CN105717312B - 一种红细胞模拟粒子、其制备方法以及含该模拟粒子的质控物或校准物 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种红细胞模拟粒子及其制备方法，所述红细胞模拟粒子的形状为球形，其制备方法包括以下步骤：(1)配制红细胞处理液，采用所述红细胞处理液对含有红细胞的血液样本中的红细胞进行球形化和固定化一步处理或分步进行球形化处理、固定化处理，所述红细胞处理液包括以下组分：细胞球形化组分、细胞膜磷脂固定组分、血红蛋白氧化组分和细胞膜蛋白质固定组分；(2)将经步骤(1)处理后的红细胞进行洗涤、保存，得到红细胞模拟粒子。该制备方法操作简单，制得的红细胞模拟粒子形状为球形，形态均一，细胞形态、体积能够保持长期稳定，长期保存后红细胞体积变化差异较小。本申请还提供了含该模拟粒子的血液细胞分析质控物或校准物。
Description
技术领域
本申请涉及血液细胞分析领域，具体涉及一种红细胞模拟粒子、其制备方法以及含该模拟粒子的质控物或校准物。
背景技术
红细胞是人血液中的重要组成成分，红细胞的数量和形态相关参数是血液常规筛查的重要参数。血液细胞分析仪器对外周全血进行分析可以获得红细胞的参数信息，为了有效的对仪器的红细胞相关结果输出进行监控和校准，需要制备能够有效模拟红细胞特征的红细胞模拟粒子。
目前，红细胞模拟粒子相关技术在本应用领域往往存在以下缺陷：
(1)红细胞呈现双凹圆盘形貌，这种状态下红细胞形态分布不均一，特别当遇到不同的处理试剂或保存试剂时，不均一特征会更加明显，这也给细胞固定化后长期放置时细胞形态的保持带来挑战；(2)红细胞模拟粒子难以保持体积的长期稳定，在血细胞分析仪质控物和校准物要求的有效期内MCV(平均红细胞体积)变化较大。
因此，如何获得形态均一且体积能够保持长期稳定的红细胞模拟粒子显得非常必要。
发明内容
为解决上述问题，本申请提供了一种红细胞模拟粒子及其制备方法。所述红细胞模拟粒子形状为球形，形态均一，其形态和体积能够保持长期稳定；所述红细胞模拟粒子的制备方法简单。本申请还提供了含该模拟粒子的血液细胞分析质控物或校准物。
本申请第一方面提供了一种红细胞模拟粒子，所述红细胞模拟粒子的形状为球形。
优选地，所述红细胞模拟粒子是将天然红细胞经过球形化和固定化后得到的球形细胞。
本申请第一方面提供的红细胞模拟粒子，形状为球形，形态均一，在经过后续试剂处理后或长期放置后细胞形态、体积能够保持长期稳定，避免了现有技术中红细胞模拟粒子形状为双凹圆盘导致的细胞形态不均一的缺陷。
本申请第二方面提供了一种红细胞模拟粒子的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，采用所述红细胞处理液对血液样本中的红细胞进行球形化和固定化一步处理或分步进行球形化处理、固定化处理，所述红细胞处理液包括以下组分：
细胞球形化组分：其包括表面活性剂，所述表面活性剂为阳离子、阴离子、非离子和/或两性离子表面活性剂，所述表面活性剂的质量浓度以能够使红细胞球形化，且不破坏红细胞和不出现血红蛋白泄漏到胞外的浓度为准，本领域技术人员能够根据各类表面活性剂的性质选择合适的浓度；
细胞膜磷脂固定组分，用于固定细胞膜磷脂；
血红蛋白氧化组分，用于氧化血红蛋白；
细胞膜蛋白质固定组分：其包括醛类，用于固定细胞膜蛋白质；
将所述红细胞处理液的渗透压控制为300-800Osm/kg·H2O，pH控制为5.0-9.0；
(2)将经步骤(1)处理后的红细胞进行洗涤、保存，得到红细胞模拟粒子。
本申请中，用于制备红细胞模拟粒子的红细胞来源为天然存在的动物红细胞，优选地，和人红细胞体积接近的动物红细胞，例如猴子的红细胞、鳄鱼的红细胞，或者猪的红细胞，更优选是人的红细胞。
本申请可以对红细胞进行球形化处理和固定化一步处理，也可以先进行球形化处理，再进行固定化处理。
在一个实施方式中，所述红细胞处理液包括红细胞处理液A和红细胞处理液B，所述红细胞处理液A包括所述细胞球形化组分，所述红细胞处理液B包括所述 细胞膜磷脂固定组分、所述血红蛋白氧化组分和所述细胞膜蛋白质固定组分。在一步处理中，红细胞处理液A和B混合为一份溶液。当采用所述红细胞处理液对红细胞分步进行球形化处理、固定化处理时，首先采用所述红细胞处理液A对红细胞进行球形化处理，然后采用所述红细胞处理液B对所述红细胞进行固定化处理。优选地，球形化处理和固定处理之间可以将经球形化处理后的红细胞进行洗涤。
更优选地，采用生理盐水洗涤经球形化处理后的红细胞，采用缓冲液悬浮红细胞，所述缓冲液为柠檬酸钠缓冲液、Tris缓冲液、PBS缓冲液或HEPES缓冲液。
优选地，将所述红细胞处理液A和所述红细胞处理液B的渗透压控制为300-800Osm/kg·H2O，pH控制为5.0-9.0。
本申请使用细胞球形化组分对红细胞进行球形化处理，所述细胞球形化组分为至少一种表面活性剂，优选地，所述表面活性剂为通式I所示的阳离子表面活性剂或通式II所示的阴离子表面活性剂，通常的使用浓度为0.005g/L-0.5g/L，
