CN105837596B - 双重hdac/brd4抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种双重HDAC/BRD4抑制剂及其制备方法和应用，双重HDAC/BRD4抑制剂结构式如式16所示。本发明还公开了上述双重HDAC/BRD4抑制剂的制备方法及其在制备药物中的应用。本发明通过Linker将HDAC抑制剂的药效基团与BRD4抑制剂的药效基团进行拼接，得到了一类具有双重HDAC/BRD4抑制效果的新型双重HDAC/BRD4抑制剂。本发明制备方法简单、条件温和、易于实现。

Description

双重HDAC/BRD4抑制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药化工领域，具体涉及一种双重HDAC/BRD4抑制剂及其制备方法和应用。

背景技术

许多人类疾病特别是肿瘤及自身免疫炎症的一个重要特征就是乙酰化水平异常从而导致转录异常。组蛋白赖氨酸的乙酰化水平主要由组蛋白乙酰化转移酶(HATs)、组蛋白去乙酰化酶(HDACs)和溴结构域(BET)控制。

HDACs是多蛋白质复合物的催化亚单位，HDAC介导核小体结构的改变，参与调节基因表达，调节细胞周期进程和分化。多种疾病如癌症、急性髓性白血病、感染等的发生与发展都与HDAC有关。一般情况下，组蛋白乙酰化水平与基因转录活性呈现正相关关系。通过对组蛋白去乙酰化的抑制作用，可以导致染色质过乙酰化，从而促进癌细胞的基因活化，导致细胞分化或死亡。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histone Deacetylase Inhibitors，HDAC抑制剂)可以通过与HDAC活性催化口袋底部的锌离子进行相互作用，可逆或者不可逆的抑制组蛋白去乙酰化酶活性，从而阻断了因HDAC功能紊乱而导致的有关抑癌基因表达受抑制。

目前，基于乙酰化体内动态平衡的新药研发主要集中在组蛋白去乙酰化酶抑制剂，然而组蛋白乙酰化转移酶与溴结构域在调控组蛋白乙酰化的内稳态上也起到关键作用，这也就提供了新的新药研发思路。溴结构域是一种能够特定识别组蛋白乙酰化赖氨酸残基的蛋白结构域，例如组蛋白拖尾上N末端的赖氨酸残基。这种特定的识别是调节蛋白与组蛋白的结合以及染色结构重塑的先决条件。同时，肿瘤的发生常常涉及多个抑癌基因的失活，针对单一基因的治疗往往不足以抑制肿瘤的生长，HDAC及BET作用于整个基因组而不是特定的基因，可同时恢复多个抑癌基因的表达提高基因组稳定性。

BRD是一类能够特异性识别组蛋白乙酰化赖氨酸(Acetylated lysine,KAc)的蛋白结构域。人体内发现的61种BRD存在于46种蛋白中，根据其功能的不同，被划分为8大家族，其中溴结构域和超末端结构蛋白(Bromodomain and extraterminal domain，BET)属于BRD家族的第2类，包括BRD2、BRD3、BRD4和BRDT。BET蛋白通过识别KAc，并招募不同的转录调节因子，如正性转录延伸因子b(P-TEFb)来调节靶基因的表达。BET抑制剂在临床研究中呈广谱性，在抗肿瘤、抗炎及男性避孕等方面均有疗效。特别是BET家族中的BRD4作为表观遗传领域的重要抗肿瘤靶标，近年来日益受到制药公司和科研机构的高度关注。PDB数据库已经报道了23种不同亚型的BRD晶体结构，其中BRD4晶体结构的报道为我们设计目标化合物提供了重要的结构信息。

目前，已报道了多种结构各异的选择性靶向BRD4的小分子抑制剂，它们都可以特异性的靶向乙酰化赖氨酸(KAc)识别位点，在该位点与KAc竞争保守的天冬酰胺残基140(Asn140)。三唑噻吩二氮杂类化合物(+)-JQ1是最早公开报道的BRD4抑制剂，对BRD4的IC₅₀为39nM，其作为化学探针成功证实BRD4可以作为潜在的抗肿瘤治疗靶点。值得关注的是，对BRD4的抑制作用将导致转录因子Myc家族致癌基因(如c-Myc)的下调，c-Myc在多种肿瘤细胞中高表达且发挥关键作用。目前为止，能够直接抑制c-Myc的小分子抑制剂还未见报道，因此BRD4抑制剂可为c-Myc高表达引起的肿瘤疾病提供新的治疗策略。

