CN105815640A - 一种促消化调整肠胃果蔬益生菌产品及其制备方法 - Google Patents

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CN105815640A CN201610195227.5A CN201610195227A CN105815640A CN 105815640 A CN105815640 A CN 105815640A CN 201610195227 A CN201610195227 A CN 201610195227A CN 105815640 A CN105815640 A CN 105815640A
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肖林
孙保剑
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Abstract

本发明公开一种具有促消化调理肠胃功能的果蔬益生菌产品及其制备方法，由对肠胃调理作用、促进消化的金桔、山楂、苹果、柠檬、香蕉、菠萝、葡萄、梨、沙棘果、猕猴桃、南瓜、白萝卜、胡萝卜等果蔬，采用两段发酵法，将果蔬内的糖粉充分转化为益生菌菌体及代谢产物，同时保留了果蔬中大量维生素、微量元素及代谢有机酸；通过碳酸钙调节有机酸浓度转化为有机钙，利于肠道吸收，消除酸涩感；采用木糖醇及益生元调节甜味，可以增强钙吸收，增强体内益生菌增殖和外源益生菌的定植作用。产品不仅可以促进腹胀、胃动力差的人群促进消化，可以调节肠道菌群，而且可以有效补充人体膳食日常所需钙质，长期服用可增强人体免疫力。

Description

一种促消化调整肠胃果蔬益生菌产品及其制备方法
技术领域
本发明涉及食品加工领域，具体涉及一种促消化调整肠胃果蔬益生菌产品及其制备方法。
背景技术
随着现代生活节奏的加快、饮食结构和生活方式的改变，全民食品过度精细化，添加剂及抗生素滥用导致人体肠道菌群处于亚健康状态，特别是白领一族由于工作压力大、节食减肥、乱补保健品及缺乏运动，便秘、腹泻、排便恶臭、口臭、肤色暗淡、痤疮等生理状态，使得人们对肠道健康产品的需求越来越多，酸奶作为肠道健康的调整者已经被广大群众所认可，但酸奶中益生菌菌群较为单一，含有甜味剂、增稠剂，长期服用或者大量服用会出现某一单一菌群失调，因此，方便饮用益生菌饮料成为当今白领一族追逐的热点，因此，一种源于天然、有益肠道健康的益生菌饮品是调整白领、中老年及儿童胃肠道健康、焕发活力、提高生活品质的有利保障。
酵素是日本与台湾对“酶”的一种统称，即，具有生物催化作用一种特殊蛋白质，承担人体内新陈代谢中各种生化变化的媒介体。近年来，以多种混合水果为原料加蔗糖或蜂蜜等直接发酵的液体被市场上称为能够排毒清肠、美容养颜，加速新陈代谢，排除多余热量、减脂、控制体重的活性酵素，然而这种说法却不具有科学性，首先酵素作为蛋白质其耐酸性能较差，而市场上水果发酵后的产物，其pH通常为3～4，大部分消化蛋白会失活变性，在体内被降解成氨基酸，无生物催化活性，因此以酵素命名果蔬发酵产物不准确。但果蔬发酵产物对于调解人体肠道菌群、提高免疫力、促进营养吸收、改善体内微环境、提高心血管和肝肾排毒能力、延缓衰老都有显著作用，其起作用的是益生菌，其制备工艺与传统葡萄酒酿造过程类似，属于天然益生菌发酵。
中国专利《一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法》申请号为201510355647.0虽然公开了一种复合益生菌果蔬酵素的制备方法，主要包括：将果蔬原料洗净切块、果蔬培养基的配制、灭菌、混合发酵，发酵后得到该益生菌酵素产品，但该发明的不足之处在于：一是忽略了天然菌群的发酵，使得有益菌群单一，虽然原料中会存在有害菌还是合理控制发酵条件，可以最大限度的降低有害菌的繁殖；二是对发酵及其发酵条件控制的不合理，导致产品质量降低：发酵后产物的pH在3～4中(附图1中的发酵过程pH在发酵初期已经为3.5，随着发酵时间的延长，pH继续降低)，即使产生大量蛋白，也存在变性失活的情况，产品明显质量降低。
