CN105821032A - 一种从柽柳组织中提取总rna 的方法 - Google Patents
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Abstract
一种从柽柳组织中提取总RNA的方法，通过用试剂盒结合添加PVPP粉改进传统提取RNA的方法，使得不易提取的植物材料RNA提取效果和质量提高。主要的技术流程包括试剂盒设备提取前处理，提取RNA的详细过程，以及后期RNA浓度和质量控制检测。用该方法从柽柳组织中提取总RNA浓度高，质量好，没有蛋白质和其它的杂质污染。这项发明为提取荒漠中多盐多酚类的植物的RNA提取提供了参考。
Description
技术领域
本发明涉及一种荒漠植物柽柳RNA的提取方法。
背景技术
提取高质量的RNA 是进行Northern 分析、RT-PCR、cDNA 文库构建、DD-PCR 分析及体外翻译等分子生物学研究的必要前提, 是研究基因表达的重要环节；荒漠植物具有很强的抗逆性，主要是其中含有大量的次生代谢物, 如多糖、多酚、单宁等物质，在细胞破碎后, 这些物质将以不同的方式干扰RNA 的提取, 严重影响所提取RNA 的质量和产量；因此查找出能够抑制或减少次生代谢物的干扰，是实现简单可行的RNA提取方法的主要难题。
多枝柽柳（Tamarix ramosissima ）属灌木或小乔木，高1-5m；枝条细瘦，红棕色；叶披针形、长2-5 cm，总状花序密生在当年生枝上，组成顶生大圆锥花序；果实为蒴果三角状圆锥形；多枝柽柳喜光不耐阴，在遮阴处多生长不良；根系发达，既耐干又耐水湿，抗风能力强，耐盐碱土，能在含盐量1.2%的盐碱地上正常生长；由于多枝柽柳具有抗严寒、耐高温、耐干旱、耐盐碱、耐瘠薄、耐风蚀、耐病虫的特性，所以将其作为防风、固沙、改良盐碱地的重要造林树种；阿勒泰地区的开展绿色通道建设及退耕还林工作中，就把多枝柽柳作为了重要的造林树种加以推广种植，收到了很好的效果。
根据报道，改良的CTAB法可以提取柽柳组织中的总RNA，但是比较繁琐，需要的时间比较长，而且产量也低；甚至由于反复的操作，容易造成RNA降解和污染；目前RNA提取的试剂盒种类繁多，但是很难找到适合柽柳组织的商用RNA提取试剂盒；这是由于柽柳组织破碎后，只要加入裂解溶液，溶液颜色立马变深，说明柽柳多酚、多糖及其他次级代谢物的氧化非常迅速；而普遍适用的β-巯基乙醇基本对这一现象起不到明显作用。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术存在的上述不足之处，提供一种快速稳定柽柳总RNA的提取方法。本发明采用Omega公司商用RNA提取试剂盒E.Z.N.A® Plant RNA Kit结合PVPP粉的方法，开发出了一种针对柽柳的根、茎、叶和花组织，提取RNA的快速稳定的方法；此种方法得到的RNA量及质量非常高，能够成功地应用于RT-PCR和下一代的高通量的转录组测序等下游技术。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
一种从柽柳组织中提取总RNA的方法，该方法包括试剂盒设备提取前处理，提取步骤，质量检测；其中试剂盒设备提取前处理是：提取前将用到的离心管、药勺和研钵用0.1%DEPC的水溶液浸泡12小时，然后用铝泊纸包裹，高压蒸汽灭菌和干燥；提取前用70%酒精喷雾清洗离心机、试验台、试管架和移液器，然后用无菌纸巾擦干，反复2-3次，确保实验台及实验所有仪器及设备无污染。
其中提取步骤包括：
1) 根据E.Z.N.A® Plant RNA Kit (Omega Bio-tek, Doraville, GA, USA)操作手册要求，在RNA Wash Buffer II 中加入48 ml 95% 的乙醇，上下颠倒，充分混匀，备用；
2）在5 ml试管中加入E.Z.N.A® Plant RNA Kit (Omega Bio-tek, Doraville, GA,USA) 裂解液RCL 4 ml,再加入4×20 μl的β-巯基乙醇,盖上盖子,在涡旋振荡器上轻轻振荡,充分混匀,总体积共达4080μl；
3）然后用1000移液器移取步骤2）中700μl 裂解液RCL与β-巯基乙醇的混合溶液， 加入1.5 ml 或 2 ml 经液氮预冷过的自备离心管中，放置预冷过的试管架上备用；
4）称PVPP粉，PVPP粉的量为柽柳组织样品重量的2%，分别放入四个完全预冷并装有液氮的研钵中；
5）在装有PVPP的研钵中，分别放入新鲜的或者液氮冷冻的柽柳根、茎、叶、花组织进行充分研磨； 把研磨后的柽柳根、茎、叶、花组织粉末，（不低于70 mg，不超过100mg）分别放入步骤3)盛有700 μl 裂解液RCL与β-巯基乙醇的混合溶液1.5ml 或 2ml的 4个自备离心管中，盖上盖子，在涡旋振荡器上充分振荡2～5分钟，然后放入50℃水浴锅水浴，水浴期间取出振荡几次，充分混匀；