其中R1为C6-14烷基，R2为C1-4烷基，R3为C1-4烷基，R4为C1-4烷基或苄基，Z-为卤素离子；
R5-SO3X (II)，其中R5为C12-18烷基，X为碱金属离子。
更优选地，所述表面活性剂为十二烷基磺酸钠、十六烷基三甲基氯化铵、十烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基氯化铵或十二烷基二甲基苄基氯化铵。
为了使细胞体积稳定，本申请使用细胞膜磷脂固定组分固定细胞膜磷脂，加强了细胞膜的稳定性，同时，得到的红细胞模拟粒子的磷脂仍然可以被表面活性剂溶解导致细胞被溶解。
为了减少对红细胞血红蛋白的影响和进一步稳定细胞内血红蛋白，本申请采用血红蛋白氧化组分氧化血红蛋白。
优选地，所述细胞膜磷脂固定组分和所述血红蛋白氧化组分中均包括重铬酸盐，重铬酸盐的使用浓度为0.01g/L-5.0g/L，优选0.05g/L-2.5g/L。
更优选地，所述重铬酸盐为重铬酸钾或重铬酸钠。
本申请使用细胞膜蛋白质固定组分对细胞膜蛋白质进行固定化，对细胞膜进一步强化，维持细胞的球形形态和提高细胞的稳定性。所述细胞膜蛋白质固定组分包括醛类，优选地，所述醛类为甲醛、戊二醛、乙二醛、丙酮醛和多聚甲醛中的至少一种。
优选地，所述红细胞处理液中，所述细胞膜蛋白质固定组分的体积分数为0.01％-0.1％。
所述红细胞处理液的渗透压和pH控制在一定范围内；优选地，使用渗透压调节剂调节所述红细胞处理液的渗透压，所述渗透压调节剂为氯化钠、磷酸二氢钠、氯化钾或柠檬酸钠。使用渗透压调节剂对所述红细胞处理液进行渗透压微调可以对细胞体积作进一步的调整，减少了细胞批间的体积细小差异。
优选地，使用缓冲液调节所述红细胞处理液的pH，所述缓冲液为柠檬酸钠缓冲液、Tris缓冲液、PBS缓冲液或HEPES缓冲液。
优选地，所述红细胞处理液中还含有叠氮化钠，在所述红细胞处理液中的浓度为2×10-4g/mL-2×10-2g/mL，叠氮化钠起防腐杀菌的作用。
可以根据实际需要制备含有红细胞的血液样本，所述血液样本可以为混合血液样本或纯红细胞血液样本。当所述血液样本为混合血液样本时，需对混合血液样本进行洗涤后再混合，防止不同血型造成的凝集。
优选地，所述含有红细胞的血液样本由以下方法制得：取含有红细胞的血液样本，将所述血液样本使用生理盐水洗涤2次以上，离心至上清无过多悬浮细胞。
优选地，所述含有红细胞的血液样本由以下方法制得：将含有红细胞的血液样本进行过滤、离心以除去白细胞和血小板，使用缓冲液洗涤2次以上，去上清留压积红细胞备用，所述缓冲液为柠檬酸钠缓冲液、Tris缓冲液、PBS缓冲液或HEPES缓冲液。
根据红细胞的计数结果选择所述含有红细胞的血液样本与所述红细胞处理液的体积比，优选地，所述含有红细胞的血液样本与所述红细胞处理液按体积比为1:x混合，x>0。
更优选地，所述0<x<6。
优选地，所述步骤(2)中使用生理盐水洗涤经步骤(1)处理后的红细胞，洗涤后，再加入保存液进行保存。所述保存液适合细胞保存且具有防腐功能，商品化的或者是常规方法配制的保存液均可使用。
本申请第二方面提供的红细胞模拟粒子的制备方法操作简单，通过将红细胞置于所述红细胞处理液中进行球形化处理和固定化处理，制得的红细胞模拟粒子形状为球形，形态均一，细胞形态、体积能够保持长期稳定，长期保存后红细胞体积变化差异较小。
本申请第三方面提供了一种红细胞模拟粒子，所述红细胞模拟粒子由本申请第二方面所述制备方法制得。
本申请第三方面提供的红细胞模拟粒子，形状为球形，形态均一，细胞形态、体积能够保持长期稳定。
本申请第四方面提供了一种血液细胞分析质控物或校准物，包含按照本申请第二方面所述制备方法制得的红细胞模拟粒子。
所述红细胞模拟粒子在血液细胞分析质控物的有效期内MCV(平均红细胞体积)变化较小，使血液分析的测试参数更加稳定和准确。
优选地，所述血液细胞分析质控物还包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、本申请第二方面制备的红细胞模拟粒子和保存液。所述保存液适合细胞保存且具有防腐功能。
综上，本申请提供的一种红细胞模拟粒子、其制备方法以及含该模拟粒子的血液细胞分析质控物或校准物，具有如下有益效果：
(1)本申请提供的红细胞模拟粒子为球形，形态均一，长期放置后细胞形态保持不变；本申请提供的红细胞模拟粒子能保持体积的长期稳定，在血液细胞分析质控物要求的有效期内MCV(平均红细胞体积)变化较小，为2.0fl(飞升)以下；
(2)本申请提供的红细胞模拟粒子的制备方法简单，制得的红细胞模拟粒子呈球形，形态均一，同时该红细胞粒子的体积稳定，长期保存后红细胞体积变化差异较小。
附图说明
图1是本申请实施例一中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图2是本申请实施例二中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图3是本申请实施例三中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图4是本申请实施例四中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图5是本申请实施例五中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图6是本申请实施例六质控物中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图7是本申请实施例七质控物中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图8是本申请实施例八质控物中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图9是本申请实施例九质控物中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图10是本申请实施例十质控物中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图11是本申请实施例十一中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV结果图；
图12是本申请实施例一中红细胞的镜检图；
图13是本申请实施例十一中红细胞的镜检图；
图14是血液细胞分析质控物的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)通道呈现图。
具体实施方式
以下所述是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本申请的保护范围。
实施例一
一种红细胞模拟粒子的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，其组分如表1所示：
表1
(2)取人抗凝血20mL使用生理盐水洗涤2次以上，离心至上清无过多悬浮细胞，得到含有红细胞的血液样本，备用。将该含有红细胞的血液样本与上述红细胞处理液按照体积比为1:1的比例混合，混匀后放置于室温下静置1小时，对红细胞进行球形化处理和固定化处理。
(3)将经步骤(2)处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次，然后使用保存液分散悬浮红细胞，再于2-8℃低温保存，得到红细胞模拟粒子。
将实施例一中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，测试结果如图1所示，测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.8fl。
实施例二
一种红细胞模拟粒子的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，其组分如表2所示：
表2
(2)取人抗凝血20mL，使用生理盐水洗涤2次以上，离心至上清无过多悬浮细胞，得到含有红细胞的血液样本，备用。将该含有红细胞的血液样本与上述红细胞处理液按照体积比为1:2的比例混合，混匀后放置于室温下静置3小时，对红细胞进行球形化处理和固定化处理。
(3)将经步骤(2)处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次，然后使用保存液分散悬浮红细胞，再于2-8℃低温保存，得到红细胞模拟粒子。
将实施例二中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图2所示，测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.6fl。
实施例三
一种红细胞模拟粒子的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液(包括红细胞处理液A和红细胞处理液B)，其组分如表3所示：
表3
(2)取人抗凝血20mL进行过滤、离心等措施去白细胞和血小板，然后使用柠檬酸钠缓冲液洗涤3次，去上清留压积红细胞，得到含有红细胞的血液样本，备用。将该含有红细胞的血液样本与上述红细胞处理液A按照体积比为1:3的比例混合，混匀后放置于室温下静置1小时，对红细胞进行球形化处理。
(3)将经步骤(2)处理后的红细胞使用生理盐水洗涤2次以上，然后使用柠檬酸钠缓冲液悬浮。
(4)将经步骤(3)处理后的悬浮液与上述红细胞处理液B按照体积比为1:3的比例混合，混匀后放置于室温下静置2小时，对红细胞进行固定化处理。
(5)将经步骤(4)处理后的红细胞使用生理盐水洗涤2次以上，然后使用保存液洗涤3次，最后使用保存液分散悬浮红细胞，于2-8℃低温保存，得到红细胞模拟粒子。
将实施例三中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图3所示，测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.6fl。
实施例四
一种红细胞模拟粒子的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，其组分如表4所示：
表4
(2)取人抗凝血20mL进行过滤、离心等措施以除去白细胞和血小板，使用Tris缓冲液洗涤3次，去上清留压积红细胞，得到含有红细胞的血液样本，备用，将该含有红细胞的血液样本与上述红细胞处理液按照体积比为1:1的比例混合，混匀后放置于室温下静置2小时，对红细胞进行球形化处理和固定化处理。
(3)将经步骤(2)处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次，然后使用保存液洗涤3次，最后使用保存液分散悬浮红细胞，于2-8℃低温保存，得到红细胞模拟粒子。
将实施例四中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图4所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为2.0fl。
实施例五
一种红细胞模拟粒子的制备方法，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，其组分如表5所示：
表5
(2)取人抗凝血20mL使用生理盐水洗涤3次，离心至上清无过多悬浮细胞，得到含有红细胞的血液样本，备用。将该含有红细胞的血液样本与上述红细胞处理液按照体积比为1:1的比例混合，混匀后放置于室温下静置2小时，对红细胞进行球形化处理和固定化处理。
(3)将经步骤(2)处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次，然后使用保存液分散悬浮红细胞，再于2-8℃低温保存，得到红细胞模拟粒子。
将实施例五中红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图5所示，测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.7fl。
实施例一至五说明，本申请方法制备的红细胞模拟物具有很好的体积稳定性。
实施例六
一种血液细胞分析质控物，包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例一制得的红细胞模拟粒子。该血液细胞分析质控物的制备方法，包括以下步骤：
将白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例一制得的红细胞模拟粒子混合均匀，制成血液细胞分析质控物，分装后，2～8℃低温保存。这里的白细胞模拟粒子和血小板模拟粒子可以用商品化的产品，也可以是用常规或已知方 法制备的模拟物，优选通过洗涤离心方式置换为与红细胞模拟粒子相同的保存液。
将上述血液细胞分析质控物中的红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图6所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.1fl。
实施例七
一种血液细胞分析质控物，包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例二制得的红细胞模拟粒子。该血液细胞分析质控物的制备方法，包括以下步骤：
将白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例二制得的红细胞模拟粒子混合均匀，制成血液细胞分析质控物，分装后，2～8℃低温保存。这里的白细胞模拟粒子和血小板模拟粒子可以用商品化的产品，也可以是用常规或已知方法制备的模拟物，优选通过洗涤离心方式置换为与红细胞模拟粒子相同的保存液。
将上述血液细胞分析质控物中的红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图7所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.5fl。
实施例八
一种血液细胞分析质控物，包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例三制得的红细胞模拟粒子。该血液细胞分析质控物的制备方法，包括以下步骤：
将白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例三制得的红细胞模拟粒子混合均匀，制成血液细胞分析质控物，分装后，2～8℃低温保存。这里的白细胞模拟粒子和血小板模拟粒子可以用商品化的产品，也可以是用常规或已知方 法制备的模拟物，优选通过洗涤离心方式置换为与红细胞模拟粒子相同的保存液。