因此为满足现代人对肠道健康、营养多样性、平衡性和易于吸收性的需求，亟需一种新型的促消化调整肠胃果蔬益生菌产品的制备方法以及益生菌产品。
发明内容
本发明采用添加益生菌益生元及肠道益生菌来实现的，突破原有益生菌饮品为乳制品饮料，以有机果蔬为原料，采用天然发酵和后期添加特种益生菌发酵制备出具有促进消化调整肠胃功能的益生菌饮品及产品。
本发明的目的在于提供一种具有促消化调整肠胃功能的果蔬益生菌产品及其制备方法，利用有机认证的水果蔬菜通过天然菌群和外源益生菌群两阶段发酵产生益生菌产品，该产品不同与传统乳制品益生菌饮料，有益菌群丰富，富含维生素，味道可口，不仅可以提高胃动力，而且可以调整肠道菌群，可以通过提高肠道菌群的健康来提高人体免疫力。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种促消化调整肠胃果蔬益生菌产品的制备方法，包括以下步骤：
(1)清洗水果和蔬菜，制成果蔬浆；
(2)一次发酵：将果蔬浆、糖类物质、无菌水和低聚木糖按照设定比例进行混合，接入双歧杆菌菌种进行一次发酵，发酵至pH为4～4.5时，得到富含双歧杆菌的发酵液；
(3)二次发酵：将乳酸杆菌和酵母菌接入步骤(2)中的发酵液进行二次发酵；
(4)向步骤(3)中的发酵液中添加益生元制备得到果蔬益生菌产品。
步骤(1)中，所述水果包括金桔、山楂、苹果、柠檬、香蕉、菠萝、葡萄、梨、沙棘果、猕猴桃的3～10种，所述蔬菜包括南瓜、白萝卜、胡萝卜、西红柿的2～4种，此类组合中至少包括金桔、山楂、沙棘果、白萝卜和西红柿。
优选的，上述原料中水果与蔬菜的质量比例为3-10:1。
经过大量实验验证与分析，为得到性能效果较好的果蔬益生菌产品，本发明中果蔬的具体重量比例应用如下：金桔100-200份、山楂50-100份、苹果100-500份、柠檬10-50份、香蕉100-200份、菠萝100-200份、葡萄50-100份、梨100-300份、沙棘果200-400份、猕猴桃100-300份；南瓜50-300份、白萝卜10-200份、胡萝卜20-50份、西红柿20-100份。
本发明针对4～12岁儿童消化系统以及体质特点设计了符合其食用的最佳方案：适合4～12岁儿童的促消化调整肠胃果蔬益生菌产品，是由以下重量份制成的：金桔100～150份、山楂50～100份、苹果200～300g份、葡萄50～100份、沙棘果200～300份、猕猴桃100～150份、南瓜50～100份、白萝卜10～20份、胡萝卜20～50份、西红柿20～50份。
优选的，所述适合4～12岁儿童的促消化调整肠胃果蔬益生菌产品，是由以下重量份制成的：金桔100份、山楂50份、苹果300份、葡萄100份、沙棘果200份、猕猴桃100份、南瓜100份、白萝卜10份、胡萝卜20份、西红柿20份。
儿童的肠壁较薄，粘膜脆弱，肠液中的各种酶含量较低，胃容量较小，本发明针对4～12岁的儿童的体质和消化系统的特点，经过大量实验验证和分析选取金桔、山楂、苹果、葡萄、沙棘果、猕猴桃六种水果，和南瓜、白萝卜、胡萝卜、西红柿四种蔬菜。选用的水果和蔬菜配伍复合后营养更加均衡、全面丰富，制备得到的产品柔和不损害儿童的较为脆弱和敏感的消化系统，满足人体需求的维生素C、维生素K、核黄素、胡萝卜素、番茄红素。
本发明针对中老年的消化系统以及体质特点设计了符合其食用的最佳方案：适合中老年的促消化调整肠胃果蔬益生菌产品，是由以下重量份制成的：金桔150～200份、山楂100～150份、苹果300～500份、葡萄50～150份、柠檬10～20份、香蕉120～180份、菠萝150～200份、沙棘果300～400份、猕猴桃100～300份、南瓜200～300份、白萝卜50～100份、胡萝卜50份、西红柿50份。
优选的，所述适合中老年的促消化调整肠胃果蔬益生菌产品，是由以下重量份制成的：
金桔200份、山楂150份、苹果500份、葡萄150份、柠檬10份、香蕉140份、菠萝200份、沙棘果400份、猕猴桃100份、南瓜200份、白萝卜50份、胡萝卜50份、西红柿50份。
