CN105765386A - 用于检测中和抗体的竞争性配体结合测定法 - Google Patents
用于检测中和抗体的竞争性配体结合测定法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105765386A CN105765386A CN201480059578.2A CN201480059578A CN105765386A CN 105765386 A CN105765386 A CN 105765386A CN 201480059578 A CN201480059578 A CN 201480059578A CN 105765386 A CN105765386 A CN 105765386A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- method described
- sarilumab
- sample
- patient
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
- G01N33/6869—Interleukin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/52—Assays involving cytokines
- G01N2333/54—Interleukins [IL]
- G01N2333/5412—IL-6
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Neurology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Psychiatry (AREA)
Abstract
用于检测针对生物治疗蛋白质的中和抗体的存在的免疫原性测定法,其中已向需要的患者施用生物治疗蛋白质,该测定包括以下步骤:(a)获得患者的样品;(b)在捕获试剂的存在下孵育样品;以及(c)加入检测试剂,其中相对于对照样品降低的信号指示针对生物治疗剂的中和抗体的存在。
Description
领域
本发明涉及用于检测抗生物学生物治疗剂的中和抗体(Nab)的存在的测定方法。
背景
抗体诸如中和抗体(NAb)的检测是免疫原性评估的一部分,其针对用生物治疗剂治疗的患者进行。中和抗体中和药物的功能从而负面地影响药物的效力。可以使用几种免疫测定方法检测用特定生物治疗剂治疗的患者中NAb的存在,这些方法包括例如比色酶联免疫吸附测定法(ELISA)、基于免疫荧光的受体结合测定法、可溶性和固相放射性免疫测定法和基于传感器的测定法。
还可以使用基于细胞的测定法检测NAb。在这些基于细胞的测定法中,NAb的存在可以通过其抑制生物治疗剂的生物学作用(例如调节靶细胞中的生物学过程)的能力来检测。这些测定法可以涉及例如报告基因(诸如萤光素酶或β-半乳糖苷酶)的活化。但是,现有的这些检测方法具有许多缺点,包括灵敏度水平、特异性水平、基质干扰问题、测定变异性、有限的动态范围和测定的持续时间较长。
Sarilumab是临床开发中的首个靶向白介素-6(IL6)受体的完全人单克隆抗体。IL-6是由免疫细胞和非免疫细胞产生的多效细胞因子,其在调节免疫应答、急性期反应和血细胞生成中起着至关重要的作用。它结合可溶性的和细胞膜结合的IL-6R(α链)形成二元复合体,并且该复合体能够与细胞膜结合的gp130(β链)相互作用,诱导包含各两个IL-6、IL-6R和gp130的信号传导复合体的形成。
概述
存在开发检测临床样品中的Nab活性的灵敏且可重复的测定法的监管需要。虽然在本领域中已知用于检测Nab的基于细胞的测定法,但是非基于细胞的竞争性配体结合(CLB)测定法可作为更好的替代方式,因为它们提供优异的动态范围和灵敏度。然而,CLB测定法也可具有被各种测定和基质成分干扰的问题。申请人已经开发了灵敏且可靠的CLB测定法,其能够检测患者中针对生物治疗药物分子的中和抗体(NAb)应答。
在一个方面,本发明提供了用于评估用生物治疗剂治疗的患者中的针对生物治疗剂的中和抗体(NAb)的方法。该方法包括评估在用生物治疗剂治疗患者期间和/或之后NAb的存在。
在一个实施方案中,方法用于检测在需要生物治疗蛋白质并用所述蛋白质进行治疗的患者中针对生物治疗蛋白质的中和抗体的存在,该方法包括以下步骤:(a)将患者样品与捕获试剂组合;以及(b)加入检测试剂,其中相对于对照样品降低的信号指示针对生物治疗剂的中和抗体的存在。在一个实施方案中,蛋白质生物治疗剂是单克隆抗体(mAb),优选是抗白介素-6受体α(IL-6Rα)单克隆抗体。在一个实施方案中,蛋白质生物治疗mAb是sarilumab或tocilizumab;更具体地,该蛋白质生物治疗mAb是sarilumab。
样品获自针对IL-6依赖性疾病进行治疗的患者。获自患者的样品包括例如组织、唾液、奶、血液、血浆、血清或其中可以检测到抗体的任何其它相关的生物流体。在一个实施方案中,样品是获自这样的患者的血清样品。
IL-6依赖性疾病的实例包括类风湿性关节炎、糖尿病、动脉粥样硬化、阿尔兹海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、所有混合性结缔组织病症、卡斯尔曼氏病和前列腺癌。在具体的实施方案中,血清样品获自患有类风湿性关节炎的患者。
在本方法的实施方案中,捕获试剂包含经标记的生物治疗蛋白质。当患者正用sarilumab进行治疗时,捕获试剂是经标记的sarilumab。在一些实施方案中,用标记给捕获试剂加标记以促进与基质、表面或反向标记(counter-labeled)分子的结合。标记包括例如生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、聚精氨酸、聚组氨酸、FLAG、c-myc、HAT(天然组氨酸亲和标签)、谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽、S、RNaseA的S片段、麦芽糖结合蛋白、壳多糖结合结构域、壳多糖、钙调蛋白、钙调蛋白结合肽等。参见Terpe,K.,“Overviewoftagproteinfusions:frommolecularandbiochemicalfundamentalstocommercialsystems,”Appl.Microbiol.Biotechnol.(2003)60:523-533。在本发明的方法的一个实施方案中,捕获试剂是生物素化的sarilumab。