6）将步骤5）中装有样品和裂解液的4个离心管取出水浴，放入eppendorf离心机中，以14000 rpm转速离心 2分钟，取出离心管，放置在试管架上；
7) 用1000 ul的移液器移取步骤6）离心管中的上清液600 μl到新的1.5ml 或 2ml 离心管中； 然后用移液器枪加入300 ul 的95% 的乙醇，枪头不出离心管，吸入排除反复5-10次，至完全混匀；
8）将HiBind® RNA Mini 柱置放在2 ml收集管上，转移步骤7）离心管中所有溶液到HiBind® RNA Mini 柱上，然后 10000 rpm离心 1分钟；
9）弃掉收集管中的废液，重新在HiBind® RNA Mini 柱上加入400 ul RWC WashBuffer，10000 rpm离心 30秒；
10）弃掉收集管中的废液，用移液器取步骤1）配置好的 RWC Wash Buffer II 400 μl，加到HiBind® RNA Mini 柱上，10000 rpm离心30秒；
11) 分别加入预先配置的DNaseI 80 ul（70 ul DNase 酶，10 ul 共320 ul），放置15分钟；然后用10000 rpm离心 30秒；倒掉收集管中的废液，再10000 rpm离心 20秒，甩掉管壁的残液；
12）把HiBind® RNA Mini 柱放置在新的1.5 ml 的收集管上，打开HiBind® RNA Mini柱盖子2分钟；
13）在HiBind® RNA Mini 柱中央，加入30-50 ul DEPC水后， 盖上盖子，静置3分钟；用14000 rpm离心 2分钟；得到的RNA放-80℃存储。
其中步骤4）中，2% 柽柳组织样品重量的PVPP粉必须研磨怪柳之前加入；
其中步骤5）所述新鲜柽柳或者液氮冷冻的柽柳根、茎、叶或花组织放入盛有液氮的研钵中；
其中步骤6）所述取出离心管时避免强烈震荡；
其中步骤7）所述上清液避免杂质，随后加入的乙醇与上清液的体积比为1:2；
其中步骤11）所述DNaseI需要现用现配；
其中步骤13）所述DEPC水的温度范围40-50 ℃，体积为30-50 ul。
该方法从柽柳组织中提取的总RNA，需要质量检测，其中包括以下方法：
1) Nanodrop 检测RNA质量，要求在260 nm 处有完美的RNA峰型，260/230 值在1.0-2.0之间，260/280 值在1.8-2.2之间；
2) 用Agileng Technologies 2100 Bioanalyzer 的RNA integrity number(RIN) 软件评估的多枝柽柳（Tamarix ramosissima）根茎叶花组织总RNA质量，要求RIN值大于7，rRNA Ratio大于1.5；
3) 琼脂糖电泳检测RNA质量，要求电泳分离出条带清晰可见的5S和18S和28S条带。
附图说明
图 1 柽柳根、茎、叶、花组织Nanodrop检测RNA质量峰图；
图2-a：多枝柽柳（Tamarix ramosissima）Bioanalyzer检测根组织rRNA峰图；
图2-b：多枝柽柳（Tamarix ramosissima）Bioanalyzer检测茎组织rRNA峰图；
图2-c：多枝柽柳（Tamarix ramosissima）Bioanalyzer检测叶组织rRNA峰图；
图2-d: 多枝柽柳（Tamarix ramosissima）Bioanalyzer检测花组织rRNA峰图
图3：多枝柽柳（Tamarix ramosissima）根、茎、叶、花组织RNA琼脂糖电泳图
其中
1为根组织；
2为茎组织；
3为叶组织；
4为花组织；
M为DNA marker
具体实施方式
下面结合附图，用本发明实施例来进一步说明本发明的实施方式，但并不以此来限定本发明。
实施例
提取柽柳根、茎、叶及花组织种内总RNA方法概述：
发明的内容包括所需试剂盒设备，提取前专有处理过程，提取操作步骤和所提的RNA质量检测四部分。具体实施方案如下：
一、所需试剂和设备
0.1% DEPC水、无水乙醇、液氮、β-巯基乙醇、E.Z.N.A® Plant RNA Kit试剂盒；
离心管、试管架、药勺、研钵、灭菌锅、铝泊纸、无菌纸巾、1000 ul移液器、200 ul 移液器、100 ul移液器、50 ul移液器、1000 ul带过滤器的枪头、200 ul带过滤器的枪头、100 ul带过滤器的枪头、50 ul带过滤器的枪头；
二、提取前专有处理过程