中年人在社会生产岗位上的劳动性质已基本定型，饮食的品种、数量已基本形成习惯，多数中年人饮食量较稳定，在中年中期，人体的合成代谢与分解代谢大致处于平衡状态，因而胃肠的功能状况也较稳定。但是，随着年龄的增长，胃肠道的消化吸收功能有所下降。中年后期，有的中年人牙齿开始脱落，使食物未经充分咀嚼而直接进入胃，显然加重了胃的负担，加之胃肠粘膜、肌肉随着年龄的增长而萎缩，胃肠粘膜分泌的消化液减少，尤其是胆汁和胰液的减少，使脂肪、蛋白质等食物消化、吸收过程延迟。肠蠕动减慢，增加了水分的吸收。本发明根据中老年人的消化系统和体质的特点，选取金桔、山楂、苹果、葡萄、柠檬、香蕉、菠萝、沙棘果、猕猴桃9种水果，和南瓜、白萝卜、胡萝卜、西红柿4种蔬菜。选用的水果和蔬菜配伍复合后营养更加均衡、全面丰富，制备得到的产品特别适合中老年人食用，满足人体需求的维生素C、维生素K、核黄素、胡萝卜素、番茄红素。
本发明选用的果蔬必须经过有机认证，无农药残留，以保证水果中天然益生菌，其次需要个体饱满无腐烂的新鲜蔬果，以保证整个发酵品质无腐败、染菌现象。
步骤(2)中，所述双歧杆菌菌种包括长双歧杆菌CICC6186，短双歧杆菌CICC6185，两歧双歧杆菌CICC6170，青春双歧杆菌CICC6180，婴儿双歧杆菌CICC6069，动物双岐杆菌CICC6165的一种或多种组合。
经过大量实验验证与分析，本发明优先选取青春双歧杆菌CICC6180、婴儿双歧杆菌CICC6069和动物双岐杆菌CICC6165作为适合4～12岁儿童的益生菌产品的一次发酵的菌种。
经过大量实验验证与分析，本发明优先选取长双歧杆菌CICC6186，短双歧杆菌CICC6185，两歧双歧杆菌CICC6170，青春双歧杆菌CICC6180，动物双岐杆菌CICC6165作为适合中老年的益生菌产品的一次发酵的菌种。
所述双歧杆菌菌种的制备方法为：将所需双歧杆菌按照5～10％(w/w)的接种量接种于TPY液体培养基中，严格厌氧静止培养24h～36h。将上述双歧杆菌培养物在10℃，2000-6000rpm转离心5～10min，收集菌泥，并采用生理盐水清洗菌泥2次后作为双歧杆菌菌种备用。
所述TPY液体培养基配方如下：酸水解酪蛋白10.0g，大豆蛋白胨5.0g，酵母浸粉2.5g，葡萄糖15.0g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸氢二钾2.0g，氯化镁0.5g，氯化钙0.15g，氯化锌0.000001g，吐温801.0g，调节pH值6.7，加水定容至1L，分装121℃灭菌15min后转入厌氧培养箱中冷却，冷却至37℃以下后接种。
优选的，所述糖类物质、果蔬浆、无菌水的质量比为1：1～5：3～15，进一步优选的质量比例为1:4:10，所述糖类物质为蔗糖或葡萄糖。所述低聚木糖的添加量为果蔬浆、糖类物质和无菌水质量的0.5～2％。
优选的，所述一次发酵的发酵条件为：通入氮气28～32℃的厌氧条件，双歧杆菌菌种的接种量为发酵罐内液体质量的0.1～5％(w/w)。进一步优选的，发酵至pH4.5后结束一次发酵。
步骤(3)中，优选的，所述乳酸杆菌菌种包括副干酪乳杆菌CICC6236、嗜酸乳杆菌CICC6088、植物乳杆菌CICC6238、鼠李糖乳杆菌CICC6133的一种或多种组合，酵母菌优选为酿酒酵母，为酿酒酵母菌株CICC1249。
所述乳酸杆菌菌种制备方法为：将所需乳酸杆菌按照5～10％(w/w)的接种量接种于乳酸菌肉汤培养基中严格厌氧静止培养24h～36h。将上述乳酸杆菌培养物在10℃，2000-6000rpm转离心5～10min，收集菌泥，并采用生理盐水清洗菌泥2次后作为乳酸杆菌菌种备用。
其中所述肉汤培养基配方：胨化乳15.0g/L，酵母浸粉5.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，葡萄糖10.0g/L，蕃茄浸出粉2.5g/L，吐温801.0g/LpH值6.8±0.2，加水定容至1L，分装121℃灭菌15min后转入厌氧培养箱中冷却，冷却至37℃以下后接种。
所述酵母菌菌种制备方法为：将所需的酵母菌种接种于YPD培养基中，接种量5％(w/w)，静置培养12～24h。将上述酵母菌培养物在10℃，2000-6000rpm转离心5～10min，收集菌泥，并采用生理盐水清洗菌泥2次后作为酵母菌菌种备用。
