TWI466676B - 一種大和當歸萃取物之用途 - Google Patents

Description

一種大和當歸萃取物之用途

本發明係關於一種當歸萃取物，特別係一種具有抑制脂肪肝之大和當歸萃取物、該大和當歸萃取物之製備方法及包含該大和當歸萃取物之醫藥組合物。

根據病理生理學的研究，當肝細胞內所含之脂質(尤其係指三酸甘油脂)超過肝臟重量的5%，或者，在肝組織學上，每單位面積呈現30%以上的脂肪變性時，則在臨床上可稱為「脂肪肝」。

據統計，台灣成人脂肪肝的盛行率約在25~36%之間，然而，由於脂肪肝的臨床病症不明顯，通常為非特異性的腸胃道疾病病徵，例如：上腹部不適感或疼痛、食慾不振、全身倦怠、腹脹(尤其是上腹部)或肝區有壓痛感，因此，許多人已罹患脂肪肝卻不自知，唯有在發生急性肝腫大、猛爆性肝炎時，或者接受腹部超音波檢查時，才會發現自己已罹患脂肪肝。

導致脂肪肝的原因包括長期多量飲酒、營養過量或不足、過度肥胖、肥胖型糖尿病罹患者(其脂肪肝罹患率高達80%)，或長期服用含類固醇藥物者，皆可能引發脂肪肝。雖然過去臨床醫學認為，脂肪肝不需要藥物治療，只要了解脂肪肝患者的病因，在去除病因、配合飲食控制及加強脂肪肝患者的運動量之後，以患者的自癒能力即可使脂肪細胞的三酸甘油脂隨著時間緩解而消除。

然而，醫學界對於脂肪肝的消極態度卻容易使脂肪肝患者因長期的血脂偏高、血液混濁及血流流速降低，造成循環變差，進而衍生出心臟血管疾病，如不加以改善脂肪肝的狀況，更可能使脂肪肝患者衍生其他肝臟合併症，如慢性肝炎、猛爆性肝炎、肝硬化或肝癌，而造成無法挽回的後果。

雖然以患有高血脂症的脂肪肝患者而言，習知降血脂藥物雖然能夠有效降低血液中的血脂含量，然而，習知降血脂藥物卻無法有效清除肝臟中脂肪的含量，而在長期大量使用習知降血脂藥物的情況下，更提高脂肪肝患者的肝毒性；此外，非高血脂症的脂肪肝患者由於不具有高血脂的臨床病症，更無法以習知降血脂藥物作為抑制脂肪肝之用。由上述可知，目前為止並未有一種醫藥組合物係能夠有效抑制脂肪肝。

本發明之主要目的係提供一種抑制脂肪肝之大和當歸萃取物，係藉由抑制生物體內的脂質蓄積於肝臟細胞內，進而有效抑制脂肪肝形成。

本發明之次一目的係提供一種含有大和當歸萃取物之醫藥組合物，該醫藥組合物係包含由天然草本植物-大和當歸所萃取而得，其對生物體不具有肝毒性。

為達到前述發明目的，本發明所運用之技術內容包含有：一種大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥 物的用途，係將一濃縮之大和當歸萃取物投予一生物體，以抑制該生物體之脂肪肝形成；其中，該濃縮之大和當歸萃取物之製備方法係包含：一乾燥步驟，將一大和當歸根部進行乾燥，使該大和當歸根部之含水量降至10%以下，得到一大和當歸乾燥物；及一萃取步驟，以超臨界二氧化碳流體於200~650巴，溫度為50~65℃之條件下萃取該大和當歸乾燥物，得到一大和當歸萃取物；其特徵在於：該大和當歸萃取物係以每天每單位體重之生物體投予150~600毫克/公斤體重，且其投予時間係持續4週。

本發明大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途中，該大和當歸根部包括大和當歸之根頭、主根、支根或根梢。

本發明大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途中，該濃縮之大和當歸萃取物係以口服方式投予該生物體。