在本方法的实施方案中,检测试剂是经标记的可溶性IL-6受体α。在另一个实施方案中,检测试剂含有能够实现检测的标记。标记包括例如螯合的镧系金属如铕,铂族金属如钌,荧光染料,包括除其它以外呫吨衍生物如荧光素和罗丹明、荧光蛋白如绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生物黄色荧光蛋白(YFP)和红色荧光蛋白(RFP),放射性标记如碘-125和锕-225,以及其它类似可检测标记。在更具体的实施方案中,检测试剂是钌标记的可溶性IL-6受体α。
在一个实施方案中,使组合的患者样品和捕获试剂经受低pH(酸性)处理。在具体的实施方案中,用乙酸处理,随后进行中和步骤。
在一个实施方案中,本发明的用于检测用生物治疗蛋白质治疗的患者中的中和抗体的存在的测定方法表现出约150ng/mL的灵敏度、约500ng/mL的药物耐受性以及约1μg/mL的靶干扰容限(targetinterferencetolerance)。
在另一方面,本发明提供了包含上述捕获试剂和检测试剂以及使用其的说明书的试剂盒。
附图
图1和2示出并比较了药物捕获(图1)和靶捕获(图2)测定形式。在两种测定形式中,在不存在NAb的情况下产生信号,在存在NAb的情况下发生信号的抑制。%抑制=由Nab的存在导致的背景(NQC)信号的%降低。
图3和4是柱状图,其显示针对药物捕获(图3)和靶捕获(图4)测定形式,低pH处理对药物耐受性的作用。实心=低pH处理;空心=无低pH处理。
图5和6显示了在药物捕获(图5)和靶捕获(图6)测定形式中药物干扰的作用。
图7和8是IL6Rα干扰对假阳性产生的作用的图。图7显示了药物捕获和靶捕获这两种形式的结果;图8显示了使用药物捕获形式在抗靶抗体存在的情况下靶干扰的结果。
图9和10显示了在药物捕获形式中减轻干扰NAb检测的高信号应答人样品的研究结果。图9显示了在选定的类风湿因子阳性(RF+)个体中高信号应答的结果;图10显示了在高信号RF+个体中NAb回收的结果。
图11是从在标准链霉抗生物素蛋白(实心柱)或高结合抗生物素蛋白(空心柱)板中筛选高信号RF+个体所获得的结果的柱状图。
图12是显示在选定的高信号RF+个体或正常信号RF+个体中获得的结果的柱状图;实心柱=未加标(unspiked)的样品;空心柱=用LQC加标(spiked)的样品。
详述
在描述本发明之前,应当理解的是,本发明不限于所描述的具体方法和实验条件,因为这样的方法和条件可以发生变化。还应当理解的是,本文中所使用的术语仅用于描述具体实施方案的目的,并且不旨在为限制性的,因为本发明的保护范围将仅由所附的权利要求书进行限定。
除非另外定义,否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。如本文所用,当引用具体叙述的数值时使用的术语“约”意指该值可以从所述值变化不超过1%。例如,本文中使用的表述“约100”包括99和101以及其间的所有值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管与本文中所述的方法和材料相似或等价的任何方法和材料可以用于实践本发明,但现描述优选的方法和材料。本文中提到的所有出版物通过引用以其全文记载并入本文中。通过查阅下文的详述,其它实施方案将变得显而易见。
为了使本文所述的发明得到完全理解,以下进行详述。
本文开发的CLB测定基于MesoScaleDiscovery(MSD)平台。图1和2示出了所研究的两种测定形式。图1示出了药物捕获形式,其中将人血清样品中的NAb用生物素化的sarilumab进行孵育,并随后在包被链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白的微板上进行捕获。然后加入钌化的IL6Rα,其在不存在NAb的情况下导致信号,并且在存在NAb的情况下导致信号的抑制。在靶捕获形式中原理保持相同,除了现在通过板上的生物素化的IL6Rα靶来捕获钌化的sarilumab之外。灵敏且可靠的测定法的开发包括优化药物、靶、标记、pH和孵育时间。比较这两种测定形式,然后优化并验证较好的形式。
初始表征表明靶捕获更容易受到药物干扰的影响,而药物捕获形式导致更高的非特异性信号。检查了几种优化策略,之后进行比较评价以选择该程序的最佳测定法。通过转换为抗生物素蛋白包被的微板的不同固相基质,有效消除了来自RF+血清的导致假阴性结果的高背景信号。低pH处理改善了药物耐受性,而使用特异性阻断靶和药物之间的相互作用的抗靶抗体减轻了靶干扰。结果显示,药物捕获形式提供具有来自药物或靶的最小干扰的灵敏且强有力的测定。所验证的测定法显示范围为1-8%的精确度,并具有以下特征:灵敏度=~150ng/mL,药物耐受性=~500ng/mL,靶干扰=~1μg/mL。
尽管靶捕获和药物捕获形式均可成功用于建立CLBNAb测定,但重要的是研究药物和靶对的特异性结合特征以针对灵敏度、药物耐受性和减轻靶干扰来设计成功的策略。基于所获得的结果,药物捕获形式更优异,并因此验证和用于临床样品生物分析。
本发明表征了用于检测针对蛋白质生物治疗剂的中和抗体的免疫原性测定法。在一个实施方案中,蛋白质生物治疗剂是单克隆抗体(mAb);更具体地,蛋白质生物治疗剂是特异性结合白介素-6受体α(IL-6Rα)的mAb;更具体地,生物治疗剂是sarilumab。sarilumab(也被称为REGN88)已被开发用于治疗类风湿性关节炎。因此,在具体实施方案中,本发明呈现了用于检测使用sarilumab针对类风湿性关节炎进行治疗的患者中的中和抗体的免疫原性测定法。可以预见,其它抗IL-6Rα单克隆抗体可以用于本发明的方法,例如,人源化的抗IL-6Rαtocelizumab。
定义
“中和抗体(NAb)”是抗药物抗体,其具有中和生物治疗分子的能力。在一个实施方案中,生物治疗分子是抗IL6Rα抗体sarilumab,并且NAb结合IL6Rα抗体并阻止其结合IL6Rα。
术语“分析物”用于指进行分析的物质,即在质量对照(qualitycontrol)中存在的小鼠抗REGN88单克隆抗体(REGN575)或者在人血清样品中存在的人抗REGN88NAb。
术语“截断点”是指用于区分测定中的NAb阴性应答与NAb阳性应答的阈值(即%抑制)。它是恒定值,通过分析一组未用药患病人样品的测定应答来统计地确定。
实施例