其中所述YPD培养基配方：蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，酵母浸出粉5.0g/L。30℃培养12～24h。
优选的，所述二次发酵的发酵条件为：发酵温度为36～38℃，乳酸杆菌菌种和酵母菌菌种两者的接种量为发酵罐内液体质量的0.1～2％，当发酵液中含有总糖含量小于1％时停止发酵。
二次发酵后发酵液中的乳酸菌总数为107～1010cfu/mL，其含有总糖含量小于1％。
以上菌种均购自于中国微生物菌种保藏中心。
步骤(4)中，优选的，进一步向步骤(3)中加入食品级碳酸钙，碳酸钙的添加量为发酵罐内液体质量的0.1～2‰，混匀，然后在加入益生元。向其发酵液中加入了碳酸钙，一方面优化了产品的口感，消除酸涩感，另一方面中和醋酸和乳酸将其转化为有机钙醋酸钙和乳酸钙，为人体提供了充足的钙源，经过大量实验验证和分析，一般人每日喝200mL的此产品即可满足人体对钙质的需求。添加的益生元可以促进钙的吸收和利用。
所述益生元包括木糖、木糖醇、低聚半乳糖、低聚木糖的一种或多种。不仅有助于改善口感，而且协助肠道益生菌群增殖以及产品中的益生菌定植于肠道。优选的，为使产品的口感和性能更加优异，所述益生元是由木糖、木糖醇、低聚半乳糖、低聚木糖按照10:1:1:0.5的质量比例进行混匀得到的混合物。
步骤(4)后还包括步骤(5)：将步骤(4)中的果蔬益生菌产品加入脱脂奶粉，干燥成粉，制备成为果蔬益生菌干粉。
优选的，所述果蔬益生菌产品加入10％(w/w)的脱脂奶粉，-70℃真空冷冻干燥成粉。
所述果蔬益生菌干粉充氮气包装，服用时按照1:3-10的比例用30-37℃温水冲服。
步骤(5)后还包括步骤(6)：将步骤(5)中的果蔬益生菌干粉采用压片机进行压片制备成为口含片或咀嚼片。
本发明还提供一种采用上述制备方法制备得到促消化调整肠胃果蔬益生菌产品。
本发明的有益效果是：
(1)该果蔬益生菌产品富含大量促进胃消化的水果与蔬菜，在发酵代谢水果中糖类的同时含有少量的蛋白酶、淀粉酶和微量元素，保留了满足人体需求的维生素C、维生素K、番茄红素，而益生菌在体内则可以产生核黄素、胡萝卜素及维生素等；本产品发酵后产生的益生菌，并在发酵后期制备成品时添加益生元产品，不仅有助于改善口感，可以增强钙的吸收，而且协助肠道益生菌群增殖以及产品中的益生菌定植于肠道，对于改善胃肠道消化不良的健康问题其双效作用。
(2)必选的果蔬为金桔、山楂、沙棘果和白萝卜。
其中白萝卜：可以理气化瘀，同时蔬菜类富含大量的长纤维可以促进肠道蠕动，防止肠胃不佳的人群便秘。
金桔：果实含有丰富的维生素C、金桔甙等成分，对维护心血管功能，防止血管硬化、高血压等疾病有一定的作用。金桔作为食疗保健品，金桔蜜饯可以开胃，饮金桔汁能生津止渴，加萝卜汁、梨汁饮服能治咳嗽。金桔药性甘温，能理气解郁，化痰，同时对维护心血管功能，防止血管硬化、高血压等疾病有一定的作用。
山楂：核果类水果，核质硬，果肉薄，味微酸涩。果可生吃或作果脯果糕，干制后可入药，是中国特有的药果兼用树种，具有降血脂、血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药，对胸膈脾满、疝气、血淤、闭经等症有很好的疗效。山楂内的黄酮类化合物牡荆素，是一种抗癌作用较强的药物，其提取物对抑制体内癌细胞生长、增殖和浸润转移均有一定的作用。
沙棘果：含有脂肪、蛋白质、糖类、盐类和维生素，并且含量丰富。每100g沙棘果汁中含维生素C500mg-400mg、维生素E250mg-400mg、维生素B1含0.05mg-0.3mg、维生素B2含0.03,g-0.15,g、维生素B12含0.2mg-0.88mg、维生素K族化合物115、P族维生素20mg-350mg。具有活血散淤、化痰宽胸、补脾健胃、生津止渴、清热止泻之效，同时对多种疾病都有一定的治疗作用。
西红柿具有止血、降压、利尿、健胃消食、生津止渴、清热解毒、凉血平肝的功效。由于番茄中维生素A、维生素C的比例合适，可增强小血管功能，预防血管老化。番茄中的类黄酮、番茄红素，既有降低毛细血管的通透性和防止其破裂的作用，还有预防血管硬化的特殊功效，可以预防前列腺炎、宫颈癌、膀胱癌和胰腺癌等疾病。
