CN105873946A - 交叉反应性金黄色葡萄球菌抗体序列 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种交叉中和抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α‑毒素(Hla)及双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体包括抗体重链可变区(VH)的至少三个互补决定区(CDR1至CDR3)，其中：A)所述抗体包括：a)CDR1，包括氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQ ID 1)或由氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQ ID 1)组成；及b)CDR2，包括氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)或由氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)组成；及c)CDR3，包括氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)或由氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)组成；或B)所述抗体包括以下CDR的至少一种功能性活性CDR变体：a)由氨基酸序列SEQ ID 1组成的亲代CDR1；或b)由氨基酸序列SEQ ID 2组成的亲代CDR2；或c)由氨基酸序列SEQ ID 3组成的亲代CDR3；其中所述功能性活性CDR变体在亲代CDR序列中包括至少一个点突变，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列或由这样的氨基酸序列组成。本发明进一步涉及是亲代抗体的功能性活性变体抗体的交叉中和抗体，所述亲代抗体包括SEQ ID 20的VH氨基酸序列，及SEQ ID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点，所述功能性活性变体抗体在SEQ ID 20或SEQ 39任一个的任何构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)中包括至少一个点突变，与每种毒素结合的亲和力Kd小于10‑8M，优选小于10‑9M。
Description
本发明涉及交叉中和抗体，包括与金黄色葡萄球菌的α毒素(Hla)及双-组分毒素中的至少一种毒素结合的至少一个多特异性结合位点，其特征在于特异性氨基酸序列。
背景技术
金黄色葡萄球菌感染是未攻克的重大医疗问题。金黄色葡萄球菌是相关感染最常见的原因之一，在发展为肺炎、菌血症和/或脓毒病的患者中，死亡率特别高。另一点引起关注的是抗生素耐药克隆(与医院和社区有关的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：HA-和CA-MRSA)的发展，突显了人们对新型治疗方法的需求。
新的抗生素无法解决这种医学问题，很大一部分原因是由于耐药性发展迅速及抗生素无法消除毒性机理，例如引起严重感染患者疾病恶化和死亡的溶细胞效应。人们进行了多种尝试，试图通过预防免疫接种或被动免疫接种(即施用单克隆抗体mAbs)来诱导保护性免疫。这些努力的目的是通过吞噬细胞增强调理吞噬吸收和杀灭细菌，然而，在临床应用中，仍无法预防或治疗金黄色葡萄球菌感染。
人们最近发现，外毒素是金黄色葡萄球菌感染发病的主要原因，因此，人们找到了新的免疫预防和治疗方法。根据Beribe和Bubeck Wardenburg的综述，在金黄色葡萄球菌疾病的动物模型中，α-溶血素(Hla，或α-毒素)表现为损害上皮细胞和内皮细胞的主要毒力因子，并且其被证明是疫苗抗原和单克隆抗体靶(Berube BJ,Toxins(Basel).2013 5(6):1140)。新近，已在人体试验中对Hla的主动免疫情况和被动免疫情况进行了评估。
Wardenburg等(The Journal of Experimental Medicine 2008,205(2):287-294)描述了基于Hla突变体形式的疫苗主动免疫情况，它们无法形成孔并且无法产生抗原-特异性免疫球蛋白G应答。
Lin等(Expert Review of Clinical Pharmacology 2010,3(6):735-767)描述了葡萄球菌感染的毒力因子和发病机理，并讨论了包括疫苗在内的最新发展情况。
Heveker等(Human Antibodies and Hybridomas 1994,5(1-2):18-24)描述了采用杂交瘤技术制备的抗葡萄球菌α-毒素的人单克隆抗体。采用这种抗α-毒素的抗体时，由于金黄色葡萄球菌的双组分毒素并不包含α-毒素，且其与α-毒素明显不同，因此，这种抗体无法靶向金黄色葡萄球菌双组分毒素中的任何毒素。
Ragle等(Infection and Immunity 2009,77(7):2712-2718)描述了能够阻止形成稳定的α-毒素低聚物的抗α-毒素单克隆抗体。同样，这种α-毒素抗体无法靶向双组分毒素中的任何毒素。
双组分毒素家族的成员，γ-溶血素(HlgAB和HlgCB)、Panton Valentine杀白细胞素(PVL或LukSF)、LukED和LukGH/LukAB可以溶解人吞噬菌细胞(phagotyic cell)，从而与逃避天然免疫有关，这是金黄色葡萄球菌发病机理的标志。此外，HlgAB是人红细胞的强效毒素，据最新报道，LukED通过CXC5受体靶向人T细胞(Alonzo,Nature 2013,493:51-55)。HlgAB和LukED对鼠科动物全身性感染及脓肿模型中的金黄色葡萄球菌的毒力有贡献，而PVL/LukSF仅在兔子模型中有作用(根据Alonzo PLoS Pathog的综述。2013,9(2):e1003143)。
绝大多数金黄色葡萄球菌临床分离物表达Hla、HlgAB和HlgCB，其中大约40-75％是LukED。LukSF/PVL毒素被5-10％菌株中存在的噬菌体编码，与更严重的疾病表现有关(根据Vandenesch的综述，Front Cell Infect Microbiol.2012,2:12)。
据两个独立的研究小组(Adhikari,J Infect Dis.2012,206:915；Fritz,ClinInfect Dis.2013,56(11):1554)报道，根据基因流行分布和血清流行病学研究对这些外毒素对人金黄色葡萄球菌疾病的作用进行了研究，后者表明，高血清抗体水平和良好的临床结果有关联。因此，推测采用外毒素中和单克隆抗体补充人血清抗体集，可以降低死亡率，特别是降低这些毒素中和IgG内源水平较低的患者的死亡率。
杀白细胞素单独分泌的非活性形式的–两个亚基：S-组分和F-组分在结构上高度相关，氨基酸一致性高达80％。与靶细胞结合后，这些双组分毒素亚基和Hla都形成类似筒形的低聚孔复合物，虽然氨基酸序列保守性较低(<28％)，但仍然具有类似的结构。
Gouaux等(Protein Science 1997,6:2631-2635)描述了α-毒素、γ-溶血素和杀白细胞素的序列差别和结构类似性。
已经确定了Hla、LukS、LukF、HlgA和HlgB的晶体结构，表明尽管Hla和双组分毒素亚基之间的氨基酸同源性较低，氨基酸一致性为16-28％，但是，仍然显示出某种结构同源性(Galdiero,Protein Sci,2004:1503；Pedelacq,Structure,1999:277；Menestrina,FEBSLetters,2003:54)。所有这些毒素均通过低聚亚基形成类-环结构，导致在细胞膜内形成孔，随后发生细胞溶解。已经表明，当为Hla时，这些孔是七聚体，但是，据报道，当为双组分毒素时，这些孔是六聚体(Comai,Mol Microbiol,2002,44:1251)、七聚体和八聚体(Yamashita,PNAS,2011,108:17314)异源低聚物(详细情况见Kaneko的综述，BiosciBiotechnol Biochem,2004,68:981)。
这种毒素家族不同的F-组分和S-组分不仅可以构成同源对(它们是：LukS-LukF、LukE-LukD、HlgC-HlgB、HlgA-HlgB和LukH-LukG)，而且还可以构成非同源对，Gravet等(Gravet,FEBS Letters,1998,436:202)对其中的许多对进行了报道，Dalla Serra等(Dalla Serra,J Chem Inf Model,2005,45:1539)对γ溶血素和LukS进行了报道。由于这种毒素家族既多且杂乱的性质，使单一组分失活不可能有效对付金黄色葡萄球菌感染。这一观点得到了文献结果的支持，中和单个双组分毒素仅部分影响显型(例如，Ventura,PloSONE,2010,5:e11634；Malachowa,PloS ONE,2011,6:e18617)。动物研究表明，根据采用的模型或体内实验所用的物种，不同的双组分毒素对存活的影响不同。当消除多种毒素时，观察到疾病严重程度显著减轻，例如，在采用金黄色葡萄球菌敲出菌株，其中agr群体感应系统-毒素表达全局调控因子失活的兔子感染模型中，情况就是如此(Kobayashi,J Infect Dis,2011,204:937)。因此，据推测与抗单一毒素的mAbs相比，中和更多毒素的抗体组合具有显著的优势。但是，开发含三个以上组分的单克隆抗体(mAb)组合是一种挑战。
US 2011/274692A1描述了对LukA或LukB具有特异性的抗体，但是，并没有描述这些抗体的交叉反应性。
人们认为，由于Hla和双组分毒素之间的序列同源性较低(<28％)，很难找到在α溶血素和双组分毒素中的任何一种毒素之间交叉反应的单个抗体。由于除LukGH与S-组分或F-组分中任一组分的氨基酸一致性是30-40％之外，S-组分和F-组分的序列同源性水平更高()，因此，推测发现在S-组分和F-组分之间交叉反应的单个抗体的机会更高。已有描述称LukS免疫动物的超免疫血清可以识别HLgC，但是，这是由于多克隆血清中存在不同的特异性。Laventie等(Laventie,PNAS,2011,108:16404)描述了与HlgC交叉反应的抗LukS的双-特异性抗体。总之，到目前为止，未报道抗不同双组分金黄色葡萄球菌毒素或抗α溶血素及双-组分毒素中任何毒素的交叉反应性mAbs。
由于金黄色葡萄球菌复杂的发病机理，因此，需要开发一种能够使几种外毒素失活的抗体，显著提高抗-金黄色葡萄球菌治疗的效力。
发明内容
本发明的目的是提供具有改善的交叉反应性或交叉中和效力的抗不同金黄色葡萄球菌细胞毒素的抗体。特别地，本发明的目的是提供一种对至少2种、3种或4种不同毒素分子，特别是Hla、HlgB、LukF和LukD，具有纳摩尔或亚-纳摩尔亲和力的单克隆抗体。具体来讲，本发明的目的涉及一种抗体，在相关动物模型中，与单毒素特异性抗体相比，该抗体体外抗Hla和多种双-组分杀白细胞素的中和效力较高并且具有改善的保护效果。
本发明的目的通过本发明的主题实现。
根据本发明，提供一种交叉中和抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)及双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体包括抗体重链可变区(VH)的至少三个互补决定区(CDR1至CDR3)，其中：
A)所述抗体包括：
a)CDR1，包括氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQ ID 1)或由氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQID 1)组成；及
b)CDR2，包括氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)或由氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)组成；及
c)CDR3，包括氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)或由氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)组成；
或
B)所述抗体包括以下中的至少一种功能性活性CDR变体：
a)由氨基酸序列SEQ ID 1组成的亲代CDR1；或
b)由氨基酸序列SEQ ID 2组成的亲代CDR2；或
c)由氨基酸序列SEQ ID 3组成的亲代CDR3；
其中所述功能性活性CDR变体包括在亲代CDR序列中的至少一个点突变，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性，优选具有至少70％、至少80％、至少90％序列一致性的氨基酸序列，或者由与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性，优选具有至少70％、至少80％、至少90％序列一致性的氨基酸序列组成。
具体地，抗体并不是在先技术中的抗体，比如通过以DSM 26748保藏的宿主细胞和以DSM 26747保藏的宿主细胞产生的抗体。具体地，本发明的抗体并不是采用包括以下链的宿主细胞产生的抗体#AB-24：
i)命名为#AB-24-LC的抗体轻链，其编码序列包括在以DSM 26748保藏的宿主细胞内，及
ii)命名为#AB-24-HC的抗体重链，其编码序列包括在以DSM 26747保藏的宿主细胞内。
但是，本发明的抗体可以是，例如，在任何FR和/或任何CDR序列中具有不同的氨基酸序列的任何在先技术抗体的任何功能性变体。特别是，本发明的抗体可以是抗体#AB-24的任何功能性变体，具有与抗体#AB-24相同的表位特异性。
命名为#AB-24的抗体的特异性变体明确地包括在本发明权利要求的主题中，包括但不限于CDR变体、FR变体、鼠科变体、嵌合变体、人源化变体或人变体，或不同于由保藏材料的LC和HC组成的组合的任何抗体结构域组合，例如，包括相同CDR1-6或VH/VL组合但具有不同FR序列的抗体，包括，例如，各种类型的全长抗体、Fab、scFv等。
根据一具体方面，本发明提供一种分离的单克隆抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)及双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，例如，所述抗体具有与命名为#AB-24的抗体相同的结合特异性，或源自命名为#AB-24并与命名为#AB-24的抗体交叉竞争的抗体，或命名为#AB-24的抗体的功能性活性变体，优选地其中所述命名为#AB-24的抗体的特征在于：
a)抗体轻链，其编码序列包含在已用于转化宿主细胞的质粒内，其中所述转化宿主细胞以DSM 26748保藏；和/或
b)抗体重链，其编码序列包含在已用于转化宿主细胞的质粒内，其中所述转化宿主细胞以DSM 26747保藏。
具体地，命名为#AB-24的抗体由抗体轻链和抗体重链组成，抗体轻链包括可变区或LC，该可变区或LC以保藏号DSM 26748保藏的大肠杆菌宿主细胞中所含质粒的编码序列编码，抗体重链包括可变区或HC，该可变区或HC以保藏号DSM 26747保藏的大肠杆菌宿主细胞中所含质粒的编码序列编码。
具体地，功能性活性CDR变体包括以下中的至少一种：
a)亲代CDR序列的1、2或3个点突变；或
b)亲代CDR序列的任何四个C-端或四个N-端，或四个中心氨基酸位置的1或2个点突变。
具体地，功能性活性CDR变体是以下中的任一种：
a)CDR1序列，选自由YPISSGMGWG(SEQ ID 4)和YSISSGMGWD(SEQ ID 5)组成的组；或
b)CDR2序列，选自由SVDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 6)、RIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID7)、RVDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 8)、SIDQRGSTYYNPSLEG(SEQ ID 9)和SIDQRGSTYYNPPLES(SEQ ID 10)组成的组；或
c)CDR3序列，选自由ARDAGHGADMDV(SEQ ID 11)和ARDAGHAVDMDV(SEQ ID 12)组成的组。
具体地，所述抗体的特征在于CDR序列，其中：
a)在VH CDR1中的位置5，氨基酸残基选自由S、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W和Y组成的组，优选H、R和W中的任一个；
b)在VH CDR1中的位置7，氨基酸残基选自由M、H、K、Q、R和W组成的组，优选K、R或W中的任一个；
c)在VH CDR2中的位置3，氨基酸残基选自由D和R组成的组；
d)在VH CDR2中的位置7，氨基酸残基选自由S、A、D、E、F、H、K、M、N、Q、R、T、W和Y组成的组，优选D、H、K、N或Q中的任一个，更优选是Q；
e)在VH CDR2中的位置9，氨基酸残基选自由Y、F、K、L、Q和R组成的组，优选是R；
f)在VH CDR3中的位置5，氨基酸残基选自由G、A、D、F、H、I、M、N、R、S、T、V和Y组成的组，优选D、F、H、I、M、N、R、T、V或Y中的任一个；
g)在VH CDR3中的位置6，氨基酸残基选自由H、E、Q和S组成的组，优选E或Q中的任一个；
h)在VH CDR3中的位置7，氨基酸残基选自由G、A、D、E、H、I、M、N、Q、S、T、V和W组成的组，优选是W；和/或
i)在VH CDR3中的位置8，氨基酸残基选自由V、A、D、E、G、I、K、L、M、Q、R、S和T组成的组，优选M或R中的任一个。
根据一个具体实施例，所述抗体选自由下述序列组成的组：
a)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 6的CDR2序列；及
c.SEQ ID 11的CDR3序列；
b)抗体，包括：
a.SEQ ID 4的CDR1序列；及
b.SEQ ID 7的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
c)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 8的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
d)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 2的CDR2序列；及
c.SEQ ID 12的CDR3序列；
e)抗体，包括：
a.SEQ ID 5的CDR1序列；及
b.SEQ ID 9的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
f)抗体，包括：
a.SEQ ID 5的CDR1序列；及
b.SEQ ID 10的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
根据一个具体的方面，所述抗体包括选自由SEQ ID 20–31组成的组中的VH氨基酸序列。
根据一个具体的方面，所述抗体包括选自由SEQ ID 40–-51组成的组中的抗体重链(HC)氨基酸序列，或删除C-端氨基酸的SEQ ID 40–51中的任何氨基酸序列，或特别是删除C-端赖氨酸的SEQ ID 40–51中的任何氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 40–51示出了通过信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 40示出了包括SEQ ID 20的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 41示出了包括SEQ ID 21的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 42示出了包括SEQ ID 22的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 43示出了包括SEQ ID 23的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 44示出了包括SEQ ID 24的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 45示出了包括SEQ ID 25的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 46示出了包括SEQ ID 26的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 47示出了包括SEQ ID 27的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 48示出了包括SEQ ID 28的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 49示出了包括SEQ ID 29的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 50示出了包括SEQ ID 30的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
具体地，SEQ ID 51示出了包括SEQ ID 31的VH氨基酸序列且由信号序列N-端延伸的HC序列。应该理解的是，具体的抗体包括带有或不带相应的信号序列的所述VH或HC氨基酸序列，或带有替代信号序列或前导序列的所述VH或HC氨基酸序列。
根据一个具体方面，每个HC序列在恒定区可以是末端延伸的或删除的，例如，删除一个或多个或C－端氨基酸。
具体地，包括C－端赖氨酸残基的每个HC序列优选在使用时删除该C-端赖氨酸残基。
根据一个具体实施例，抗体进一步包括抗体轻链可变区(VL)的至少三个互补决定区(CDR4至CDR6)，优选地其中：
A)所述抗体包括：
a)CDR4，包括氨基酸序列RASQGISRWLA(SEQ ID 32)或由氨基酸序列RASQGISRWLA(SEQ ID 32)组成；及
b)CDR5，包括氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID 33)或由氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID33)组成；及
c)CDR6，包括氨基酸序列QQGYVFPLT(SEQ ID 34)或由氨基酸序列QQGYVFPLT(SEQID 34)组成；
或
B)所述抗体包括以下中的至少一种功能性活性CDR变体：
a)由氨基酸序列SEQ ID 32组成的亲代CDR4；或
b)由氨基酸序列SEQ ID 33组成的亲代CDR5；或
c)由氨基酸序列SEQ ID 34组成的亲代CDR6；
其中功能性活性CDR变体在亲代CDR序列中包括至少一个点突变，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性，优选具有至少70％、至少80％、至少90％序列一致性的氨基酸序列，或者由与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性，优选具有至少70％、至少80％、至少90％序列一致性的氨基酸序列组成。