示出以下实施例以向本领域技术人员提供如何制备和使用本发明的方法和组合物的完全公开和描述,并且不旨在限制本发明人所认为的本发明的保护范围。已经努力确保所使用的数字(例如量、温度等)的准确性,但是应当考虑到一些实验误差和偏差。除非另外指明,否则份是按重量计的份,分子量是平均分子量,温度为摄氏度的形式,以及压力是大气压或者接近大气压。
实施例1.用于检测抗REGN88(sarilumab)的Nab的竞争性配体结合测定法。
REGN88是特异于人白介素-6受体α(IL-6Rα)的人单克隆抗体(IgG1亚类)。如下所述,开发了使用竞争性配体结合测定形式检测抗REGN88中和抗体(NAb)的方法。
测定程序采用小鼠抗REGN88单克隆抗体(REGN575)作为阳性对照,生物素化的REGN88(生物素化-REGN88)作为捕获试剂,钌标记的可溶性hIL-6Rα(钌-REGN78)作为检测试剂,以及采用REGN17(抗人IL-6Rα单克隆抗体)来减轻配体干扰。
简而言之,将样品和对照在低pH条件(使用乙酸)下进行稀释,然后使用含有生物素化-REGN88和REGN17的Tris碱溶液进行中和。低pH处理导致血清样品中存在的NAb:药物和药物:靶复合体的解离,从而允许在血清中存在过量药物的情况下改善对NAb的检测。为了减轻靶干扰,将REGN17用于结合通过低pH处理释放的游离靶。在孵育期间,样品中存在的阳性对照(REGN575)或任何NAb与生物素化的REGN88结合。然后将低pH处理过的样品加至抗生物素蛋白预包被的微板,其中抗生物素蛋白捕获生物素化的REGN88以及与其结合的任何NAb。
在孵育和洗涤之后,将钌-REGN78加至微板。在样品中不存在NAb的情况下,抗生物素蛋白捕获的生物素化的REGN88与钌-REGN78结合,从而在微板表面上形成生物素化的REGN88:钌-REGN78复合体。将基于三丙胺(TPA)的读数缓冲液加至微板,其通过MesoScaleDiscovery(MSD)电化学发光读数仪进行读数。在存在NAb的情况下,NAb会结合生物素化的REGN88,从而阻止生物素化的REGN88:钌-REGN78复合体的形成,这进而减少电化学发光信号。因此,所测得的电化学发光(即计数)与样品中NAb的量成反比。
分析八十例未用药患者样品以确定截断点。选择的%抑制截断点是40,其通过使用参数法基于0.1%的假阳性率来计算。百分比抑制(%抑制)被计算为Nab的存在所导致的信号降低。阳性质量对照(PQC)是具有已知量的REGN575的对照样品,其在NQC中制备,用于验证测定的性能:HQC=高质量对照;20XHQC:4μg/mL;MQC=中等质量对照;20MQC:0.4μg/mL;LQC=低质量对照;20XLQC:0.2μg/mL。阴性质量对照是没有分析物的对照样品(纯人血清),用于计算%抑制。加标的阴性质量对照(SNQC)是具有已知量的REGN78的对照样品,其在NQC中制备,用于验证REGN17的性能。CV%—表达为百分比的变异系数。检测极限(LOD)是具有大于截断点的%抑制的阳性对照(REGN575)的最低浓度。纯血清中测定的LOD约为150ng/mL的小鼠抗REGN88单克隆抗体(REGN575)。计数=电化学发光信号的单位。
材料与设备。试剂:小鼠抗-REGN88单克隆抗体(Regeneron,REGN575)也称为抗REGN88mAb;生物素化的REGN88(生物素-REGN88或生物素化-REGN88);钌标记的hIL-6Rα(Ru(bpy)3REGN78或钌-REGN78);小鼠抗人IL-6Rα单克隆抗体(也称为抗hIL-6RαmAb);hIL-6Rα(REGN78);5%BSA封闭缓冲液;磷酸盐缓冲液,pH7.2(1XPBS);抗生物素蛋白包被的微板—MULTI-96-孔AvidinGoldPlate;300mM乙酸;1.5M三羟甲基氨基甲烷碱(Trizma-base)溶液(Tris或Tris-碱);读数缓冲液—MSDReadBufferT(4X),具有表面活性剂(4X读数缓冲液);1X洗涤缓冲液;净化水;混合人血清。
仪器和实验室器皿。96孔聚丙烯板(深孔板或块);附带MSDDiscoveryWorkbench应用的SectorImager2400(MesoScaleDiscovery,Model1250);MicrosoftExcel;Pro应用,版本5.2或更高版本(MolecularDevices)。
程序。在孵育步骤期间进行板的摇动。将最小10μL用于所有体积转移。处理人血清时遵循生物安全水平2级预防措施。质量对照(QC):显示QC在多至10个冻融循环、在室温下贮存至少4小时(4小时32分钟)或在4℃冷藏室中贮存多至23小时(23小时20分钟)下是稳定的。QC稳定性用作研究样品稳定性的替代品。阴性质量对照(NQC):商购的正常人血清库是胜任用作NQC的。将人血清库(NQC)分成等分试样并贮存于-80℃冷冻室中。
PQC-(HQC,MQC,LQC)的制备。如果旨在将PQC用于制备日之后的样品分析,那么PQC是胜任的。通过向NQC中加标小鼠抗REGN88单克隆抗体(REGN575)来以下表中所列的浓度制备20XPQC。可将以下用作制备各PQC的实例:实例:将10μL的REGN575(0.88mg/mL)加入至166μL的NQC并混合以产生50μg/mLREGN575溶液(QC前体A)。将10μL的50μg/mLREGN575溶液加入至490μL的NQC并混合以产生1μg/mLREGN575溶液(QC前体B)。可以在同一天使用PQC或者将其分成等分试样并贮存于-80℃冷冻室中。
加标的阴性质量对照(SNQC)。SNQC胜任用于在制备日之后的样品分析。在NQC中制备0.6μg/mLhIL-6Rα(REGN78)溶液。可将以下用作制备SNQC的实例:实例:将10μL的REGN78(2.3mg/mL)加入至220μL的NQC并混合以产生100μg/mLREGN78溶液。将10μL的100μg/mLREGN78溶液加入至90μL的NQC并混合以产生10μg/mLREGN78溶液。将30μL的10μg/mLREGN78溶液加入至470μL的NQC并混合以产生0.6μg/mLREGN78溶液(SNQC)。在同一天使用SNQC或者将其分成等分试样并贮存于-80℃冷冻室中。