(3)采用两段分批发酵工艺，将果蔬内的糖分充分转化为益生菌菌体及代谢产物，同时保留了果蔬中大量维生素、微量元素及代谢有机酸；并且两段分批发酵能实现双歧杆菌优先生长，同时后期补充乳酸杆菌与酵母菌充分消耗果蔬产品中的蔗糖、葡萄糖、果糖，使其还原糖总糖浓度小于1％，该产品可以在糖尿病患者中使用。
本发明的制备方法采用两段分批发酵工艺，在提高有益菌群的活菌数的同时，其pH控制在大于4以上，避免了蛋白质的变性失活，明显提高了本发明产品的质量品质。
经过对发酵过程的控制和采用有机认证的果蔬，抑制了原料中天然存在的有害菌的在发酵过程中的繁殖，是最终制备得到的产品质量合格。
(4)发酵后采用碳酸钙，中和醋酸和乳酸可以将其转化为有机钙醋酸钙及乳酸钙，不仅可以提高产品的口感，消除酸涩感，同时为人体可以补充相应的钙，提高钙吸收能力，每日喝此产品200mL即可满足人体对钙质的需求。
(5)该果蔬益生菌产品的优点在于本产品选用的水果、蔬菜富含维生素C，具有较强的还原能力，是双歧杆菌发酵提供还原力的优良原料，以此为基料发酵生产双歧杆菌，双歧杆菌活菌数高达108CFU/mL。
(6)本发明终产品中富含三大有益微生物，分别为乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌，有效活菌数≥109CFU/mL，其中双歧杆菌活菌数≥108CFU/mL。
酵母菌中富含大量维生素B，包括核黄素及生物素，可以补充人体因精细化饮食而造成的脱皮、生长缓慢、易疲劳、肌肉疼等现象。
双歧杆菌和乳酸菌可以改善肠道内环境可合成维生素,形成有抗菌作用的物质乙酸和脂肪酸等，提高肠道先天免疫系统，如加强肠道紧密连接、增加黏液分泌和促进胃肠蠕动等；产生包括泛酸、尼克酸、B1、B2、B6及维生素K等，同时能产生短链脂肪酸、抗氧化剂、氨基酸等等，对骨骼成长和心脏健康有重要作用；可以抗肿瘤作用，降低胆固醇作用，降低尿草酸盐排泄率，从而预防和治疗肠源性尿草酸盐过多及其引起的泌尿系结石的目的。对于目前的酵素产品，多为乳酸菌，不含酵母和双歧杆菌。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例1
针对于4-12岁儿童最佳推荐方案：
(1)菌种制备方法：将青春双歧杆菌CICC6180，婴儿双歧杆菌CICC6069，动物双岐杆菌CICC6165按照5％(w/w)的接种量分别接种于150mLTPY液体培养基中，严格厌氧静止培养24h～36h，10℃4000rpm离心5min后，加入50mL无菌生理盐水洗涤菌泥，反复两次收集沉淀，将沉淀按照质量比1:1:1混合后，取5g菌泥接种于2kg果蔬培养基中；将副干酪乳杆菌CICC6236、嗜酸乳杆菌CICC6088、植物乳杆菌CICC6238、鼠李糖乳杆菌CICC6133分别接种于100mL乳酸菌培养基中，酵母菌株CICC1249接入100mL酵母菌培养基中，厌氧静止培养24h后，10℃4000rpm离心5min后，加入50mL无菌生理盐水洗涤菌泥，反复两次收集沉淀，将沉淀按照质量比1:1:1:1:0.5混合后，取10g菌泥接种于2kg果蔬培养基中。
双歧杆菌培养基配方如下：酸水解酪蛋白10.0g，大豆蛋白胨5.0g，酵母浸粉2.5g，葡萄糖15.0g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸氢二钾2.0g，氯化镁0.5g，氯化钙0.15g，氯化锌0.000001g，吐温801.0g，调节pH值6.7，加水定容至1L，分装121℃灭菌15min后转入厌氧培养箱中冷却，冷却至37℃以下后接种。
乳酸菌培养基配方：胨化乳15.0g/L，酵母浸粉5.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，葡萄糖10.0g/L，蕃茄浸出粉2.5g/L，吐温801.0g/LpH值6.8±0.2，加水定容至1L，分装121℃灭菌15min后转入厌氧培养箱中冷却，冷却至37℃以下后接种。