目前并未有双重HDAC/BET抑制剂的报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术中的问题，本发明提供了一种双重HDAC/BRD4抑制剂，本发明的另一个目的是提供该双重HDAC/BRD4抑制剂的制备方法和应用。

技术方案：一种双重HDAC/BRD4抑制剂，结构如式16所示：

式16中，n＝2～6。

优选的，n＝2～5；进一步优选的，n＝2～5，更优选的，n＝3。

本发明还提供了所述的双重HDAC/BRD4抑制剂的制备方法，包括：

(1)式10化合物与碱反应，获得式11化合物，其中式10化合物和式11化合物的结构依次分别为：

(2)在缩合剂和碱存在下，式11化合物与式12化合物反应，获得式13化合物；其中式12化合物与式13化合物的结构依次分别为：

(3)在缩合剂和碱存在下，式13化合物与式14化合物反应，获得式15化合物；其中，式14化合物与式15化合物的结构依次分别为：

(4)用酸脱去式15化合物的叔丁氧基，获得所述的式16化合物；

式12、式13、式15和式16中，n＝2～6。

式10化合物即为(+)-JQ1，可直接购买或采用现有公开的方法进行制备。

步骤(1)反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂选自二氯甲烷、二氯乙烷、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇和二氧六环中的一种或几种；碱为氢氧化钠；碱的质量浓度为10～30％，优选为20％。反应温度为80～120℃，反应时间为1～10h，优选的，反应温度为90～110℃，反应时间为1～4h，更优选的，反应温度为100℃，反应时间为2h。

步骤(2)反应在有机溶剂中进行，有机溶剂选自正丁醇、叔丁醇、二氧六环、苯、甲苯、乙苯、叔丁苯、二甲苯、二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种。

步骤(2)中，缩合剂为HCTU或HOBT，碱选自叔丁醇钾、二异丙基氨基锂、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺和二乙胺中的一种或几种。反应温度为23～110℃，反应时间为1～24h，反应温度为23～40℃，反应时间为12～18h，更优选的，反应温度为23℃，反应时间为16h。

步骤(3)反应在有机溶剂中进行，有机溶剂选自正丁醇、叔丁醇、二氧六环、苯、甲苯、乙苯、叔丁苯、二甲苯、二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种。

步骤(3)中，缩合剂为HCTU或HOBT，碱选自叔丁醇钾、二异丙基氨基锂、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺和二乙胺中的一种或几种。反应温度为23～110℃，反应时间为1～24h，反应温度为23～40℃，反应时间为12～18h，更优选的，反应温度为23℃，反应时间为16h。

具体的，步骤(4)为：式15化合物溶于有机溶剂中，加酸反应，反应结束后，从体系中分离得到所述的式16化合物。

步骤(4)中，所述的酸选自盐酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、乙磺酸、三氟甲磺酸、磷酸和硫酸氢钠水溶液中的一种或几种。所述有机溶剂选自二氯甲烷、正丁醇、叔丁醇、二氧六环、苯、甲苯、乙苯、叔丁苯、二甲苯、二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种。反应一般在室温中进行即可，反应时间为1-12h，优选为1～4h，更优选为2h。

本发明还提供了所述的双重HDAC/BRD4抑制剂在制备HDAC酶或/和BRD4酶抑制药物中的应用。实验证明，本发明双重HDAC/BRD4抑制剂在具有HDAC酶和BRD4酶抑制活性，且一些化合物较原各自单靶点抑制剂的抑制活性更高，因此，可将其应用于HDAC酶或/和BRD4酶抑制药物的制备中。

本发明还提供了所述的双重HDAC/BRD4抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。实验证明，本发明双重HDAC/BRD4抑制剂对肿瘤细胞如白血病细胞具有较好的抑制作用，因此，可将其应用于抗肿瘤药物的制备中。

与现有技术相比，本发明的有益效果包括：

本发明通过Linker将HDAC抑制剂(Vorinostat)与BRD4抑制剂((+)-JQ1)的活性药效团进行拼接，同时保留了HDAC酶和BRD4酶抑制活性，得到了一类具有双重HDAC/BRD4抑制活性的新型抑制剂。HDAC及BRD作用于整个基因组而不是特定的基因，可同时恢复多个抑癌基因的表达提高基因组稳定性。双重HDAC/BRD4抑制剂提供了一个全新的新药研发思路，提高了药物的利用效率和治疗效果，对实体肿瘤的抑制有可能取得实质性的进展。