测定程序。取回QC并解冻,并将研究样品保持在冰上或4℃冷藏室中。在深孔聚丙烯板(样品板)中,在300mM乙酸中制备QC和研究样品各自的1:10稀释夜并混合。实例:将10μL的各QC/样品加至90μL的300mM乙酸并混合。盖好样品板并室温下孵育45±15分钟。制备1XPBS中的1%BSA溶液并混合。实例:将8mL的5%BSA封闭缓冲液加至32mL的1XPBS并混合。制备在1%BSA中含有10ng/mL的生物素化-REGN88、50μg/mL的REGN17和0.2MTris的溶液并混合。实例:将10μL的生物素化-REGN88(3.8mg/mL)加至370μL的1%BSA并混合以产生100μg/mL生物素化-REGN88溶液。将10μL的100μg/mL生物素化-REGN88加至190μL的1%BSA并混合以产生5μg/mL生物素化-REGN88溶液。将15μL的5μg/mL生物素化-REGN88、19.3μL的19.5mg/mLREGN17和1mL的1.5M三羟甲基氨基甲烷碱加至6.5mL的1%BSA并混合以产生10ng/mL生物素化-REGN88、50μg/mLREGN17和0.2MTris的1%BSA溶液。在深孔聚丙烯板中(样品板),在10ng/mL生物素化-REGN88、50μg/mLREGN17和0.2MTris的1%BSA溶液中制备QC和研究样品的最终1:2稀释液(1:20的总稀释度)并混合。实例:将100μL的10ng/mL生物素化-REGN88、50μg/mLREGN17和0.2MTris的1%BSA溶液加至100μL酸化的QC/样品并混合。盖好样品板并室温下孵育60±15分钟,孵育期间以400rpm摇动。使用MSDPLATE3X洗涤程序用300μL/孔的1X洗涤缓冲液洗涤测定板3X。将各50μL的QC和研究样品从样品板一式两份加至测定板。盖好测定板并室温下孵育60±15分钟,孵育期间以400rpm摇动。在1%BSA中制备含有2μg/mL钌-REGN78的溶液并混合。实例:将10μL钌-REGN78(2.9mg/mL)加至280μL的1%BSA并混合以产生100μg/mL钌-REGN78溶液。将140μL的100μg/mL钌-REGN78置于7mL的1%BSA中并混合以产生2μg/mL钌-REGN78的1%BSA溶液。使用MSD_PLATE_3X洗涤程序用300μL/孔的1X洗涤缓冲液洗涤测定板3X。将50μL/孔的2μg/mL钌-REGN78的1%BSA溶液加至测定板。盖好测定板并室温下孵育60±15分钟,孵育期间以400rpm摇动。微板制备。将300μL/孔的5%BSA封闭缓冲液加至抗生物素蛋白包被的微板(测定板)。密封微板并室温下孵育1-4小时。制备并混合2X读数缓冲溶液。实例:将10mL的4X读数缓冲液加至10mL的净化水并混合。使用MSD_PLATE_3X洗涤程序用300μL/孔的1X洗涤缓冲液洗涤测定板3X。将150μL/孔的2X读数缓冲溶液加至测定板。在加入2X读数缓冲液之后的10分钟内在SectorImager2400上对测定板进行读数。
数据分析。将读板数据转移至SoftMaxPro文件格式。当在SoftMax文件中之后,如果需要遮蔽孔,则在转换数据部分中将孔遮蔽。这使得可以查看遮蔽的值,但不用于计算。然后针对各QC和研究样品计算平均计数、%抑制和CV%计数。
%抑制=100x[(NQC的平均计数–PQC或样品的平均计数)/NQC的平均计数]。
测定性能规范:LQC%抑制必须>截断点;SNQC%抑制必须<截断点;HQC%抑制必须>MQC%抑制;MQC%抑制必须>LQC%抑制;PQC和SNQC各自的CV%计数必须≤20%;NQC的CV%计数必须≤15%。
研究样品接受标准。测定性能—所有测定性能规范得到满足,否则研究样品进行重新记录和重新分析。精确度—CV%计数必须≤20%,否则研究样品进行重新记录和重新分析。将%抑制大于截断点的任何研究样品报告为阳性的。将%抑制小于或等于截断点的任何研究样品报告为阴性的。
实施例2.低pH处理对药物耐受性的影响。
进行实验以测试在药物捕获形式和靶捕获形式中低pH处理对药物耐受性的作用。用1μg/mL的sarilumab在阳性对照的指定浓度加标人血清。在两种测定形式中,在使用或者不使用低pH处理的情况下测试这些样品。将QC和样品稀释于乙酸工作储液浓度中并孵育。然后将这些稀释于含有适当的钌化检测试剂的Tris中和缓冲液中。结果示于图3和4中。
结果:低pH处理有效减轻来自过量药物的干扰,从而改善两种测定形式中的NAb检测。
实施例3.药物干扰
将在不存在NAb的情况下药物产生假阳性应答的能力定义为药物干扰。进行研究以比较两种测定形式中在不存在NAb的情况下的药物干扰。
方法:用指定浓度的sarilumab加标正常人血清。以低pH处理所有样品并在药物捕获形式和靶捕获形式中进行测试。
结果。靶捕获形式:更高浓度的游离sarilumab在与生物素化-IL6Rα的结合中竞争胜过钌化-sarilumab,从而导致假阳性应答(图5)。药物捕获形式:在不存在NAb的情况下的Sarilumab不能结合板上的捕获sarilumab并因此不能干扰测定(图6)。
如上所述研究特异性靶IL6Rα对减轻假阳性结果的作用。用指定浓度的IL6Rα加标正常人血清并在两种测定形式中用低pH处理进行测试(图7)。在添加或者不添加抗靶(IL6Rα)抗体的情况下测试类似的样品(图8)。在两种测定形式中均观察到来自靶干扰的假阳性应答。当测试IL6Rα:sarilumab复合体时观察到类似的结果。加入抗靶抗体减轻了药物捕获形式中的干扰。但是,抗靶抗体不能被加至靶捕获形式,因为它会阻断捕获。选择药物捕获形式并在这之后使用其。
进行研究以减轻由靶(IL6Rα)引起的假阳性结果。用指定浓度的IL6Rα加标正常人血清并在两种测定形式中用低pH处理进行测试。在添加或者不添加抗靶(IL6Rα)抗体的情况下测试类似的样品。
在两种测定形式中均观察到来自靶干扰的假阳性应答(图7)。当测试IL6Rα:sarilumab复合体时观察到类似的结果(图8)。加入抗靶抗体减轻了药物捕获形式中的干扰。但是,抗靶抗体不能被加至靶捕获形式,因为它会阻断捕获。选择药物捕获形式并在这之后使用其。
实施例4.人血清基质干扰的减轻
接下来,以低pH处理RF+血清并在药物捕获形式中进行筛选。在选定的高信号RF+个体与正常信号RF+个体之间进行比较。在低pH处理之前将阳性对照以LQC水平加标于这些未用药血清中,然后进行测定。
结果:由某些RF+个体产生的信号大于NQC的信号并得到高负向%抑制。在这些个体中,加标阳性对照仍然导致假阴性结果(图9和10)。
进行比较标准链霉抗生物素蛋白包被的板与高结合抗生物素蛋白包被的板的研究。以低pH处理两个高信号RF+个体并在测定中进行测试。然后,在选定的高信号RF+个体与正常信号RF+个体之间进行比较。在低pH处理之前将阳性对照以LQC水平加标于这些未用药血清中,然后在高结合抗生物素蛋白包被的板上进行测定。