酵母菌培养基配方：蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，酵母浸出粉5.0g/L。30℃培养12～24h。
(2)发酵：将有机蔬果采用自来水流动冲洗后无菌水，所选取的金桔100g、山楂50g、苹果300g、葡萄100g、沙棘果200g、猕猴桃100g；蔬菜去皮后南瓜100g、白萝卜10g、胡萝卜20g、西红柿20g，合计1kg果蔬，将果蔬投入果蔬充氮粉碎机中，将其粉碎成浆状，然后加入200g冰糖，1kg无菌水真空均质成浆状，20g低聚木糖，转入无菌不锈钢发酵罐，充氮气，保持罐压0.02Mpa，按照(1)所述方法接入青春双歧杆菌CICC6180，婴儿双歧杆菌CICC6069，动物双岐杆菌CICC6165培养物，搅拌混匀后在30±2℃静止发酵2天后，此时发酵液的pH为4.5，按照(1)所述培养方法转接副干酪乳杆菌CICC6236、嗜酸乳杆菌CICC6088、植物乳杆菌CICC6238、鼠李糖乳杆菌CICC6133，酵母菌株CICC1249进行二次发酵，在36～38℃发酵2天后将发酵产物直接灌装至无菌罐中进行调配，加入0.8‰CaCO3(w/w)，3％的低聚半乳糖(w/w)，2％木糖醇(w/w)搅拌混匀后直接灌装成150mL的益生菌饮料。
对该产品的活菌数进行检测，双岐杆菌含量大于等于108CFU/mL；乳酸菌含量大于等于1010CFU/mL，建议2～10℃条件下保存30天。
将调好口感的益生菌饮料，加入10％(w/w)的脱脂牛奶采用-70摄氏度真空冷冻干燥，然后加入羧甲基纤维素钠及硬脂酸镁进行压片，每片含量2g，铝箔包装，可口含或咀嚼使用，建议一日6片，保质期3个月。
实施例2
针对于中老年最佳推荐方案：
(1)菌种制备方法：将长双歧杆菌CICC6186，短双歧杆菌CICC6185，两歧双歧杆菌CICC6170，青春双歧赶紧CICC6180，动物双岐杆菌CICC6165按照5％的接种量分别接种于200mLTPY液体培养基中，严格厌氧静止培养24h～36h，10℃4000rpm离心5min后，加入50mL无菌生理盐水洗涤菌泥，反复两次收集沉淀，将沉淀按照质量比1:1:1:1:1混合后，取10g菌泥接种于4kg果蔬培养基中；将副干酪乳杆菌CICC6236、嗜酸乳杆菌CICC6088、鼠李糖乳杆菌CICC6133，分别接种于100mL乳酸菌培养基中，酵母菌株CICC1249接入100mL酵母菌培养基中，厌氧静止培养24h后，10℃4000rpm离心5min后，加入50mL无菌生理盐水洗涤菌泥，反复两次收集沉淀，将沉淀按照质量比1:1:1:1混合后，取5g菌泥接种于4kg果蔬培养基中。
双歧杆菌培养基配方如下：酸水解酪蛋白10.0g，大豆蛋白胨5.0g，酵母浸粉2.5g，葡萄糖15.0g，L-半胱氨酸0.5g，磷酸氢二钾2.0g，氯化镁0.5g，氯化钙0.15g，氯化锌0.000001g，吐温801.0g，调节pH值6.7，加水定容至1L，分装121℃灭菌15min后转入厌氧培养箱中冷却，冷却至37℃以下后接种。
乳酸菌培养基配方：胨化乳15.0g/L，酵母浸粉5.0g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，葡萄糖10.0g/L，蕃茄浸出粉2.5g/L，吐温801.0g/LpH值6.8±0.2，加水定容至1L，分装121℃灭菌15min后转入厌氧培养箱中冷却，冷却至37℃以下后接种。
酵母菌培养基配方：蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，酵母浸出粉5.0g/L。
(2)发酵：将有机蔬果采用自来水流动冲洗后无菌水，所选取的金桔200g、山楂150g、苹果300g、葡萄150g、柠檬10g、香蕉140g、菠萝200g、沙棘果400g、猕猴桃100g；蔬菜去皮后南瓜200g、白萝卜50g、胡萝卜50g、西红柿50g，合计2kg果蔬，将果蔬投入果蔬充氮粉碎机中，将其粉碎成浆状，然后加入500g冰糖，2kg无菌水真空均质成浆状，80g低聚木糖，转入无菌不锈钢发酵罐，充氮气，保持罐压0.02Mpa，接入10g(1)双歧杆菌菌泥，搅拌混匀后静止发酵1.5天后，转接5g(1)制备的乳酸菌和酵母菌进行二次发酵，发酵待总糖含量0.05％后，将发酵产物直接灌装至无菌罐中进行调配，加入0.8‰CaCO3，1％的低聚木糖，2.5％木糖醇搅拌混匀后直接灌装成300mL的益生菌饮料，建议2～10℃条件下保存30天。