本發明大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途中，該濃縮之大和當歸萃取物之劑型係錠劑、膠囊、粉劑、粒劑或液劑。

為讓本發明之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本發明之較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：本發明抑制脂肪肝之大和當歸萃取物不僅具有降低血脂中總膽固醇、總三酸甘油脂及高密度脂蛋白膽固醇之 功效外，該大和當歸萃取物更能夠抑制生物體內的三酸甘油脂累積於肝臟細胞內，並且促進肝臟細胞的脂質代謝正常，進一步達到抑制生物體發生脂肪肝。

請參照第1圖所示，本發明抑制脂肪肝之當歸萃取物係選擇但不限定經由下列方式製備，該當歸萃取物之製備方法係包含一乾燥步驟S1及一萃取步驟S2，該當歸萃取物之製備方法係由本發明所屬技術領域者能夠適當修飾而進行。

該乾燥步驟S1係將當歸根部進行乾燥，使該當歸根部之含水量降至10%以下，得到一當歸乾燥物。更詳言之，該乾燥步驟S1可選擇但不限定以冷凍乾燥處理、噴霧乾燥處理、蒸發處理或加熱乾燥處理方式進行乾燥。本發明所指之當歸可以選擇為大和當歸(Angelica acutiloba Kitagawa)、北海當歸(Angelica actiloba Kitagawa var.sugiyamae Hikino)、朝鮮當歸(Angelica koreana Max)或中華當歸(Angelica sinensis Oliv.)等品種之其中一種，且該當歸根部較佳係取當歸之根頭、主根、支根或根梢進行萃取；本實施例係以乾淨的大和當歸(Angelica acutiloba Kitagawa)根部進行冷凍乾燥，得到該當歸乾燥物。當歸之味性甘、辛且性溫，入心、肝及脾經，當歸所含之阿魏酸(Ferulic acid)及槀本內酯(Ligustilide)係其主要活性成分，具有抗菌、抗氧化、抗發炎及抗癌之功用，其中，阿魏酸具有良好抗氧化和清除自由基作用，亦降低脂肪過氧化而減少血脂形成，更具有抑制肝臟合成膽固醇之功用。藉由該乾燥步驟S1濃縮該當歸中的活性成分，以提升 該萃取步驟S2之萃取效率。

該萃取步驟S2係以一溶劑萃取該當歸乾燥物，得到一當歸萃取物。舉例而言，該萃取步驟S2可以選擇但不限定為水萃取法、有機溶劑萃取法或超臨界流體萃取法(Supercritical fluid extraction)等，請參照第2圖所示，以水萃取法或有機溶劑萃取法進行萃取者，該當歸之活性成分係存在於水或有機溶劑(例如酒精)中，則須另以一濃縮步驟S21進行濃縮，方能得到該當歸萃取物，該濃縮步驟S21係可選擇但不限定為冷凍乾燥處理、噴霧乾燥處理、蒸發處理或加熱乾燥處理。本實施例係選擇但不限定以一超臨界流體萃取系統(1000 Bar Extraction Pilotplant)，將超臨界二氧化碳流體於200~650巴(Bar)，溫度為50~65℃之條件下，對該當歸乾燥物進行萃取後，萃取後的超臨界二氧化碳流體轉變為氣相後而直接得到一當歸萃取物，該當歸萃取物係不含溶劑，因此，不需要另外進行該濃縮步驟S21即可取得含有當歸活性成分之當歸萃取物，以便於將該當歸萃取液製備成一具有抑制脂肪肝之醫藥組合物。

為證實本發明當歸萃取物具有抑制脂肪肝之功效，遂以該當歸萃取物進行「高膽固醇血症動物模式」之試驗，並紀錄該高膽固醇血症動物模式之體重、總膽固醇(Total cholesterol，簡稱TC)、總三酸甘油脂(Total triglyceride，簡稱TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein cholesterol，簡稱LDL-C)及高密度脂蛋白膽固醇(High-density lipoprotein cholesterol，簡稱HDL-C)，並以 該高膽固醇血症動物模式之肝臟組織切片了解其脂肪肝之改善情形。