结果:高信号RF+个体可以通过改变至高结合抗生物素蛋白包被的板来进行标准化(图11)。通过标准化信号,这些板允许检测在这些“高信号”RF+个体中的NAb(图12)。
Claims (23)
1.用于检测针对生物治疗蛋白质的中和抗体的存在的方法,其中已向需要的患者施用所述生物治疗蛋白质,所述方法包括以下步骤:(a)将患者样品与捕获试剂组合,以及(b)加入检测试剂,其中相对于对照样品降低的信号指示针对生物治疗剂的中和抗体的存在。
2.权利要求1所述的方法,其中所述生物治疗蛋白质是单克隆抗体。
3.权利要求1或2所述的方法,其中所述生物治疗蛋白质是抗白介素-6受体α(IL-6Rα)单克隆抗体。
4.权利要求1-3任一项所述的方法,其中所述生物治疗蛋白质是sarilumab或tocilizumab。
5.权利要求4所述的方法,其中所述生物治疗蛋白质是sarilumab。
6.权利要求5所述的方法,其中针对IL-6依赖性疾病治疗所述患者。
7.权利要求6所述的方法,其中所述IL-6依赖性疾病是类风湿性关节炎、糖尿病、动脉粥样硬化、阿尔兹海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、结缔组织病症、卡斯尔曼氏病和前列腺癌之一。
8.权利要求7所述的方法,其中所述IL-6依赖性疾病是类风湿性关节炎。
9.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述捕获试剂包含经标记的生物治疗蛋白质。
10.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述捕获试剂是经标记的sarilumab。
11.权利要求10所述的方法,其中所述经标记的sarilumab是生物素化的sarilumab。
12.权利要求11所述的方法,其中所述生物素化的sarilumab结合至抗生物素蛋白包被的板。
13.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述检测试剂是经标记的可溶性IL-6受体α。
14.权利要求13所述的方法,其中所述检测试剂是钌标记的可溶性IL-6受体α。
15.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述患者样品在步骤(b)之前经受低pH处理。
16.权利要求15所述的方法,其中所述患者样品在步骤(b)之前经受乙酸处理。
17.权利要求15或16所述的方法,其中在所述低pH处理后进行中和。
18.前述权利要求中任一项所述的方法,其中测定法表现出约150ng/mL的灵敏度容限、约500ng/mL的药物耐受性以及约1μg/mL的靶干扰容限。
19.用于检测针对sarilumab的中和抗体的存在的方法,其中已向需要的患者施用sarilumab,所述方法包括以下步骤:(a)将患者的血清样品与包含生物素化的sarilumab的捕获试剂组合,(b)使组合的血清样品和捕获试剂经受低pH处理,随后进行中和步骤;以及(d)加入检测试剂,其中所述检测试剂包含经标记的可溶性IL-6受体α,其中相对于对照样品降低的信号指示针对生物治疗剂的中和抗体的存在。
20.权利要求19所述的方法,其中所述检测试剂是钌标记的可溶性IL-6受体α。
21.权利要求19-20所述的方法,其中所述患者患有类风湿性关节炎。
22.权利要求19-21中任一项所述的方法,其中测定法表现出约150ng/mL的灵敏度容限、约500ng/mL的药物耐受性以及约1μg/mL的靶干扰容限。
23.试剂盒,其包含前述权利要求任一项所述的捕获试剂和检测试剂以及使用说明书。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361898046P | 2013-10-31 | 2013-10-31 | |
US61/898,046 | 2013-10-31 | ||
PCT/US2014/063034 WO2015066259A1 (en) | 2013-10-31 | 2014-10-30 | Competitive ligand binding assay for detecting neutralizing antibodies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105765386A true CN105765386A (zh) | 2016-07-13 |
CN105765386B CN105765386B (zh) | 2019-07-16 |
Family
ID=51905411
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201480059578.2A Active CN105765386B (zh) | 2013-10-31 | 2014-10-30 | 用于检测中和抗体的竞争性配体结合测定法 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10261094B2 (zh) |
EP (1) | EP3063543B1 (zh) |
JP (1) | JP6756611B2 (zh) |
KR (1) | KR102101987B1 (zh) |
CN (1) | CN105765386B (zh) |
AU (1) | AU2014342316B2 (zh) |
BR (1) | BR112016009460B1 (zh) |
CA (1) | CA2928730C (zh) |
IL (2) | IL245188A0 (zh) |
MX (1) | MX2016005686A (zh) |
RU (1) | RU2701684C2 (zh) |
WO (1) | WO2015066259A1 (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111983226A (zh) * | 2020-03-25 | 2020-11-24 | 新加坡国立大学 | SARSr-CoV抗体的检测 |
CN113702452A (zh) * | 2020-05-22 | 2021-11-26 | 罗伯特·博世有限公司 | 用于检测溶液中被分析物的量的方法 |
CN115561355A (zh) * | 2022-09-26 | 2023-01-03 | 重庆迪纳利医药科技有限责任公司 | 羧肽酶g2的中和抗体检测方法以及基于lc-ms/ms的检测系统 |