具体地，所述抗体的特征在于CDR序列，其中：
a)在VL CDR4中的位置7，氨基酸残基选自由S、A、E、F、G、K、L、M、N、Q、R、W和Y组成的组，优选L、M、R或W中的任一个，更优选是R；
b)在VL CDR5中的位置1，氨基酸残基选自由A和G组成的组；
c)在VL CDR5中的位置3，氨基酸残基选自由S、A、D、G、H、I、K、L、N、Q、R、T、V和W组成的组；
d)在VL CDR5中的位置4，氨基酸残基选自由S、D、E、H、I、K、M、N、Q、R、T和V组成的组；优选K、N、Q和R中的任一个；
e)在VL CDR6中的位置3，氨基酸残基选自由G、A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组；
f)在VL CDR6中的位置4，氨基酸残基选自由Y、D、F、H、M、R和W组成的组；
g)在VL CDR6中的位置5，氨基酸残基选自由V、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T和W组成的组；和/或
h)在VL CDR6中的位置6，氨基酸残基选自由F和W组成的组。
根据一个具体方面，本发明的抗体包括图1所列的CDR组合，只要所述抗体仍然是功能性活性的。
具体地，本发明的抗体包括图1所列任何抗体的CDR1-6。但是，根据一个替代实施例，所述抗体可以包括不同的CDR组合，例如，其中图1所列的抗体包括一个抗体的至少一个CDR序列，如1、2、3、4、5或6个CDR序列，和图1所列任意抗体中的不同抗体的至少一个其它CDR序列。根据具体实例，抗体包括1、2、3、4、5或6个CDR序列，其中该CDR序列是1个以上，例如，2、3、4、5或6个不同抗体，的CDR组合。例如，CDR序列可以经组合以优选包括图1所列任意抗体的CDR1-3的1、2或全部3个，以及图1所列相同或任何其它抗体的CDR4-6的1、2或全部3个。
本申请中应清楚理解的是，编号为CDR1、2、3的CDR代表VH结构域的结合区，CDR4、5和6代表VL结构域的结合区。
根据一个具体方面，本发明的抗体包括图1描述的任何HC和LC氨基酸序列组合，或由所述HC和LC氨基酸序列组合形成的结合位点。或者，可以采用两种不同抗体的免疫球蛋白链组合，只要所述抗体仍然是具有功能性活性的。例如，一个抗体的HC序列可以与另一个抗体的LC序列结合。根据另一个具体实施例，图1描述的任何构架区可以作为本申请任何CDR序列和/或VH/VL组合的构架。
应该理解的是，本发明的抗体任选地包括图1所述氨基酸序列，带有或不带相应的信号序列，或带有替代信号序列或前导序列。
根据一个具体方面，图1的每个序列在恒定区可以是末端上延伸的或删除的，例如，删除一个或多个或C－端氨基酸。
图1示出了在任何CDR1、2和/或3类似的12种不同的HC序列，及1种LC序列，并支持任何HC/LC组合，其中一个HC的CDR1-3中的一个，例如CDR1与第二个及任选第三个HC的任何其它CDR序列，例如，分别与第二和第三HC的CDR2和CDR3结合。
根据一个具体方面，抗体包括SEQ ID 39的VL氨基酸序列或SEQ ID 52的抗体轻链(LC)。
具体地，SEQ ID 52示出了LC序列，包括SEQ ID 39的VL氨基酸序列，且其信号序列N-端延伸。应该理解的是，特异性抗体包括所述VL或LC氨基酸序列，带有或不带相应的信号序列，或带有替代信号序列或前导序列。
根据一个具体方面，本发明的抗体包括SEQ ID 20–31的任意VH氨基酸序列，及SEQID 39的VL氨基酸序列，或由所述VH和VL氨基酸序列的组合形成的结合位点。
根据一个具体方面，本发明的抗体包括SEQ ID 40–51的任意HC氨基酸序列，及SEQID 52的LC氨基酸序列，或由所述HC和LC氨基酸序列的组合形成的结合位点。
根据本发明，进一步提供了交叉中和抗体，所述抗体包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体是亲代抗体的功能性活性变体抗体，所述亲代抗体包括SEQ ID 20的VH氨基酸序列，及SEQID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点，所述功能性活性变体抗体在SEQ ID 20或SEQ39任一个的任何构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)中包括至少一个点突变，与每种毒素结合的亲和力Kd小于10-8M，优选小于10-9M，优选小于10-10M，优选小于10- 11M，例如，亲和力为皮摩尔范围。
具体地，功能性活性变体抗体包括本发明的至少一种功能性活性CDR变体。
具体地说，功能性活性变体与亲代抗体(例如，图1所列的任何抗体)的不同之处在于氨基酸序列中(优选CDR中)至少有一个点突变，其中每个CDR氨基酸序列中点突变的数量是0、1、2或3。
具体地，抗体源自所述抗体，采用各CDR序列，或CDR突变体，包括功能性活性CDR变体，例如，在CDR环中，例如，在5-18个氨基酸的CDR长度内，例如，在5-15个氨基酸或5-10个氨基酸的CDR区域内，有1、2或3个点突变。或者，在CDR环中，例如，在小于5个氨基酸的CDR长度内，有1或2个点突变，以提供包括功能性活性CDR变体的抗体。具体CDR序列可能比较短，例如，CDR2或CDR5序列。根据具体实施例，功能性活性CDR变体在由不到4或5个氨基酸序列组成的任何CDR序列中包括1或2个点突变。
根据一个具体方面，本发明的抗体包括CDR序列和构架序列，其中CDR和构架序列中的至少一个序列包括人、人源化、嵌合、鼠科或亲和力成熟的序列，优选其中构架序列具有IgG抗体，例如，具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型，或具有IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM抗体。
特异性抗体作为构架突变抗体提供，例如，用于改善亲代抗体的制备性或耐受性，例如，用于提供具有较低免疫原潜力的改善(突变)抗体，例如，与亲代抗体相比，在任何CDR序列和/或构架序列中存在突变的人源化抗体。
其它特异性抗体作为CDR突变抗体提供，例如，用于改善抗体的亲和力和/或用于靶向亲代抗体靶向的相同表位或亲代抗体靶向表位附近的表位(表位漂移)。
因此，图1所列任何抗体可以作为亲代抗体，用于设计改善的抗体。
具体地，功能性活性变体抗体具有结合与亲代抗体相同表位的特异性。
根据一个具体方面，至少一个点突变是任何氨基酸替换、删除和/或插入一个或多个氨基酸。
具体地，至少一个点突变是以下任一种氨基酸替换：
-CDR2中的S51R或S51K；或
-CDR3中的G103A、V104A或V104S。
具体地，本发明抗体靶向的双组分毒素选自由γ-溶血素(HlgABC)、PVL(LukSF)和PVL-类毒素的F组分和S组分的同源对和非同源对组成的组，优选HlgAB、HlgCB、LukSF、LukED、LukGH、LukS-HlgB、LukSD、HlgA-LukD、HlgA-LukF、LukG-HlgA、LukEF、LukE-HlgB、HlgC-LukD或HlgC-LukF中的任何一个。
根据一个具体方面，抗体具有结合Hla及双组分毒素或包含F-组分的毒素中的至少一种的交叉特异性，优选具有结合其中至少两种或三种毒素，优选Hla和双组分毒素或包含F-组分的毒素中的至少三种F-组分的交叉特异性。
具体地，F-组分选自HlgB、LukF和LukD，或γ-溶血素、PVL毒素和PVL-类毒素的F组分和S-组分的同源对和非同源对的任何F-组分，优选HlgAB、HlgCB、LukSF、LukED、LukS-HlgB、LukSD、HlgA-LukD、HlgA-LukF、LukEF、LukE-HlgB、HlgC-LukD或HlgC-LukF。
具体地，本发明抗体靶向的F-组分是HlgB、LukF和LukD中的任何一种、两种或三种。
优选地，结合位点与至少两种或至少三种双-组分毒素结合，优选地，与HlgAB、HlgCB、LukSF和LukED中任意的至少两种或三种毒素结合，优选地，与HlgAB、HlgCB、LukSF和LukED中的所有毒素结合。
根据一个具体方面，抗体抑制一种或多种毒素与磷酸胆碱或磷脂酰胆碱结合，尤其是与哺乳动物细胞膜的磷脂酰胆碱结合。
根据一个具体方面，细胞分析法测定的抗体体外中和效力IC50低于100:1mAb：毒素(mol/mol)，优选低于50:1，优选低于25:1，优选低于10:1，更优选低于1:1。
根据另一个具体的方面，抗体中和动物(包括人类和非人类的动物)中的靶向毒素，抑制体内金黄色葡萄球菌的发病，优选任何肺炎、菌血症、败血症、脓肿、皮肤感染、腹膜炎、导管和假体器械相关感染及骨髓炎模型。
根据一个具体方面，抗体是全长单克隆抗体、其抗体片段或融合蛋白，其中抗体片段包括至少一个带所述结合位点的抗体区，融合蛋白包括至少一个带所述结合位点的抗体区。优选地，抗体选自鼠科、嵌合、人源化或人抗体、重链抗体、Fab、Fd、scFv和单结构域抗体，如VH、VHH或VL，优选人IgG1抗体。
本发明进一步提供一种包括编码序列的表达盒或质粒，用于表达本发明抗体的轻链和/或重链。
本发明特别提供一种包含编码序列的表达盒或质粒，用于表达：
a)本发明的VH和/或VL抗体；或
b)本发明的HC和/或LC抗体。
本发明进一步提供一种包含本发明表达盒或质粒的宿主细胞。
具体地，不包括其材料以DSM 26747或DSM 26748保藏的质粒和宿主细胞。这些保藏是质粒转化的大肠杆菌宿主细胞，其中以DSM 26748保藏的宿主细胞采用包含命名为#AB-24-LC抗体轻链的核苷酸序列的质粒转化的；以DSM 26747保藏的宿主细胞采用包含命名为#AB-24-HC抗体重链的核苷酸序列的质粒转化的。
特别优选的是宿主细胞和采用所述宿主细胞的制备方法，所述宿主细胞包括：
-本发明的质粒或表达盒，包括表达所述抗体轻链的编码序列；及
-本发明的质粒或表达盒，包括表达所述抗体重链的编码序列；及
本发明进一步提供一种产生本发明抗体的方法，其中将本发明的宿主细胞在一定条件下培养或保持，从而产生所述抗体。
本发明进一步提供一种产生一亲代抗体的功能性活性抗体变体的方法，所述亲代抗体是本发明的任何抗体，例如，是图1列出的抗体，或包括图1所示任何HC和LC氨基酸序列组合，或包括由所述HC和LC氨基酸序列组合形成的结合位点，或包括任何SEQ ID 20-31的VH氨基酸序列，及SEQ ID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点，所述方法包括在SEQ ID20-31或SEQ 39中任一个的构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)设计至少一个点突变，得到变体抗体，并通过以下方法确定变体抗体的功能性活性：
-与金黄色葡萄球菌的Hla及双组分毒素中的至少一种毒素结合的亲和力Kd小于10-8M，优选小于10-9M，优选小于10-10M，优选小于10-11M，例如，亲和力为皮摩尔范围，和/或
-变体抗体与Hla或双组分毒素中的至少一种毒素的结合与亲代抗体竞争；
其中在确定功能性活性之后，选择功能性活性变体，用于通过重组制备方法进行的制备。
功能性活性变体抗体在VH或VL序列方面可能不同，或者拥有相同的VH和VL序列，但各FR有所变化。可以采用本领域熟悉的方法从亲代抗体突变形成变体抗体。
示例性亲代抗体在下面的实例和图1中进行描述。具体地，抗体是图1所列亲代抗体的功能性活性衍生物。可以设计带一个或多个修饰CDR序列，和/或带一个或多个修饰FR序列，如FR1、FR2、FR3或FR4序列，或修饰恒定区序列的变体。
本发明进一步提供一种产生本发明抗体的方法，包括：
(a)采用下文定义的表位的三维结构物给非-人类动物免疫；
(b)从分离的B-细胞形成永生化细胞系；
(c)筛选b)中获得的细胞系，鉴定产生与表位结合的单克隆抗体的细胞系；及
(d)产生所述单克隆抗体，或人源化抗体或人抗体，或其与所述单克隆抗体具有相同表位结合特异性的衍生物。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种产生本发明抗体的方法，包括：
(a)采用金黄色葡萄球菌的α-毒素和/或双组分毒素中的至少一种毒素给非人类动物进行免疫，并分离B-细胞产生抗体；
(b)从分离的B-细胞形成永生化细胞系；
(c)筛选细胞系，鉴定产生与金黄色葡萄球菌的α-毒素和/或双组分毒素中的至少一种毒素结合的单克隆抗体的细胞系；及
(d)产生所述单克隆抗体，或人源化抗体或人抗体，或其与所述单克隆抗体具有相同表位结合特异性的衍生物。
本发明进一步提供本发明抗体的医学用途，特别是用于存在金黄色葡萄球菌感染风险的受试者或被金黄色葡萄球菌感染的受试者，包括给受试者施用有效剂量的抗体，限制受试者感染，改善感染引起的疾病状况，或抑制金黄色葡萄球菌疾病，如肺炎、脓毒病、菌血症、伤口感染、脓疮、手术伤口感染、眼内炎、疖病、痈病、心内膜炎、腹膜炎、骨髓炎或关节感染的发病机理。
具体地，所述抗体用于预防金黄色葡萄球菌感染。
因此，本发明提供一种治疗方法，其中给受试者施用有效剂量的抗体，治疗存在金黄色葡萄球菌感染风险的受试者或被金黄色葡萄球菌感染的受试者，限制受试者的感染，改善所患感染引起的疾病状况，或抑制金黄色葡萄球菌疾病，如肺炎、脓毒病、菌血症、伤口感染、脓疮、手术伤口感染、眼内炎、疖病、痈病、心内膜炎、腹膜炎、骨髓炎或关节感染的发病机理。
具体地，所述治疗方法用于预防病原性金黄色葡萄球菌。
本发明进一步提供包括本发明抗体的药物制剂，优选包括肠胃外或粘膜制剂，任选包含药学上可接受的载体或赋形剂。
所述药物组合物可以包含抗体作为唯一的活性物质，或与其它活性物质组合，或与活性物质的混合物组合使用，如至少两种或三种不同抗体的组合或混合(cocktail)，例如，其中其它活性物质进一步靶向金黄色葡萄球菌，如OPK抗体或靶向至少一种其它毒素的抗体。具体地，该抗体的混合包括本发明的一种或多种抗体，每种抗体靶向(多种)毒素并且该组合比该混合中的单独一种抗体靶向更多种不同表位或毒素。
本发明进一步提供本发明抗体用于诊断任何金黄色葡萄球菌感染，包括高毒素MRSA感染，如坏死性肺炎的诊断用途，及用于检测疖病和痈病中毒素的产生。
本发明进一步提供本发明抗体的诊断制剂，任选地包含带标记的抗体和/或其它带标记的诊断试剂。
具体地，提供了抗体用于本发明的诊断用途，其中用所述抗体接触受试者的体液样本，体外测定受试者的全身性金黄色葡萄球菌感染，其中出现抗体的特异性免疫反应则确定存在感染。
因此，本发明进一步涉及诊断受试者金黄色葡萄球菌感染的方法，特别是确定受试者金黄色葡萄球菌全身感染的方法。
本发明进一步提供一种Hla单体形成的晶体，其衍射x-射线辐射，产生一衍射图，该衍射图代表与本发明抗体，或其结合片段，优选Fab片段接触的Hla边缘域(rim domain)的三维结构物，具有下述细胞常数：空间群P21212，任选地偏差在至之间。
本发明进一步提供一种LukD单体形成的晶体，其衍射x-射线辐射，产生一衍射图，该衍射图代表与本发明抗体，或其结合片段，优选Fab片段接触的LukD边缘域(rim domain)的三维结构物，具有下述细胞常数：空间群H32，任选地偏差在至之间。
本发明进一步提供本发明抗体的分离互补位，或包括所述互补位的结合分子。
本发明进一步提供本发明抗体识别的分离构象表位，其特征在于Hla、LukD、LukF或HlgB边缘域的三维结构物。所述表位由单一表位组成或包含表位变体的表位混合物组成，每个表位由本发明的抗体识别。
本发明进一步提供本发明的表位，其特征在于选自下述三维结构物：
a)三维Hla结构物，其特征在于SEQ ID 54的接触氨基酸残基179-191、194、200、269和271的结构坐标；
b)三维LukF结构物，其特征在于SEQ ID 55的接触氨基酸残基176-188、191、197和269的结构坐标；优选具有SEQ ID 58的氨基酸残基176-179、181-184、186-188、191、197和267；
c)三维LukD结构物，其特征在于SEQ ID 54的接触氨基酸残基176-188、191、197和267的结构坐标；优选具有SEQ ID 62的氨基酸残基176-179、181-184、186-188、191、197和267；
d)三维HlgB结构物，其特征在于SEQ ID 56的接触氨基酸残基177-189、192、198和268的结构坐标；优选具有SEQ ID 68的氨基酸残基177-180、182-185、187-189、192、198和268；
e)本发明晶体的三维Hla边缘域结构物；
f)本发明晶体的三维LukD边缘域结构物；
g)a)至f)任一项三维结构物的同系物，其中所述同系物包括与接触氨基酸残基骨架原子的均方根差是在至之间的结合位点。
具体地，表位通过结合分子结合。
本发明进一步提供一种与本发明表位特异性结合的结合物或结合分子，优选选自蛋白质、肽、拟肽类物、核酸、碳水化合物、脂质、寡肽、适配子和小分子化合物，优选抗体、抗体片段或融合蛋白，抗体片段包括含所述结合位点的至少一个抗体区，融合蛋白包括含结合位点的至少一个抗体区。
具体地，结合物或结合分子是与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合物。
具体地，结合物或结合分子防止毒素与磷酸胆碱结合，并与本发明抗体竞争。
本发明进一步提供鉴定与本发明表位特异性结合的结合物或识别本发明表位的结合物的筛选方法或分析方法，包括以下步骤：
-将候选化合物与本文定义表位的三维结构物接触；及
-对候选化合物与三维结构物之间的结合进行评价；其中候选化合物和三维结构物之间的结合可以鉴定候选化合物是否是与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合物。例如，候选化合物和三维结构物或表位之间发生阳性功能性结合反应，可以鉴定该化合物为具有保护作用的结合物。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种免疫原，包括：
a)本发明的表位；
b)任选与(a)中所述表位非天然相关的其它表位；及
c)载体。
具体地，载体是药学上可接受的载体，优选包含缓冲物质和/或佐剂。
本发明的免疫原优选在疫苗制剂中提供，优选肠胃外使用。
具体地，本发明的免疫原提供用于医学用途，特别是通过施用有效剂量的所述免疫原处理受试者，预防受试者被金黄色葡萄球菌感染，或预防所述感染引发的疾病，或抑制金黄色葡萄球菌肺炎发病。
具体地，本发明的免疫原用于引发保护性免疫应答。
根据本发明的一个具体方面，进一步提供一种处理金黄色葡萄球菌感染风险受试者的方法，所述方法包括给受试者施用有效剂量的免疫原，预防受试者感染，尤其是预防病原性金黄色葡萄球菌感染。
根据本发明的另一个方面，本发明提供一种编码本发明抗体或本发明表位的分离核酸。
附图说明
图1：Hla–双-组分毒素交叉反应性mAbs的氨基酸序列和Fab KD亲和力。
图中示出了重链和轻链CDR序列、FR序列及各FR序列和CDR序列(SEQ ID 1-39)的复合序列的全长序列信息，相对亲代AB-28mAb的氨基酸变化以粗体和带下划线的字体表示。Fab KD亲和力采用MSD方法，利用Sector Immager 2400仪器(Meso Scale Discovery)测定。一般说来，将20pM生物素化抗原用不同浓度的Fab在室温培养16小时，未结合抗原被捕捉在固定化IgG上。亦参见，例如，Estep等的“High throughput solution-basedmeasurement of antibody-antigen affinity and epitope binning”,MAbs,Vol.5(2),pp.270-278(2013)。每个抗体和每种毒素组分的Fab KD亲和力以pM表示。
图1采用的命名应具有下述含义：
VH CDR1＝CDR1
VH CDR2＝CDR2
VH CDR3＝CDR3
VL CDR4＝CDR4＝VL CDR1
VL CDR5＝CDR5＝VL CDR2
VL CDR6＝CDR6＝VL CDR3
图2。Hla–双-组分毒素交叉反应性mAbs的毒素中和效力随其与单个毒素组分的亲和力的改善而增加。
A：Hla[12.2nM]对兔子血细胞的溶血抑制分析，B：人多形核细胞(PMN)的LukSF[2.94nM]中毒，C：人PMN的LukED[7.35nM]中毒，D：人PMN的HlgCB[2.94nM]中毒。Y-轴：采用MSD方法，利用Sector Immager 2400仪器(Meso Scale Discovery)测定的Fab KD亲和力。一般说来，将20pM生物素化抗原采用不同浓度的Fab在室温培养16小时，未结合抗原被捕捉在固定化IgG上。亦参见，例如，Estep等“High throughput solution-based measurementof antibody-antigen affinity and epitope binning”，MAbs，Vol.5(2),pp.270-278(2013)。X-轴：在毒素介导细胞溶解的半数最大抑制时mAb与毒素的摩尔比表示的IC50值。亲代AB-28mAb的亲和力和效力以虚线表示。
图3：与所有靶向毒素具有较高亲和力的Hla-双组分毒素交叉反应性mAbs有效地抑制了重组杀白细胞素联合效应引起的细胞溶解。
A：抑制HlgAB[2.94nM]、HlgCB[2.94nM]、LukSF[2.94nM]和LukED[7.35nM]混合物中毒引起的人PMN溶解。B：抑制Hla[12.12nM]和HlgAB[2.94nM]、HlgA-LukD[2.94nM]、LukED[2.94nM]和LukSF[2.94nM]混合物处理诱导的兔子红细胞溶血现象。C：Hla[12.12nM]兔子红细胞溶血抑制试验。D：抑制Hla[3.03nM]、HlgCB[2.94nM]、LukSF[2.94nM]和LukED[7.35nM]混合物中毒引起的人PMN溶解。mAbs的效力以在毒素介导细胞溶解的半数最大抑制时的mAb与毒素的摩尔比表示。*没有可检出的效力。
图4：鼠科动物HlgAB毒素挑战模型中Hla-双组分毒素交叉反应性mAbs的保护作用
采用200ug(0.4mg/ml)所示mAbs(10mg/kg剂量)腹膜内处理小鼠24小时，然后，静脉内挑战致死剂量HlgA-HlgB毒素(两者剂量均为0.2ug/小鼠)。观察10天，跟踪小鼠的存活率。我们发现，采Logrank(Mantel-Cox)检验，Kaplan-Meier存活率曲线具有统计学上的显著不同。对照小鼠采用抗不相关抗原产生的人IgG1进行处理。
图5：鼠科动物HlgA-LukD毒素挑战模型中Hla–双组分毒素交叉反应性mAbs的保护作用增强，同时，LukD结合亲和力提高。
采用100ug(0.2mg/ml)所示mAbs(5mg/kg剂量)腹膜内处理小鼠24小时，然后静脉内挑战致死剂量HlgA-LukD毒素(两者剂量均为1ug/小鼠)。观察10天，跟踪小鼠的存活率。我们发现，采用Logrank(Mantel-Cox)检验，Kaplan-Meier存活率曲线具有统计学上的显著不同。对照小鼠采用抗不相关抗原产生的人IgG1进行处理。
图6：鼠科动物肺炎模型中Hla-双组分毒素交叉反应性mAbs的保护作用
采用100ug(0.2mg/ml)所示mAbs(5mg/kg剂量)腹膜内处理小鼠24小时，然后静脉内挑战致死剂量TCH1516毒素(40μl中6×108cfu，对应1.5×1010cfu/ml)。观察10天，跟踪小鼠的存活率。我们发现，采用Logrank(Mantel-Cox)检验，Kaplan-Meier存活率曲线具有统计学上的显著不同。对照小鼠仅用溶媒处理。