本實施例係以購自國家實驗動物繁殖及研究中心的Golden Syrian雄性倉鼠(四週大，體重約100~150克)並將該倉鼠誘導成為高膽固醇血症動物模式，其中，該倉鼠係飼養於溫度(25±1℃)、光照(日照時間12小時)皆維持於正常範圍之環境，使倉鼠自由進食及飲水，並定時記錄其進食量及體重。

請參照第1及2表所示，本實施例係取四週大之5組倉鼠(每組8隻)進行本試驗，其中1組(第A0組)係以正常飼料(18%粗蛋白質、10%水份、6%粗脂肪、6%粗灰份、6%粗纖維及54%可溶性無窒素物)作為正常倉鼠之對照組，其餘4組(第A1至A4組)係以一高膽固醇飼料(包含1%膽固醇之TestDiet® 5TJT高膽固醇飼料)作為日常營養來源，以誘導各組倉鼠成為高膽固醇血症倉鼠(Hyperlipidemic hamster，簡稱HL倉鼠)，待飼養4週後(八週大之倉鼠)，測量各組倉鼠之體重及血脂參數(包括TC、TG、LDL-C及HDL-C)，其中TC值大於200mg/dl，TG值大於150mg/dl，LDL-C值大於130mg/dl，HDL-C值小於40mg/dl者，代表該倉鼠成功誘導為HL倉鼠。

本實施例係以第A0組之正常倉鼠做為對照組，第A1至A4組之倉鼠於八週大時皆誘導成為HL倉鼠，第A0組持續餵食正常飼料，第A1至A4組持續餵食高膽固醇飼料，各組倉鼠於實驗期間(4週)以第3表所示之條件，分別餵食空白載劑-水(第A0及A1組)、150毫克/公斤體重/天(mg/kg/day)之當歸萃取物(第A2組)、300mg/kg/day之當歸萃取物(第A3組)及600mg/kg/day之當歸萃取物(第A4組)，待飼養4週後(十二週大之倉鼠)， 測量各組倉鼠之血脂參數(包括TC、TG、LDL-C及HDL-C)。

請參照第3表所示，第A0組之正常倉鼠在餵食水或當歸萃取物後之體重及各血脂參數皆維持正常；請參照第3表及第3至7圖所示，第A2至A4組倉鼠之體重及各血脂參數皆較第A1組倉鼠為低，其中，第A2至A4組倉鼠之體重較第A1組倉鼠降低40~55克(第3圖)，第A2至A4組倉鼠之TC較第A1組倉鼠降低約95~110mg/dl(第4圖)，第A2至A4組倉鼠之TG較第A1組倉鼠降低約70~95mg/dl(第5圖)，第A2至A4組倉鼠之LDL-C較第A1組倉鼠增加約0.9~1.2mg/dl(第6圖)，第A2至A4組倉鼠之HDL-C較第A1組倉鼠降低約60~76mg/dl(第7圖)；本實施例証實第A2至A4組倉鼠之體重、TC、TG及HDL-C與第A1組相較皆具有顯著差異(p >0.05)。

由上述可知，本發明之當歸萃取物確實能夠抑制高膽 固醇血症動物的各血脂參數，特別係能夠有效抑制TC及TG。

為證實本實施例之高膽固醇血脂動物模式經由上述之實驗條件後，其肝臟確實誘發形成脂肪肝，並且藉由本發明之當歸萃取物抑制該高膽固醇血脂動物發生脂肪肝，本實施例係將第A0至A4組倉鼠於實驗4週後(即十二週大之倉鼠)犧牲，並取各組倉鼠之肝臟以製作組織切片，觀察各組HL倉鼠肝臟發生脂肪肝的病變情形，其中包括水腫變性(Hepatocellular hydropic degeneration)、中央小葉壞死(Central lobular necrosis)、肝臟脂質沉積(Hepatic lipidosis)及肝纖維化(Hepatic fibrosis)等組織切片的病理特徵。