WO2023186106A1 (zh) * | 2022-03-31 | 2023-10-05 | 上海细胞治疗集团药物技术有限公司 | 中和抗体检测方法 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MX2016005686A (es) | 2013-10-31 | 2016-08-11 | Regeneron Pharma | Ensayo de union competitiva al ligando para detectar anticuerpos neutralizantes. |
BR112019004715A2 (pt) | 2016-09-12 | 2019-07-16 | Aegerion Pharmaceuticals Inc | métodos para detectar anticorpos neutralizantes anti-leptina |
CN113785203A (zh) * | 2019-05-13 | 2021-12-10 | 里珍纳龙药品有限公司 | 改进的竞争性配体结合测定 |
US20210341487A1 (en) * | 2020-05-01 | 2021-11-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Neutralizing antibody assay for therapeutic proteins |
CN112730846B (zh) * | 2020-12-18 | 2023-12-15 | 安渡生物医药(杭州)有限公司 | 一种用于小鼠血样检测免疫复合物的方法 |
WO2024064044A1 (en) * | 2022-09-23 | 2024-03-28 | Merck Sharp & Dohme Llc | Neutralization antibody assay method |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100209926A1 (en) * | 2007-09-28 | 2010-08-19 | Stryker Corporation | Methods for detecting neutralizing antibodies for bone morphogenetic proteins |
US20130266963A1 (en) * | 2011-07-06 | 2013-10-10 | Nestec S.A. | Assay for detecting neutralizing autoantibodies to biologic therapy |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4208479A (en) * | 1977-07-14 | 1980-06-17 | Syva Company | Label modified immunoassays |
FR2813606B1 (fr) | 2000-09-01 | 2004-04-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Proteine bard1 tronquee, et ses applications diagnostiques et therapeutiques |
ZA200600798B (en) | 2003-07-29 | 2007-06-27 | Genentech Inc | Assay for human anti CD20 antibodies and uses therefor |
DK2374818T3 (da) | 2006-06-02 | 2013-01-21 | Regeneron Pharma | Højaffinitetsantistoffer mod human IL-6-receptor |
JP4148367B1 (ja) | 2007-08-02 | 2008-09-10 | 富山県 | 細胞のスクリーニング方法 |
ES2550158T3 (es) | 2007-08-06 | 2015-11-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Método para medir la actividad inhibidora sobre la unión ligando-receptor |
RU2650594C1 (ru) * | 2009-01-29 | 2018-04-17 | Медиммун, Ллк | Человеческие анти-il-6 антитела с пролонгированным периодом выведения in vivo и их применение при лечении онкологических, аутоиммунных заболеваний и воспалительных заболеваний |
CA2769407A1 (en) | 2009-08-21 | 2011-02-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Mimotopes of hiv and uses thereof |
US20110245154A1 (en) * | 2010-03-11 | 2011-10-06 | Hemaquest Pharmaceuticals, Inc. | Methods and Compositions for Treating Viral or Virally-Induced Conditions |
CA2795549A1 (en) | 2010-04-29 | 2011-11-03 | Theradiag Sa | Methods for detecting antibodies |
TWI589299B (zh) | 2011-10-11 | 2017-07-01 | 再生元醫藥公司 | 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法 |