图7：氨基酸序列信息：AB-28、AB-28-3、AB-28-4、AB-28-5、AB-28-6、AB-28-7、AB-28-8、AB-28-9、AB-28-10、AB-28-11、AB-28-12、AB-28-13(SEQ ID 40-51)的HC，及AB-28的LC(SEQ ID 52)。
图8：此处涉及的金黄色葡萄球菌毒素序列。
SEQ ID 53USA300TCH1516菌株的Hla核苷酸序列(Genbank，保藏号：CP000730)
SEQ ID 54：USA300TCH1516菌株的Hla氨基酸序列，
SEQ ID 55：USA300TCH1516菌株的LukS核苷酸序列，
SEQ ID 56：USA300TCH1516菌株的LukS氨基酸序列，
SEQ ID 57：USA300TCH1516菌株的LukF核苷酸序列，
SEQ ID 58：USA300TCH1516菌株的LukF氨基酸序列，
SEQ ID 59：USA300TCH1516菌株的LukE核苷酸序列，
SEQ ID 60：USA300TCH1516菌株的LukE氨基酸序列，
SEQ ID 61：USA300TCH1516菌株的LukD核苷酸序列，
SEQ ID 62：USA300TCH1516菌株的LukD氨基酸序列，
SEQ ID 63：USA300TCH1516菌株的HlgA核苷酸序列，
SEQ ID 64：USA300TCH1516菌株的HlgA氨基酸序列，
SEQ ID 65：USA300TCH1516菌株的HlgC核苷酸序列，
SEQ ID 66：USA300TCH1516菌株的HlgC氨基酸序列，
SEQ ID 67：USA300TCH1516菌株的HlgB核苷酸序列，
SEQ ID 68：USA300TCH1516菌株的HlgB氨基酸序列，
SEQ ID 69：USA300TCH1516菌株的LukH核苷酸序列，
SEQ ID 70：USA300TCH1516菌株的LukH氨基酸序列，
SEQ ID 71：USA300TCH1516菌株的LukG核苷酸序列，
SEQ ID 72：USA300TCH1516菌株的LukG氨基酸序列，
SEQ ID 73：MRSA252菌株(Genbank，保藏号BX571856)的LukH核苷酸序列
SEQ ID 74：MRSA252菌株的LukH氨基酸序列，
SEQ ID 75：MRSA252菌株的LukG核苷酸序列，
SEQ ID 76：MRSA252菌株的LukG氨基酸序列，
SEQ ID 77：MSHR1132菌株(Genbank，保藏号FR821777)的LukH核苷酸序列
SEQ ID 78：MSHR1132菌株的LukH氨基酸序列，
SEQ ID 79MSHR1132菌株的LukG核苷酸序列
SEQ ID 80：MSHR1132菌株的LukG氨基酸序列
图9：
A.Hla:AB-28复合物的结构，Hla以球表示，AB-28的Fab片段中的轻链以黑色图表示，重链以灰色图表示。B.带AB-28表位(接触残基)的Hla单体以球表示(黑色为Hla、LukF、LukD和HlgB间完全保守的氨基酸)。
图10：
A.LukD:AB-28复合物的结构，LukD以球表示，AB-28的Fab片段中的轻链以黑色图表示，重链以灰色图表示。B.带AB-28表位(接触残基)的LukD单体以球表示(黑色为Hla、LukF、LukD和HlgB间完全保守的氨基酸)。
图11：存在和不存在(无抗体)AB-28的情况下，福特生物(ForteBio)中磷酸胆碱(PC4-BSA)与生物素化毒素的结合。
具体实施方式
本发明中使用的术语“抗体”指的是由抗体区组成或包括抗体区的多肽或蛋白质，抗体区理解为具有或不具有连接序列的免疫球蛋白的重链和/或轻链的恒定区和/或可变区。如果多肽包含β-桶状结构，而β-桶状结构由环序列连接的抗体区结构的至少两个β-链组成，则多肽理解为抗体区。抗体区可能具有天然结构或通过突变或衍生修饰，例如，修饰抗原的结合性质或任何其它性质，如稳定性和功能性，例如，与Fc受体FcRn和/或Fcγ受体结合。
本发明使用的抗体具有与一个或多个抗原结合或所述抗原的一个或多个表位结合的特异性结合位点，特别是包括单一可变抗体区的CDR结合位点，如VH、VL或VHH，或可变抗体区对，如VL/VH对的结合位点，抗体包含VL/VH区对和恒定抗体区，如Fab、F(ab')、(Fab)2、scFv、Fv或全长抗体。
本发明使用的术语“抗体”特别指的是包含单一可变抗体区或由单一可变抗体结构域组成的抗体格式，如VH、VL或VHH或可变和/或恒定抗体区的组合，带或不带连接序列或铰链区，包括可变抗体区对，如VL/VH对，包含VL/VH区对和恒定抗体区或由VL/VH区对和恒定抗体区组成的抗体，如重链抗体、Fab、、F(ab')、(Fab)2、scFv、Fd、Fv或全长抗体，例如IgG型(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型)、IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM抗体。术语“全长抗体”可用于指任何包括至少大多数Fc区及其它天然抗体单体中通常发现的其它区的任何抗体分子。本发明使用此术语用于强调具体的抗体分子并非抗体片段。
术语“抗体”应特别包括分离形式的抗体，如基本上不含其它抗不同靶抗原的抗体或包含抗体区的不同结构安排。但是，分离抗体可能包含在组合制剂中，包含分离抗体，例如，与至少一种其它抗体，如具有不同特异性的单克隆抗体或抗体片段的组合。
术语“抗体”应适用于包括人类的动物来源抗体，如哺乳动物，包括人类、鼠科动物、兔子、山羊、美洲驼马、牛和马或鸟类，如母鸡，这一术语应特别包括基于动物来源序列，如人序列的重组抗体。
术语“抗体”进一步适用于具有不同物种来源序列(如鼠科动物和人类序列)的嵌合抗体。
谈到抗体时使用的术语“嵌合”指的是其中重链和轻链的每个氨基酸序列的一部分，与源自特定物种的抗体或属于特定类别的抗体中的对应序列同源，而链的其它片段与另一物种或类别的对应序列同源的抗体。
一般说来，轻链和重链的可变区模仿源自一种哺乳动物的抗体的可变区，而恒定区与源自另一种动物的抗体序列同源。例如，可变区源自目前已知的源，利用容易获得的B-细胞或来自非人类寄助物的杂交瘤，恒定区源自，例如，人类细胞制剂。
术语“抗体”进一步适用于人源化抗体。
谈及抗体时的术语“人源化”指的是具有抗原结合位点的分子，基本上源自非人类物种的免疫球蛋白，其中所述分子的其它免疫球蛋白结构是基于人类免疫球蛋白的结构和/或序列。抗原结合位点可以包括融合到恒定区上的完整可变区或仅为接枝到可变区合适构架区上的互补决定区(CDR)。抗原-结合位点可以是野生-型或修饰型，例如，被一个或多个氨基酸替换修饰，优选经修饰后更接近人类免疫球蛋白。人源化抗体的某些形式保留了所有CDR序列(例如，人源化小鼠抗体，包含了来自小鼠抗体的全部六个CDR。其它形式相对原抗体更改了有一个或多个CDR。
术语“抗体”进一步适用于人源抗体。
谈及抗体时使用的术语“人源”理解为包括源自人类种系免疫球蛋白序列、具有可变区和恒定区的抗体。本发明的人源抗体包括，例如，CDR中不采用人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，体外随机或定点诱导突变或体内体细胞突变引入的突变体)。人源抗体包括从人免疫球蛋白文库中分离的抗体或包括从动物转基因得到的一个或多个人免疫球蛋白分离的抗体。
术语“抗体”特别适用于任何类别或子类别的抗体。根据其重链恒定区的氨基酸序列，抗体可以分为抗体IgA、IgD、IgE、IgG和IgM主类，这些主类中的几个类别可以进一步分为几个子类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。
该术语进一步适用于单克隆或多克隆抗体，特别是重组抗体，重组抗体包括通过重组手段制备、表达、创造或分离的所有抗体和抗体结构，例如，源自动物的抗体，如包括人类的哺乳动物，包括来自不同来源的基因或序列，例如，鼠科抗体、嵌合抗体、人源化抗体或杂交瘤衍生抗体。进一步的实例涉及从经转化用于表达抗体的宿主细胞分离的抗体，或从重组体、抗体组合文库或抗体区分离的抗体，或通过其它将抗体基因序列拼接到其它DNA序列上的方法制备、表达、创造或分离的抗体。
还应当理解术语“抗体”还应理解为指的是抗体的衍生物，尤其是功能性活性衍生物。抗体衍生物理解为一种或多种抗体区或抗体和/或融合蛋白的任何组合，其中抗体的任何区可在一种或多种其它蛋白，如其它抗体的任何位置融合，如包含CDR环的结合结构、受体多肽，还有配体、支架蛋白、酶、毒素等。抗体的衍生物可通过各种化学方法，如共价偶联、静电相互作用、二硫键连接等与其它物质缔合或结合。与抗体结合的其它物质可以是类脂、糖类、核酸、有机和无机分子或它们的任何组合(例如PEG、药物前体或药物)。在具体实施例中，抗体是包含与生物学上接受的化合物特异性相互作用的其它标签(tag)的衍生物。本发明可以使用的标签并没有特别的限制，只要其对其靶向抗体的结合没有任何不良影响或不良影响可以忍受即可。合适的标签实例包括His-标签、Myc-标签、FLAG-标签、Strep-标签、Calmodulin-标签、GST-标签、MBP-标签和S-标签。在本发明的另一个具体实施例中，抗体是包含标记(label)的衍生物。术语“标记”指的是可以检测的化合物或组合物，其与抗体直接或间接结合，从而产生“标记的”抗体。标记可以是本身可以检测的标记，例如，放射性同位素标记或荧光标记，或者，在酶标记时，标记可以催化底物化合物或组合物发生可检测的化学变化。
本发明所述的优选衍生物在抗原结合方面是功能性活性的，与非衍生抗体类似，优选具有中和金黄色葡萄球菌的效力和/或是保护抗体。
源自亲代抗体或抗体序列的抗体，例如亲代CDR或FR序列，尤其理解为例如，通过生物模拟或重组工程或通过化学衍生作用或合成得到的突变体或变体。
具体地，源自本发明抗体的抗体可以包括至少一个或多个CDR区或其CDR变体，例如，重链可变区的至少3个CDR和/或轻链可变区的至少3个CDR，CDR或FR区的至少一个区，或HC或LC的恒定区中有至少一个点突变，所述抗体是功能性活性的，例如，与识别毒素的多特异性结合位点特异性结合。
应当理解的是，术语“抗体”还指的是抗体的变体，包括具有亲代CDR序列功能性活性CDR变体的抗体，及亲代抗体的功能性活性变体抗体。
术语“变体”应尤其指的是，例如，通过突变方法得到的抗体，如突变抗体或抗体片段，尤其是删除、交换氨基酸序列、插入氨基酸序列到特异性抗体氨基酸序列中或区域中或化学衍生氨基酸序列，如在恒定区中，设计抗体稳定性，效应子功能性或半衰期，或在可变区中，如通过本领域可以提供的亲和力成熟技术，改善抗原结合性质。可以采用本领域熟悉的任何突变方法，包括期望位置的点突变，如通过随机化方法实现。在某些情况下，随机选择位置，例如，采用任何可能的氨基酸或选择优选的氨基酸来随机化抗体序列。术语“突变”指的是本技术领域认可的改变多核苷酸或多肽序列的任何方法。优选的突变类型包括易错PCR突变、饱和突变或其它定点突变。
术语“变体”应特别包括功能性活性变体。
本发明谈到CDR序列时使用的术语“功能性活性变体”理解为“功能性活性CDR变体”，谈到抗体时使用的术语“功能性活性变体”理解为“功能性活性抗体变体”。功能性活性变体指的是通过插入、删除或替换一个或多个氨基酸，或化学衍化氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基，或核苷酸序列内的核苷酸，或序列的任一个或两个远端，例如，CDR序列中，N-端和/或C-端的1、2、3或4个氨基酸，和/或中心1、2、3或4个氨基酸(即在CDR序列中间)，对序列(亲代抗体或亲代序列)进行修饰，且这种修饰并不会影响该序列的活性，特别是不会对该序列活性有不良影响而得到的一个序列。在结合位点对选定靶向抗原具有特异性的情况下，抗体的功能性活性变体将仍然具有预定的结合特异性，虽然这一性质可以改变，例如，改变与特定表位的精细特异性、亲和力、亲合力、Kon或Koff等。例如，亲和力成熟抗体特别理解为功能性活性变体抗体。因此，亲和力成熟抗体中的修饰CDR序列理解为功能性活性CDR变体。通过突变可以进行其它修饰，例如，拓宽交叉特异性，靶向比亲代抗体更多的毒素或毒素组分，或提高其与一种或多种毒素或毒素组分的反应性。
具体地，正如在本发明将进一步描述的那样，本发明抗体的功能性活性变体具有与金黄色葡萄球菌的Hla和双-组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点。功能性活性的其它指标应是与细胞膜任一种毒素的竞争性结合，特别是与磷酸胆碱结合。
优选采用测定抗体抗溶细胞毒素的中和效力的方法，对功能性活性进行测定，例如，通过在标准方法中，测定对给定毒素敏感的细胞活性或功能性的增加，从而测定功能性活性。例如，测定功能性活性，察看细胞分析法测定的抗体体外中和效力IC50是否低于100:1mAb:毒素(mol/mol)，优选低于50:1，优选低于25:1，优选低于10:1，更优选低于1:1。中和通常以有抗体和没抗体时活细胞的百分数表示。对高效力抗体来说，中和效力比较好的表达方式是抗体/毒素摩尔比，其中数值越低，效力越高。数值低于10表明功能性活性高。任选在最严格的检验中这些数值是1至10。
功能性活性变体可以通过以下方法得到：例如，改变亲代抗体的序列，例如，亲代抗体是包含结合位点的抗体，即由CDR区形成的结合位点，或由具有SEQ ID 20序列的VH形成的结合位点，及具有SEQ ID 39序列的VL形成的结合位点，或由各CDR区形成的结合位点，其中亲代抗体或序列的特征在于其交叉反应性，但是，除结合位点以外，抗体区内进行了修饰，或通过对结合位点内进行修饰，从亲代抗体衍生得到变体，这种修饰对抗原结合不存在不利影响，优选其生物活性(包括与金黄色葡萄球菌的毒素结合的能力和/或以特定效力中和金黄色葡萄球菌的能力)与亲代抗体类似，例如，生物活性基本上相同，生物活性采用靶向金黄色葡萄球菌或金黄色葡萄球菌毒素的特异性结合方法或功能性试验测定。
具体地，下述任一CDR序列可以经修饰包括下述部分：
a)VH CDR1中的位置5，氨基酸残基选自S、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W和Y，优选H、R和W中的任一个；
b)VH CDR1中的位置7，氨基酸残基选自M、H、K、Q、R或W，优选K、R或W中的任一个；
c)VH CDR2中的位置3，氨基酸残基选自D和R；
d)VH CDR2中的位置7，氨基酸残基选自S、A、D、E、F、H、K、M、N、Q、R、T、W和Y，优选D、H、K、N或Q中的任一个，更优选是Q；
e)VH CDR2中的位置9，氨基酸残基选自Y、F、K、L、Q和R，优选R；
f)VH CDR3中的位置5，氨基酸残基选自G、A、D、F、H、I、M、N、R、S、T、V和Y，优选D、F、H、I、M、N、R、T、V或Y中的任一个；
g)VH CDR3中的位置6，氨基酸残基选自H、E、Q和S，优选E或Q；
h)VH CDR3中的位置7，氨基酸残基选自G、A、D、E、H、I、M、N、Q、S、T、V和W，优选W；和/或
i)位置8的VH CDR3中，氨基酸残基选自V、A、D、E、G、I、K、L、M、Q、R、S和T，优选M或R中的任一个。
具体地，下述任一个CDR序列可以经修饰包括下述部分：
a)VL CDR4中的位置7，氨基酸残基选自S、A、E、F、G、K、L、M、N、Q、R、W和Y，优选L、M、R或W中的任一个，更优选R；
b)VL CDR5中的位置1，氨基酸残基选自A和G；
c)VL CDR5中的位置3，氨基酸残基选自S、A、D、G、H、I、K、L、N、Q、R、T、V和W；
d)VL CDR5中的位置4，氨基酸残基选自S、D、E、H、I、K、M、N、Q、R、T和V；优选K、N、Q和R中的任一个；
e)VL CDR6中的位置3，氨基酸残基选自G、A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y；
f)VL CDR6中的位置4，氨基酸残基选自Y、D、F、H、M、R和W；
g)VL CDR6中的位置5，氨基酸残基选自V、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T和W；和/或
h)VL CDR6中的位置6，氨基酸残基选自F和W。
此处使用的术语“生物活性基本上相同”指的是测定的活性是可以比较的亲代抗体的活性的至少20％、至少50％、至少75％、至少90％，例如至少100％，或至少125％，或至少150％，或至少175％，或例如高达200％。
此处描述的优选的变体或衍生物在抗原结合方面是功能性活性的，优选其具有与单种毒素特异性结合，与其它非靶向毒素的抗原不显著结合的效力，例如，Kd差至少是2log，优选至少3log。功能性活性变体与抗原的结合通常不会造成不利影响，对应与亲代抗体或序列，或包含序列变体的抗体具有基本上相同的结合亲和力；例如，Kd差小于2log，优选小于3log，但是，亲和力甚至可以改善更多，例如，Kd差至少1log，优选至少2log。
在优选的实施例中，亲代抗体的功能性活性变体是：
a)是抗体的生物活性片段，所述片段包括分子序列的至少50％，优选至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，或至少95％，及最优选至少97％、98％或99％；
b)源自至少一个氨基酸替换、加入和/或删除的抗体，其中功能性活性变体与分子或分子的一部分具有序列一致性，如序列一致性至少50％，优选至少60％，优选至少70％，更优选至少80％，更优选至少90％，甚至更优选至少95％，及最优选至少97％、98％或99％的抗体；和/或
c)由抗体或其功能性活性变体及另外至少一个与多肽或核苷酸序列同源的氨基酸或核苷酸组成。
在本发明一个优选的实施例中，本发明抗体的功能性活性变体基本上与上面描述的变体相同，但是，其多肽或核苷酸序列分别不同，不同之处在于其是源自不同种属的同源序列。这些都称为天然变体或类似物。
术语“功能性活性变体”还包括天然等位变体，以及突变体或任何其它非天然变体。正如本技术领域熟悉的那样，等位变体是一种(多)肽替代形式，其特征在于替换、删除或加入一个或多个氨基酸，基本上不改变多肽的生物功能性。
功能性活性变体可通过改变多肽或核苷酸序列中的序列得到，例如，当与本发明一起使用时，其中所述序列改变保留或改善了未变动多肽或核苷酸序列的功能性。此种序列改变包括但不限于，(保守)替换、加入、删除、突变和插入。
具体的功能性活性变体有CDR变体。CDR变体包括CDR区中被至少一个氨基酸修饰的氨基酸序列，其中所述修饰可以是氨基酸序列的化学或部分变化，所述修饰使变体保留未修饰序列的生物学特性。CDR氨基酸序列的部分更改可以是删除或替换一个至几个氨基酸，例如，1、2、3、4或5个氨基酸，或加入或插入一个至几个氨基酸，例如1、2、3、4或5个氨基酸，或通过化学衍生一个至几个氨基酸，例如，1、2、3、4或5个氨基酸，或它们的组合。氨基酸残基的替换可以是保守替换，例如，以一个疏水氨基酸替换一个替代疏水氨基酸。
保守替换是那些在其侧链和化学性质方面相关的氨基酸族内发生的替换。这些氨基酸族的实例有具有碱性侧链的氨基酸、具有酸性侧链的氨基酸、具有非极性脂肪族侧链的氨基酸、具有非极性芳香烃铡链的氨基酸、具有不带电极性侧链的氨基酸、具有小侧链的氨基酸及具有大侧链的氨基酸等。
点突变尤其理解为多核苷酸工程，得到的氨基酸序列的表达与非工程氨基酸序列在一个或多个单(非保守)或双氨基酸的替换或交换、删除或插入方面有所不同，用于得到不同的氨基酸。
优选的点突变指的是相同极性和/或电荷的氨基酸的交换。在这里，氨基酸指的是六十四个三联体密码子编码的20种天然氨基酸。这20种氨基酸可以分裂成具有中性电荷、正电荷和负电荷的氨基酸：
下面给出了“中性”氨基酸及其各自的三-字母和单字母的代码和极性：
丙氨酸：(Ala，A)非极性，中性；
天冬酰胺：(Asn，N)极性，中性；
半胱氨酸：(Cys，C)非极性，中性；
谷氨酰胺：(Gln，Q)极性，中性；
甘氨酸：(Gly，G)非极性，中性；
异亮氨酸：(Ile，I)非极性，中性；
亮氨酸：(Leu，L)非极性，中性；
蛋氨酸：(Met，M)非极性，中性；
苯丙氨酸：(Phe，F)非极性，中性；
脯氨酸：(Pro，P)非极性，中性；
丝氨酸：(Ser，S)极性，中性；
苏氨酸：(Thr，T)极性，中性；
色氨酸：(Trp，W)非极性，中性；
酪氨酸：(Tyr，Y)极性，中性；
缬氨酸：(Val，V)非极性，中性；及
组氨酸：(His，H)极性，带正电荷(10％)，中性(90％)。
带“正”电荷的氨基酸有：
精氨酸：(Arg，R)极性，带正电荷；及
赖氨酸：(Lys，K)极性，带正电荷。
带“负”电荷的氨基酸有：
天冬氨酸：(Asp，D)极性，带负电荷；及
谷氨酸：(Glu，E)极性，带负电荷。
谈及抗体序列和同系物时所称“氨基酸序列一致性的百分数(％)”定义为必要时，为了得到最大的序列一致性百分数，在比对序列和引入缺口后，候选序列中与特定多肽序列中氨基酸残基一致的氨基酸残基百分数，任何保守替换并不视为序列一致性的一部分。
熟悉本领域的技术人员能够确定衡量比对的合适参数，包括待比较序列全部长度实现最大比对所需的任何算法。
抗体变体特别理解为包括同系物、类似物、片断、具有特定糖基化模式的修饰或变体，例如，通过糖工程产生的，是功能性的和可以作为功能性相当物，例如，与特异性靶结合和具有功能性性质的变体。本发明所述的优选变体在抗原结合方面是功能性活性的，优选具有中和金黄色葡萄球菌的效力和/或是保护抗体。
本发明的抗体可以具有或不具有Fc效应子功能性。虽然作用模式主要是通过中和抗体调节，并没有Fc效应子功能性，但是，Fc可以募集补体，通过形成免疫复合物，帮助从循环内消除靶抗原，如毒素。
特异性抗体可以没有活性Fc单元，因此，由不含抗体Fc部分或不包含Fcγ受体结合位点的抗体区组成，或包括没有Fc效应子功能性的抗体区，例如，通过修饰，减少Fc效应子功能性，特别是，消除或降低ADCC和/或CDC活性。可以通过工程设计替代抗体，掺入修饰，增加Fc效应子功能性，尤其是增强ADCC和/或CDC活性。
这种修饰可能受突变，例如，Fcγ受体结合位点中的突变的影响，或通过衍生物或试剂，干扰抗体格式的ADCC和/或CDC活性，从而减少或增加Fc效应子功能性。
Fc效应子功能性显著降低通常理解为指的是以ADCC和/或CDC活性衡量的Fc效应子功能性低于未修饰(野生型)格式的10％，优选低于5％。
Fc效应子功能性显著增加通常理解为指的是以ADCC和/或CDC活性衡量的Fc效应子功能性至少是未修饰(野生型)格式的10％，优选至少是20％、30％、40％或50％。
谈及抗体序列时使用的术语“糖基化工程”变体应指的是因糖基化工程而具有修饰免疫原或免疫调节(例如，抗炎)特性、ADCC和/或CDC的糖基化变体。所有抗体在重链恒定区的保守位置含有糖类结构，每个同种型具有N-连接糖类结构的不同阵列，可变地影响蛋白质的组装、分泌或功能性活性。IgG1型抗体是每个CH2域中Asn297处具有保守的N-连接糖基化位点的糖蛋白。与Asn297连接的两个复合双天线低聚糖隐蔽在CH2域之间，与多肽骨架形成广泛的接触，它们的存在对抗体介导效应子功能性，例如，抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)是必不可少的。通过使N297突变，例如，突变到A，脱除N-聚糖，或T299，通常得到ADCC下降的无糖基化抗体格式。具体地，本发明的抗体可以是糖基化或糖基化工程或无糖基化抗体。