另外，本发明并不是将两类抑制剂进行简单拼接，图1以一种化合物为例展示了本发明抑制剂设计的药效结构模型，本发明以(+)-JQ1出发，在其适当位置引入适当的侧链连接HDAC的Zn²⁺螯合基团(邻氨基苯甲酰胺)，一方面没有影响本发明双靶点抑制剂与BRD4的KAc识别位点的结合；同时，(+)-JQ1母核作为HDAC抑制剂的表面识别部分，也未影响邻氨基苯甲酰胺与HDAC蛋白Zn²⁺的螯合。HDAC酶抑制活性测定药理实验的结果表明：双重HDAC/BRD抑制剂较单靶点HDAC抑制剂具有更好的HDAC酶抑制活性，其中化合物Ab的抑制活性最高。BRD4酶抑制活性测定药理实验的结果表明：双重HDAC/BRD抑制剂较单靶点BRD4抑制剂具有更好的BRD4酶抑制活性，其中化合物Ab的抑制活性最高。

U937细胞存活率测定药理实验的结果表明：本发明的双重HDAC/BRD抑制剂A(a-e)较传统的单靶点HDAC抑制剂以及单靶点BRD4抑制剂的抗肿瘤细胞活性更高，其中化合物Ab的抗肿瘤细胞活性最高。

本发明的制备方法简单，条件温和，产率高。

附图说明

图1为基于(+)-JQ1和HDAC药效团的双靶点抑制剂的设计思路。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐明本发明。

本发明提供的双重HDAC/BRD4抑制剂合成路线如下：

化合物1：结构如式1所示；化合物2：乙腈，结构如式2所示；

化合物3：结构如式3所示；化合物4：丁酮，结构如式4所示；

化合物5：结构如式5所示；化合物6：结构如式6所示；

化合物7：结构如式7所示；化合物8：结构如式8所示；

化合物9：结构如式9所示；化合物10：(+)-JQ1，结构如式10所示；

化合物11：结构如式11所示；化合物12a：结构如式12a所示；

化合物12b：结构如式12b所示；化合物12c：结构如式12c所示；

化合物12d：结构如式12d所示；化合物12e：结构如式12e所示；

化合物13a：结构如式13a所示；化合物13b：结构如式13b所示；

化合物13c：结构如式13c所示；化合物13d：结构如式13d所示；

化合物13e：结构如式13e所示；化合物14：结构如式14所示；

化合物15a：结构如式15a所示；化合物15b：结构如式15b所示；

化合物15c：结构如式15c所示；化合物15d：结构如式15d所示；

化合物15e：结构如式15e所示；化合物16a：结构如式16a所示；

化合物16b：结构如式16b所示；化合物16c：结构如式16c所示；

化合物16d：结构如式16d所示；化合物16e：结构如式16e所示；

DMA：N，N-二甲基乙酰胺；；EtOH：乙醇；

Morpholine：吗啉；HCTU：6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯；

i-Pr2Net：N,N-二异丙基乙胺；Piperidine：哌啶；

AcOH：乙酸；Lawesson reagent：劳森试剂；

THF：四氢呋喃；DMF：N，N-二甲基甲酰胺；

Toluene：甲苯；TFA：三氟乙酸；

DCM：二氯甲烷；Vorinostat：伏立诺他，N-羟基-N'-苯基辛二酰胺；

Entinostat：恩替诺特，N-[[4-[[(2-氨基苯基)氨基]甲酰]苯基]甲基]氨基甲酸3-吡啶基甲基酯。

实施例1制备化合物3

例1-1

称取化合物1(2.85g，20mmol)溶解于20mL N，N-二甲基乙酰胺中，依次加入10mL乙腈、0.1g氯化铜、3g氢氧化钾，在氧气氛围下室温(25℃)反应12h。反应结束后，缓慢滴加1mol/L的盐酸，调节pH至7，用硅藻土过滤，滤液水洗三次，再用饱和食盐水洗三次，有机层用无水硫酸钠干燥，蒸干。柱层析得到黄色固体即目标化合物3(2.92g，产率为82％)。

目标产物化合物3的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:

2.95(s，2H)，7.58(d，J＝8.30Hz，2H)，7.80(t，J＝8.52Hz，2H)

例1-2

称取化合物1(2.85g，20mmol)溶解于20mL四氢呋喃中，依次加入10mL乙腈、0.1g氯化铜、3g氢氧化钾，在氧气氛围下室温反应12h。反应结束后，缓慢滴加1mol/L的盐酸，调节pH至7，用硅藻土过滤，滤液水洗三次，再用饱和食盐水洗三次，有机层用无水硫酸钠干燥，蒸干。柱层析得到黄色固体即目标化合物3(2.5g，产率为70％)。