WO2013071055A1 (en) * | 2011-11-10 | 2013-05-16 | Wellstat Diagnostics, Llc | Assay for diabetes-associated autoantibodies |
US9175076B2 (en) * | 2012-12-21 | 2015-11-03 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Anti-GDF15 antibodies |
MX2016005686A (es) | 2013-10-31 | 2016-08-11 | Regeneron Pharma | Ensayo de union competitiva al ligando para detectar anticuerpos neutralizantes. |
-
2014
- 2014-10-30 MX MX2016005686A patent/MX2016005686A/es active IP Right Grant
- 2014-10-30 US US15/031,126 patent/US10261094B2/en active Active
- 2014-10-30 EP EP14799930.4A patent/EP3063543B1/en active Active
- 2014-10-30 CN CN201480059578.2A patent/CN105765386B/zh active Active
- 2014-10-30 BR BR112016009460-3A patent/BR112016009460B1/pt active IP Right Grant
- 2014-10-30 WO PCT/US2014/063034 patent/WO2015066259A1/en active Application Filing
- 2014-10-30 KR KR1020167012246A patent/KR102101987B1/ko active IP Right Grant
- 2014-10-30 CA CA2928730A patent/CA2928730C/en active Active
- 2014-10-30 AU AU2014342316A patent/AU2014342316B2/en active Active
- 2014-10-30 JP JP2016527452A patent/JP6756611B2/ja active Active
- 2014-10-30 RU RU2016121151A patent/RU2701684C2/ru active
-
2016
- 2016-04-18 IL IL245188A patent/IL245188A0/en unknown
-
2019
- 2019-10-07 IL IL269870A patent/IL269870B/en active IP Right Grant
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100209926A1 (en) * | 2007-09-28 | 2010-08-19 | Stryker Corporation | Methods for detecting neutralizing antibodies for bone morphogenetic proteins |
US20130266963A1 (en) * | 2011-07-06 | 2013-10-10 | Nestec S.A. | Assay for detecting neutralizing autoantibodies to biologic therapy |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MARK SPENGLER ET AL: "Immuno-PCR assays for immunogenicity testing", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111983226A (zh) * | 2020-03-25 | 2020-11-24 | 新加坡国立大学 | SARSr-CoV抗体的检测 |
CN113702452A (zh) * | 2020-05-22 | 2021-11-26 | 罗伯特·博世有限公司 | 用于检测溶液中被分析物的量的方法 |
WO2023186106A1 (zh) * | 2022-03-31 | 2023-10-05 | 上海细胞治疗集团药物技术有限公司 | 中和抗体检测方法 |
CN115561355A (zh) * | 2022-09-26 | 2023-01-03 | 重庆迪纳利医药科技有限责任公司 | 羧肽酶g2的中和抗体检测方法以及基于lc-ms/ms的检测系统 |
CN115561355B (zh) * | 2022-09-26 | 2024-04-30 | 重庆迪纳利医药科技有限责任公司 | 羧肽酶g2的中和抗体检测方法以及基于lc-ms/ms的检测系统 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2928730A1 (en) | 2015-05-07 |
RU2701684C2 (ru) | 2019-09-30 |
WO2015066259A1 (en) | 2015-05-07 |
IL245188A0 (en) | 2016-06-30 |
IL269870B (en) | 2020-08-31 |
AU2014342316B2 (en) | 2019-07-25 |
RU2016121151A (ru) | 2017-12-05 |
KR102101987B1 (ko) | 2020-04-20 |
US20160252520A1 (en) | 2016-09-01 |
CA2928730C (en) | 2020-06-02 |
US10261094B2 (en) | 2019-04-16 |
KR20160070111A (ko) | 2016-06-17 |
EP3063543A1 (en) | 2016-09-07 |
EP3063543B1 (en) | 2020-03-11 |
JP2016536587A (ja) | 2016-11-24 |
RU2016121151A3 (zh) | 2018-07-31 |