請參照第8至12圖所示，分別為第A0至A4組倉鼠肝臟組織的HE染色切片圖(放大倍率為200×)，其中，為降低各組倉鼠之個體誤差，本實施例之肝臟切片皆取其肝臟最大右葉中約略為同一位置之肝臟組織(面積約為1cm² )，以10%中性福馬林溶液固定後，以石蠟包埋後進行組織切片，再以蘇木紫與伊紅染色法(Hematoxylin and eosin stain，簡稱HE染色)進行染色，並檢視各組肝臟組織切片的水腫變性、中央小葉壞死、肝臟脂質沉積及肝纖維化等病理症狀，並以上述之評量分數判斷各組別倉鼠之肝臟組織發生脂肪肝的情形。

肝臟脂質沉積之病理特徵：第8至12圖之肝臟組織中所含的空泡為脂肪，該空泡面積越多代表該肝臟組織之肝臟脂質沉積程度越嚴重，其中，第A1組之肝臟組織單 位面積下之空泡比例約為84%，第A2組約為64%，第A3組約為52%，第A4組約為40%，其中，第A2至A4組之空泡比例較第A1組少且具有顯著差異(p <0.05)，又以第A4組肝臟組織之空泡比例已接近正常倉鼠(第A0組)的肝臟組織樣態；由此可證實，本發明當歸萃取物確實能夠達到抑制高膽固醇血脂動物出現肝臟脂質沉積之病理特徵。

水腫變性之病理特徵：細胞新陳代謝異常時，細胞內吸入過多液體而腫脹，於病理切片中可發現細胞質內含有許多小水泡或透明液體，此為可逆性反應，病因及時去除即可恢復。

中央小葉壞死之病理特徵：是指位於肝臟中央靜脈區細胞發生壞死，該壞死細胞的細胞核濃縮，且細胞質變嗜伊紅性，此為不可逆性反應。

肝纖維化之病理特徵：肝臟中央靜脈區之肝細胞大量壞死，且壞死區域由結締組織取代，為不可逆性反應。

為將水腫變性、中央小葉壞死、肝臟脂質沉積及肝纖維化等病理症狀量化，本實施例係委請病理科醫師在不了解各組別試驗之情形下，對第8至12圖進行各種病理症狀評量，各種病理症狀之評量標準如下：0分代表沒有發生病症，1分代表該組織切片單位面積下有25%以下之組織發生病症，2分代表該組織切片單位面積下有25~50%以下之組織發生病症，3分代表該組織切片單位面積下有50~75%以下之組織發生病症，4分代表該組織切片單位面積下有75%以上之組織發生病症。

請參照第4表所示，係關於第A0至A4組倉鼠肝臟組織之水腫變性、中央小葉壞死、肝臟脂質沉積及肝纖維化等病理症狀評量表，其中，第A2至A4組之各病理症狀評量值皆與第A1組之間具有顯著差異(p <0.05)，其中又以第A4組為佳，證實本發明當歸萃取物確實能夠抑制高膽固醇血脂動物發生脂肪肝所具有之病理特徵，且本發明當歸萃取物之施用劑量較佳係每日施予每個體單位體重150~600mg/kg。

由上述可知，高膽固醇血脂動物在餵食本發明大和當歸萃取物後，能夠抑制高膽固醇血脂動物之肝臟細胞中的總膽固醇、總三酸甘油脂及高密度脂蛋白膽固醇之含量，並且，本發明之大和當歸萃取物能夠有效防止高膽固醇血脂動物的肝臟組織形成脂肪肝，具有保護個體肝臟之功效。

