01，与模型组相比较。
2.2.3组合物对高脂血症血管性痴呆大鼠脑内星形胶质细胞的影响
镜下可见空白对照组大鼠海马区域内，GFAP免疫阳性细胞分布稀疏，细胞数目少，细胞体积小，荧光信号弱。与空白照组比较，模型组大鼠海马区域GFAP免疫阳性细胞明显增多，细胞体积较大，胞浆丰富，且多数细胞的分支增粗、增长，细胞整体覆盖面积大，荧光信号强，可以认为模型组大鼠脑内的星状胶质细胞大量活化，用于修复可能的脑神经元受损。而组合物高、低剂量组的大鼠GFAP阳性细胞数目明显少于模型组，荧光信号较弱。由表5可见，空白对照组与组合物干预组海马区的平均光密度值和IOD值均明显小于模型组(P<0.05)。(结果见表6)。
表6.各组大鼠海马区GFAP平均光密度和IOD的结果(n＝10)
a P<0.01，与空白对照组相比较；ab P<0.05，b P<0.01，与模型组相比较。
结论，本发明的组合物能明显改善和延缓高脂血症血管性痴呆模型大鼠的空间学习记忆障碍。其机制与调节脂质代谢，减少脂肪沉积引起的血管栓塞，避免缺血缺氧引起的星形胶质细胞激活和神经元凋亡有关。
综上所述，本发明通过高脂血症血管性痴呆大鼠模型因引起的脂代谢失调诱发高脂血症、粥动脉硬化和认知功能障碍等症状，证实了所述丹参提取物、辅酶Q10和维生素K组合物能纠正机体的脂代谢失衡，减少脂质过氧化物的生成，减少炎症因子的激活，从而改善模型动物产生的主动脉粥样硬化和认知功能障碍。另外，本发明还开拓了组合物新的药物用途，能用于预防或/和治疗心血管疾病和血管性痴呆症的药物或保健食品。值得一提的是：该组合物所制备的预防和/或治疗心血管疾病和血管性痴呆症的药物或保健食品，其给药剂型可用药学上可接受的辅料及常规制剂方法而制成胶囊剂或口服液等剂型。
最后应说明的是：以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，但是凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，其特征在于包括有以下重量百分比的各组分：丹参脂溶性成分8％～24％、辅酶Q10 16％～23％、维生素K 1.2％～3％、玉米油50％～74％。
2.根据权利要求1所述一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，其特征在于包括有以下重量百分比的各组分：丹参脂溶性成分24％、辅酶Q10 23％、维生素K3％、玉米油50％。
3.根据权利要求1或2所述一种含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物，其特征在于：所述丹参脂溶性成分中的主要有效物丹参酮IIA计其含量范围为18％-42％。
4.如权利要求1所述含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物制备方法，其特征在于：按比例分别称取辅酶Q10和维生素K加入到丹参脂溶性成分中，搅拌，使其溶解均匀，加入适量的玉米油，并最终使丹参脂溶性成分的质量分数达到组合物质量的8％～24％，即为所得组合物。
5.根据权利要求4所述含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物制备方法，其特征在于所述丹参脂溶性成分的制备方法包括以下步骤：
S1、取丹参药材，粉碎，过40目筛，得到丹参粉末；
S2、将丹参粉末按1：1的比例加入90％乙醇浸泡8h后，再加入8倍体积的90％乙醇，以40kHZ、50℃超声3次，每次30min，抽滤，合并滤液，减压浓缩成干浸膏；
S3、将干浸膏充分分散于4-6倍体积的2％NaHCO3溶液中，室温25℃下静置24h，后3000rpm/min离心10min，弃上清，保留沉淀物；
S4、沉淀物再分散于2-4倍体积的95％乙醇中，4℃下静置12h，后3000rpm/min离心10min，减压浓缩至无醇味，后加入2-3倍体积的玉米油充分 震荡萃取2次，分取，合并玉米油层，即为所述丹参脂溶性成分。
6.采用权利要求1所述组合物的药物，其特征在于：所述药物包括有药物成分和制药辅料，该药物成分采用权利要求1所述的含丹参脂溶性成分和辅酶Q10的组合物。
7.根据权利要求6所述药物，其特征在于：所述药物软胶囊剂、乳剂、口服液。
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