抗体糖基化的主要区别在于细胞系，甚至在不同培养条件下给定细胞系也会出现小的区别。菌细胞的表达通常提供无糖基化抗体。据报道，具有β(1,4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII)(催化平分型GlcNAc形成的糖基转移酶)四环素调控表达的CHO细胞具有改善的ADCC活性(Umana et al.,1999,Nature Biotech.17:176-180)。除宿主细胞选择之外，影响抗体重组产生期间糖基化的因素包括增长模式、基质配方、培养密度、氧合作用、pH、纯化方案等。
术语“抗原结合位点”或“结合位点”指的是抗体参与抗原结合的部分。抗原结合位点是由重链(“H”)和/或轻链(“L”)N-端可变区(“V”)或其可变域的氨基酸残基形成的。重链和轻链V区内的三个高度发散伸展(称为“超变量区”)插在更保守的侧翼伸展(称为构架区)之间，抗原结合位点提供与结合表位或抗原三维表面互补的表面，超变量区被称为“互补－决定区”或“CDR”。CDR中掺入的结合位点在本发明中亦称为“CDR结合位点”。
具体地，此处谈到的CDR序列理解为那些根据Kabat命名法确定的抗体的氨基酸序列(参见Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thEd.Public Health Service,U.S.Department of Health and Human Services.(1991))。
本发明使用的术语“抗原”可与术语“靶”或“靶抗原”互换，指的是抗体结合位点识别的整个靶分子或所述靶分子的片段。具体地，抗原的子结构，例如，多肽或糖类的结构，通常称为“表位”，例如，B-细胞表位或T-细胞表位，这些表位是免疫相关的，可由所述结合位点识别。
本发明使用的术语“表位”应特别指的是完全构成抗体结合位点特异性结合伴侣或特异性结合伴侣一部分的分子结构。表位可由糖类、肽结构、脂肪酸、有机物质、生化物质或无机物质组成或它们的衍生物和它们的任何组合组成。如果表位包括在肽结构中，如肽、多肽或蛋白质中，则其通常包括至少3个氨基酸，优选5至40个氨基酸，更优选大约10-20个氨基酸。表位可以是线性表位或构象表位。线性表位由多肽或糖链基本序列的单片段组成。线性表位可以是连续的或重叠的。
构象表位由将多肽重叠形成三级结构而在一起的氨基酸或糖类组成，在线性序列中，氨基酸不一定彼此相邻。具体地，关于多肽抗原，构象或非连续表位的特征在于存在两个或多个在基本序列中被分开的离散氨基酸残基，但是，当多肽折叠成天然蛋白质/抗原时，它们在分子表面上组装形成一致的结构。具体地，构象表位是由非线性比对的系列氨基酸残基组成的表位，也就是说，残基以非连续方式沿多肽序列的长度分隔或成组。
这种构象表位的特征在于具有特异性结构坐标的三维结构物，结构坐标通过氨基酸残基和/或结晶学分析测定，例如，分析特异性抗体或Fab片段结合表位的免疫复合物形成的晶体。
具体地，作用于表位的结合残基在此处理解为接触氨基酸残基。
术语“结构坐标”指的是笛卡儿原子坐标，根据原子，即晶体形式的抗原或免疫复合物的散射中心发出的X-射线单光束衍射图得出相关数学方程式，得到坐标。衍射数据用于计算晶体重复单元的电子密度图。然后，电子密度图用于确定表位(例如，被特异性抗体或Fab结合的表位)的单个原子。可以理解的是，抗原的一组结构坐标是定义三维形状的各点的相关集合。单个坐标的轻微变化对总体形状几乎没有影响。在本发明中，在以抗原结构坐标描述的相关骨架原子上叠加时，保守残基骨架原子均方根差位于0.00A和2.00A之间的任何三维结构物都被视为相同或基本上相同。在本发明中，即使单个坐标存在轻微不同，如果这些不同并不影响结构坐标定义的总体形状，则结构坐标被视为相同或基本上相同。
此处术语“表位”应尤其指的是抗体识别的单一表位，或包括表位变体的表位混合物，每个表位被交叉反应性抗体识别。
此处所述的交叉反应性抗体特异性识别毒素，尤其是可溶毒素单体或毒素组分的边缘域。边缘域被理解为与宿主质膜外叶毗连的毒素域，边缘域参与细胞膜结合。因此，边缘域作为膜锚着点。本发明抗体靶向的表位位于边缘域的边缘区，因此，具有免疫相关的潜力，即与主动或被动免疫治疗保护作用有关。
根据本发明鉴定的表位，另外提供各自的互补位是可行的，例如，本发明抗体的互补位，如识别表位的部分全长抗体，抗体的抗原-结合位点。这通常是抗体Fv区15-22个氨基酸的小区域。所述互补位可以包纳到合适的支架中，得到支架类型分子，如融合蛋白或人工支架，得到具有所需交叉反应结合特点的特异性结合物或结合分子。
此处使用的术语“结合分子”应理解为特异性识别靶的表位-结合分子或抗原-结合分子，特别显示出对靶毒素的交叉特异性。结合分子的具体实例选自蛋白质、肽、拟肽类物、核酸、碳水化合物、类脂、寡肽、适配子和小分子化合物，优选抗体、抗体片段或融合蛋白，抗体片段包括含所述结合位点的至少一个抗体区，融合蛋白包括含结合位点的至少一个抗体区。结合分子可以，例如，采用合适的筛选方法获得候选化合物，然后，对其结合特点进行进一步表征，从合适的结合物文库，例如，抗体文库或其它化合物或支架文库，例如，DARPins，HEAT重复蛋白，ARM重复蛋白，三角形四肽重复蛋白及其它基于天然发生重复蛋白的支架中选择。
术语“表达”应按下述方式理解。含表达产物(如本发明所述抗体)的要求编码序列和控制序列(如可操作连锁中的启动子)的核酸分子可用于表达目的。利用这些序列转化或转染的宿主能够产生编码蛋白质。为了影响转化，表达系统可以包括在载体中；但是，相关DNA也可以整合到宿主染色体内。具体地，该术语指的是宿主细胞和相容的载体，在合适的条件下，例如，通过载体携带且引入到宿主细胞内的外源DNA，表达编码的蛋白质。
编码DNA是一种DNA序列，对特定多肽或蛋白质，如抗体的特定氨基酸序列进行编码。启动子DNA是引发、调节或介导或控制编码DNA表达的DNA序列。启动子DNA和编码DNA可以来自同一基因或不同基因，可以来自同一有机体或不同有机体。重组克隆载体通常包括一种或多种用于克隆或表达的复制系统，一种或多种用于宿主中选择的标记，例如，抗生素抗性，及一种或多种表达盒。
此处使用的术语“载体”定义为合适的宿主有机体中克隆重组核苷酸序列转录，即重组基因转录及其mRNA翻译所需的DNA序列。
“表达盒”指的是对规定限制位点处插入到载体内的表达产物进行编码的DNA编码序列或DNA片段。表达盒限制位点设计用于确保表达盒插在合适的阅读框内。通常，外源DNA在载体DNA的一个或多个限制位点处插入，然后，随同传播载体DNA一起由载体携带进入到宿主细胞内。具有插入或增加DNA，如表达载体的DNA片段或序列也可以称为“DNA构建体”。
表达载体包括表达盒和另外通常包括宿主细胞自主复制的起始点或基因组整合位点、一个或多个可选择的标记(例如，氨基酸合成基因或抗生素抗性基因，如zeocin(博来霉素)、卡那霉素、G418或潮霉素)、多个限制性酶切位点、合适的启动子序列及其组分可以操作连锁在一起的转录终止子。此处使用的术语“载体”包括自主复制核苷酸序列以及基因组整合核苷酸序列。载体的常见类型是“质粒”，质粒通常是双链DNA的独立分子，容易接受其它(外源)DNA和容易被引入到合适的宿主细胞内。质粒载体通常包含编码DNA和启动子DNA，具有一个或多个适合插入外源DNA的限制位点。具体地，术语“载体”或“质粒”指的是一种媒介体，DNA或RNA序列(例如，外源基因)通过该媒介体可以被引入到宿主细胞内，从而转化引入序列的宿主和促进表达(例如，转录和翻译)。
此处使用的术语“宿主细胞”应指的是转化产生特定重组蛋白质的原代受试者细胞，如本发明所述的抗体及其任何子代。应该理解的是，并非所有子代都与亲代细胞完全相同(由于有意或无意的突变或环境差异)，但是，只要子代保留了与原转化细胞相同的功能性，该术语即包括这些改变的子代。术语“宿主细胞系”指的是用于表达重组基因，产生重组多肽，如重组抗体的宿主细胞的细胞系。此处使用的术语“细胞系”指的是已经获得了长期增殖能力的特定细胞类型的确定克隆。这种宿主细胞或宿主细胞系可以在细胞培养中保持和/或培养以产生重组多肽。
针对组合物，例如免疫原组合物，此处亦称为“免疫原”(包括此处所述的一种抗原或表位，或疫苗)的“免疫应答”是在宿主或受试者中引发针对感兴趣的组合物或疫苗的细胞和/或抗体介导的免疫应答。通常，这种应答由产生抗体的受试者、B细胞、辅助T细胞、抑制T细胞、和/或细胞毒性T细胞组成，特异性导向包括在感兴趣的组合物或疫苗中的抗原。
“保护性免疫应答”理解为与未免疫群体相比，提供显著改善的诱导或自然感染或毒素挑战结果。针对毒素的保护性免疫应答主要通过高亲和力(例如，Kd小于10-8M)中和抗体调节。毒素中和的好处是保护靶细胞和预防炎症。通过从循环中清除毒素(通过RES细胞)，Fc介导的免疫复合物形成也起到一些作用。
免疫原或免疫原组合物通常包括抗原或表位和载体，特别是可以包含佐剂。术语“佐剂”指的是一种化合物，当其与抗原一起施用时增强和/或重新定向抗原的免疫应答，但是，当其单独施用时，并不会产生针对抗原的免疫应答。
佐剂可以通过几种机制增强免疫应答，包括淋巴细胞募集、刺激B细胞和/或T细胞及刺激巨噬细胞。示例性载体有脂质体或阳离子肽；示例性佐剂有磷酸铝或氢氧化铝、MF59或CpG寡核苷酸。
此处谈到核酸、抗体或其它化合物时使用的术语“分离的”或“分离”应指的是此种化合物已经与其自然相关的环境充分分离，从而以“基本上纯净的”形式存在。“分离”并不一定排除与其它化合物或材料的人工或合成混合物，或存在不干扰基本活性的杂质，及存在因不完全纯化而可能存在的杂质。具体地，本发明的分离核酸分子还包括那些化学合成的核酸分子。
谈及本发明的核酸时，有时采用术语“分离核酸”。应用于DNA时，该术语指的是与起始有机体天然基因组邻接序列分离的DNA分子。例如，“分离核酸”包括插入到载体内的DNA分子，如质粒或病毒载体，或整合到原核或真核细胞或寄助物基因组DNA内的DNA分子。当应用于RNA时，术语“分离核酸”主要指的是由上文定义的分离DNA分子编码的RNA分子。或者，该术语指的是在其自然状态(即在细胞中或组织中)与其缔合的其它核酸充分分离的RNA分子。“分离核酸”(或DNA或RNA)进一步指的是采用生物或合成手段直接产生并与其产生期间存在的其它组分分离的分子。
谈到多肽或蛋白质，如本发明的抗体或表位时，术语“分离”特别指的是不含或基本不含其自然相关的材料，如在其自然环境中，或其制备环境(如细胞培养)中发现的其它化合物，所述制备是采用重组DNA技术在体外或体内进行。
分离化合物可以采用稀释剂或佐剂配制，但对于实际用途来说仍然是分离的–例如，用于诊断或治疗时，多肽或多核苷酸可以与药学上可接受的载体或赋形剂混合。
此处使用的术语“中和”或“中和作用”指的是广义，指的是不考虑实现中和的机制，阻止病原体的任何分子，如阻止金黄色葡萄球菌感染受试者，或阻止病原体通过产生有效的蛋白质毒素促进感染，或阻止毒素损害受试者的靶细胞。中和可以通过抗体，抑制金黄色葡萄球菌毒素与其靶细胞上的同源受体结合和/或相互作用而实现。在一些实施例中，此处描述的抗体可以中和毒素活性，其中毒素和靶细胞，如红血细胞之间的体内和体外相互作用影响被降低或消除。还可以通过抑制形成活性毒素，例如，在金黄色葡萄球菌双组分溶细胞素的情况下，通过抑制S-组分和F-组分的结合或细胞膜内低聚体孔的形成而进一步发生中和。
抗体抗溶细胞毒素的中和效力通常采用标准试验方法，通过测量对给定毒素敏感的细胞活性的增加或功能性的增加而测定。中和可以以有抗体和没有抗体时活细胞的百分数表示。对高效力抗体来说，中和效力比较好的表达方式是抗体/毒素摩尔比，其中数值越低，效力越高。数值低于10表明效力较高，而数值低于1表明效力非常高。
此处使用的术语“交叉中和”应指的是中和多种毒素，例如，包括被交叉反应性或多特异性抗体识别的交叉反应性表位的毒素。
术语“金黄色葡萄球菌”或“S.aureus”或“病原性S.aureus”应按下述方式理解。金黄色葡萄球菌通常存在于人和动物的皮肤上或鼻子内。这种细菌通常是无害的，除非它们通过切口或其它伤口进入体内。一般说来，对健康的人来说，感染是微小的皮肤问题。过去，采用广谱抗生素(如甲氧西林)治疗感染。然而，现在，已经出现了一些耐甲氧西林和其它β-内酰胺抗生素，如青霉素和先锋霉素的菌株。
这些菌株被称为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(亦称为耐多药金黄色葡萄球菌，或“MRSA”)。
金黄色葡萄球菌是一种重要的人病原体，表达了多种分泌毒素(外毒素)。这些毒素袭击各种类型的宿主细胞，包括红细胞、中性粒细胞和其它免疫细胞，以及肺或皮肤的上皮细胞。金黄色葡萄球菌毒素最重要的成员是对淋巴细胞、巨噬细胞、肺上皮细胞和肺内皮细胞施加细胞溶解作用的α溶血素(Hla)。
金黄色葡萄球菌感染，包括MRSA，通常一开始是出现与丘疹、疖子或蜘蛛咬伤类似的红色小肿块。这些肿块或斑点会迅速转化为需要手术引流的让人很痛苦的深度脓肿。有时候细菌限于皮肤上。有时候，它们会深入到体内，在范围广泛的人类组织，包括皮肤、软组织、骨骼、关节、手术伤口、血流、心瓣膜、肺或其它器官中引发可能威胁生命的感染。因此，金黄色葡萄球菌感染会导致与其有关的病症，这些病症可能是致命的疾病，如坏死性筋膜炎、心内膜炎、败血症、菌血症、腹膜炎、中毒性休克综合症，及各种形式的肺炎(包括坏死性肺炎)，及疖病和痈病中的毒素产生。MRSA感染在医院或疗养院这些地方尤其麻烦，这些地方的病人存在裸露伤口、侵入器械及免疫系统变弱的风险或发生这些风险的可能性很大，因此，比普通大众存在更大的感染风险。
中和金黄色葡萄球菌毒素的抗体干扰病原体和病理反应，从而能够限制或预防感染和/或减轻这种感染引起的疾病症状，或抑制金黄色葡萄球菌发病机理，特别是肺炎、腹膜炎、骨髓炎、菌血症和脓毒病发病机理。在此方面，“保护性抗体”理解为负责在主动或被动免疫中对观察到的感染源免疫的抗体。具体地，此处描述的保护性抗体能够中和分泌的毒力因子(外毒素)的毒性效应(如细胞溶解、靶细胞诱导的促炎性细胞因子表达)及因此干扰金黄色葡萄球菌的致病潜力。
此处使用的术语“重组”应指的是“基因工程制备的或基因工程导致的”。重组宿主特别包括表达载体或克隆载体，或其已经通过基因工程而包含重组核酸序列，尤其是采用宿主外源核苷酸序列。重组蛋白通过表达宿主内各自的重组核酸制备。此处使用的术语“重组抗体”包括采用重组手段制备、表达、创造或分离的抗体，如(a)从转基因或染色体转移得到人免疫球蛋白基因的动物(如小鼠)分离的抗体，或从其制备的杂交瘤，(b)从转化而表达抗体的宿主细胞分离的抗体，如转染瘤，(c)从重组体、组合人源抗体文库分离的抗体，及(d)采用其它涉及剪接人免疫球蛋白基因序列到其它DNA序列的任何其它手段制备、表达、创造或分离的抗体。这种重组抗体包括经工程设计而包括抗体成熟期间发生重排和突变的抗体。
此处使用的术语“特异性”或“特异性结合”指的是分子异质群体中感兴趣的同源配体的决定性结合反应。因此，在指定条件下(例如，免疫分析条件下)，一个抗体与其特定靶特异性结合，并且不以显著数量与样本中存在的其它分子结合。特异性结合指的是就靶识别而言，结合是选择性的，根据选择，具有高、中或低的结合亲和力或亲合力。如果与另一个抗原相比，结合常数或结合动力学至少相差10倍(理解为至少相差1log)，优选相差至少100倍(理解为至少相差2log)，更优选至少相差1000倍(理解为至少相差3log)，通常实现选择性结合。
术语“特异性”或“特异性结合”还理解为适用于与一个或多个分子结合的结合物，如交叉-特异性结合物。靶向至少两种不同抗原或靶向至少两种不同抗原上的交叉反应性表位的优选交叉特性异(亦称为多特异性或交叉反应性)结合物以基本上类似的结合亲和力与抗原特异性结合，例如，相差小于100倍或甚至相差小于10倍。
例如，交叉特异性抗体能够与携带交叉反应性表位的各种抗原结合。抗体的这种结合位点或具有与至少两种不同抗原结合或至少两种不同抗原的交叉反应性表位结合的特异性的抗体，亦分别称为多特异性或交叉特异性结合位点和抗体。例如，抗体可以具有多特异性结合位点，与和多个不同抗原交叉反应的表位特异性结合，这些抗原在表位内具有序列同源性和/或结构类似性，提供结构基本上相同的构象表位，例如，至少与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素交叉反应。
抗体的免疫特异性、其结合能力和抗体展示的对交叉反应性结合序列的伴随亲和力，由抗体与其免疫反应(结合)的交叉反应性结合序列决定。交叉反应性结合序列特异性(至少部分)可由免疫球蛋白重链可变区的氨基酸残基、抗体和/或轻链可变区氨基酸残基序列定义。
术语“具有相同的特异性”、“具有相同的结合位点”或“结合相同的表位”指的是相当的单克隆抗体表现出相同的或基本相同的，即类似的免疫反应(结合)特点，与预先选择的靶结合序列竞争结合。适用于特定靶的抗体分子的相对特异性可以通过竞争试验相对测定，例如，Harlow,et al.,ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1988)所述的试验。
此处使用的术语“受试者”应指的是温血哺乳动物，特别应指的是人类或非人类动物。MRSA是非常重要的人类病原体，在兽医中也引起了人们的关注。它在范围广泛的非-人类动物物种中存在。因此，术语“受试者”还特别指的是包括狗、猫、兔子、马、牛、猪和家禽的动物。具体地，本发明的医学用途或各种治疗方法适用于需要预防或治疗与金黄色葡萄球菌感染有关的疾病的受试者。受试者可以是存在金黄色葡萄球菌感染风险的患者或患有此类疾病，包括早期或晚期疾病的患者。术语“患者”包括接受预防或治疗处理的人类和其它哺乳动物受试者。因此，术语“处理”包括预防和治疗处理。
对受试者进行处理，以预防或治疗金黄色葡萄球菌疾病。具体地，对处于感染风险或患有此类疾病或疾病复发的受试者，或患有此类感染和/或与此类感染有关疾病的受试者进行处理。
具体地，术语“预防”指的是预防发病的预防措施或降低发病风险的预防措施。
具体地，此处所述处理、预防或延迟受试者疾病的方法，是通过干扰作为疾病病因的金黄色葡萄球菌发病机理实现的，其中发病机理包括，例如，通过特异性毒力因子或毒素在受试者细胞膜上形成孔的步骤。
此处使用的术语“毒素”应指的是金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)和双组分毒素。特别应该理解的是，本发明抗体靶向的毒素是例如，金黄色葡萄球菌表达的可溶单体毒素或成孔毒素形式的毒素，或毒素组分，如双组分毒素中的组分。因此，此处使用的术语“毒素”应指的是携带免疫相关表位的毒素或毒素组分。
金黄色葡萄球菌的毒力是多种毒力因子组合的结果，包括使细菌粘附在真核细胞膜上的表面相关蛋白质、防止其调理吞噬的荚膜多糖，及几种外毒素。金黄色葡萄球菌主要通过产生分泌的毒力因子，如溶血素、肠毒素和中毒性休克综合征毒素引发疾病。这些分泌的毒力因子通过使宿主体内的许多免疫机制失活而抑制免疫响应，及导致组织破坏和帮助引发感染。后者由一组成孔毒素实现，其中最重要的是Hla，这是一种引发金黄色葡萄球菌肺炎的关键毒力因子。
金黄色葡萄球菌产生多种其它毒力因子和毒素，使这种细菌能够中和和耐受不同免疫细胞的攻击，特别是构成体内主要防御系统的白细胞亚群的攻击。
这些毒力因子和毒素的产生使金黄色葡萄球菌保持感染状态。在这些毒力因子中，金黄色葡萄球菌产生几种双组分白细胞毒素，通过两种不-相关蛋白质或亚基的协同作用，损害宿主防御细胞和红细胞的膜。在这些双-组分毒素中，γ-溶血素(HlgAB和HlgCB)及Pantone-Valentine杀白细胞素(PVL)是其中表征最好的毒素。
杀白细胞素对哺乳动物细胞的毒性涉及两种组分的作用。第一个亚基是S类组分，第二个亚基是F类组分。S亚基和F亚基协同作用，在白细胞上，包括单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和嗜中性粒细胞(统称为吞噬细胞)上形成孔。γ-溶血素，特别是HlgAB和HlgA-LukD也对红细胞及T细胞上的LukED有作用。众所周知的是，金黄色葡萄球菌产生的双组分白细胞毒素集包括F组分和S组分的同源对和非同源对，例如，γ-溶血素、PVL毒素、PVL-类毒素，包括HlgAB、HlgCB、LukSF、LukED、LukGH、LukS-HlgB、LukSD、HlgA-LukD、HlgA-LukF、LukG-HlgA、LukEF、LukE-HlgB、HlgC-LukD或HlgC-LukF，这些是此处所述的优选靶。
术语“基本上纯”或“纯化”应指的是包含至少50％(w/w)，优选至少60％、70％、80％、90％或95％化合物，如核酸分子或抗体的制剂。纯度采用适合所述化合物的方法测定(例如，色谱法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、HPLC分析等)。
本发明谈到化合物，例如，本发明的抗体或免疫原时使用的术语“治疗有效剂量”与术语“有效剂量”或“足够剂量”可以互换，它们是施用于受试者时足够产生有效益处或达到要求结果，包括临床结果的数量或活性，同样，有效剂量或其同义词取决于应用的语境。
有效剂量指的是足够治疗、预防或抑制疾病或病症的化合物的数量。在疾病语境中，此处所述抗体的治疗有效剂量特别用于治疗、调节、减弱、逆转或影响从抑制金黄色葡萄球菌或金黄色葡萄球菌发病机理中受益的疾病或状况。
与有效剂量对应的化合物的数量将根据各种因素而变化，如给定药物或化合物、药物配方、给药途径、疾病或状况类型、治疗的受试者或宿主身份等，但是，这些都是熟悉本领域的技术人员日常确定的。
本发明的抗体或免疫原可预防性用于抑制金黄色葡萄球菌感染发作，或用于治疗金黄色葡萄球菌感染，特别是治疗难治的MRSA等金黄色葡萄球菌感染，或在特定受试者时，治疗其它传统抗生素难治的金黄色葡萄球菌感染。
此处所述抗体的治疗有效剂量，如提供给需要治疗的人类患者的有效剂量，可以特别是0.5-50mg/kg，优选是5-40mg/kg，甚至更优选是不超过20mg/kg，不超过10mg/kg，不超过5mg/kg，虽然，治疗急性疾病时，可能需要更高的剂量。
此外，采用治疗有效剂量的本发明抗体治疗或预防受试者的方案可由单次施用组成或由一系列施用组成。例如，抗体可以至少每年施用一次，至少半年施用一次或至少一个月施用一次。但是，在另一个实施例中，对于给定治疗，受试者从大约每周一次至大约每天一次施用抗体。治疗期长短取决于各种因素，例如，疾病的严重程度，是急性还是慢性疾病，患者的年龄、抗体格式的浓度和活性。还应该理解的是，在特定治疗或预防方案期间，用于治疗或预防的有效剂量可以增加或减少。剂量的变化是本领域熟知的标准诊断试验可以得到和显而易见的。在某些情况下，需要慢性给药。
此处所述免疫原的有效剂量，如存在患上与金黄色葡萄球菌感染有关疾病风险的患者，每次剂量可能特别是1-20mg/kg。
例如，根据初免-加强免疫方案，免疫原可能作为第一剂施用，紧接着在某一时间框架内施用一次或多次加强剂量，诱导对金黄色葡萄球菌感染长期有效的免疫应答。优选的疫苗施用方案将包括施用三剂，例如，第0天施用第1剂，在第5-40天施用第2剂，在第10-100天施用第3剂，优选三剂分别在第0天、28天和90天施用。根据优选的加快方案，施用可在第0天、7天和14天进行。加快方案可用于预防，例如，针对面临择期手术的患者。通常明矾被作为佐剂使用，例如，作为磷酸盐或氢氧化物。
因此，本发明特别涉及交叉中和金黄色葡萄球菌α-溶血素和双-组分毒素的抗体。由于序列同源性水平低，这一点令人吃惊，因为预期产生交叉中和Hla和双组分毒素中至少一种毒素的mAbs的机会非常低。这种交叉中和抗体具有巨大的潜在价值。
描述多个双-组分特异性抗体(Laventie,PNAS,2011,108:16404)的唯一出版物仅设计靶向LukS和HlgC，因此，被认为与本发明并不相关。