对该产品其中的活菌数检测，乳酸菌含量大于等于108CFU/mL，其中双歧杆菌数量为3×107CFU/mL。
将调好口味的益生菌饮料，加入10％的脱脂牛奶采用-70真空冷冻干燥，充氮气包装，每包30g，真空干燥包装，保存6个月，用1:1或1:237℃温水冲制口感较好条件下饮用。
对比例1
(1)菌种的制备方法：同实施例1中相同。
(2)发酵：将有机蔬果采用自来水流动冲洗后无菌水，所选取的金桔100g、山楂50g、苹果300g、葡萄100g、沙棘果200g、猕猴桃100g；蔬菜去皮后南瓜100g、白萝卜10g、胡萝卜20g、西红柿20g，合计1kg果蔬，将果蔬投入果蔬充氮粉碎机中，将其粉碎成浆状，然后加入200g冰糖，1kg无菌水真空均质成浆状，20g低聚木糖，转入无菌不锈钢发酵罐，充氮气，保持罐压0.02Mpa，按照(1)所述方法接入青春双歧杆菌CICC6180，婴儿双歧杆菌CICC6069，动物双岐杆菌CICC6165培养物，按照(1)所述的培养方法转接副干酪乳杆菌CICC6236、嗜酸乳杆菌CICC6088、植物乳杆菌CICC6238、鼠李糖乳杆菌CICC6133酵母菌株CICC1249，进行发酵，发酵条件：28～32℃发酵2天后，升温至36～38℃再发酵2天，发酵结束后将发酵产物直接灌装至无菌罐中进行调配，加入0.8‰CaCO3(w/w)，3％的低聚半乳糖(w/w)，2％木糖醇(w/w)搅拌混匀后直接灌装成150mL的益生菌饮料。
搅拌混匀后在28～32℃静止发酵2天后，此时发酵液的pH为4.5，按照(1)所述培养方法转接副干酪乳杆菌CICC6236、嗜酸乳杆菌CICC6088、植物乳杆菌CICC6238、鼠李糖乳杆菌CICC6133，酵母菌株CICC1249进行二次发酵，在36～38℃发酵2天后将发酵产物直接灌装至无菌罐中进行调配，加入0.8‰CaCO3(w/w)，3％的低聚半乳糖(w/w)，2％木糖醇(w/w)搅拌混匀后直接灌装成150mL的益生菌饮料。
结论：对该产品其中的活菌数检测，乳酸菌含量大于等于109CFU/mL，双歧杆菌数为103CFU/mL。直接发酵法由于双歧杆菌培养条件苛刻而造成乳酸菌大量繁殖，无法保证双歧杆菌所占有效菌群中的比例。
效果1菌株存活率实验
将调解好口感或冻干后的菌粉用生理盐水进行10倍梯度稀释，稀释后按照倾注法进行菌落计数，其中乳酸杆菌总菌落数测定采用MRS培养基，双歧杆菌菌落数测定采用莫匹罗星锂盐改良MRS固体琼脂培养基。每个梯度3个平行。
液体剂型2-10℃下保存30天乳酸菌总数及双歧杆菌活菌保留率如下表所示：
实施例1(液体) 0d 6d 12d 18d 24d 30d
乳酸菌保留率％ 100.0±1.1 97.4±0.9 91.7±0.9 88.3±0.9 85.0±1.2 80.4±0.7
双歧杆菌保留率％ 100±1.2 93.1±0.5 84.2±1.4 80.5±0.3 74.3±1.8 69.6±0.5
液体样品经过冷冻干燥压片后，乳酸菌含量为8.7×109，存活率为83.7％，双歧杆菌存活率为78.2％，以冻干压片制成成品进行计数，2～10℃随着保存6个月，不同保存时间菌株存活率如下表所示，其含量≥109CFU/mL。
实施例1(压片) 0mon 1mon 2mon 3mon 4mon 5mon 6mon
乳酸菌保留率％ 100.0±0.8 87.4±0.9 61.7±0.9 58.8±0.4 55.0±1.7 47.3±0.6 40.4±1.7
双歧杆菌保留率％ 100％±1.2 73±1.2 67±1.2 58.5±2.7 49.7±4.3 46.1±0.5 42.3±0.4
效果2胃肠液耐受性实验对比