CN105765386B (zh) | 2019-07-16 |
AU2014342316A1 (en) | 2016-05-19 |
MX2016005686A (es) | 2016-08-11 |
BR112016009460A8 (pt) | 2020-05-12 |
BR112016009460B1 (pt) | 2020-09-29 |
JP6756611B2 (ja) | 2020-09-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105765386A (zh) | 用于检测中和抗体的竞争性配体结合测定法 | |
CN103018464B (zh) | 一种测定降钙素原的试剂及该试剂的制备方法 | |
Faria et al. | Comparison of a stable isotope labeled (SIL) peptide and an extended SIL peptide as internal standards to track digestion variability of an unstable signature peptide during quantification of a cancer biomarker, human osteopontin, from plasma using capillary microflow LC–MS/MS | |
TWI698639B (zh) | 前列腺抗原標準品及其用途 | |
Lupoli et al. | Prognostic significance of thyroglobulin antibody epitopes in differentiated thyroid cancer | |
Guerrero et al. | Simultaneous determination of CXCL7 chemokine and MMP3 metalloproteinase as biomarkers for rheumatoid arthritis | |
US20090068680A1 (en) | Method for Characterizing Immune Disorders | |
Yamashita et al. | Diagnostic value of procalcitonin for acute complicated appendicitis | |
CN108051439A (zh) | 一种单试剂肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
CN102507918A (zh) | 抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒 | |
CA3148161A1 (en) | Anti-drug antibody assay | |
Hoesel et al. | Development and evaluation of a new ELISA for the detection and quantification of antierythropoietin antibodies in human sera | |
Uhlin-Hansen | C-reactive protein (CRP), a comparison of pre-and post-mortem blood levels | |
CN112424604A (zh) | 用于检测11-脱氢-血栓烷b2的方法和试剂盒 | |
Hock et al. | Development of a competitive binding homogeneous mobility shift assay for the quantification of adalimumab levels in patient serum | |
Jansen et al. | Stability of TSH receptor antibody concentrations and comparability of its immunoassays | |
Orhon et al. | Soluble endothelial protein C receptor levels in healthy population | |
Eckersall et al. | The measurement of canine steroid‐induced alkaline phosphatase by L‐phenylalanine inhibition | |
Paulsen et al. | Analytical performance characteristics of the new Beckman Coulter access PCT immunoassay | |
EP2223122A1 (en) | Endogenous morphine or a naturally occuring metabolite thereof as a marker for infection | |
WO2023234422A1 (ja) | 三次リンパ組織の検査方法、及び三次リンパ組織の検査用キット | |
Mader et al. | Comparison of an immunoradiometric and an immunoluminometric assay for the evaluation of the tumour associated antigens CA 19-9 and CA 125 | |
CN105137079A (zh) | 鳞状细胞癌抗原测定系统 | |
Guerrero Irigoyen et al. | Simultaneous determination of CXCL7 chemokine and MMP3 metalloproteinase as biomarkers for rheumatoid arthritis | |
Yagmur et al. | Technical evaluation of the Beckman Coulter OV-Monitor (CA 125 antigen) immunoassay |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |