CN105749269A - 一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法，包括步骤1)在5?15日龄对鸭进行首次免疫：对鸭腹腔接种禽流感灭活抗原，同时肌肉或者皮下免疫禽流感灭活油乳剂疫苗。该方法通过鸭腹腔接种灭活抗原与肌肉或者皮下注射灭活油乳剂疫苗的双重作用方式，使鸭快速产生免疫应答，从而快速产生抗禽流感抗体；有效减少鸭免疫禽流感灭活疫苗的免疫空档期7天以上。

Description

一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法
技术领域
本发明涉及技术领域水禽养殖技术领域，具体涉及一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法。
背景技术
上世纪末以来，高致病性H5亚型流行株对水禽致病力逐渐增强，跟对陆生禽一样，也引起水禽发病死亡。水禽本身已不仅是流感病毒的库，也成为流感病毒的易感宿主。
禽的获得性免疫系统由法氏囊源性和胸腺源性免疫组成。受到抗原刺激产生抗体和细胞免疫应答产生三类抗体：IgM、IgY、和IgA。李宁团队发现鸭免疫相关基因的数量与鸡相当，均显著少于哺乳动物的数量，但鸭β-防御素基因和类乳脂球蛋白基因显著多于鸡。由于家禽和水禽免疫应答特征有所区别，禽流感灭活疫苗免疫鸭的抗体上升的速度和滴度明显低于免疫鸡，例如禽流感灭活疫苗免疫鸡群后，在7天、14天、21天分别能够达到3-5Log2、5-8Log2、8-10Log2，28-35天抗体滴度达到最高；而禽流感灭活疫苗免疫鸭群后在7天、14天、21天分别能够达到2-3Log2、3-6Log2、5-8Log2，28-35天抗体滴度达到最高6-9Log2并且维持2-3个月。
虽然关于鸭母源抗体消长规律报道有所差异，通常鸭禽流感母源抗体1日龄的8-10Log2下降,到7-9日龄的临界点(4-6Log2)以下，15-28日龄将下降到0-2Log2。母源抗体会干扰禽流感灭活苗对雏鸭的免疫效果，较严重的可能产生免疫抑制。种鸭群通常都拥有比较高的禽流感抗体，其所生产的雏鸭基本拥有比较高的母源抗体，一般能在1-15日龄保护雏鸭，帮助其抵御高致病性禽流感病毒的感染。大日龄再对雏鸭进行禽流感免疫，免疫空档则过长，会提高雏鸭受高致病性禽流感病毒感染的风险。因此，通常鸭会在10日左右免疫禽流感灭活疫苗。由于禽流感灭活疫苗免疫鸭后抗体产生缓慢，通常禽流感疫苗免疫鸭后有2周左右的免疫空档期。这期间禽流感效价低，容易发生禽流感感染，而造成严重经济损失。怎么样从技术上使鸭免疫禽流感快速产生抗体并且维持抗体水平这对于养鸭业具有重要意义。
发明内容
为克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法，包括步骤1)在5-15日龄对鸭进行免疫：对鸭腹腔接种禽流感灭活抗原，同时肌肉或者皮下免疫禽流感灭活油乳剂疫苗。
作为优选，步骤1)中，在8-10日龄对鸭进行首次免疫。
作为优选，步骤1)中，所述灭活抗原的用量为0.1-1mL，其HA价为7-12Log2。
作为优选，步骤1)中，所述灭活抗原的用量为0.3-0.5mL，其效价HA价为9-10Log2。
作为优选，步骤1)中，所述灭活油乳剂疫苗的用量为0.1-1mL，其HI价为7-12Log2。
作为优选，步骤1)中，所述灭活油乳剂疫苗的用量为0.3-0.5mL，其效价HI价为9-10Log2。
作为优选，还包括步骤2)在首次免疫10天后对鸭进行再次免疫：对鸭腹腔接种禽流感灭活抗原。
作为优选，步骤2)中，所述灭活抗原的用量为0.1-1mL，其HA价为7-12Log2。
作为优选，步骤2)中，所述灭活抗原的用量为0.3-0.5mL，其HA价为9-10Log2。
作为优选，所述灭活抗原的毒株包括H5亚型禽流感毒株和H9亚型禽流感毒株；所述灭活油乳剂疫苗的生产种毒株包括H5亚型禽流感毒株和H9亚型禽流感毒株。
相对于现有技术，本发明的有益效果在于：
1)本发明通过鸭腹腔接种禽流感灭活抗原与肌肉或者皮下注射免疫禽流感灭活油乳剂疫苗的双重作用方式，使鸭快速产生免疫应答，从而快速产生抗禽流感抗体；
2)本发明提供的使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法，明显比传统鸭免疫禽流感油乳剂灭活疫苗产生禽流感抗体的速度快，有效减少鸭免疫禽流感灭活疫苗的免疫空档期7天以上。
下面结合具体的实施方式对本发明作进一步详细说明。
具体实施方式
本发明提供一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法，包括步骤1)在5-15日龄对鸭进行免疫：对鸭腹腔接种禽流感灭活抗原，同时肌肉或者皮下免疫禽流感灭活油乳剂疫苗。
以下具体实施方式中，如未特殊说明，所采用的试剂或试验对象均可通过市售途径获得。
以下具体实施例中，所采用的雏鸭为市售的广东本地雏鸭，灭活抗原和灭活油乳剂疫苗均来自广东温氏大华农生物科技有限公司，灭活抗原毒株包括H5亚型禽流感毒株和H9亚型禽流感毒株，如H5Re-6毒株和H9SS毒株；所述灭活油乳剂疫苗为H5+H9亚型禽流感灭活疫苗，其生产种毒株包括H5亚型禽流感毒株和H9亚型禽流感毒株，如H5Re-6毒株和H9SS毒株。
实施例1
取50只市售的刚孵化出的雏鸭，分为6个实验组，第1组为对照组，不作免疫处理；第2组，1日龄进行首次免疫处理；第3组，5日龄进行首次免疫处理；第4组，8日龄进行首次免疫处理；第5组，10日龄进行首次免疫处理；第6组，14日龄进行首次免疫处理；第2-6组，首次免疫处理10天后进行再次免疫处理；
对1-6实验组鸭于首次免疫处理后的0、5、7、14、21、28、35、42天从鸭翅下静脉采集血液并且分离血清，统一测定血清中抗禽流感病毒的抗体效价(HI价)；其结果如表1所示；
本实施例中，首次免疫处理的具体操作步骤为：每只鸭腹腔注射免疫0.5mL禽流感灭活抗原和同时颈部皮下注射禽流感灭活油乳剂疫苗0.5mL；
本实施例中，再次免疫处理的具体操作步骤为：每只鸭腹腔注射免疫0.5mL禽流感灭活抗原。
表1禽流感灭活抗原和灭活疫苗复合免疫对雏鸭禽流感抗体的影响
结果表明，雏鸭腹腔注射免疫禽流感灭活抗原的同时皮下注射灭活油乳剂疫苗，5天后H5亚型禽流感抗体滴度就能达到4-5Log2，H9亚型流感抗体滴度能达到3-6Log2；首次免疫时间在5日龄以上的雏鸭，7天后H5亚型禽流感抗体滴度能达到5-7Log2，H9亚型禽流感抗体滴度能达到6-8Log2，且该滴度能维持至35天以上；首次免疫时间在8-10日龄的雏鸭，5天后禽流感H5和H9亚型禽流感抗体滴度超过4Log2，7天后H5亚型禽流感抗体滴度就能达到5-7Log2，H9亚型禽流感抗体滴度达7-9Log2，且该滴度可维持42天以上。
实施例2
取50只市售的刚孵化出的雏鸭，分为5个实验组，第1组为对照组，不作免疫处理；
第2-5组，15日龄进行首次免疫；其中，第2组，每只鸭肌肉注射免疫0.5mL禽流感灭活抗原进行首次免疫；第3组，每只鸭颈部皮下注射免疫0.5mL禽流感灭活抗原进行首次免疫；第4组，每只鸭滴鼻免疫0.5mL禽流感灭活抗原进行首次免疫；第5组，每只鸭腹腔注射免疫0.5mL禽流感灭活抗原进行首次免疫；
第2-5组，首次免疫处理10天后进行再次免疫处理，再次免疫的具体操作步骤；
首次免疫处理后的0、5、7、14、21、28、35、42天从鸭翅下静脉采集血液并且分离血清，统一测定血清中抗禽流感病毒的抗体效价(HI价)；其结果如表2所示；
表2雏鸭不同途径免疫禽流感灭活抗原的效果情况
由表2可知，采用腹腔注射免疫方式的第5组的鸭，在首次免疫5天后，其H5亚型禽流感抗体滴度就可高达5Log2，H9抗体滴度就可高达6Log2；且在首次免疫28天后，H5亚型禽流感抗体滴度和H9亚型禽流感抗体滴度均保持在7Log2以上。而采用肌肉注射或颈部皮下注射或滴鼻免疫的方式免疫的鸭的H5亚型禽流感抗体滴度和H9亚型禽流感抗体滴度均非常低。
实施例3
取50只市售的刚孵化出的雏鸭，分为5个实验组，第1组作为对照组，不免疫禽流感灭活疫苗；