提取前将用到的离心管、药勺和研钵用0.1% DEPC的水溶液浸泡 12 小时，然后用铝泊纸包裹在高压蒸汽灭菌和干燥。提取前用 70%酒精喷雾清洗离心机、试验台、试管架、移液器，然后用无菌纸巾擦干；反复2-3次，确保实验台及实验所有仪器及设备无污染;
三、提取步骤包括：
1) 根据E.Z.N.A® Plant RNA Kit (Omega Bio-tek, Doraville, GA, USA)操作手册要求，在RNA Wash Buffer II 中加入48 ml 95% 的乙醇，上下颠倒，充分混匀，备用；
2）在5ml试管中加入E.Z.N.A® Plant RNA Kit (Omega Bio-tek, Doraville, GA,USA) 裂解液RCL 4 ml,再加入4×20 μl的β-巯基乙醇,盖上盖子,在涡旋振荡器上轻轻振荡,充分混匀,总体积共达4080 μl；
3）然后用1000 移液器移取步骤2）中700 μl 裂解液RCL与β-巯基乙醇的混合溶液， 加入1.5 ml 或 2 ml 经液氮预冷过的自备离心管中，放置预冷过的试管架上备用；
4）称PVPP粉，PVPP粉的量为柽柳组织样品重量的2%，分别放入四个完全预冷并装有液氮的研钵中；
5）在装有PVPP的研钵中，分别放入新鲜的或者液氮冷冻的柽柳根、茎、叶、花组织进行充分研磨；把研磨后的柽柳根、茎、叶、花组织粉末，（不低于70 mg，不超过100 mg）分别放入步骤3)盛有700 μl 裂解液RCL与β-巯基乙醇的混合溶液1.5ml 或 2ml的 4个自备离心管中，盖上盖子，在涡旋振荡器上充分振荡2～5分钟，然后放入50℃水浴锅水浴，水浴期间取出振荡几次，充分混匀；
6）将步骤5）中装有样品和裂解液的4个离心管取出水浴，放入eppendorf离心机中，以14000 rpm转速离心 2分钟，取出离心管，放置在试管架上；
7) 用1000 ul的移液器移取步骤6）离心管中的上清液600 μl到新的1. 5ml 或 2ml离心管中；然后用移液器枪加入300 ul 的95% 的乙醇，枪头不出离心管，吸入排除反复5-10次，至完全混匀；
8）将HiBind® RNA Mini 柱置放在2 ml收集管上，转移步骤7）离心管中所有溶液到HiBind® RNA Mini 柱上，然后 10000 rpm离心 1分钟；
9）弃掉收集管中的废液，重新在HiBind® RNA Mini 柱上加入400 ul RWC WashBuffer，10000 rpm离心 30秒；
10）弃掉收集管中的废液，用移液器取步骤1）配置好的 RWC Wash Buffer II 400 μl，加到HiBind® RNA Mini 柱上，10000 rpm离心30秒；
11) 分别加入预先配置的DNaseI 80 ul（70 ul DNase 酶，10 ul 共320 ul），放置15分钟；然后用10000 rpm离心 30秒；倒掉收集管中的废液，再10000 rpm离心 20秒，甩掉管壁的残液；
12）把HiBind® RNA Mini 柱放置在新的1.5 ml 的收集管上，打开HiBind® RNA Mini柱盖子2分钟；
13）在HiBind® RNA Mini 柱中央，加入30-50 ul DEPC水后，盖上盖子，静置3分钟；用14000 rpm离心 2分钟；得到的RNA放-80℃存储；
四、RNA质量检测包括：
1) Nanodrop 检测RNA质量，要求在260 nm 处有完美的RNA峰型，260/230 值在1.0-2.0之间，260/280 值在1.8-2.2之间；
2) 用Agileng Technologies 2100 Bioanalyzer 的RNA integrity number(RIN) 软件评估的多枝柽柳（Tamarix ramosissima）根、茎、叶、花组织总RNA质量，要求RIN值大于7，rRNA Ratio大于1.5；
3) 琼脂糖电泳检测RNA质量，要求电泳分离出条带清晰可见的5S、28S和18S三条带；
4.1 Nanodrop 检测 RNA 质量
取 l ul 上述方法提取的多枝柽柳（Tamarix ramosissima ）根、茎、叶、花组织的 RNA在NanoDrop 2000 仪器上检测，检测设定为 RNA，结果显示260/230 的值大于 1.5，说明RNA 中的多糖杂质含量很低；260/280的值大于1.8，位于1.8 - 2.2 之间，说明 RNA 中的蛋白质杂质含量很低（如附图1所示）；
4.2 Bioanalyzer RIN值及rRNA Ratio检测
以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis)，并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估，10为RNA完整性最好，0为最差；检测结果在7.4和7.6之间（参见表1），5S、18S及28S rRNA峰非常尖锐，说明RNA完整性很好（如附图2-a、2-b、2-c、2-d所示）；