将实施例1、2样品用生理盐水进行10倍梯度稀释，稀释后按照倾注法进行菌落计数，其中乳酸杆菌总菌落数测定采用MRS培养基，双歧杆菌菌落数测定采用莫匹罗星锂盐改良MRS固体琼脂培养基。每个梯度3个平行。
将实施例1、2样品放置在pH2.5的0.3％胃蛋白酶中消化3h后进行胃消化模拟实验，消化后按照前述方法进行计数；然后将为消化后的样品放置在pH7.50.1％胰蛋白酶中消化3h，按照前述方法计数，每个样品3个平行。
结果显示，双歧杆菌及乳酸菌存活率均大于50％。
上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种促消化调整肠胃果蔬益生菌产品的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)清洗水果和蔬菜，制成果蔬浆；
(2)一次发酵：将果蔬浆、糖类物质、无菌水和低聚木糖按照设定比例进行混合，接入双歧杆菌菌种进行一次发酵，发酵至pH为4～4.5时，得到富含双歧杆菌的发酵液；
(3)二次发酵：将乳酸杆菌和酵母菌接入步骤(2)中的发酵液进行二次发酵；
(4)向步骤(3)中的发酵液中添加益生元制备得到果蔬益生菌产品。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤(1)中，所述水果包括金桔、山楂、苹果、柠檬、香蕉、菠萝、葡萄、梨、沙棘果、猕猴桃的3～10种，所述蔬菜包括南瓜、白萝卜、胡萝卜、西红柿的2～4种；优选的，所述水果与蔬菜的质量比例为3-10:1，进一步优选的，水果和蔬菜的组合至少包括金桔、山楂、沙棘果、白萝卜和西红柿。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤(2)中，所述糖类物质、果蔬浆、无菌水的质量比为1:1～5:3～15，所述糖类物质为蔗糖或葡萄糖；所述低聚木糖的添加量为果蔬浆、糖类物质和无菌水质量的0.5～2％。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤(2)中，在28～32℃温度下厌氧发酵，双歧杆菌菌种的接种量为发酵罐内液体质量的0.1～5％。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤(3)中，所述二次发酵的发酵条件为：发酵温度为36～38℃，乳酸杆菌菌种和酵母菌菌种两者的接种量为发酵罐内液体质量的0.1～2％，当发酵液中含有总糖含量小于1％时停止发酵。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征是：进一步向步骤(3)中加入食品级碳酸钙，碳酸钙的添加量为发酵罐内液体质量的0.1～2‰。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征是：步骤(4)后还包括步骤(5)：将步骤(4)中的果蔬益生菌产品加入脱脂奶粉，干燥成粉，制备成为果蔬益生菌干粉；优选的，步骤(5)后还包括步骤(6)：将步骤(5)中的果蔬益生菌干粉采用压片机进行压片制备成为口含片或咀嚼片。
8.采用权利要求1～7中任一项所述的制备方法制备得到的促消化调整肠胃果蔬益生菌产品。
9.如权利要求8所述的益生菌产品，其特征是：针对4～12岁儿童，是由以下重量份制成的：金桔100～150份、山楂50～100份、苹果200～300g份、葡萄50～100份、沙棘果200～300份、猕猴桃100～150份、南瓜50～100份、白萝卜10～20份、胡萝卜20～50份、西红柿20～50份；
针对中老年人，是由以下重量份制成的：金桔150～200份、山楂100～150份、苹果300～500份、葡萄50～150份、柠檬10～20份、香蕉120～180份、菠萝150～200份、沙棘果300～400份、猕猴桃100～300份、南瓜200～300份、白萝卜50～100份、胡萝卜50份、西红柿50份。
10.如权利要求8所述的益生菌产品，其特征是：所述益生菌产品形式为液体饮料、粉剂、口含片或咀嚼片。
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