本发明特别涉及一种通过同一结合位点(本发明中称为多特异性结合位点)靶向几种毒素的抗体，所述抗体能够与不同的毒素结合，例如，与四种不同的毒素(四重反应性)结合，这四种毒素是α-毒素和γ-溶血素的F-组分、Panten Valentine杀白细胞素(PVL，LukSF)和LukED。由于牛杀白细胞素与LukED和LukSF的氨基酸同源性较高，因此，四重反应性mAb与牛杀白细胞素结合也是可行的。
在一些实施例中，本发明识别Hla上的表位，并与HlgB交叉反应的抗体可能还对其它葡萄球菌杀白细胞素F化合物，如LukF'-PV、LukF-PV、LukDv、LukD、LukF-l和LukG具有交叉反应性。本发明的交叉反应性抗-HlgB抗体可以抑制或降低HlgB的活性。在一些实施例中，交叉反应性抗-HlgB抗体中和，例如，基本上消除HlgB的活性。
根据一个具体方面，本发明提供一种与相同表位结合的抗体，该术语包括与基本上相同表位结合的变体，亲代抗体的特征在于以SEQ ID 20的VH氨基酸序列和SEQ ID 39的VL氨基酸序列，或由SEQ ID 40的HC氨基酸序列和SEQ ID 52的LC氨基酸序列形成的多特异性结合位点。所述抗体可以是，例如，通过修饰亲代抗体的各CDR或抗体序列得到的功能性活性变体抗体。
示例性亲代抗体在下述实例一节和图1中进行描述。命名为#AB-28的抗体作为亲代抗体，用于制备具有一个或多个修饰CDR序列的功能性活性CDR变体，及具有一个或多个修饰FR序列(如FR1、FR2、FR3或FR4序列)，或恒定区序列，和/或一个或多个修饰CDR序列的功能性活性抗体变体。通过突变由亲代制备的变体抗体在下文中列出，命名为#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8、#AB-28-9、#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13(参见图1)。虽然这些变体抗体享有相同的SEQ ID39的VL序列，但是，使用各FR或CDR序列中存在修饰的功能性活性变体VL链也是可行的。
其它包含相同结合位点的抗体变体是可行的，该术语包括结合位点与命名为#AB-28的抗体基本上相同的变体。#AB-28抗体和功能性活性变体尤其包括有效中和Hla和交叉中和LukS-LukF、LukE-LukD和HlgB-HlgC三种同源毒性对中的至少一种、至少两种或至少三种毒性对，及可能中和其它双组分毒性的结合位点。
具体地，本发明提供一种抗体，包括命名为#AB-28的抗体的可变区，特别是CDR序列中的至少一个序列，优选CDR序列中的至少两个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个序列，或它们的功能性活性变体。更具体地说，本发明提供命名为#AB-28、#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8、#AB-28-9、#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13的抗体。
具体地，#AB-28抗体或其任何功能性活性变体可以通过重组方法，采用此处提供的序列制备，任选具有其它免疫球蛋白序列，例如，用于制备IgG抗体。
在某些方面，本发明提供所述功能性活性变体抗体，优选单克隆抗体，更优选人抗体，包括重链和轻链，其中重链或VH可变区或各CDR中的任一种包括源自亲代抗体，至少一个FR或CDR序列经修饰的氨基酸序列，所述亲代抗体是#AB-28、#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8、#AB-28-9、#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13抗体中的一种抗体。
在某些方面，本发明提供所述功能性活性变体抗体，优选单克隆抗体，更优选人抗体，包括重链和轻链，其中任何轻链或VL可变区或各CDR，包括来源于亲代抗体，至少一个FR或CDR序列经修饰的氨基酸序列，亲代抗体是#AB-28抗体。
在某些方面，本发明提供所述变体抗体，优选单克隆抗体，更优选人抗体，包括重链和轻链，其中重链和轻链，或VH/VL可变区或各CDR中的任一种包括源自亲代抗体，至少一个FR或CDR序列经修饰的氨基酸序列，所述亲代抗体是#AB-28、#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8、#AB-28-9、#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13抗体中的一种抗体。
在某些方面，本发明还提供变体抗体，包括来源于上述亲代抗体的各结合序列，如可变序列和/或CDR序列，其中结合序列，或CDR包括与亲代抗体氨基酸序列的一致性是至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％或至少99％的序列，其中变体是功能性活性变体。
具体地，功能性活性通过靶向特异性毒素的交叉反应性测定，例如，通过结合与各亲代抗体相同的表位或基本上相同的表位确定。
如果抗体交叉竞争，从而在给定时间点，仅一种抗体与表位结合，即一种抗体阻止另一种抗体的结合或调节效应，则称抗体为与“同一表位结合”或“包括同一结合位点”或“具有基本上相同的结合”特点。
此处谈及抗体时使用的术语“竞争”或“交叉竞争”指的是第一抗体，或其抗原-结合部分，以一种与第二抗体，或其抗原-结合部分的结合足够类似的方式与表位结合，从而在第二抗体存在下，第一抗体与其同源表位的结合结果，与不存在第二抗体时第一抗体的结合相比，其结合减少，这种减少是可以检测的。或者，其中在第一抗体的存在下，第二抗体与其表位的结合也减少，这种减少是可以检测的，但是，并不一定要求如此。也就是说，第一抗体可以抑制第二抗体与其表位的结合，第二抗体并不抑制第一抗体与其各表位的结合。但是，若每个抗体抑制另一个抗体与其同源表位的结合是可以检出的，不管其程度是相同、更大或更少，都称抗体为了与其各表位的结合而彼此“交叉竞争”。竞争和交叉竞争抗体均包括在本发明之内。
此处的竞争指的是采用竞争性ELISA分析或ForteBio分析，例如，如实例部分所述测定的相对抑制率大于大约30％。在特定的环境中，例如，利用竞争分析选择或筛选新抗体，设计新抗体使其具有与金黄色葡萄球菌另外的毒素或其它毒素结合的指定功能性时，设定更高的相对抑制率阈值作为合适竞争水平的标准，这是符合要求的。因此，例如，可以设定竞争性结合的标准，其中检测到至少40％，或至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或甚至至少100％相对抑制率，则抗体被视为具有足够竞争性。
正如本发明所述，一方面，本发明提供特征在于有能力与#AB-28、#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8,#AB-28-9、#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13中任一个抗体竞争的抗体分子，与Hla、LukSF、LukED和HlgCB中的任一种毒素结合，或与Hla、LukF、LukD和HlgB中的每种毒素结合。
本发明的优选抗体与所述单个抗原以较高亲和力结合，特别是具有较高结合速率和/或较低解离速率，或较高结合亲合力。
抗体的结合亲和力通常以抗体的浓度表征，即一半抗源结合位点被占据时的浓度被称为解离常数(Kd或KD)。通常，Kd<10-8M，优选Kd<10-9M，甚至更优选Kd<10-10M的结合物被视为高亲和力结合物。
然而，在特别优选的实施例中，单个抗原的结合亲和力是中等亲和力，例如，当与至少两个抗原结合时，Kd小于10-6M和不超过10-8M。
本发明可以提供中等亲和力结合物，优选一起提供亲和力成熟的过程，如果必要的话。
亲和力成熟是抗体和靶抗原的亲和力增加的过程。根据本发明此处公开的各种实施例，为了产生亲和力成熟的抗体，可以采用本领域可以利用的任何一种或多种制备方法和/或利用亲和力成熟文库。示例性的亲和力成熟方法和用途，如随机突变、细菌增变株传代、定点-突变、突变热点靶向、限定性突变、抗体替换、轻链替换、重链替换、CDR1和/或CDR1突变，及可用于实施本发明公开的各种实施例的方法和用途的产生和利用亲和力成熟文库的方法，包括，例如，Prassler等(2009)；Immunotherapy,Vol.1(4),pp.571-583；Sheedy等(2007)，Biotechnol.Adv.,Vol.25(4),pp.333-352；WO2012/009568；WO2009/036379；WO2010/105256；US2002/0177170；WO2003/074679公开的方法。
随着抗体结构的变化，包括氨基酸突变发生或免疫球蛋白基因片段体细胞突变的结果，产生和选择抗原结合位点变体，实现更大的亲和力。亲和力成熟抗体的亲和力比亲代抗体大几个log。单个亲代抗体可以开展亲和力成熟。或者，与靶抗原具有类似结合亲和力的抗体文库可以视为亲代结构，这些亲代结构经过变化得到亲和力成熟的单个抗体或亲和力成熟的抗体文库。
本发明优选的亲和力成熟抗体变体，其结合亲和力至少增加2倍，优选至少增加5倍，优选至少增加10倍，优选至少增加50倍，或优选至少增加100倍。在采用各亲代分子库的筛选活动中，可以采用具有中等亲和力的抗体，通过亲和力成熟，得到本发明具有特异性靶结合性质、结合亲和力Kd<10-8M的抗体。或者，可以通过本发明抗体的亲和力成熟，甚至进一步提高亲和力，得到亲和力较高的抗体，对应的Kd小于10-9M，优选小于10-10M，或甚至小于10-11M，最优选处于皮摩尔范围。
在某些实施例中，结合亲和力通过亲和力ELISA法测定。在一些实施例中，结合亲和力通过BIAcore、ForteBio或MSD法测定。在一些实施例中，结合亲和力通过动力学方法测定。在一些实施例中，结合亲和力通过平衡/溶液法测定。
吞噬效应细胞可以通过采用补体活化的另一种途径活化。与微生物表面抗原结合的抗体利用其Fc区吸引补体级联成分，启动“经典”补体系统的活化。这导致刺激吞噬效应细胞，通过补体依赖的细胞毒性(CDC)，吞噬效应细胞基本上杀灭靶细菌。
根据一个具体实施例，采用标准ADCC或CDC试验测定表明，本发明抗体在免疫效应细胞存在下具有细胞毒活性。如果与对照相比，细菌溶解百分数明显增加的话，表明本发明抗体具有ADCC或CDC试验测定的细胞毒活性。与ADCC或CDC相关的细胞毒活性优选以绝对百分数增加量来衡量，优选高于5％，更优选高于10％，甚至更优选高于20％。补体固定可能是特别相关的，这种机制可以通过清除形成的免疫复合物来清除感染部位或血液中的毒素。
根据一个具体实施例，本发明抗体具有IgG的Fc部分赋予的免疫调节功能。改变的糖基化作用增加，例如，末端半乳糖残基的唾液酸化作用，可能通过DC-SIGN信号传导而具有消炎作用。优先与Fcγ受体IIb结合(抑制)，而不是与Ia、IIa和III Fcγ受体结合，可能提供了消炎作用。
本发明特别提供了交叉反应性抗体，所述抗体是通过一种鉴定具有多特异性的中和抗体的方法，例如，通过交叉反应性发现选择方案得到的。因此，对于包括与两种靶，靶A和靶B具有反应性的抗体的抗体文库，可以首先根据与其中一种靶，例如，靶A的反应性进行选择，然后，根据与另一种靶，如靶B的反应性进行选择。每轮相继的选择都增强了所得库对两种靶的反应强度。因此，本方法在鉴定对两种不同的靶具有交叉反应性的抗体，及交叉中和病原体的潜力方面尤其有用。该方法还可增加一轮其它靶富集步骤，延伸用于鉴定对其它靶具有反应性的抗体。
在某些情况下，交叉反应性抗体通过针对单个抗原的筛选制备。为了增加分离交叉反应性克隆的可能性，应针对多个抗原开展逐次筛选，采用几种选择性压力。特殊mAb选择策略以交替的方式使用不同的毒素组分。例如，测定中和抗-Hla mAbs与人嗜中性白血球上的PVL和PVL类毒素的结合情况，这些毒素是金黄色葡萄球菌感染期间双组分毒素的主要靶。
采用图7各序列，通过重组方法制备的重组毒素，或从金黄色葡萄球菌培养上清液分离的毒素，可用于从抗体文库，例如，酵母展示抗体文库中选择抗体，参见，例如：BlaiseL,Wehnert A,Steukers MP,van den Beucken T,Hoogenboom HR,Hufton SE。Construction and diversification of yeast cell surface displayed libraries byyeast mating:application to the affinity maturation of Fab antibodyfragments.Gene.2004Nov 24；342(2):211-8；Boder ET,Wittrup KD.Yeast surfacedisplay for screening combinatorial polypeptide libraries.NatBiotechnol.1997Jun；15(6):553-7；Kuroda K,Ueda M.Cell surface engineering ofyeast for applications in white biotechnology.Biotechnol Lett.2011Jan；33(1):1-9.doi:10.1007/s10529-010-0403-9.Review；Lauer TM,Agrawal NJ,Chennamsetty N,Egodage K,Helk B,Trout BL.Deveiopability index:a rapid in silico tool for thescreening of antibody aggregation propensity.J Pharm Sci.2012Jan；101(1):102-15；Orcutt K.D.和Wittrup K.D.(2010),207-233doi:10.1007/978-3-642-01144-3_15；Rakestraw JA,Aird D,Aha PM,Baynes BM,Lipovsek D.Secretion-and-capture cell-surface display for selection of target-binding proteins.Protein Eng DesSel.2011Jun；24(6):525-30；美国专利6,423,538；美国专利6,696,251；美国专利6,699,658；公开的PCT申请，公开号WO2008118476。
在任一个事件中，交叉反应性可以采用本领域熟悉的抗体优化方法进一步改善。例如，此处所述免疫球蛋白链可变区的某些区域可以采用一种或多种优化策略，包括轻链替换、目标突变形成、CDR合并及选定CDR和/或构架区的定向突变。
鉴定具有期望中和性质的抗体的筛选方法可以是抑制与靶细胞结合的毒素，抑制二聚体或低聚体的形成，抑制孔的形成，抑制细胞溶解，抑制细胞因子、淋巴因子及任何促炎信号传导，和/或抑制对动物的体内影响(死亡、溶血现象、过度发炎、器官功能性障碍)。例如，可以利用标准方法，根据与要求毒素的直接结合，对反应性进行评估。
一旦鉴定出具有要求性质的交叉中和抗体，可以确定抗体识别的优势表位。表位定位的方法是本领域所熟悉和公开的，例如，Epitope Mapping:A Practical Approach,Westwood and Hay,eds.,Oxford University Press,2001中所述。
表位定位涉及抗体结合表位的鉴定。对于熟悉本领域的技术人员来说，有许多种测定蛋白质上表位位置的方法，包括抗体-抗原复合物的结晶学分析、竞争试验、基因片段表达试验和基于合成肽的试验。谈到抗体时所称“结合相同表位”的抗体此处应按下述方式理解。当两个抗体识别相同或空间上重叠的表位时，抗体被称为结合相同或基本上相同或大体上相同的表位。测定两个抗体是否与相同或空间上重叠的表位结合的常用方法是竞争试验，该试验采用标记抗原或标记抗体，可以配置所有数量的不同格式。通常，抗原定植在96-孔板上，采用放射性或酶标记方法测定未标记抗体阻断标记抗体结合的能力。
一旦鉴定出具有要求交叉中和性质的抗体，可以采用本领域熟悉的方法包括，例如，杂交瘤技术或重组DNA技术制备这种抗体，包括抗体片段。
在杂交瘤方法中，小鼠或其它合适的宿主动物，如仓鼠，经免疫引出淋巴细胞，产生或能够产生与免疫用蛋白质特异性结合的抗体。或者，淋巴细胞可以体外免疫。
然后，采用合适的融合剂，如聚乙二醇，淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。对杂交瘤在其中生长的培养基进行试验，产生抗抗原的单克隆抗体。优选通过免疫沉淀法或通过体外结合试验如放射免疫法(RIA)或酶联免疫吸附剂法(ELISA)对杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性进行测定。
例如，可以采用熟悉的重组表达载体，例如，本发明的质粒或包括编码抗体序列的核苷酸序列的表达盒，通过分离DNA编码要求抗体链和利用表达编码序列转染重组宿主细胞，重组单克隆抗体。重组宿主细胞可以是原核细胞和真核细胞，如前文所述的那些细胞。
根据具体的方面，核苷酸序列可用于基因操作，对抗体进行人源化或改善亲和力，或抗体的其它特点。例如，恒定区可以工程定制，使其与人类恒定区更类似，从而如果抗体在临床试验中使用和治疗人类时，可以避免免疫应答。基因操作抗体序列，使其与靶向毒素的亲和力更大及抗金黄色葡萄球菌的功效更大，是符合要求的。显然，对于熟悉本领域的技术人员来说，可以改变抗体的一种或多种多核苷酸，却仍然保持其对靶向毒素的结合能力。
采用各种方法产生抗体分子通常是人们熟悉的。例如，美国专利6331415(Cabilly等人)描述了一种重组制备抗体的方法，其中重链和轻链从单一载体或从单一细胞中两个独立的载体同时表达。Wibbenmeyer等人，(1999,Biochim Biophys Acta 1430(2):191-202)以及Lee和Kwak(2003,J.Biotechnology 101:189-198)描述了采用独立的大肠杆菌培养基表达的质粒，从独立产生的重链和轻链制备单克隆抗体的方法。与抗体制备有关的其它各种方法在，例如，Harlow,et al.,ANTIBODIES:A LABORATORY MANUAL,Cold SpringHarbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,(1988)中进行了描述。
如果要求的话，对本发明的抗体，例如，#AB-28、#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8、#AB-28-9、#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13抗体中的任一个抗体进行测序，然后，多核苷酸序列或其序列变体或突变体可以克隆为表达或传播的载体。编码抗体的序列可以保持在宿主细胞的载体内，然后，宿主细胞可以扩大和冷冻供将来之用。细胞培养中重组单克隆抗体的制备可以采用本领域熟悉的方法通过B细胞抗体基因克隆进行。
另一方面，本发明提供一种分离核酸，所述分离核酸包括编码制备本发明重组抗体的序列。
另一方面，本发明提供一种分离核酸，所述核酸包括编码制备本发明重组表位的序列，或一种包括本发明所述表位的分子。但是，本发明的表位也可以合成制备，例如，采用本领域熟悉的任何合成方法制备。
编码核酸的抗体或表位可以具有任何合适的特点和包括任何合适的特点或其组合。因此，例如，编码核酸的抗体或表位可以是DNA、RNA或它们的混合物的形式，可以包括非天然碱、修饰骨架，例如，促进核酸稳定性的硫代磷酸酯骨架，或它们两者。核酸掺入到本发明的表达盒、载体或质粒内比较有利，包括促进靶宿主细胞中所需表达、复制和/或选择的特点。所述特点实例包括复制成分来源、选择基因成分、启动子成分、增强子元件成分、聚腺苷酸化序列成分、终止成分等，其中许多合适的实例是人们熟悉的。
本发明进一步提供包含本发明所述一种或多种核苷酸序列的重组DNA构建体。这些重组构建体与载体一起使用，例如，质粒、噬菌粒、噬菌体或病毒载体，在载体内插入编码任何本发明抗体的DNA分子。
利用培养基中的连续细胞系采用产生抗体分子的任何方法制备单克隆抗体。制备单克隆抗体的合适方法的实例包括Kohler等人(1975,Nature 256:495-497)描述的杂交瘤方法和人源B-细胞杂交瘤方法(Kozbor,1984,J.Immunol.133:3001；和Brodeur等人,1987,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications(Marcel Dekker,Inc.New York(纽约Marcel Dekker公司))pp 51-63))描述的方法。
此外，本发明提供药物组合物，包括本发明所述的抗体或免疫原及药学上可接受的载体或赋形剂。这些药用组合物可以按照本发明所述以弹丸注射或输注或持续输注的方式施用。适合帮助这种施用手段的药物载体是本领域公知的。
药学上可接受的载体通常包括与本发明抗体或相关组合物或组合生理上相容的任何和所有合适的溶剂、分散介质、涂料、抗细菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的其它实例包括无菌水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等以及它们的任何组合。
一方面，抗体可与适合要求施用途径的一种或多种载体结合，抗体可以，例如，与任何乳糖、蔗糖、淀粉、链烷酸的纤维素酯、硬脂酸、滑石粉、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、阿拉伯树胶、明胶、海藻酸钠、聚维酮、聚乙烯醇和任选进一步片剂化或胶囊化用于传统施用。或者，抗体可以溶于盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、羧基甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、麻油、黄蓍胶和/或各种缓冲溶液。其它载体、佐剂和施用方式是药学领域公知的。载体可以包括控释材料或时间延迟材料，如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯单独使用或与蜡，或本领域熟悉的其它材料一起使用。
其它药学上可接受的载体是本领域公知的，例如，REMINGTON'S PHARMACEUTICALSCIENCES中进行了描述。液体制剂可以是溶液、乳液或悬浮液，可以包括赋形剂，如悬浮剂、增溶剂、表面活性剂、防腐剂和螯合剂。
本发明还提供药物组合物，其中配制本发明的抗体或免疫原及一种或多种治疗活性剂。将具有要求纯度的所述免疫球蛋白与任选地药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合，配制本发明抗体或免疫原的稳定制剂，以冻干制剂或水溶液的形式贮存。体内施用制剂特别是无菌的，优选是无菌水溶液形式。通过无菌过滤膜过滤或其它方法，很容易实现这一点。本发明公开的抗体和其它治疗活性剂还可以配制为免疫脂质体，和/或装在微胶囊中。
包含本发明抗体或免疫原的药物组合物的施用可以采用各种方式，包括口服、皮下施用、静脉施用、鼻内施用、囊内施用、经皮施用、粘膜施用、局部施用，例如，凝胶、软膏、洗液、乳膏等，腹膜内、肌肉内、肺内施用，例如，采用可吸入技术或肺部给药系统、阴道、肠胃外、直肠或眼内施用。
肠胃外给药所用示例性制剂包括那些适合皮下、肌肉内或静脉注射的制剂，例如，无菌溶液、乳液或悬浮液。
在一个实施例中，本发明的抗体或免疫原是给受试者施用的唯一的治疗活性剂，例如，作为疾病改善或预防单一疗法。
在另一个实施例中，本发明的抗体或免疫原在混合物(cocktail)中与其它抗体或免疫原结合使用，例如，在各部分的混合物或试剂盒中结合，靶向金黄色葡萄球菌，这样该混合(cocktail))包含不止一种向受试者施用的治疗活性剂，例如，作为疾病改善或预防的联合治疗。
或者，本发明的抗体或免疫原与一种或多种其它治疗或预防剂联合使用，包括但不限于标准治疗，例如，炎症的抗生素、类固醇和非-类固醇抑制剂，和/或其它基于抗体的治疗，如采用抗菌剂或消炎剂。
一种联合治疗法是特别采用标准治疗方案，例如，用于治疗MRSA感染的方案。这种方案可能包括抗生素，例如替加环素(tygecycline)、利奈唑胺、甲氧西林和/或万古霉素。
在联合治疗中，抗体以混合物施用，或与一种或多种其它治疗方案共用，例如，联合治疗之前、同时或之后使用。
在某些情况下，免疫原的预防性施用可以采用包括本发明免疫原的疫苗，即单价疫苗。但是，可以采用包括不同免疫原的多价疫苗，诱导针对相同或不同靶向病原体的免疫应答。
本发明抗体、免疫原或各药物制剂的生物学特性可以以活体外细胞、组织和整个有机体实验进行表征。正如本领域熟悉的那样，为了测量药物治疗疾病或疾病模型的效力，或测量药物的药代动力学、药效动力学、毒性和其它特性，药物通常在动物体内测试，包括但不限于小鼠、大鼠、兔子、狗、猫、猪和猴子。动物可能称为疾病模型。治疗通常在小鼠中试验，包括但不限于裸鼠、严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠、异种移植小鼠和转基因小鼠(包括敲除或敲入)。这种实验可以提供确定抗体作为治疗或预防潜力的有意义的数据，包括合适的半衰期、效应子功能性、(交叉-)中和活性和/或主动或被动免疫疗法时的免疫应答。任何有机体，优选哺乳动物，可用于试验。例如，由于与人类的遗传相似性，灵长类动物、猴子适合治疗模型，因此，可用于试验主题试剂或组合物的功效、毒性、药代动力学、药效动力学、半衰期或其它特性。药物要获得批准，最终需要在人体内进行试验，因此，当然需要设计这些实验。因此，本发明的抗体、免疫原和各药物组合物可以在人体内试验，确定其治疗效果或预防效果、毒性、免疫原性、药代动力学和/或其它临床特性。
本发明还提供本发明主题的抗体用于诊断目的，例如，在检测和定量测定生物流体样本中毒素或作为免疫试剂的抗体或靶的浓度的方法中使用。
本发明还提供检测生物标本(如体液)中毒素水平或金黄色葡萄球菌感染程度的方法，包括将标本与本发明的抗体接触的步骤。本发明的抗体可以在任何熟悉的试验方法中使用，如竞争结合试验、直接或间接夹心法、免疫沉淀法和酶联免疫吸附法(ELISA)。
本发明使用的体液包括受试者的生物标本，如组织提取液、尿液、血、血清、大便和粘液。
在一个实施例中，所述方法包括在允许抗体附着到固体载体表面的条件下，采用与靶特异性形成复合物的过量的某种类型的抗体片段(如本发明抗体靶向的毒素中的至少一种毒素)接触固体载体。得到抗体附在其上的固体载体，然后，用生物流体标本接触载体，从而生物流体中的靶与抗体结合，形成靶-抗体复合物。所述复合物可以采用可以检测的标记进行标记。或者，靶或抗体可以在形成复合物之前进行标记。例如，可以与抗体结合的可以检测的标记(标签)。然后，所述复合物可以检测和定量测定，从而检测和定量测定生物流体样本中靶的浓度。
针对具体应用，本发明的抗体与标记或报告分子结合，标记或报告分子选自有机分子、酶标记、放射性标记、彩色标记、荧光标记、发色标记、发光标记、半抗原、地高辛配基、生物素、金属复合物、金属、胶体金以及它们的混合物。与标记或报告分子结合的抗体可用于，例如，试验系统中或诊断方法中，例如，用于诊断金黄色葡萄球菌感染或与其有关的病情。
本发明的抗体可以与其它分子结合，可以在，例如，结合试验(如ELISA)和结合研究中简单检测出所述结合。
本发明的另一个方面提供一种包括抗体的试剂盒，除一种或多种抗体之外，所述试剂盒还可以包括各种诊断剂或治疗剂。试剂盒还可以包括诊断方法或治疗方法的说明书。所述说明书可以，例如，提供在试剂盒中包含的装置上，例如，工具或装置，用于准备用于诊断目的的生物标本，如在测定各毒素诊断疾病之前分离含细胞和/或蛋白质的组分。所述试剂盒优选包括抗体和诊断剂或可在本发明所述的一种或多种诊断方法中使用的试剂。在另一个优选的实施例中，试剂盒包括抗体，例如，冻干形式的抗体，和/或药学上可接受的载体，可在使用之前将它们混合，形成近期可施用的注射组合物。
具体地，命名为#AB-28的抗体的特征在于图1所示氨基酸序列，具体地分别是SEQID20的VH序列和SEQ ID 40的HC序列，特别是VH CDR序列，SEQ ID 1的CDR1，SEQ ID2的CDR2，SEQ ID 3的CDR3，及进一步的特征在于VH FR序列，SEQ ID 13的FR1，SEQ ID 15的FR2，SEQ ID 17的FR3，及SEQ ID 19的FR4，及进一步的特征分别在于SEQ ID 39的VL序列，SEQ ID 52的LC序列，特别是VL CDR序列，SEQ ID 32的CDR4，SEQ ID 33的CDR5，及SEQ ID34的CDR6，及进一步的特征在于VL FR序列，SEQ ID 35的FR1，SEQ ID 36的FR2，SEQ ID 37的FR3，及SEQ ID 38的FR4。
命名为#AB-28-3、#AB-28-4、#AB-28-5、#AB-28-6、#AB-28-7、#AB-28-8、#AB-28-9,#AB-28-10、#AB-28-11、#AB-28-12或#AB-28-13的抗体变体的特征在于图1所示氨基酸序列，特别是图1所述的各自的VH或HC序列，及进一步是VL或LC序列，包括FR序列和CDR序列。
命名为#AB-24的抗体，特别是抗体轻链和/或重链的特征在于在DSMZ-DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen(德国微生物和细胞培养物保藏中心),Mascheroder Weg 1b/InhoffenstraPe 7B,38124Braunschweig(DE)以本发明所示保藏号保藏的生物材料。
DSM 26747是采用质粒转化的大肠杆菌宿主细胞，其中质粒含#AB-24重链(AB-24-HC)的编码序列：大肠杆菌DH5αAB-24-HC＝DSM 26747，保藏日期：2013年1月8日；保藏人：Arsanis Biosciences GmbH，奥地利维也纳。
DSM 26748是采用质粒转化的大肠杆菌宿主细胞，其中质粒含#AB-24轻链(AB-24-LC)的编码序列：大肠杆菌DH5αAB-24-LC＝DSM 26748，保藏日期：2013年1月8日；保藏人：奥地利维也纳Arsanis Biosciences GmbH。
下述定义的主题视为本发明的实施例：
1.一种交叉中和抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体包括抗体重链可变区(VH)的至少三个互补决定区(CDR1至CDR3)，其中：
A)所述抗体包括：
a)CDR1，包括氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQ ID 1)或由氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQID 1)组成；及
b)CDR2，包括氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)或由氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)组成；及
c)CDR3，包括氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)或由氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)组成；
或
B)抗体包括以下的至少一种功能性活性CDR变体：
a)由氨基酸序列SEQ ID 1组成的亲代CDR1；或
b)由氨基酸序列SEQ ID 2组成的亲代CDR2；或
c)由氨基酸序列SEQ ID 3组成的亲代CDR3；
其中所述功能性活性CDR变体包括在亲代CDR序列中的至少一个点突变，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列或由与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列组成。
2.定义1所述的抗体，其中所述功能性活性CDR变体包括以下至少一种：
a)亲代CDR序列中有1、2或3个点突变；或
b)亲代CDR序列的任何四个C-端或四个N-端，或四个中心氨基酸位置有1或2个点突变。
3.定义1或2所述的抗体，其中所述功能性活性CDR变体是以下中的任一种：
a)CDR1序列，选自由YPISSGMGWG(SEQ ID 4)和YSISSGMGWD(SEQ ID 5)组成的组；或
b)CDR2序列，选自由SVDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 6)、RIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID7)、RVDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 8)、SIDQRGSTYYNPSLEG(SEQ ID 9)和SIDQRGSTYYNPPLES(SEQ ID 10)组成的组；或
c)CDR3序列，选自由ARDAGHGADMDV(SEQ ID 11)和ARDAGHAVDMDV(SEQ ID 12)组成的组。
4.定义1至3任一项所述的抗体，选自下述抗体：
a)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 6的CDR2序列；及
c.SEQ ID 11的CDR3序列；
b)抗体，包括：
a.SEQ ID 4的CDR1序列；及
b.SEQ ID 7的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
c)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 8的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
d)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 2的CDR2序列；及
c.SEQ ID 12的CDR3序列；
e)抗体，包括：
a.SEQ ID 5的CDR1序列；及
b.SEQ ID 9的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
f)抗体，包括：
a.SEQ ID 5的CDR1序列；及
b.SEQ ID 10的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
5.定义1至3任一项所述的抗体，包括选自由SEQ ID 20–31组成的组中的VH氨基酸序列。
6.定义1至3任一项所述的抗体，包括选自由SEQ ID 40-51组成的组中的抗体重链(HC)氨基酸序列，或删除C-端氨基酸的SEQ ID 40–51的任何氨基酸序列。
7.定义1至6任一项所述的抗体，进一步包括抗体轻链可变区(VL)的至少三个互补决定区(CDR4至CDR6)，优选其中：
A)所述抗体包括：
a)CDR4，包括氨基酸序列RASQGISRWLA(SEQ ID 32)或由氨基酸序列RASQGISRWLA(SEQ ID 32)组成；及
b)CDR5，包括氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID 33)或由氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID33)组成；及
c)CDR6，包括氨基酸序列QQGYVFPLT(SEQ ID 34)或由氨基酸序列QQGYVFPLT(SEQID 34)组成；
或
B)所述抗体包括以下的至少一种功能性活性CDR变体：
a)由氨基酸序列SEQ ID 32组成的亲代CDR4；或
b)由氨基酸序列SEQ ID 33组成的亲代CDR5；或
c)由氨基酸序列SEQ ID 34组成的亲代CDR6；
其中所述功能性活性CDR变体包括在亲代CDR序列中的至少一个点突变，并包括与
亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列或由与亲代CDR序列具有至
少60％序列一致性的氨基酸序列组成。
8.1.定义7所述的抗体，包括SEQ ID 39的VL氨基酸序列或SEQ ID 52的抗体轻链(LC)氨基酸。
8.2.定义1至3任一项所述的抗体，包括选自SEQ ID 40–51的HC氨基酸序列，任选地删除C-端赖氨酸，及进一步包括SEQ ID 52的LC氨基酸。
9.一种交叉中和抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体是亲代抗体的功能性活性变体抗体，所述亲代抗体包括SEQ ID 20的VH氨基酸序列，及SEQ ID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点，所述功能性活性变体抗体在SEQ ID 20或SEQ 39的任何构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)中包括至少一个点突变，与每种毒素结合的亲和力Kd小于10-8M，优选小于10-9M。
10.定义9所述的抗体，其中所述功能性活性变体抗体包括至少一种定义1至3任一项定义的功能性活性CDR变体。
11.定义9或10所述的抗体，其中所述功能性活性变体抗体具有与亲代抗体相同表位结合的特异性。
12.定义1至11任一项所述的抗体，其中至少一个点突变是氨基酸替换、删除和/或插入一个或多个氨基酸中的任一种。
13.定义1至12任一项所述的抗体，其中至少一个点突变是以下任一种氨基酸替换：
-CDR2中的S51R或S51K；或
-CDR3中的G103A、V104A或V104S。
14.定义1至13中任一项所述的抗体，所述抗体具有结合Hla及双组分毒素中至少一种F-组分(优选至少两种或三种F-组分)的交叉特异性。
15.定义14所述的抗体，其中所述F-组分选自HlgB、LukF和LukD，或γ-溶血素、PVL毒素和PVL-类毒素的F组分和S组分的同源对和非同源对的任何F-组分，优选HlgAB、HlgCB、LukSF、LukED、LukS-HlgB、LukSD、HlgA-LukD、HlgA-LukF、LukEF、LukE-HlgB、HlgC-LukD或HlgC-LukF。
16.定义1至15任一项所述的抗体，所述抗体抑制一种或多种毒素与磷酸胆碱的结合。
17.定义1至16所述的抗体，所述抗体是全长单克隆抗体、其抗体片段或融合蛋白，其中抗体片段包括至少一个带所述结合位点的抗体区，融合蛋白包括至少一个带所述结合位点的抗体区。
18.一种表达盒或质粒，包括表达定义1至17任一项所述抗体轻链和/或重链的编码序列。
19.一种宿主细胞，包括定义18所述的表达盒或质粒。
20.产生定义1至17任一项所述抗体的方法，其中将定义19所述的宿主细胞在一定条件下培养或保持在一定条件下，以产生所述抗体。
21.产生亲代抗体功能性活性抗体变体的方法，所述亲代抗体包括SEQ ID 20-31任一项VH氨基酸序列，及SEQ ID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点，所述方法包括在SEQ ID20-31或SEQ 39中任一个的构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)设计至少一个点突变，得到变体抗体，并通过以下任一种方法确定变体抗体的功能性活性：
--与金黄色葡萄球菌的Hla及双组分毒素中的至少一种毒素结合的亲和力Kd小于10-8M，优选小于10-9M，和/或
-变体抗体与Hla或双组分毒素中的至少一种毒素的结合与亲代抗体竞争；
其中在确定功能性活性之后，选择功能性活性变体，用于通过重组制备方法进行制备。
22.定义1至16任一项所述抗体用于治疗存在金黄色葡萄球菌感染风险的受试者或被金黄色葡萄球菌感染的受试者的用途，包括给受试者施用有效剂量的抗体，限制受试者的感染，改善所患感染引起的疾病状况，或抑制金黄色葡萄球菌疾病，如肺炎、脓毒病、菌血症、伤口感染、脓疮、手术伤口感染、眼内炎、疖病、痈病、心内膜炎、腹膜炎、骨髓炎或关节感染的发病。
23.包含定义1至16任一项所述抗体的药物制剂，优选包含肠胃外或粘膜制剂，任选包含药学上可接受的载体或赋形剂。
24.定义1至16任一项所述的抗体用于检测任何金黄色葡萄球菌感染，包括高毒素MRSA感染，如坏死性肺炎的诊断用途，及用于检测疖病和痈病中毒素的产生。
25.定义1至16任一项所述抗体的诊断制剂，任选地包含带标记的抗体和/或其它带标记的诊断试剂。
26.一种Hla单体形成的晶体，其衍射x-射线辐射，产生一衍射图，该图代表与定义1至16任一项所述抗体或其结合片段(优选Fab片段)接触的Hla边缘域(rim domain)的三维结构物，具有下述细胞常数：空间群P21212，任选地偏差在 至之间。
27.一种LukD单体形成的晶体，其衍射x-射线辐射，产生一衍射图，该图代表与定义1至16任一项所述抗体或其结合片段(优选Fab片段)接触的边缘域(rim domain)的三维结构物，具有下述细胞常数：空间群H32，任选地偏差在至2.00之间。
28.定义1至16任一项所述抗体的分离互补位，或包括所述互补位的结合分子。
29.定义1至16任一项所述抗体识别的分离构象表位，其特征在于Hla、LukD、LukF或HlgB边缘域的三维结构物。
30.定义29所述的表位，其特征在于选自下述组中的三维结构物：
a)三维Hla结构物，其特征在于SEQ ID 54的接触氨基酸残基179-191、194、200、269和271的结构坐标；
b)三维LukF结构物，其特征在于SEQ ID 55的接触氨基酸残基176-188、191、197和269的结构坐标；优选地具有SEQ ID 58的氨基酸残基176-179、181-184、186-188、191、197和267；
c)三维LukD结构物，其特征在于SEQ ID 54的接触氨基酸残基176-188、191、197和267的结构坐标；优选地具有SEQ ID 62的氨基酸残基176-179、181-184、186-188、191、197和267；
d)三维HlgB结构物，其特征在于SEQ ID 56的接触氨基酸残基177-189、192、198和268的结构坐标；优选地具有SEQ ID 68的氨基酸残基177-180、182-185、187-189、192、198和268；
e)定义26所述晶体的三维Hla边缘域结构物；
f)定义27所述晶体的三维LukD边缘域结构物；
g)a)至f)任一项三维结构物的同系物，其中所述同系物包括与接触氨基酸残基骨架原子的均方根差在至之间的结合位点。
31.定义29或30所述的表位，所述表位通过结合分子结合。
32.一种与定义29或30所述表位特异性结合的结合分子，优选选自蛋白质、肽、拟肽类物、核酸、碳水化合物、脂质、寡肽、适配子和小分子化合物，优选抗体、抗体片段或融合蛋白，抗体片段包括含所述结合位点的至少一个抗体区，融合蛋白包括含结合位点的至少一个抗体区。
33.定义32所述的结合分子，所述结合分子是与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合物。
34.定义32或33所述的结合分子，所述结合分子阻止毒素与磷酸胆碱结合，并与定义1至16任一项所述抗体竞争。
35.鉴定与定义29或30所述表位特异性结合的结合物的筛选方法或分析方法，包括以下步骤：
-将候选化合物与定义29或30定义的三维结构物接触；及
-对候选化合物与三维结构物之间的结合进行评价；其中候选化合物和三维结构物之间的结合可以鉴定候选化合物是否是与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合物。
36.一种免疫原，包括：
a)定义29或30的表位；
b)任选其它与(a)中所述表位非天然相关的表位；及
c)载体，优选是药学上可接受的载体，优选包含缓冲物质和/或佐剂。
37.疫苗制剂中根据定义36所述的免疫原，优选肠胃外使用。
38.根据定义36或37所述的免疫原，通过施用有效剂量的所述免疫原治疗受试者，防止受试者被金黄色葡萄球菌感染，预防所述感染引发的疾病，或抑制金黄色葡萄球菌肺炎发病。
39.根据定义38所述的免疫原，用于引发保护性的免疫应答。
40.编码根据定义1至16任一项所述抗体或根据定义29或30所述表位的分离核酸。
参照下述实例将更充分地理解前述说明。但是，这些实例仅仅只是本发明实践一个或多个实施例的方法代表，不应视为限制本发明的范围。
实例
实例1以高亲和力与单个毒素组分结合的Hla–双组分毒素交叉反应性mAbs的产生
方法：
重组毒素的产生。S-组分和F-组分的基因源自TCH1516USA300菌株，密码子优化用于大肠杆菌表达，通过基因合成产生(Genescript,USA)，(参见图7)，克隆为pET44a，在没有信号肽序列的BL21、Rosetta或Tuner DE3菌株中产生蛋白质(采用PrediSi程序测定；Hiller,Nucleic Acids Res.,2004,32:W375-W379)。
LukS、LukF、LukE、LukD、HlgA、HlgC和HlgB以可溶解的形式表达，具有N-端NusA/His6标记，该标记在第一纯化步骤后通过蛋白水解清除。纯化通常包括三个色谱法步骤1)IMAC(固定化金属离子亲和柱)2)阳离子交换或IMAC，及3)体积排阻色谱法。澄清的细胞提取物被负载到金属离子亲和柱(IMAC 5ml,GE Healthcare或Ni-IDA,15ml,Novagen)上，融合蛋白采用500mM咪唑洗脱。在缓冲液切换为剪切缓冲液(20mM Tris,pH 7.5,200mM NaCl,2mM CaCl2)且采用肠激酶(New England Biolabs)酶切之后，采用金属离子亲和色谱法或阳离子交换色谱法(SP-Sepharose FF,5ml,GE Healthcare或EMD SO3-，XK16柱，Merk)将成熟蛋白质(N-端“SL”含两个另外的氨基酸)与NusA/His6标记分离。在于pH 7.5 50mM磷酸钠及300mM NaCl中平衡的凝胶过滤柱(Superdex 75 16/60,GE Healthcare)上开展最后的纯化步骤，得到纯(>95％)蛋白质，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)判断。通过SDS-PAGE分析蛋白质的纯度，通过体积排阻色谱法分析单体状态，通过圆二色性分析二级结构，通过体外毒素效力分析方法分析功能性。
为了进行抗体选择，按照生产商的说明，采用氨基酸反应性试剂Sulfo-NHS-LC生物素(Thermo-Scientific)对蛋白质进行标记，得到1-2.5生物素/蛋白质。
单克隆抗体的选择。采用体外酵母选择系统和相关方法，从全长人IgG1抗体库分离出毒素特异性抗体(WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568)。采用不同浓度的抗体表达酵母细胞培养生物素标记Hla或杀白细胞素单体，然后，在相继的几轮选择中，采用链霉亲和素二级试剂，利用磁珠分选法和荧光激活细胞分选(FACS)法，鉴定毒素-结合mAbs。通过交替使用不同的毒素，选择Hla和双-组分毒素交叉反应性mAbs。然后，通过筛选的酵母克隆产生抗体，并通过蛋白A亲和色谱法纯化。
