CN105724246A - 一种快速繁殖水蕨种苗的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速繁殖水蕨种苗的方法，是将水蕨的孢子接种到萌发培养基培养成幼苗；将获得的幼苗切段后插入幼芽培养基中进行培养长出幼芽，再将幼芽切成段插入新的幼芽培养基培养进行继代培养；将获得的幼芽接种到生根培养基培养至生根，即可获得水蕨种苗。本发明流程简单，易于操作，增殖速度快，解决了利用水蕨孢子繁殖种苗中野生水蕨资源少、大量采集孢子难、萌发率难以控制、育苗时间受限、繁殖速度慢的问题，实现了水蕨种苗的长期大规模快速增殖，可大量、快速、持续获得高质量的水蕨试管苗，实用性强。

Description

一种快速繁殖水蕨种苗的方法

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体为一种利用试管快速繁殖水蕨种苗的方法。

背景技术

水蕨（Ceratopteristhalictroides）属水蕨科，是一年生水生或湿生的同型孢子蕨类，漂浮或生于淤泥中。水蕨具有很高的经济价值，既可以培养成可供食用的水蕨菜；也可作为药用，有明目、清凉、活血、解毒的功效，可治痞积、痢疾、胎毒和跌打损伤等病症；还可以作为观赏植物，近年来，由于生活水平的提高，人们对观赏植物需求的不断增多，水蕨因其造型美观和稀有，在园艺栽培方面深受大众喜爱。但是长期以来，由于人类活动对水体和周围环境的破坏，如除草剂、洗涤剂等对水蕨的生长和繁殖有严重的破坏力，导致水蕨的分布地和种群数量越来越少，有濒临灭绝的危险。同时，水蕨的耐温性较差，冬季的长时间低温会使未完全成熟的幼苗冻死，故在没有保温措施情况下的野生水蕨繁殖率较低，这也是水蕨濒临灭亡的一个重要原因。因此在1999年水蕨就被列为国家二级重点保护野生植物。

水蕨传统的繁殖方法采用孢子繁殖，该方法存在的问题：(1)野生水蕨稀少，大量采集孢子困难；(2)孢子采集受时间限制，无法实现定期播种育苗；(3)采集的孢子往往成熟度不均，难以保证萌发率。

近年来，组培繁殖成为水蕨种苗繁殖的研究重点。组培繁殖目前采用诱导愈伤组织、分化增殖愈伤组织和诱导生根的方式获得无菌苗，这种方式存在的问题是：(1)诱导愈伤组织时间较长；(2)愈伤组织分化为不定芽的频率较低，分化出的不定芽变异率高；(3)愈伤组织分化出的不定芽伸长速度慢。这些问题严重阻碍了水蕨种苗的快速规模化生产，因而无法满足水蕨药材市场需求。为此，必须建立能大量、快速扩繁水蕨种苗的生产技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速繁殖水蕨种苗的方法，利用试管中不定芽萌发和伸长速度快的特点，实现了水蕨种苗大规模快速扩繁的目的。

本发明利用少量孢子获得无菌苗，以无菌苗为外植体，通过试管培养不定芽的萌发进行快速增殖，实现水蕨种苗大规模扩繁。

本发明所采用的技术方案：一种快速繁殖水蕨种苗的方法，包括无菌苗的获得、不定芽的诱导和生根培养。

1、无菌苗的获得

选取水蕨的孢子，经消毒后将孢子接种到萌发培养基进行培养至长成幼苗，所述萌发培养基是以MS培养基为基本培养基并附加活性炭0.5g·L^-1。

2、不定芽的诱导

将步骤1所获得的幼苗切成段，将切段的基部向下插入诱芽培养基中进行培养至长出不定芽，再将不定芽切成段，然后将其基部向下插入新的诱芽培养基中进行继代培养。所述诱芽培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤0.25mg·L^-1、吲哚丁酸0.25mg·L^-1。

3、生根培养

将步骤2所获得的幼芽接种到生根培养基上，先暗培养再进行光照培养，至生根即可获得水蕨种苗；所述生根培养基是以MS培养基为基本培养基并附6-苄基腺嘌呤0.5mg·L^-1、吲哚丁酸0.3mg·L^-1、活性炭0.5g·L^-1。

本发明流程简单，易于操作，增殖速度快，解决了水蕨孢子繁殖种苗中野生水蕨资源少、大量采集孢子难、萌发率难以控制、育苗时间受限、繁殖速度慢的问题，实现了水蕨种苗的长期大规模快速增殖，可大量、快速、持续获得高质量的水蕨试管苗，实用性强，为水蕨大规模扩繁增殖提供了高效的方法，为水蕨种苗的规模化、工厂化生产奠定了基础，也为保护野生水蕨种质资源开辟了一条切实可行的途径。

具体实施方案

下面对本发明作进一步说明。

本发明所提供的快速繁殖水蕨种苗的方法，包括无菌苗的获得、不定芽的诱导和生根培养。

1)、无菌苗的获得

选取野生水蕨的成熟孢子，经消毒后将孢子接种到萌发培养基培养成幼苗，培养温度为25℃，光照强度为16～20μmol·m^-2·s^-1，光照时间为11h·d^-1，培养14～20天；所述萌发培养基是以MS培养基为基本培养基并附加活性炭0.5g·L^-1。

2)、不定芽的诱导

将步骤1所获得的幼苗切成段，将切段的基部向下插入诱芽培养基中进行培养至长出不定芽，再将不定芽切成段，然后将其基部向下插入新的诱芽培养基中进行继代培养，培养温度为25～26℃，光照强度为30～40μmol·m^-2·s^-1，光照时间为11h·d^-1；所述诱芽培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤0.25mg·L^-1、吲哚丁酸0.25mg·L^-1。

3)、茎段生根

将步骤2所获得的幼芽接种到生根培养基上，先暗培养3～4天再进行光照培养20～30天，至生根即可获得水蕨种苗；所述生根培养基是以MS培养基为基本培养基并附6-苄基腺嘌呤0.5mg·L^-1、吲哚丁酸0.3mg·L^-1、活性炭0.5g·L^-1。

Claims (1)

1.一种快速繁殖水蕨种苗的方法，其特征在于包括三个过程：无菌苗的获得、不定芽的诱导和生根培养；

（1）无菌苗的获得

选取野生水蕨的成熟孢子，经消毒后将孢子接种到萌发培养基培养成幼苗，培养温度为25℃，光照强度为16～20μmol·m^-2·s^-1，光照时间为11h·d^-1，培养14～20天；所述萌发培养基是以MS培养基为基本培养基并附加活性炭0.5g·L^-1；

（2)、不定芽的诱导

将步骤1所获得的幼苗切成段，将切段的基部向下插入诱芽培养基中进行培养至长出不定芽，再将不定芽切成段，然后将其基部向下插入新的诱芽培养基中进行继代培养，培养温度为25～26℃，光照强度为30～40μmol·m^-2·s^-1，光照时间为11h·d^-1；所述诱芽培养基是以MS培养基为基本培养基并附加6-苄基腺嘌呤0.25mg·L^-1、吲哚丁酸0.25mg·L^-1；

（3)、生根培养

将步骤2所获得的幼芽接种到生根培养基上，先暗培养3～4天再进行光照培养20～30天，至生根即可获得水蕨种苗；所述生根培养基是以MS培养基为基本培养基并附6-苄基腺嘌呤0.5mg·L^-1、吲哚丁酸0.3mg·L^-1、活性炭0.5g·L^-1。