CN105806841A - 一种测定糖化血清蛋白的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定糖化血清蛋白的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：磷酸钾缓冲液10~90 mmol/L、氯化钙50~250 mmol/L、尿酸酶3~9 KU/L、抗坏血酸氧化酶10~18 KU/L、烷基糖苷 2.0~12.0 g/L、TritonX‑100 0.3~0.7 mmol/L、叠氮钠 0.01~0.09 g/L，其溶剂为纯化水，试剂R2：磷酸钾缓冲液 10~90 mmol/L、四氮唑蓝 0.3~1.5 mmol/L、叠氮钠0.01~0.09 g/L，其溶剂为纯化水，制备方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的糖化血清蛋白的浓度。本发明具有准确度高、无污染等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定糖化血清蛋白的试剂盒及其制备方法。
背景技术
血液中的葡萄糖与白蛋白和其它蛋白分子N末端发生非酶促糖化反应，形成糖化血清蛋白，血清蛋白糖化主要发生在蛋白质分子的赖氨酸残基上，其中以白蛋白为主，糖化血清蛋白(GSP)的半衰期为17~19天，测定糖化血清蛋白(GSP)可反映测定前2~3周的平均血糖水平，且不受当时血糖浓度的影响，是糖尿病患者监测血糖的良好指标，因此，糖化血清蛋白的测定在糖尿病的诊断、近期监测和疗效评价方面均具有重要的意义。
目前主要采用放射标记技术、亲和层析法、过硫代巴比吐酸法等对糖化血清蛋白(GSP)进行测定，但以上的检测方法操作繁琐，且有污染，大规模的应用起来较为复杂，而且其它的检测方法也存在精密度差、稳定性差的缺陷。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服放射化学法有放射性污染、气相色谱法操作复杂和耗时较长以及酶法的试剂稳定性不佳的缺陷，而提供一种测定糖化血清蛋白的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
氯化钙50~250mmol/L
尿酸酶3~9KU/L
抗坏血酸氧化酶10~18KU/L
烷基糖苷2.0~12.0g/L
TritonX-1000.3~0.7mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
四氮唑蓝0.3~1.5mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
氯化钙100mmol/L
尿酸酶6KU/L
抗坏血酸氧化酶14KU/L
烷基糖苷7.0g/L
TritonX-1000.5mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
四氮唑蓝0.9mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R1中，所述的磷酸钾缓冲液的pH值为6～8。
作为优选，所述的试剂R2中，所述的磷酸钾缓冲液的pH值为6～8。
作为优选，本发明还公开了上述测定糖化血清蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
氯化钙50~250mmol/L
尿酸酶3~9KU/L
抗坏血酸氧化酶10~18KU/L
烷基糖苷2.0~12.0g/L
TritonX-1000.3~0.7mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
四氮唑蓝0.3~1.5mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水。
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的糖化血清蛋白的浓度。
本发明的检测原理是：糖化血清蛋白是一种大分子的酮胺类化合物，在碱性条件下可将四氮唑蓝还原成紫色甲月替，其生成量与血清糖化白蛋白成正比。
样本中GSP活性（mmol/L）=CS×（mmol/L）
式中：ΔAU/min待测样品平均每分钟的吸光度变化值
ΔAB/min校准液平均每分钟的吸光度变化值
CS校准液中GSP的浓度
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明所述的测定糖化血清蛋白的试剂盒不含有任何放射性物质，不会对人体以及环境产生放射性污染，且操作简便，耗时短，可应用于临床全自动生化分析仪，且通过显色反应将四氮唑蓝还原成甲月替，反应生成的有色物质稳定，易于检测，使得检测结果更为准确，因此测定的准确度较高。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
氯化钙100mmol/L
尿酸酶6KU/L
抗坏血酸氧化酶14KU/L
烷基糖苷7.0g/L
TritonX-1000.5mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
四氮唑蓝0.9mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
磷酸钾缓冲液90mmol/L
氯化钙50mmol/L
尿酸酶9KU/L
抗坏血酸氧化酶18KU/L
烷基糖苷12.0g/L
TritonX-1000.3mmol/L
叠氮钠0.09g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液90mmol/L
四氮唑蓝1.5mmol/L
叠氮钠0.01g/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
氯化钙100mmol/L
尿酸酶6KU/L
抗坏血酸氧化酶14KU/L
烷基糖苷7.0g/L
TritonX-1000.5mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
四氮唑蓝0.9mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm、副波长700nm；
（c）反应时间：10min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1；
(d)反应方向：正方向。
3、检测步骤
（a）取180ul试剂R1与12ul待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入60μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1；
(d)根据GSP活性（mmol/L）=CS×（mmol/L）计算出样本中的糖化血清蛋白的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液90mmol/L
氯化钙50mmol/L
尿酸酶9KU/L
抗坏血酸氧化酶18KU/L
烷基糖苷12.0g/L
TritonX-1000.3mmol/L
叠氮钠0.09g/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