采用ForteBio Octet Red仪器[Pall Life Sciences]，通过干涉测量，证明了mAbs与不同毒素的结合。生物素化抗原或抗体被固定在传感器上，并分别测量了溶液中抗体Fab片段或抗原的结合和解离(通常是200nM)。Fab KD亲和力采用MSD方法，利用SectorImmager 2400仪器(Meso Scale Discovery)测定。一般说来，将20pM生物素化抗原采用不同浓度的Fab在室温培养16小时，未结合抗原被捕捉在固定化IgG上。亦参见，例如，Estep等的“High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinityand epitope binning”，MAbs，Vol.5(2),pp.270-278(2013)。
结果：
首先采用Hla，然后采用HlgB、LukF和LukD作为来自全长人IgG1文库、在酵母表面表达的抗原(多样性大约～10-10)，开展交替讯问，经过连续几轮选择，发现毒素交叉反应性mAb：AB-28。AB-28对Hla和HlgB具有较高的亲和力(<10pM)，但是，与LukF和LukD的结合亲和力低1和2log(分别>100pM和>1nM)。因此，采用基于AB-28CDR序列产生的人IgG1文库，对AB-28进行优化。通过低浓度的LukF、LukD、HlgB和Hla连续筛选，得到亲和力改善的抗体。通过基于ForteBio或MSD的结合方法，鉴定了抗体对LukF和/或LukD的结合亲和力得到了改善。有些抗体显示出对LukF和LukD的亲和力显著改善，同时，对Hla和HlgB的亲和力仍然保持在单位数皮摩尔水平。所述抗体的实例如图1所示。如图1所示，亲和力的改善通过替换CDR区中的单个氨基酸实现。
实例2Hla–双-组分毒素交叉反应性mAbs与LukF和LukD的结合亲和力的改善提高
了体外毒素中和效力
方法：
体外法测定毒素介导的细胞溶解。通过测定中毒细胞(多形核细胞(PMN)，分化HL60或A549细胞)的ATP水平，对靶细胞的毒素效力进行评价。简单地说，将Hla或F-组分和S组分的等摩尔混合物在试验介质中连续稀释，用于使细胞中毒。然后，采用商业试剂盒(CellLuminescent Cell Viability Assay；Promega,USA)，按照生产商的说明，测定PMN，分化HL60和A549细胞的细胞存活率。相对模拟-处理对照样，计算％存活率。
对于Hla，采用人肺上皮细胞系A549或兔子红细胞，开展两种不同的体外试验。在前一天，将A549细胞(HPACC#86012804)进行胰蛋白酶化，按20000个细胞/孔的密度，在补充10％FCS和Pen/Strep的F12K介质(美国Gibco)中培养(96孔半区发光板，奥地利Greiner)。细胞在以5％FCS和Pen/Strep补充的F12K介质中于37℃+5％CO2中毒6小时。
对于兔子红细胞试验，从新西兰白兔(New Zealand White Rabbits)(德国Preclinics GmbH)采集兔子EDTA-全血。将血液采用PBS w/o Ca++/Mg++(奥地利PAALaboratories)按1:1稀释，在50ml聚丙烯管中，在15ml LSM 1077(奥地利PAALaboratories)上分层15ml稀释血液，制备梯度。以680x g(RT，无刹车)离心分离之后，通过抽吸除去血小板、血浆、PBMC和Ficoll，并舍弃。将剩下的RBC球在40ml PBS w/o Ca++/Mg++(680x g离心分离，RT，无刹车)中洗涤两次，最后在20ml PBS w/o Ca++/Mg++中再悬浮。在标准血球计中测定红细胞的完整性和细胞数量。溶血试验在37℃+5％CO2采用在PBS w/o Ca++/Mg++中稀释X小时的5×107兔子红细胞开展。
为了测定双组分毒素的杀白细胞活性，采用人PMN细胞或分化HL-60细胞，测定重组毒素或金黄色葡萄球菌培养上清液诱导的细胞溶解。从红十字会(肝素化)或通过静脉穿刺从正常健康志愿者身上获取用于PMN分离的新鲜人全血，并将其放在K-EDTA或肝素真空采血管(BD，美国)中。为了聚集红细胞，向5份血中加入1份HetaSep溶液(法国Stem CellTechnologies公司)，混合，在37℃培养，直到血浆/红细胞中间相占总体积的大约50％。富白细胞的血浆层在2-步Percoll梯度中仔细分层(73％和63％Percoll Plus在HBSS中稀释，GE Healthcare)，并在680x g，RT，无刹车离心分离30分钟。通过抽吸法，取出转后梯度的第一层和第二层(主要是血清和单细胞)。从第二不透明层中收获PMN，并在50ml HBSS(美国Gibco公司)+10mM葡萄糖中洗涤二次。采用血球计，利用台盼蓝拒染法，对存活细胞数进行计数。为了进行PMN ATP试验，如前所述(21，22)，将细胞在嗜中性白血球介质、补充10％FCS的RPMI 1640(奥地利PAA Laboratories)，2mM L-谷氨酰胺和100U/ml盘尼西林和0.1mg/ml链霉素(PAA/GE Healthcare)中再悬浮；HL-60(ATCC CCL-240TM)人早幼粒细胞性白血病细胞系在嗜中性白血球介质中培养，并采用100mM DMF(N,N-二甲基甲酰胺，FisherBioReagents)或4.3mM dbcAMP(双丁酰环腺苷酸；Sigma-Aldrich)分化。采用亮紫421结合的抗-CD11b(克隆ICRF44，BioLegend)和PE-结合的抗-CD71单克隆抗体(克隆OKT9，eBioscience)，CD71颜色消失和CD11b出现颜色确定分化。按25000个细胞/孔，在嗜中性白血球介质中进行稀释，在半区发光板(奥地利Greiner)中于37℃+5％CO2开展4小时PMN/HL60lysis试验。
抗体毒素中和活性的测定。为了开展PMN/HL60细胞试验，将抗体在嗜中性白血球介质中连续稀释，以图例所示固定浓度与毒素混合。存活率分析在预培养步骤1小时后开始，让抗体与毒素结合。利用下述公式，计算毒素活性的％抑制率：％抑制率＝[(仅毒素时的活性–抑制活性)/(仅毒素时的活性)]×100。图中中和活性以IC50mAb浓度时的mAb:毒素摩尔比表示。所有试验中都包括以酵母细胞表达、抗相关抗原(鸡卵溶菌酶)产生的人IgG1对照mAb。
为了进行A459Hla-中和试验，在前一天，将A549细胞(HPACC#86012804)进行胰蛋白酶化，按20000个细胞/孔的密度在补充10％FCS和Pen/Strep的F12K介质(美国Gibco)中培养(96孔半区发光板，奥地利Greiner)。将抗体在在独立的稀释板中，在补充5％FCS和Pen/Strep的F12K介质(＝A549细胞分析介质)中连续稀释，并以固定浓度[3.03nM]与α溶血素混合。室温预培养1小时后，舍弃附着A549细胞上的接种介质，并代之以mAb:毒素混合物。将细胞在37℃+5％CO2中毒6小时，然后，开展ATP测定(如PMN/HL.60时所述)。
为了开展单克隆抗体的RBC溶血抑制分析，将抗体在PBS中连续稀释，并按图例所示固定浓度与毒素混合。溶血分析在预培养步骤1小时后开始，让抗体与毒素结合。利用下述公式，计算毒素活性的％抑制率。％抑制＝[(仅溶血毒素时的活性–抑制活性)/(仅溶血毒素时的活性)]×100。图中中和活性以IC50mAb浓度时的mAb:毒素摩尔比表示。
结果：
抗体的毒性中和效力通过利用重组LukSF、LukED和HlgCB使人PMN中毒，或利用HlgAB使人红细胞中毒，或利用Hla使人肺上皮细胞中毒(A549细胞系)测定。如图2所示，对不同毒素的结合亲和力很好地预测了mAbs的毒素中和效力。最好的Hla-LukF-LukD-HlgB四重交叉反应性抗体，抗LukD时的KD值<800pM，抗LukF时的KD值<55pM，以AB-28-6、AB-28-7、AB-28-8和AB-28-9举例，它们在中和所有靶毒素方面都非常高效。
F-组分特异性mAbs的效力并不限于四种同源毒素对，而是，对非同源对，如HlgA-LukD形成的杀白细胞素同样明显有效。
利用对某一细胞类型有活性的重组杀白细胞素混合物，按浓度足够使单种毒素造成100％细胞溶解的方式加入，开展中毒试验，结果显示了改善毒性交叉反应性的好处。抗体即使仅对其中一种毒素不具备可评估的活性，都无法防止细胞溶解。我们发现，如图3所示，具有最高抗F-组分和Hla总亲和力的mAbs–以AB-28-6、AB-28-7、AB-28-8和AB-28-9举例–在这些组合毒素分析中表现出极佳的效力。
实例3Hla–双-组分毒素交叉反应性mAbs与LukF和LukD结合亲和力的改善提高了
体内保护作用
方法：
单克隆抗体对小鼠的被动保护。对抗-金黄色葡萄球菌抗体在几个鼠科动物模型中的保护效果进行了评价。在重组毒素致死挑战之前24小时，在腹膜内开展mAbs的被动免疫。一组5只小鼠(BALB/c)，每只小鼠接受在PBS中稀释的单种mAbs接种，剂量是5或10mg/kg(分别是100或200ug/只小鼠)。对照组仅接受PBS或同样剂量的同种型匹配非特异性mAb。毒素挑战采用HlgA-HlgB或HlgA-LukD毒素对，每只小鼠(每种组分)的剂量分别是0.2和1ug。
结果：
如图4mAbs AB-28-3(KD＝18pM)和AB-28-9(KD＝5pM)的结果所示，与HlgB结合的亲和力<20pM的交叉反应性Hla mAbs对于预防因接触重组HlgAB而导致的死亡非常有效。
这些交叉反应性mAbs与LukD结合的亲和力的范围最宽，是85pM至2.2nM。如图5所示，从AB-28亲代mAb通过改变CDR区中的某些氨基酸而产生的试验子代具有明显保护作用，亲和力与体内效果具有明显的关系，实例有AB-28-9、AB-28-7和AB-28-8，KD值分别是400、290和780pM，存活率分别是75、100和35％。
实例4：Hla-双组分毒素交叉反应性mAbs介导的抗鼻内金黄色葡萄球菌TCH1516挑
战的保护作用
方法：
单克隆抗体对小鼠的被动保护。对抗-金黄色葡萄球菌抗体在鼠科动物肺炎模型中的保护效果进行了评价。在活细菌致死挑战之前24小时，在腹膜内开展mAbs的被动免疫。一组5只小鼠(BALB/c)，每只小鼠接受在PBS中稀释的单种mAbs接种，剂量是5mg/kg(分别是100ug或0.2mg/ml)。对照组仅接受PBS。用10％氯胺酮-2％甲苯噻嗪将小鼠麻醉后，将40ul含6×108cfu的细菌悬浮液施用到鼻孔内。
结果：
在肺炎模型中，交叉反应性Hla mAbs在预防金黄色葡萄球菌TCH1516诱导的死亡方面非常有效。与仅接受媒介的对照组相比(20％存活率)，所有抗体都显示出较高的保护水平。
实例5利用Hla:AB-28和LukD:AB-28复合物的晶体结构，鉴定抗体表位定位/结合
及磷酸胆碱结合分析
分别根据与AB-28的Fab片段的复合物中的Hla和LukD的晶体结构，鉴定了Hla和LukD分子中AB-28抗体的表位残基。该表位定义为与Fab残基接触的Fab-毒素界面处的毒素残基，即它们任何非氢原子之间的距离小于或等于距离在Pymol(PyMOL MolecularGraphics System，版本1.5.0.4LLC)中测定。
我们在Hla的边缘域中发现了如图9A所示的Hla表位(球形表示)，该表位与AB-28Fab可变域的轻链(黑色图)和重链(灰色图)的残基结合。从Hla晶体结构确定的Hla接触残基(图8B，球形)是氨基酸：179-191、194、200、269和271。在这些氨基酸之中，根据序列比对和可以提供的结构数据，氨基酸179-182、184-186、191、200、269和271(图9B，黑色球)在Hla、LukF、LukD和HlgB之间完全保守，而氨基酸183、190和194在LukF、LukD和HlgB之间保守，氨基酸189在Hla、LukD和HlgB之间保守。氨基酸179(Hla中的Trp)对应LukD和LukF(Tyr)和HlgB(Phe)中的其它芳香烃残基。LukF和LukD中对应氨基酸是176-188、191、197、265和267，而HlgB中对应的氨基酸是177-189、192、198、266和268。
从LukD的LukD:AB-28晶体结构(图10A，与图8A表示相同)确定的接触氨基酸是：176-179、181-184、186-188、191、197和267(图10A，接触残基为球，完全保守残基为黑色)，除184(Hla和HlgB不同)、187和191(Hla不同)之外，所有氨基酸在Hla、LukF、LukD和HlgB之间都保守。
我们观察到，Hla、LukF、LukD和HlgB之间保守口袋中与边缘域结合的磷酸胆碱，在Hla(Science 1996,274,1859)、HlgB(Nat.Struct.Biol.1999,6,134)和LukF(Structure,1999,7,277-287)的情况下结晶。参与LukF中磷酸胆碱结合的氨基酸是Asn-173、Trp-176、Tyr-179、Glu-191和Arg197，后面四个氨基酸在Hla、LukF、LukD和HlgB之间完全保守，还与晶体结构中LukD(和Hla)和AB-28之间的残基接触。磷酸胆碱与毒素的结合在基于ForteBio的测定中进行评价：将生物素化毒素固定在链霉亲和素传感器上，并测定溶液(PBS+1％BSA)中磷酸胆碱-BSA加合物的结合(PC4-BSA,Biosearch Technologies)。根据采用7版ForteBio分析软件测定的应答值判断，可以测出的结合有PC4-BSA与LukF、LukD和HlgB的结合，但并不与阴性对照S组分HlgA结合(图11)。AB-28IgG(10ug/ml)与生物素化毒素的结合防止此后与磷酸胆碱结合(图11)，表明AB-28优先磷酸胆碱与毒素结合。
实例6利用Hla:AB-28和LukD:AB-28复合物的晶体结构，开展变体氨基酸的生物模
拟分析
AB-28Fab与Hla和LukD的复合物的晶体结构用于计算所有接触位置的结合能，以及用于Fab接触残基的生物模拟突变，从而用于预测与其中一种毒素或这两种毒素的结合都得到改善的变体。
采用YASARA(Krieger E,Vriend G.YASARA View-molecular graphics for alldevices-from smartphones to workstations.Bioinformatics.2014Oct 15；30(20):2981-2)制备这些结构，离子和水分子被脱除，加入氢气，采用最速下降法进行优化。每个残基对总结合能的贡献采用Rosetta 12功能性评分法(Kaufmann KW,Lemmon GH,Deiuca SL,Sheehan JH,Meiler J.Practically useful:what the Rosetta protein modelingsuite can do for you.Biochemistry.2010Apr 13；49(14):2987-98)计算，不开展进一步优化。
每个接触残基的能量如表1所示。有几个接触位置，特别是VL CDR5中的几个位置对总体结合能贡献较低，但是，存在突变提高亲和力的机会。为了生物模拟突变协议，试验了几种方法，选择与AB-28变体已知结合特点定性结果最符合的方法。对除Cys和Pro的所有氨基酸对选择的接触位置进行突变，每个突变的结合能变化如表2.1和2.2所示。
表1 AB-28接触残基与LukD和Hla结合的结合能(△G值)
生物模拟突变表明，改变几个AB-28接触残基，即VL CDR4中的S7R、VH CDR2中的S7Q、VH CDR3中的V8M、V8R会导致与Hla和LukD的结合改善。多个其它突变：VL CDR4中的S7W、S7M、S7L，VL CDR5中的S4Q、S4N、S4K，VH CDR1中的M7H、M7R，VH CDR2中的S7D、S7H、S7N、Y9R预期与Hla的结合更好，不影响与LukD的结合。同样，VL CDR5中的A1G替换，VH CDR1中的S5H、S5R、S5W、M7K替换，VH CDR2中的S7K替换可能导致与LukD的结合更好，不影响与Hla的结合。另一方面，VL CDR5中的S4R替换及VH CDR3中的H6E、H6Q替换，预期改善与LukD的结合，但降低与Hla的结合。还有数量相对较高的突变不影响与LukD或Hla(ΔΔG值<0.5)的结合，因此，这些变体的结合性质预期与AB-28类似。
Claims (35)
1.一种交叉中和抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体包括抗体重链可变区(VH)的至少三个互补决定区(CDR1至CDR3)，其中：
A)所述抗体包括：
a)CDR1，包括氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQ ID 1)或由氨基酸序列YSISSGMGWG(SEQ ID1)组成；及
b)CDR2，包括氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)或由氨基酸序列SIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 2)组成；及
c)CDR3，包括氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQ ID 3)或由氨基酸序列ARDAGHGVDMDV(SEQID 3)组成；
或
B)所述抗体包括以下的至少一种功能性活性CDR变体：
a)由氨基酸序列SEQ ID 1组成的亲代CDR1；或
b)由氨基酸序列SEQ ID 2组成的亲代CDR2；或
c)由氨基酸序列SEQ ID 3组成的亲代CDR3；
其中所述功能性活性CDR变体在亲代CDR序列中包括至少一个点突变，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列或由与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列组成，
其中所述抗体并非采用包括以下链的宿主细胞产生的抗体#AB-24：
i)命名为#AB-24-LC的抗体轻链，其编码序列包括在以DSM 26748保藏的宿主细胞内，及
ii)命名为#AB-24-HC的抗体重链，其编码序列包括在以DSM 26747保藏的宿主细胞内。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中
a)在VH CDR1中的位置5，氨基酸残基选自由S、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W和Y组成的组，优选H、R和W中的任一个；
b)在VH CDR1中的位置7，氨基酸残基选自由M、H、K、Q、R和W组成的组，优选K、R或W中的任一个；
c)在VH CDR2中的位置3，氨基酸残基选自由D和R组成的组；
d)在VH CDR2中的位置7，氨基酸残基选自由S、A、D、E、F、H、K、M、N、Q、R、T、W和Y组成的组，优选D、H、K、N或Q中的任一个，更优选是Q；
e)在VH CDR2中的位置9，氨基酸残基选自由Y、F、K、L、Q和R组成的组，优选R；
f)在VH CDR3中的位置5，氨基酸残基选自由G、A、D、F、H、I、M、N、R、S、T、V和Y组成的组，优选D、F、H、I、M、N、R、T、V或Y中的任一个；
g)在VH CDR3中的位置6，氨基酸残基选自由H、E、Q和S组成的组，优选E或Q中的任一个；
h)在VH CDR3中的位置7，氨基酸残基选自由G、A、D、E、H、I、M、N、Q、S、T、V和W组成的组，优选是W；和/或
i)在VH CDR3中的位置8，氨基酸残基选自由V、A、D、E、G、I、K、L、M、Q、R、S和T，优选M或R中的任一个。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述功能性活性CDR变体包括以下至少一种：
a)亲代CDR序列中有1、2或3个点突变；或
b)亲代CDR序列的任何四个C-端或四个N-端，或四个中心氨基酸位置有1或2个点突变。
4.根据权利要求1至3任一项所述的抗体，其中所述功能性活性CDR变体是以下中的任一种：
a)CDR1序列，选自由YPISSGMGWG(SEQ ID 4)和YSISSGMGWD(SEQ ID 5)组成的组；或
b)CDR2序列，选自由SVDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 6)、RIDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 7)、RVDQRGSTYYNPSLKS(SEQ ID 8)、SIDQRGSTYYNPSLEG(SEQ ID 9)和SIDQRGSTYYNPPLES(SEQID 10)组成的组；或
c)CDR3序列，选自由ARDAGHGADMDV(SEQ ID 11)和ARDAGHAVDMDV(SEQ ID 12)组成的组。
5.根据权利要求1至4任一项所述的抗体，选自以下组成的组中的抗体：
a)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 6的CDR2序列；及
c.SEQ ID 11的CDR3序列；
b)抗体，包括：
a.SEQ ID 4的CDR1序列；及
b.SEQ ID 7的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
c)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 8的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
d)抗体，包括：
a.SEQ ID 1的CDR1序列；及
b.SEQ ID 2的CDR2序列；及
c.SEQ ID 12的CDR3序列；
e)抗体，包括：
a.SEQ ID 5的CDR1序列；及
b.SEQ ID 9的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列；
f)抗体，包括：
a.SEQ ID 5的CDR1序列；及
b.SEQ ID 10的CDR2序列；及
c.SEQ ID 3的CDR3序列。
6.根据权利要求1至4任一项所述的抗体，包括选自由SEQ ID 20–31组成的组中的VH氨基酸序列，优选包括选自由SEQ ID 40–51组成的组中的抗体重链(HC)氨基酸序列，或删除C-端氨基酸的SEQ ID 40–51中的任何氨基酸序列。
7.根据权利要求1至6任一项所述的抗体，进一步包括抗体轻链可变区(VL)的至少三个互补决定区(CDR4至CDR6)，优选其中：
A)所述抗体包括：
a)CDR4，包括氨基酸序列RASQGISRWLA(SEQ ID 32)或由氨基酸序列RASQGISRWLA(SEQID 32)组成；及
b)CDR5，包括氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID 33)或由氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID 33)组成；及
c)CDR6，包括氨基酸序列QQGYVFPLT(SEQ ID 34)或由氨基酸序列QQGYVFPLT(SEQ ID34)组成；
或
B)抗体包括以下的至少一种功能性活性CDR变体：