表1 用Agileng Technologies 2100 Bioanalyzer 的RNA integrity number(RIN)软件评估的多枝柽柳（Tamarix ramosissima ）根茎叶花组织总RNA质量；
表1总RNA质量评估
4.3 琼脂糖电泳检测 RNA 质量
取500ng上述方法提取的多枝柽柳的 RNA在1%的琼脂糖胶电泳分离，电泳电压为105V/cm，电泳时间为15 min。Gel-red染色，BioRad凝胶成像仪检测和照相。检测结果说明本方法提取的RNA琼脂糖胶电泳检测具有5S、18S和28S三个条带，条带清晰可见，说明所提取的RNA质量高（如附图3所示）。
综合NanoDrop 2000 仪、Agilent Bioanalyzer和琼脂糖电泳检测结果说明：本方法提取柽柳根、茎、叶及花组织的RNA质量高，产量高，无蛋白质的污染。
Claims (4)
1.一种从柽柳组织中提取总RNA的方法，该方法包括试剂盒设备提取前处理， 提取步骤，质量检测；其特征在于：
所述试剂盒设备提取前处理：将离心管、药勺和研钵用0.1% DEPC的水溶液浸泡 12 小时，然后用铝泊纸包裹，高压蒸汽灭菌和干燥；用 70%酒精喷雾清洗离心机、试验台、试管架和移液器，然后用无菌纸巾擦干，反复2-3次，确保实验台及实验所有仪器及设备无污染；
所述提取步骤包括：
1)在RNA Wash Buffer II 中加入48 ml 95% 的乙醇， 上下颠倒，充分混匀，备用；
2）在5ml试管中加入E.Z.N.A® Plant RNA Kit (Omega Bio-tek, Doraville, GA,USA) 裂解液RCL 4 ml,再加入4×20 μl的β-巯基乙醇,盖上盖子,在涡旋振荡器上轻轻振荡,充分混匀,总体积共达4080 μl；
3）用1000 移液器移取步骤2）中700 μl 裂解液RCL与β-巯基乙醇的混合溶液， 加入1.5 ml 或 2 ml 经液氮预冷过的自备离心管中，放置预冷过的试管架上备用；
4）称交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)粉，PVPP粉的量为柽柳组织样品重量的2%，分别放入四个完全预冷并装有液氮的研钵中；
5）在装有PVPP的研钵中，分别放入新鲜的或者液氮冷冻的柽柳根、茎、叶、花组织进行充分研磨； 把研磨后的柽柳根、茎、叶、花组织粉末，分别放入步骤3)盛有700 μl 裂解液RCL与β-巯基乙醇的混合溶液1.5 ml 或 2 ml的 4个自备离心管中，盖上盖子，在涡旋振荡器上充分振荡2～5分钟，然后放入50℃水浴锅水浴，水浴期间取出振荡几次，充分混匀；所述研磨后的柽柳根、茎、叶、花组织粉末不能低于70 mg，而且不能超过100 mg；
6）将步骤5）中装有样品和裂解液的4个离心管取出水浴，放入eppendorf离心机中，以14000 rpm转速离心 2分钟，取出离心管，放置在试管架上；
7) 用1000 ul的移液器移取步骤6）离心管中的上清液600 μl到新的1.5 ml 或 2 ml离心管中； 然后用移液器枪加入300 ul 的95% 的乙醇，枪头不出离心管，吸入排除反复5-10次，至完全混匀；
8）将HiBind® RNA Mini 柱置放在2 ml收集管上，转移步骤7）离心管中所有溶液到HiBind® RNA Mini 柱上，然后 10000 rpm离心 1分钟；
9）弃掉收集管中的废液，重新在HiBind® RNA Mini 柱上加入400 ul RWC WashBuffer， 10000 rpm离心 30秒；
10）弃掉收集管中的废液，用移液器取步骤1）配置好的 RWC Wash Buffer II 400 μl，加到HiBind® RNA Mini 柱上，10000 rpm离心30秒；
11) 分别加入预先配置的DNaseI 80 ul（70 ul DNase 酶，10 ul 共320 ul），放置15分钟；然后用10000 rpm离心 30秒；倒掉收集管中的废液，再10000 rpm离心 20秒，甩掉管壁的残液；
12）把HiBind® RNA Mini 柱放置在新的1.5 ml 的收集管上，打开HiBind® RNA Mini柱盖子2分钟；
13）在HiBind® RNA Mini 柱中央，加入30-50 ul DEPC水后， 盖上盖子，静置3分钟；用14000 rpm离心 2分钟；得到的RNA放-80℃存储；
所述质量检测：