磷酸钾缓冲液90mmol/L
四氮唑蓝1.5mmol/L
叠氮钠0.01g/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm、副波长700nm；
（c）反应时间：10min，其中，孵育时间5min，加入试剂R2后立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1；
(d)反应方向：正方向。
3、检测步骤
（a）取180ul试剂R1与12ul待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入60μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，5min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA＝A2-A1；
(d)根据GSP活性（mmol/L）=CS×（mmol/L）计算出样本中的糖化血清蛋白的浓度。
表1为实施例1所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的糖化血清蛋白的浓度为1.80mmol/L，测定结果见表1：
表1
| 第1次（mmol/L） | 第2次（mmol/L） | 第3次（mmol/L） | 均值（mmol/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 1.81 | 1.85 | 1.72 | 1.79 | 0.56% |
| 实施例2 | 1.80 | 1.86 | 1.69 | 1.78 | 1.11% |
由表1可知，本发明所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒以及实施例2所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的糖化血清蛋白的浓度为3.00mmol/L，测定结果见表2：
表2
| 第1次（mmol/L） | 第2次（mmol/L） | 第3次（mmol/L） | 均值（mmol/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 3.05 | 3.01 | 3.01 | 3.02 | 0.67% |
| 实施例2 | 3.06 | 3.01 | 3.03 | 3.03 | 1.00% |
由表2可知，本发明所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定糖化血清蛋白的试剂盒的精密度比较好，而且由表1可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (5)
1.一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
氯化钙50~250mmol/L
尿酸酶3~9KU/L
抗坏血酸氧化酶10~18KU/L
烷基糖苷2.0~12.0g/L
TritonX-1000.3~0.7mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
四氮唑蓝0.3~1.5mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
氯化钙100mmol/L
尿酸酶6KU/L
抗坏血酸氧化酶14KU/L
烷基糖苷7.0g/L
TritonX-1000.5mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
磷酸钾缓冲液50mmol/L
四氮唑蓝0.9mmol/L
叠氮钠0.05g/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的磷酸钾缓冲液的pH值为6～8。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R2中，所述的磷酸钾缓冲液的pH值为6～8。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定糖化血清蛋白的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
氯化钙50~250mmol/L
尿酸酶3~9KU/L
抗坏血酸氧化酶10~18KU/L
烷基糖苷2.0~12.0g/L
TritonX-1000.3~0.7mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
磷酸钾缓冲液10~90mmol/L
四氮唑蓝0.3~1.5mmol/L
叠氮钠0.01~0.09g/L
其溶剂为纯化水
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的糖化血清蛋白的浓度。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101136465B1 (ko) * | 2011-10-07 | 2012-04-19 | 주식회사 이앤비 | 현장 분석용 하폐수의 인산염인 측정 키트 및 이를 이용한 인산염인 측정 방법 |
| CN103197084A (zh) * | 2013-03-28 | 2013-07-10 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用 |
| KR20130115547A (ko) * | 2012-04-12 | 2013-10-22 | 서울시립대학교 산학협력단 | 저농도의 인산염 인 농도 검출시약 및 검출키트 |
| CN105223192A (zh) * | 2015-09-14 | 2016-01-06 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种糖化血清蛋白检测试剂及其应用 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101136465B1 (ko) * | 2011-10-07 | 2012-04-19 | 주식회사 이앤비 | 현장 분석용 하폐수의 인산염인 측정 키트 및 이를 이용한 인산염인 측정 방법 |
| KR20130115547A (ko) * | 2012-04-12 | 2013-10-22 | 서울시립대학교 산학협력단 | 저농도의 인산염 인 농도 검출시약 및 검출키트 |
| CN103197084A (zh) * | 2013-03-28 | 2013-07-10 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定的糖化血清蛋白检测试剂及应用 |
| CN105223192A (zh) * | 2015-09-14 | 2016-01-06 | 广州金域医学检验中心有限公司 | 一种糖化血清蛋白检测试剂及其应用 |
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