实施例2制备化合物5

称取化合物3(1.24g，6.9mmol，1equiv)，丁酮(0.62mL，6.9mmol，1.00equiv)，吗啉(0.6mL，6.9mmol，1.00equiv)，室温下溶解在乙醇中，然后向其混合溶液中加入固体硫(220mg，6.9mmol，1.00equiv)。将温度升高到70℃，12小时后，混合溶液冷却到23℃，并将其倒入饱和食盐水中，水层用乙酸乙酯萃取3次(3*50mL)。有机层合并，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，混合物柱层析得化合物5(1.28g，产率为70％)。

目标产物化合物5的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ:

1.56(s，3H)，2.13(s，3H)，5.91(s，2H)，7.38(d，J＝8.37Hz，2H)，7.48(t，J＝8.52Hz，2H)

实施例3制备化合物6

例3-1

将Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH(864mg，2.1mmol，2.10equiv)溶解在DMF(1.5mL，1.0M)，缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应混合物在23℃下搅拌5min。加入化合物5(266mg，1.0mmol，1equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和盐水(20mL)，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析得黄色化合物6(625mg，产率为90％)。

目标产物化合物6的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:

1.43-1.56(m，15H)，4.24(t，J＝6.06Hz 2H)，4.55(d，J＝6.54Hz 2H)，5.3(d，J＝14.04Hz 1H)，6.76(d，J＝11.82Hz 1H)，7.32(t，J＝7.35Hz 3H)，7.41(t，J＝7.26Hz，3H)，7.56(d，J＝7.38Hz 2H)，7.69(d，J＝1.8Hz，1H)，7.76(t，J＝7.71Hz 3H)。

例3-2

将Fmoc-Asp(Ot-Bu)-OH)(864mg，2.1mmol，2.10equiv)溶解在DMF(1.5ml，1.0M)，缓慢加入HCTU和三乙胺(0.55mL，4.0mmol，4.00equiv)。反应混合物在23℃下搅拌5min。加入化合物5(266mg，1.0mmol，1equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和盐水(20mL)，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析得化合物6(580mg，产率为83％)。

实施例4化合物7的制备

在23℃下，将化合物6(560mg，0.85mmol，1equiv)溶解在含有20％哌啶的DMF(4.0mL，0.22M)溶液中。30min后，乙酸乙酯(20mL)，盐水(20mL)加入到反应混合物中。水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并有机层用盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。柱层析得化合物7(370mg，90％)。

目标产物化合物7的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ

1.36-1.42(m，9H)，2.56(m，6H)，3.56(t，J＝6.06Hz 2H)，5.90(s，2H)，7.31(t，J＝7.24Hz，2H)，7.42(d，J＝7.18Hz 2H)，7.95(s，1H)

实施例5化合物8的制备

称取化合物7(280mg，0.63mmol)溶解在含有10％乙酸的乙醇(21mL，0.03M)溶液中。反应混合物加热到85℃。30min后，减压蒸馏移除溶剂，柱层析得黄色化合物8(241mg，产率为95％)。

目标产物化合物8的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ:

1.47(s，9H)，1.59(s，3H)，2.28(s，3H)，3.02-3.13(m，1H)，3.29-3.37(m，1H)，4.17-4.22(t，J＝6.96Hz 3H)，7.26-7-44(m，4H)

实施例6化合物9的制备

例6-1

称取化合物8(210mg，0.5mmol，1equiv)溶解在四氢呋喃中，五硫化二磷(222mg，1.0mmol，2.00equiv)，碳酸氢钠(168mg，2.0mmol，4.00equiv)加入其中，反应混合物加热到90℃。16h后，加入盐水和乙酸乙酯，水层用乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏，柱层析得化合物9(141mg，产率为65％)。

目标产物化合物9的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ:

1.42(s，9H)，1.62(s，3H)，2.56(s，3H)，3.2(m，1H)，3.29-3.37(m，1H)，4.17-4.22(t，J＝6.96Hz 3H)，7.26-7-44(m，4H)

例6-2

称取化合物8(210mg，0.5mmol，1equiv)溶解在甲苯中，五硫化二磷(222mg，1.0mmol，2.00equiv),碳酸氢钠(168mg，2.0mmol，4.00equiv)加入其中，反应混合物加热到90℃。16h后，加入盐水和乙酸乙酯，水层用乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏，柱层析得化合物9(120mg,产率为56％)。实施例7化合物10的合成