1）Nanodrop 检测RNA质量，取 l ul提取的多枝柽柳（Tamarix ramosissima ）根、茎、叶、花组织的 RNA 在NanoDrop 2000 仪器上检测，检测设定为 RNA，结果显示260/230 的值大于 1.5；260/280的值大于1.8；
2）Bioanalyzer RIN值及rRNA Ratio检测，以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis)，并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估，检测结果在7.4和7.6之间，5S、18S及28S rRNA峰非常尖锐，RNA完整性好；
3）琼脂糖电泳检测RNA质量，取500 ng提取的多枝柽柳的 RNA在1%的琼脂糖胶电泳分离，电泳电压为 105 V/cm，电泳时间为15 min ；Gel-red染色，BioRad凝胶成像仪检测和照相；提取的 RNA 琼脂糖胶电泳检测具有5S、18S和28S三个条带，条带清晰可见。
2.根据权利要求1所述的从柽柳组织中提取总RNA的方法，其中步骤4）中，2% 柽柳组织样品重量的PVPP粉在研磨怪柳之前加入。
3.根据权利要求1所述的从柽柳组织中提取总RNA的方法，其中步骤7）所述上清液避免杂质，随后加入的乙醇与上清液的体积比为1:2。
4.根据权利要求1所述的从柽柳组织中提取总RNA的方法，其中步骤13）所述DEPC水的温度范围40-50 ℃，体积为30-50 ul。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106047866A (zh) * | 2016-08-16 | 2016-10-26 | 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 | 一种从沙米组织中提取总dna的方法 |
| CN114573723A (zh) * | 2020-12-02 | 2022-06-03 | 复旦大学 | 柽柳多糖及其在制备补体抑制剂及防治病毒性肺炎药物中的用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102757953A (zh) * | 2012-06-21 | 2012-10-31 | 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 | 荒漠植物红砂rna的提取方法 |
| CN104164419A (zh) * | 2014-07-23 | 2014-11-26 | 南昌大学 | 紫脚板薯组织rna的提取方法 |
-
2016
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102757953A (zh) * | 2012-06-21 | 2012-10-31 | 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 | 荒漠植物红砂rna的提取方法 |
| CN104164419A (zh) * | 2014-07-23 | 2014-11-26 | 南昌大学 | 紫脚板薯组织rna的提取方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| OMEGA BIO-TEK: "《E.Z.N.A. Plant RNA Kit》", 30 September 2014 * |
| 吴亚运 等: "竹节参根状茎总RNA提取方法的研究与优化", 《武汉轻工大学学报》 * |
| 裴东 等: "几种提取木本植物中RNA方法的比较与改进", 《植物生理学通讯》 * |
| 陈桂信 等: "木奈嫩总RNA的提取与纯化", 《江西农业大学学报》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106047866A (zh) * | 2016-08-16 | 2016-10-26 | 中国科学院寒区旱区环境与工程研究所 | 一种从沙米组织中提取总dna的方法 |
| CN114573723A (zh) * | 2020-12-02 | 2022-06-03 | 复旦大学 | 柽柳多糖及其在制备补体抑制剂及防治病毒性肺炎药物中的用途 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
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Application publication date: 20160803 |