a)由氨基酸序列SEQ ID 32组成的亲代CDR4；或
b)由氨基酸序列SEQ ID 33组成的亲代CDR5；或
c)由氨基酸序列SEQ ID 34组成的亲代CDR6；
其中所述功能性活性CDR变体在亲代CDR序列中包括至少一个点突变，并包括与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列或由与亲代CDR序列具有至少60％序列一致性的氨基酸序列组成。
8.根据权利要求7所述的抗体，其中
a)在VL CDR4中的位置7，氨基酸残基选自由S、A、E、F、G、K、L、M、N、Q、R、W和Y组成的组，优选L、M、R或W中的任一个，更优选R；
b)在VL CDR5中的位置1，氨基酸残基选自由A和G组成的组；
c)在VL CDR5中的位置3，氨基酸残基选自由S、A、D、G、H、I、K、L、N、Q、R、T、V和W组成的组；
d)在VL CDR5中的位置4，氨基酸残基选自由S、D、E、H、I、K、M、N、Q、R、T和V组成的组；优选K、N、Q和R中的任一个；
e)在VL CDR6中的位置3，氨基酸残基选自由G、A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组；
f)在VL CDR6中的位置4，氨基酸残基选自由Y、D、F、H、M、R和W组成的组；
g)在VL CDR6中的位置5，氨基酸残基选自由V、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T和W组成的组；和/或
h)在VL CDR6中的位置6，氨基酸残基选自由F和W组成的组。
9.根据权利要求7或8所述的抗体，包括SEQ ID 39的VL氨基酸序列或SEQ ID 52的抗体轻链(LC)氨基酸。
10.一种交叉中和抗体，包括至少一个与金黄色葡萄球菌的α-毒素(Hla)和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合位点，所述抗体是亲代抗体的功能性活性变体抗体，所述亲代抗体包括SEQ ID 20的VH氨基酸序列，及SEQ ID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点，所述功能性活性变体抗体在SEQ ID 20或SEQ 39的任何构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)中包括至少一个点突变，与每种毒素结合的亲和力Kd小于10- 8M，优选小于10-9M。
11.根据权利要求9所述的抗体，其中
a)在VH CDR1中的位置5，氨基酸残基选自由S、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、T、V、W和Y组成的组，优选H、R和W中的任一个；
b)在VH CDR1中的位置7，氨基酸残基选自由M、H、K、Q、R和W组成的组，优选K、R和W中的任一个；
c)在VH CDR2中的位置3，氨基酸残基选自由D和R组成的组；
d)在VH CDR2中的位置7，氨基酸残基选自由S、A、D、E、F、H、K、M、N、Q、R、T、W和Y组成的组，优选D、H、K、N或Q中的任一个，更优选是Q；
e)在VH CDR2中的位置9，氨基酸残基选自由Y、F、K、L、Q和R组成的组，优选R；
f)在VH CDR3中的位置5，氨基酸残基选自由G、A、D、F、H、I、M、N、R、S、T、V和Y组成的组，优选D、F、H、I、M、N、R、T、V或Y中的任一个；
g)在VH CDR3中的位置6，氨基酸残基选自由H、E、Q和S组成的组，优选E或Q中的任一个；
h)在VH CDR3中的位置7，氨基酸残基选自由G、A、D、E、H、I、M、N、Q、S、T、V和W组成的组，优选是W；和/或
i)在VH CDR3中的位置8，氨基酸残基选自由V、A、D、E、G、I、K、L、M、Q、R、S和T组成的组，优选M或R中的任一个。
12.根据权利要求10或11所述的抗体，其中
a)在VL CDR4中的位置7，氨基酸残基选自由S、A、E、F、G、K、L、M、N、Q、R、W和Y组成的组，优选L、M、R或W中的任一个，更优选R；
b)在VL CDR5中的位置1，氨基酸残基选自由A和G组成的组；
c)在VL CDR5中的位置3，氨基酸残基选自由S、A、D、G、H、I、K、L、N、Q、R、T、V和W组成的组；
d)在VL CDR5中的位置4，氨基酸残基选自由S、D、E、H、I、K、M、N、Q、R、T和V组成的组；优选K、N、Q和R中的任一个；
e)在VL CDR6中的位置3，氨基酸残基选自由G、A、D、E、F、H、I、K、L、N、Q、R、S、T、V、W和Y组成的组；
f)在VL CDR6中的位置4，氨基酸残基选自由Y、D、F、H、M、R和W组成的组；
g)在VL CDR6中的位置5，氨基酸残基选自由V、A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T和W组成的组；和/或
h)在VL CDR6中的位置6，氨基酸残基选自由F和W组成的组。
13.根据权利要求1至12任一项所述的抗体，所述抗体具有结合Hla及双组分毒素中至少一种F-组分，优选至少两种或三种F-组分的交叉特异性，其中所述F-组分选自由HlgB、LukF和LukD组成的组，或γ-溶血素、PVL毒素和PVL-类毒素的F组分和S-组分的同源对和非同源对的任何F-组分，优选HlgAB、HlgCB、LukSF、LukED、LukS-HlgB、LukSD、HlgA-LukD、HlgA-LukF、LukEF、LukE-HlgB、HlgC-LukD或HlgC-LukF。
14.根据权利要求1至13任一项所述的抗体，所述抗体是全长单克隆抗体、其抗体片段或融合蛋白，其中抗体片段包括至少一个带所述结合位点的抗体区，融合蛋白包括至少一个带所述结合位点的抗体区。
15.权利要求1至14任一项所述抗体用于治疗存在金黄色葡萄球菌感染风险的受试者或被金黄色葡萄球菌感染的受试者的用途，包括给受试者施用有效剂量的抗体，限制受试者的感染，改善所患感染引起的疾病状况，或抑制金黄色葡萄球菌疾病，如肺炎、脓毒病、菌血症、伤口感染、脓疮、手术伤口感染、眼内炎、疖病、痈病、心内膜炎、腹膜炎、骨髓炎或关节感染的发病。
16.包含权利要求1至14任一项所述抗体的药物制剂，优选包含肠胃外或粘膜制剂，任选地包含药学上可接受的载体或赋形剂。
17.权利要求1至14任一项所述的抗体的诊断用途，用于检测任何金黄色葡萄球菌感染，包括高毒素MRSA感染，如坏死性肺炎，及用于检测疖病和痈病中毒素的产生。
18.权利要求1至14任一项所述抗体的诊断制剂，任选地包含带标记的抗体和/或其它带标记的诊断试剂。
19.编码权利要求1至14任一项所述抗体的分离核酸。
20.一种重组表达盒或质粒，包括表达权利要求1至14任一项所述抗体轻链和/或重链的编码序列。
21.包括权利要求20所述表达盒或质粒的宿主细胞。
22.权利要求1至14任一项所述抗体的产生方法，其中将权利要求21所述的宿主细胞在一定条件下培养或保持在一定条件下，以产生所述抗体。
23.产生亲代抗体功能性活性抗体变体的方法，所述亲代抗体是任何包括SEQ ID 20-31中任一个的VH氨基酸序列及SEQ ID 39的VL氨基酸序列的多特异性结合位点的抗体，所述方法包括在SEQ ID 20-31或SEQ 39中任一个的构架区(FR)或恒定区，或互补决定区(CDR1至CDR6)设计至少一个点突变，得到变体抗体，并通过以下任一种方法确定变体抗体的功能性活性：
-与金黄色葡萄球菌的每个Hla及双组分毒素中的至少一种毒素结合的亲和力Kd小于10-8M，优选小于10-9M，和/或
-变体抗体与Hla或双组分毒素中的至少一种毒素的结合与亲代抗体竞争；
其中在确定功能性活性之后，选择用于重组制备方法进行制备的功能性活性变体。
24.一种Hla单体形成的晶体，其衍射x-射线辐射，产生一衍射图，该衍射图代表与权利要求1至10任一项所述抗体或其结合片段，优选Fab片段，接触的Hla边缘域的三维结构物，具有下述细胞常数：空间群P21212，任选地偏差在至之间。
25.一种LukD单体形成的晶体，其衍射x-射线辐射，产生一衍射图，该衍射图代表与权利要求1至10任一项所述抗体，或其结合片段，优选Fab片段，接触的Luk边缘域的三维结构物，具有下述细胞常数：空间群H32，任选地偏差在至之间。
26.权利要求1至14任一项所述抗体的分离互补位，或包括所述互补位的结合分子。
27.权利要求1至14任一项所述抗体识别的分离构象表位，其特征在于Hla、LukD、LukF或HlgB边缘域的三维结构物。
28.权利要求27所述的表位，其特征在于选自下述组中的三维结构物：
a)三维Hla结构物，其特征在于SEQ ID 54的接触氨基酸残基179-191、194、200、269和271的结构坐标；
b)三维LukF结构物，其特征在于SEQ ID 55的接触氨基酸残基176-188、191、197和269的结构坐标；优选地具有SEQ ID 58的氨基酸残基176-179、181-184、186-188、191、197和267；
c)三维LukD结构物，其特征在于SEQ ID 54的接触氨基酸残基176-188、191、197和267的结构坐标；优选地具有SEQ ID 62的氨基酸残基176-179、181-184、186-188、191、197和267；
d)三维HlgB结构，其特征在于SEQ ID 56的接触氨基酸残基177-189、192、198和268的结构坐标；优选地SEQ ID 68的氨基酸残基177-180、182-185、187-189、192、198和268；
e)定义26所述晶体的三维Hla边缘域结构物；
f)定义27所述晶体的三维LukD边缘域结构物；
g)a)至f)任一项三维结构物的同系物，其中所述同系物包括与接触氨基酸残基骨架原子的均方根差在至之间的结合位点。
29.权利要求27或28所述的表位，所述表位通过结合分子结合。
30.一种与权利要求27或28所述表位特异性结合的结合分子，优选选自蛋白质、肽、拟肽类物、核酸、碳水化合物、脂质、寡肽、适配子和小分子化合物，优选抗体、抗体片段或融合蛋白，抗体片段包括含所述结合位点的至少一个抗体区，融合蛋白包括含结合位点的至少一个抗体区，其中所述结合分子是与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合物。
31.鉴定与权利要求27或28所述表位特异性结合的结合物的筛选方法或分析方法，包括以下步骤：
-将候选化合物与权利要求28定义的三维结构物接触；及
-对候选化合物与三维结构物之间的结合进行评价；其中候选化合物和三维结构物之间的结合可以鉴定候选化合物是否是与金黄色葡萄球菌的Hla和双组分毒素中的至少一种毒素结合的多特异性结合物。
32.一种免疫原，包括：
a)权利要求27或28的表位；
b)任选地其它与(a)中所述表位非天然相关的表位；及
c)载体，优选是药学上可接受的载体，优选包含缓冲物质和/或佐剂。
33.疫苗制剂中的根据权利要求32所述的免疫原，优选肠胃外使用。
34.根据权利要求32或33所述的免疫原，通过施用有效剂量的所述免疫原治疗受试者，防止受试者被金黄色葡萄球菌感染，预防所述感染引发的疾病，或抑制金黄色葡萄球菌肺炎发病。
35.根据权利要求34所述的免疫原用途，用于引发保护性的免疫应答。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109400704A (zh) * | 2018-11-14 | 2019-03-01 | 珠海泰诺麦博生物技术有限公司 | 一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2014336111A1 (en) * | 2013-10-17 | 2016-04-14 | Arsanis Biosciences Gmbh | Cross-reactive Staphylococcus aureus antibody sequences |
| JP2018513168A (ja) * | 2015-04-17 | 2018-05-24 | アルサニス・バイオサイエンスズ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 抗スタフィロコッカス・アウレウス抗体組み合わせ製剤 |
| TWI781130B (zh) * | 2017-01-03 | 2022-10-21 | 美商再生元醫藥公司 | 抗金黃色葡萄球菌溶血素ａ毒素之人類抗體 |
| WO2018165089A1 (en) * | 2017-03-06 | 2018-09-13 | Vanderbilt University | Human monoclonal antibodies to staphylococcus aureus lukab toxin |
| US11155606B2 (en) | 2018-07-24 | 2021-10-26 | Medimmune, Llc | Antibody directed against S. aureus clumping factor a (ClfA) |
| MX2021004114A (es) * | 2018-10-09 | 2021-07-16 | Medimmune Llc | Anticuerpos dirigidos contra leucotoxinas de staphylococcus aureus. |
| BR112021006622A2 (pt) | 2018-10-09 | 2021-07-20 | Medimmune, Llc | combinações de anticorpos anti-staphylococcus aureus |
| RU2705415C1 (ru) * | 2019-01-10 | 2019-11-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) | Способ диагностики стафилококковой абдоминальной хирургической инфекции |
| CN114106183B (zh) * | 2019-01-15 | 2023-06-23 | 浙江道尔生物科技有限公司 | 抗cld18a2纳米抗体及其应用 |
| CN114369165B (zh) * | 2021-12-31 | 2023-04-18 | 上海交通大学 | 一种牛源抗金黄色葡萄球菌毒力因子GapC的单链抗体、制备方法及其应用 |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US6696251B1 (en) | 1996-05-31 | 2004-02-24 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
| US6699658B1 (en) | 1996-05-31 | 2004-03-02 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Yeast cell surface display of proteins and uses thereof |
| US7117096B2 (en) | 2001-04-17 | 2006-10-03 | Abmaxis, Inc. | Structure-based selection and affinity maturation of antibody library |
| AU2003217912A1 (en) | 2002-03-01 | 2003-09-16 | Xencor | Antibody optimization |
| WO2007145689A1 (en) * | 2006-06-12 | 2007-12-21 | Nabi Biopharmaceuticals | Use of alpha-toxin for treating and preventing staphylococcus infections |
| US20180221466A9 (en) * | 2006-06-12 | 2018-08-09 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Use of alpha-toxin for treating and preventing staphylococcus infections |
| JP5754135B2 (ja) | 2007-03-26 | 2015-07-29 | アジェナス インコーポレイテッド | 関心対象のタンパク質の細胞表面ディスプレイ、スクリーニング、および産生 |
| CA2964398C (en) | 2007-09-14 | 2023-03-07 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
| US8877688B2 (en) | 2007-09-14 | 2014-11-04 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
| EP3187877A1 (en) | 2009-09-25 | 2017-07-05 | XOMA Technology Ltd. | Screening methods |
| US8431687B2 (en) * | 2010-05-05 | 2013-04-30 | New York University | Staphylococcus aureus leukocidins, therapeutic compositions, and uses thereof |
| DK3336225T3 (da) | 2010-07-16 | 2020-03-30 | Adimab Llc | Antistofbiblioteker |
| ES2709065T7 (es) * | 2011-02-08 | 2021-12-09 | Medimmune Llc | Anticuerpos que se unen específicamente a la toxina alfa de Staphylococcus aureus y métodos de uso |
| CA2839554C (en) * | 2011-06-19 | 2023-09-26 | New York University | Methods of treating and preventing staphylococcus aureus infections and associated conditions |
| CA2845259A1 (en) * | 2011-08-15 | 2013-02-21 | The University Of Chicago | Compositions and methods related to antibodies to staphylococcal protein a |
| KR101999299B1 (ko) * | 2011-12-02 | 2019-07-12 | 인티그레이티드 바이오쎄라퓨틱스, 인크. | 팬턴-발렌타인 류코시딘(pvl) 유래 폴리펩티드를 포함하는 면역원성 조성물 |
| PT2668208E (pt) * | 2012-04-17 | 2015-10-12 | Arsanis Biosciences Gmbh | Anticorpo de staphylococcus aureus de reação cruzada |
| WO2014187746A2 (en) * | 2013-05-21 | 2014-11-27 | Arsanis Biosciences Gmbh | Generation of highly potent antibodies neutralizing the lukgh (lukab) toxin of staphylococcus aureus |
| AU2014336111A1 (en) * | 2013-10-17 | 2016-04-14 | Arsanis Biosciences Gmbh | Cross-reactive Staphylococcus aureus antibody sequences |
| RU2016129526A (ru) * | 2013-12-19 | 2018-01-24 | Арзанис Байэусайнсис ГмбХ | Антитело, выделенная нуклеиновая кислота, выделенный паратоп антитела, выделенный конформационный эпитоп, связывающая молекула, иммуноген, фармацевтический и диагностический препараты, лекарственная форма вакцины, способ лечения больного, подверженного риску или страдающего от инфекции Staphylococcus aureus, способ диагностики обнаружения инфекций Staphylococcus aureus и способ скрининга или анализа для определения связующего |
| JP2018513168A (ja) * | 2015-04-17 | 2018-05-24 | アルサニス・バイオサイエンスズ・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 抗スタフィロコッカス・アウレウス抗体組み合わせ製剤 |
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Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BENOÎT-JOSEPH LAVENTIE等: "Heavy chain-only antibodies and tetravalent bispecific antibody neutralizing Staphylococcus aureus leukotoxins", 《PNAS》 * |
| BROOK E. RAGLE等: "Anti-Alpha-Hemolysin Monoclonal Antibodies Mediate Protection against Staphylococcus aureus Pneumonia", 《INFECTION AND IMMUNITY》 * |
| NIKOLAUS HEVEKER等: "A human monoclonal antibody with the capacity to neutralize Staphylococcus aureus alpha-toxin", 《HUM. ANTIBOD. HYBRIDOMAS》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109400704A (zh) * | 2018-11-14 | 2019-03-01 | 珠海泰诺麦博生物技术有限公司 | 一种抗金黄色葡萄球菌α-溶血素的抗体及其应用 |
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