本發明之大和當歸萃取物係藉由阿魏酸具有抑制脂質過氧化效果，而能夠降低肝臟中總膽固醇、總三酸甘油脂及高密度脂蛋白膽固醇之含量，進而抑制生物體脂肪肝 的形成，特別係將一有效劑量之大和當歸萃取物用於製備抑制生物體脂肪肝之醫藥組合物，該大和當歸萃取物與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑組合形成該醫藥組合物，其中，該大和當歸萃取物係可以製備適合以口服方式投與個體之型式，如錠劑、膠囊、粉劑、粒劑或液劑等，或者將該當歸萃取物與其他食品或飲料組合，以一適於食用之樣態供生物體以口服方式服用。本發明包含該大和當歸萃取物之醫藥組合物中，該大和當歸萃取物之劑量較佳係每單位體重之個體投予150~600毫克/公斤體重，且其施予時間可持續4週，以達到控制生物體之脂肪肝形成之功效；此外，該醫藥組合物係來自天然草本植物-當歸所萃取而得，因此對於生物體溫和且不具毒性，使用者不需擔心該醫藥組合物具有肝毒性，而能提高使用者服用該醫藥組合物之意願。

本發明提供一種抑制脂肪肝之大和當歸萃取物，係藉由抑制生物體內的脂質蓄積於肝臟細胞內，進而有效抑制脂肪肝的形成，具有保護個體肝臟之功效。

本發明提供一種含有大和當歸萃取物之醫藥組合物，係包含由天然草本植物-當歸所萃取而得，該醫藥組合物對於使用者而言不具有肝毒性，不僅具有保護各體肝臟之功效，更能提升使用者服用該醫藥組合物意願之功效。

雖然本發明已利用上述較佳實施例揭示，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者在不脫離本發明之精神和範圍之內，相對上述實施例進行各種更動與修改仍屬本發明所保護之技術範疇，因此本發明之保護範圍當視後附 之申請專利範圍所界定者為準。

S1‧‧‧乾燥步驟

S2‧‧‧萃取步驟

S21‧‧‧濃縮步驟

第1圖：本發明抑制脂肪肝之大和當歸萃取物之製備步驟方塊圖。

第2圖：本發明抑制脂肪肝之大和當歸萃取物之製備步驟方塊圖。

第3圖：本實施例第A0至A4組倉鼠之體重長條圖。

第4圖：本實施例第A0至A4組倉鼠之總膽固醇長條圖。

第5圖：本實施例第A0至A4組倉鼠之總三酸甘油脂長條圖。

第6圖：本實施例第A0至A4組倉鼠之低密度脂蛋白膽固醇長條圖。

第7圖：本實施例第A0至A4組倉鼠之高密度脂蛋白膽固醇長條圖。

第8圖：本實施例第A0組倉鼠肝臟組織HE染色切片圖。

第9圖：本實施例第A1組倉鼠肝臟組織HE染色切片圖。

第10圖：本實施例第A2組倉鼠肝臟組織HE染色切片圖。

第11圖：本實施例第A3組倉鼠肝臟組織HE染色切片圖。

第12圖：本實施例第A4組倉鼠肝臟組織HE染色切片圖。

S1‧‧‧乾燥步驟

S2‧‧‧萃取步驟

Claims (4)

1. 一種大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途，係將一濃縮之大和當歸萃取物投予一生物體，以抑制該生物體之脂肪肝形成；其中，該濃縮之大和當歸萃取物之製備方法係包含：一乾燥步驟，將一大和當歸根部進行乾燥，使該大和當歸根部之含水量降至10%以下，得到一大和當歸乾燥物；及一萃取步驟，以超臨界二氧化碳流體於200~650巴，溫度為50~65℃之條件下萃取該大和當歸乾燥物，得到一大和當歸萃取物；其特徵在於：該大和當歸萃取物係以每天每單位體重之生物體投予150~600毫克/公斤體重，且其投予時間係持續4週。
2. 如申請專利範圍第1項所述之大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途，其中，該大和當歸根部包括大和當歸之根頭、主根、支根或根梢。
3. 如申請專利範圍第1項所述之大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途，其中，該濃縮之大和當歸萃取物係以口服方式投予該生物體。
4. 如申請專利範圍第1項所述之大和當歸萃取物用以製備抑制脂肪肝形成之藥物的用途，其中，該濃縮之大和當歸萃取物之劑型係錠劑、膠囊、粉劑、粒劑或液劑。