第2-5组15日龄时首次免疫，其中，第2组，每只鸭腹腔免疫0.1mL禽流感灭活抗原；第3组，每只鸭腹腔免疫0.3mL禽流感灭活抗原；第4组，每只鸭腹腔免疫0.5mL禽流感灭活抗原；第5组，每只鸭腹腔免疫1mL禽流感灭活抗原。首次免疫10天后进行再次免疫，再次免疫的免疫剂量和方式与首次免疫相同。
首次免疫后0、5、7、14、21、28、35、42天从鸭翅下静脉采集血液并且分离血清，统一测定血清中抗禽流感病毒的抗体效价(HI价)，其结果如表3所示，
表3雏鸭腹腔免疫禽流感灭活抗原的效果情况
由表3可知，采用0.1-1mL禽流感灭活抗原腹腔免疫，在免疫5天后，鸭体内的禽流感H5亚型和H9亚型禽流感抗体滴度均达到5Log2以上；采用0.3-0.5mL禽流感灭活抗原腹腔免疫，鸭体内的禽流感H5亚型和H9亚型禽流感抗体滴度可维持在5Log2以上21天。
实施例4
取50只市售的刚孵化出的雏鸭，分为5个实验组，第1组作为对照组，不免疫禽流感灭活疫苗；
第2-5组，于15日龄进行皮下注射禽流感灭活疫苗首次免疫；第2组，每只鸭免疫0.1mL禽流感灭活疫苗；第3组，每只鸭免疫0.3mL禽流感灭活疫苗；第4组，每只鸭免疫0.5mL禽流感灭活疫苗；第5组，每只鸭免疫1mL禽流感灭活疫苗。
首次免疫后0、5、7、14、21、28、35、42天从鸭翅下静脉采集血液并且分离血清，统一测定血清中抗禽流感病毒的抗体效价(HI价)，结果见表4。
表4雏鸭免疫禽流感灭活疫苗的效果情况
由表4可知，雏鸭免疫禽流感灭活疫苗后，21天H5亚型禽流感特异性抗体效价(HI价)为3-5Log2；而H9亚型禽流感特异性抗体效价(HI价)为5-8Log2；而免疫后0-14天禽流感特异性抗体效价均较低不足以起免疫保护的作用。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种使鸭快速产生抗禽流感抗体并维持抗体滴度的方法，包括步骤1)在5-15日龄对鸭进行首次免疫：对鸭腹腔接种禽流感灭活抗原，同时肌肉或者皮下免疫禽流感灭活油乳剂疫苗。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，在8-10日龄对鸭进行首次免疫。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述灭活抗原的用量为0.1-1mL，其HA价为7-12Log2。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述灭活抗原的用量为0.3-0.5mL，其效价HA价为9-10Log2。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述灭活油乳剂疫苗的用量为0.1-1mL，其HI价为7-12Log2。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述灭活油乳剂疫苗的用量为0.3-0.5mL，其效价HI价为9-10Log2。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤2)在首次免疫10天后对鸭进行再次免疫：对鸭腹腔接种禽流感灭活抗原。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述灭活抗原的用量为0.1-1mL，其HA价为7-12Log2。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述灭活抗原的用量为0.3-0.5mL，其HA价为9-10Log2。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述灭活抗原的毒株包括H5亚型禽流感毒株和H9亚型禽流感毒株；所述灭活油乳剂疫苗的生产种毒株包括H5亚型禽流感毒株和H9亚型禽流感毒株。
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