酰肼(0.015mL，0.45mmol，1.25equiv)加入到含有化合物9(158mg，0.36mmol，1equiv)的THF溶液中。反应混合物加热到23℃，搅拌反应1h。减压蒸馏移除溶剂，得到的酰肼无需纯化直接使用。将酰肼溶解在体积比例为2:3的乙酸三甲酯和甲苯溶液中(6mL，0.06M)。反应混合物加热到120℃，2h后，减压蒸馏移除溶剂，柱层析得化合物10(14mg，产率为85％)。

目标产物化合物10的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ:

1.48(s，9H)，1.59(s，3H)，2.29(s，3H)，3.41(s，3H)，3.22-3.38(m，2H)，3.85-3.89(t，J＝6.72Hz 1H)，7.26-7-41(m，4H)

实施例8化合物11的合成

称取化合物10(0.46g，1mmol)溶解在乙醇中，加入200mL质量浓度为20％的NaOH水溶液，加热到100℃，高温回流2h。反应结束后，冷却至室温，加入1M盐酸，调节pH至6-7，加入乙酸乙酯20mL萃取三次，合并有机层用饱和食盐水洗三次，得到化合物11(0.38g，产率为94％)。

目标产物化合物11的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(s，3H)，2.08(s，3H)，2.27(s，3H)，3.15-3.24(m，1H)，3.32-3.40(m，1H)，4.19(t，J＝6.09Hz，1H)，7.33(d，J＝8.34Hz，2H)，7.41(d，J＝8.1Hz，2H)

实施例9化合物13a的合成

例9-1

称取化合物11(401mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物12a(107mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由20:1缓慢增至5:1，另加质量浓度为1％的三乙胺溶液)得化合物13a(395mg，产率为85％)。

目标产物化合物13a的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(s，3H)，2.08(s，3H)，2.27(s，3H)，3.23(m，1H)，3.45(m，1H)，3.7(m，4H)，4.19(t，J＝6.09Hz，1H)，7.43(d，J＝8.04Hz，2H)，7.56(d，J＝7.68Hz，2H)，8.00(s，1H)

例9-2

称取化合物11(401mg，1.0mmol，1equiv)溶解在甲苯中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物12a(107mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由20:1缓慢增至5:1，另加质量浓度为1％的三乙胺溶液)得化合物13a(320mg，产率68％)。

实施例10化合物13b的合成

称取化合物11(401mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物12b(121mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由20:1缓慢增至5:1，另加质量浓度为1％的三乙胺溶液)得化合物13b(389mg，产率80％)。

目标产物化合物13b的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.58(s，3H)，2.06(s，3H)，2.21(s，3H)，3.21(m，1H)，3.43(m，1H)，3.7-3.81(m，6H)，4.18(t，J＝6.08Hz，1H)，7.41(d，J＝8.24Hz，2H)，7.50(d，J＝7.88Hz，2H)，8.00(s，1H)

实施例11化合物13c的合成

称取化合物11(401mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物12c(135mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由20:1缓慢增至5:1，另加质量浓度为1％的三乙胺溶液)得化合物13c(415mg，产率83％)。

目标产物化合物13c的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(s，3H)，2.06(s，3H)，2.21(s，3H)，3.21(m，1H)，3.40(m，1H)，3.58(m，4H)，3.60(m，2H)3.65(m，2H)4.19(t，J＝6.08Hz，1H)，7.41(d，J＝8.24Hz，2H)，7.50(d，J＝7.88Hz，2H)，8.00(s，1H)

实施例12化合物13d的合成

称取化合物11(401mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物12d(150mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由20:1缓慢增至5:1，另加质量浓度为1％的三乙胺溶液)得化合物13d(406mg，产率79％)。

目标产物化合物13d的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(s，3H)，2.11(s，3H)，2.19(s，3H)，3.24(m，1H)，3.40(m，1H)，3.59(m，6H)，3.68(m，4H)4.19(t，J＝6.08Hz，1H)，7.36(d，J＝8.04Hz，2H)，7.48(d，J＝7.68Hz，2H)，8.00(s，1H)

实施例13化合物13e的合成

称取化合物11(401mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物12e(175mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由20:1缓慢增至5:1，另加质量浓度为1％的三乙胺溶液)得化合物13e(428mg，产率81％)。

目标产物化合物13e的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.58(s，3H)，2.12(s，3H)，2.21(s，3H)，3.25(m，1H)，3.44(m，1H)，3.59(m，6H)，3.68(m，6H)4.23(t，J＝6.26Hz，1H)，7.30(d，J＝8.02Hz，2H)，7.55(d，J＝7.48Hz，2H)，8.00(s，1H)

实施例14化合物15a的合成

称取化合物13a(471mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物14(250mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物15a(543mg，产率82％)。

目标产物化合物15a的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.50(m，9H)，1.61(s，3H)，1.92(s，3H)，2.11(s，3H)，3.23(m，1H)，3.57(m，1H)，3.98(m，4H)4.38(t，J＝5.91Hz，1H)，7.31(t，3H)，7.48(d，J＝7.68Hz，2H)，7.73(t，3H)

实施例15化合物15b的合成

称取化合物13b(485mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物14(250mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物15b(540mg，产率80％)。

目标产物化合物15b的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.56(m，9H)，1.63(s，3H)，1.92(s，3H)，2.12(s，3H)，3.26(m，1H)，3.58(m，1H)，3.99(m，4H)，4.12(m，2H)4.38(t，J＝5.98Hz，1H)，7.32(t，3H)，7.48(d，J＝7.68Hz，2H)，7.73(t，3H)

实施例16化合物15c的合成

称取化合物13c(500mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物14(250mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物15c(545mg，产率79％)。

目标产物化合物15c的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.52(m，9H)，1.69(s，3H)，1.90(s，3H)，2.15(s，3H)，3.27(m，1H)，3.66(m，1H)，4.10(m，4H)，4.12(m，2H)，4.28(m，2H)，4.42(t，J＝6.12Hz，1H)，7.37(t，3H)，7.51(d，J＝7.88Hz，2H)，7.70(t，3H)

实施例17化合物15d的合成

称取化合物13d(514mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物14(250mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：

1)得化合物15d(535mg，产率76％)。

目标产物化合物15d的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.50(m，9H)，1.66(s，3H)，1.88(s，3H)，2.16(s，3H)，3.28(m，1H)，3.66(m，1H)，4.10(m，4H)，4.12(m，2H)，4.28(m，2H)，4.39(m，2H)，4.76(t，J＝6.48Hz，1H)，7.38(t，3H)，7.50(d，J＝7.68Hz，2H)，7.72(t，3H)

实施例18化合物15e的合成

称取化合物13e(528mg，1.0mmol，1equiv)溶解在DMA中，冰浴下缓慢加入HCTU和N,N-二异丙基乙胺(0.72mL，4.0mmol，4.00equiv)，反应30min后加入化合物14(250mg，1.2mmol，1.2equiv)，混合物在23℃下搅拌反应16h，加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：

1)得化合物15e(538mg，产率75％)。

目标产物化合物15e的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(m，9H)，1.72(s，3H)，1.96(s，3H)，2.19(s，3H)，3.28(m，1H)，3.66(m，1H)，4.11(m，4H)，4.16(m，2H)，4.29(m，4H)，4.37(m，2H)，4.79(t，J＝6.52Hz，1H)，7.40(t，3H)，7.51(d，J＝7.28Hz，2H)，7.72(t，3H)

实施例19化合物16a(即化合物Aa)的合成

例19-1

称取化合物15a(662mg，1mmol)，溶解在二氯甲烷溶液中，冰浴下缓慢加入三氟乙酸10mL，升至室温继续反应2h。加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物Aa(517mg，92％)。

目标产物化合物Aa的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(s，3H)，2.08(s，3H)，2.27(s，3H)，3.23(m，1H)，3.45(m，1H)，3.7(m，4H)，4.19(t，J＝6.09Hz，1H)，7.36(d，J＝7.28Hz，2H)，7.46-7.49(m，4H)，7.67(d，J＝6.89Hz，2H)，7.92(s，2H)

例19-2

称取化合物15a(662mg，1mmol)，溶解在二氯甲烷溶液中，冰浴下缓慢加入盐酸(10mL，1M)，升至室温继续反应2h。加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL),收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL),合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物Aa(445mg，79％)。

实施例20化合物16b(化合物Ab)的合成

称取化合物15b(676mg，1mmol)，溶解在二氯甲烷溶液中，冰浴下缓慢加入三氟乙酸10mL，升至室温继续反应2h。加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物Ab(495mg，86％)。

目标产物化合物Ab的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.53(s，3H)，2.01(s，3H)，2.20(s，3H)，3.16(m，1H)，3.31(m，1H)，3.7-3.9(m，6H)，4.36(t，J＝6.09Hz，1H)，7.36(d，J＝7.28Hz，2H)，7.46-7.49(m，4H)，7.67(d，J＝6.89Hz，2H)，7.98(s，2H)

实施例21化合物16c(化合物Ac)的合成

称取化合物15c(690mg，1mmol)，溶解在二氯甲烷溶液中，冰浴下缓慢加入三氟乙酸10mL，升至室温继续反应2h。加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物Ac(502mg，85％)。

目标产物化合物Ac的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.59(s，3H)，2.06(s，3H)，2.19(s，3H)，3.21(m，1H)，3.38(m，1H)，3.67-3.79(m，8H)，4.27(t，J＝6.09Hz，1H)，7.36(d，J＝7.16Hz，2H)，7.45-7.49(m，4H)，7.69(d，J＝6.72Hz，2H)，8.00(s，2H)

实施例22化合物16d(化合物Ad)的合成

称取化合物15d(705mg，1mmol)，溶解在二氯甲烷溶液中，冰浴下缓慢加入三氟乙酸10mL，升至室温继续反应2h。加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物Ad(490mg，81％)。

目标产物化合物Ad的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.62(s，3H)，1.94(s，3H)，2.21(s，3H)，3.19(m，1H)，3.25(m，1H)，3.57-3.76(m，10H)，4.27(t，J＝6.09Hz，1H)，7.36(d，J＝7.08Hz，2H)，7.47-7.55(m，4H)，7.70(d，J＝7.18Hz，2H)，7.98(s，2H)

实施例23化合物16e(化合物Ae)的合成

称取化合物15e(718mg，1mmol)，溶解在二氯甲烷溶液中，冰浴下缓慢加入三氟乙酸10mL，升至室温继续反应2h。加入乙酸乙酯(20mL)和饱和食盐水(20mL)，收集有机层，水层用乙酸乙酯萃取两次(2*20mL)，合并所有有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏。混合物柱层析(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯由15：1缓慢增至3：1)得化合物Ae(519mg，84％)。

目标产物化合物Ae的¹H NMR的数据如下：

¹H NMR(300MHz，CDCl₃-d6)δ

1.58(s，3H)，1.90(s，3H)，2.19(s，3H)，3.18(m，1H)，3.23(m，1H)，3.57-3.76(m，8H)，3.78-3.80(m，4H)，4.30(t，J＝6.28Hz，1H)，7.38(d，J＝7.08Hz，2H)，7.46-7.52(m，4H)，7.70(d，J＝7.18Hz，2H)，7.99(s，2H)

实施例24HDAC酶抑制活性评价

实验化合物：

本发明所述新型双重HDAC/BRD4抑制剂Aa、Ab、Ac、Ad、Ae以及阳性对照化合物Vorinostat、Entinostat。

试剂盒：

HDAC荧光活性分析/药物发现试剂盒(AK-500，BIOMOL Research Laboratories)。

操作步骤：

1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μL，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

5、加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。

6、显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

7、终止：每孔加终止液50μL，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

所有实验数据均经统计处理。实验结果如表1所示，结果表明新型双重HDAC/BRD4抑制剂较单靶点HDAC抑制剂具有更好的HDAC酶抑制活性，其中化合物Ab的HDAC酶抑制活性最高。

表1化合物抑制HDAC酶活性数据(IC₅₀nM)

实施例25BRD4酶抑制活性评价

实验化合物：

本发明所述新型双重HDAC/BRD4抑制剂Aa、Ab、Ac、Ad、Ae以及阳性对照化合物(+)-JQ1、BI2536。

试剂盒：

人BRD4酶联免疫分析试剂盒

操作步骤：

1、标准品的稀释：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μL，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μL，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μL分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μL，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μL弃掉，再各取50μL分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50uL，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μL分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μL，混匀后从第七、第八孔中分别取50μL加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μL，混匀后从第九第十孔中各取50μL弃掉。

2、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μL，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟。

4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外。

7、温育：操作同3。

8、洗涤：操作同5。

9、显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

10、终止：每孔加终止液50μL，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

所有实验数据均经统计处理。实验结果如表2所示，结果表明新型双重HDAC/BRD4抑制剂较单靶点BRD4抑制剂具有更好的BRD4酶抑制活性，其中化合物Ab的BRD4酶抑制活性最高。

表2化合物抑制BRD4酶活性数据(IC₅₀nM)

实施例26人急性髓性白血病细胞U937细胞体外活性的测定

抑制肿瘤细胞增殖活性研究用MTT法测定所合成化合物在10μM浓度下对人急性髓性白血病细胞U937的生长抑制率。

操作步骤：

细胞选择和培养：

1.打开紫外照射超净台30分钟左右，关闭紫外灯，开风机以及照明灯。

2、从液氮罐中取出冻存好的高分化的人急性髓性白血病细胞U937冻存管立即放入准备好的37℃的温水中，并不时地摇动使其完全融化。

3、然后移至超净台中进行操作，用吸管吸除解冻后的细胞悬液，加入到离心管中，并用一定量的培养基冲洗冻存管后加到离心管中，低速离心4分钟左右，转速800rpm。

4、用吸管吸走上清液，再加一定量的培养基，震荡使得细胞均匀悬浮，并转移至培养瓶中，在37℃的CO₂培养箱中孵育。

药物的MTT试验方法：

1、待上述细胞生长到80-90％时，在超净台下用一次性塑料吸管吸走原来的培养液，用PBS冲洗去残留培养基，加入适量胰酶消化细胞，然后加入新的培养液稀释并使细胞悬浮在培养液中。

2、重新调整U937细胞悬浮液浓度，使细胞浓度至5×10⁴个/mL左右。

3、在96孔板中加入上述计数好的U937细胞，每孔精确在100μL。

4、将上述加入细胞的96孔板放在5％的CO₂培养箱中在37℃条件下孵育24小时，然后吸出培养基，加入溶有浓度梯度药物的培养基，每孔100μL。

5、5％CO₂，37℃孵育，24小时后倒置显微镜下观察，并进行下面操作。

6、每孔加入50μL1×MTT溶液，继续培养4h。

7、终止培养，小心吸去孔内培养液。

8、每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD 490nm处测量各孔的吸光值。

9、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)

所有实验数据均经统计处理，实验结果如表3所示，结果表明本发明所述新型双重HDAC/BRD4抑制剂较单靶点HDAC抑制剂及单靶点BRD4抑制剂具有更好的抑制肿瘤细胞活性，其中化合物Ab的抑癌效果最好。

表3.化合物与细胞作用24h细胞存活率(％)

以上对本发明的特定实施例进行了说明，但本发明的保护内容不仅仅限定于以上实施例，在本发明的所属技术领域中，只要掌握通常知识，就可以在其技术要旨范围内进行多种多样的变更。

Claims (10)

1.一种双重HDAC/BRD4抑制剂，其特征在于，结构如式16所示：

式16中，n＝2～6。

2.根据权利要求1所述的双重HDAC/BRD4抑制剂，其特征在于，n＝2～5。

3.根据权利要求2所述的双重HDAC/BRD4抑制剂，其特征在于，n＝2～4。

4.根据权利要求1所述的双重HDAC/BRD4抑制剂的制备方法，其特征在于，包括：

(1)式10化合物与碱反应，获得式11化合物，其中式10化合物和式11化合物的结构依次分别为：

(2)在缩合剂和碱存在下，式11化合物与式12化合物反应，获得式13化合物；其中式12化合物与式13化合物的结构依次分别为：

(3)在缩合剂和碱存在下，式13化合物与式14化合物反应，获得式15化合物；其中，式14化合物与式15化合物的结构依次分别为：

(4)用酸脱去式15化合物的叔丁氧基，获得所述的式16化合物；

式12、式13、式15和式16中，n＝2～6。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)反应在有机溶剂中进行，碱为氢氧化钠，反应温度80～120℃，反应时间为1～10h。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)反应在有机溶剂中进行；缩合剂为HCTU或HOBT，碱选自叔丁醇钾、二异丙基氨基锂、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺和二乙胺中的一种或几种；反应温度为23～110℃，反应时间为1～24h。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)反应在有机溶剂中进行；缩合剂为HCTU或HOBT，碱选自叔丁醇钾、二异丙基氨基锂、N,N-二异丙基乙胺、三乙胺和二乙胺中的一种或几种；反应温度为23～110℃，反应时间为1～24h。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的酸选自盐酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸、乙磺酸、三氟甲磺酸、磷酸和硫酸氢钠水溶液中的一种或几种；反应时间为1-12h。

9.根据权利要求1～3任一项所述的双重HDAC/BRD4抑制剂在制备HDAC酶或/和BRD4酶抑制药物中的应用。

10.根据权利要求1～3任一项所述的双重HDAC/BRD4抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。