将上述血液细胞分析质控物中的红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图8所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.5fl。
实施例九
一种血液细胞分析质控物，包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例四制得的红细胞模拟粒子。该血液细胞分析质控物的制备方法，包括以下步骤：
将白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例四制得的红细胞模拟粒子混合均匀，制成血液细胞分析质控物，分装后，2～8℃低温保存。这里的白细胞模拟粒子和血小板模拟粒子可以用商品化的产品，也可以是用常规或已知方法制备的模拟物，优选通过洗涤离心方式置换为与红细胞模拟粒子相同的保存液。
将上述血液细胞分析质控物中的红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图9所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.5fl。
实施例十
一种血液细胞分析质控物，包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例五制得的红细胞模拟粒子。该血液细胞分析质控物的制备方法，包括以下步骤：
将白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例五制得的红细胞模拟粒子混合均匀，制成血液细胞分析质控物，分装后，2～8℃低温保存。这里的白细胞模拟粒子和血小板模拟粒子可以用商品化的产品，也可以是用常规或已知方 法制备的模拟物，优选通过洗涤离心方式置换为与红细胞模拟粒子相同的保存液。
将上述血液细胞分析质控物中的红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图10所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为1.4fl。
实施例六至十说明，本申请方法制备的红细胞模拟粒子和其他细胞模拟粒子混合后，仍具有很好的体积稳定性。
实施例十一：对比实施例
作为对照，本实施制备了未进行球形化处理的红细胞模拟粒子，制备方法包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，其组分如表6所示：
表6
本实施例步骤(2)和步骤(3)的操作同实施例1的步骤(2)和(3)，最终得到未球形化的红细胞模拟粒子。
将上述制得的未球形化的红细胞模拟粒子在血细胞分析仪上的连续测试MCV，结果如图11所示。测试总历时18周，每周测试不少于2次平均红细胞体积MCV。期间平均红细胞体积MCV的极差(变化最大值)为4.5fl，且后期MCV沿同一趋势方向下降。通过对比实施例1-5和本对比实施例，说明没有球形化处理制备的红细胞模拟粒子体积稳定性明显低于经过球形化处理制备的。虽然不希望受 到理论约束，我们推测没有进行球形化处理的红细胞基本保持双凹圆盘状，形态不均一，在后续的固定化处理中，不均一特征可能会更加明显，红细胞模拟粒子难以保持体积的长期稳定，在血细胞分析仪质中测试有效期内MCV(平均红细胞体积)变化较大。
图12是本申请中实施例一制得的红细胞模拟粒子的镜检图，从图12中可以看出，实施例一制备的红细胞模拟粒子的形状为球形，形态均一。图13是本申请中实施例十一制得的未球形化的红细胞模拟粒子的镜检图，从图13中可以看出，实施例十一制备的红细胞的形状为圆盘状，形态不均一。
实施例十二
将实施例6的质控品与人新鲜抗凝血作为分析样本，分别注入血液细胞分析(迈瑞BC系列血液分析仪)，检测白细胞和红细胞，结果如图14所示。图14(a)为新鲜血在血细胞分析仪上的WBC、RBC通道呈现；图14(b)为血液细胞分析质控物(包括白细胞模拟粒子、血小板模拟粒子、保存液及实施例一制得的红细胞模拟粒子)在血细胞分析仪上的WBC、RBC通道呈现。结果表明，本方法制备的红细胞模拟粒子具有和新鲜血红细胞类似的体积，也具有和新鲜血红细胞类似的溶血性，在diff分类图上不影响白细胞的分类。结果说明，含本申请方法制备的红细胞模拟粒子的质控物与新鲜血相比，在血液分析仪上表现类似。
综上所述，该红细胞模拟粒子的在一定期限内MCV(平均红细胞体积)变化较小，体积稳定，能够有效模拟红细胞特征，可以应用于血液细胞分析质控物中，对红细胞的分析测定进行准确的质量控制。
以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种红细胞模拟粒子在模拟呈现双凹圆盘形貌的无核红细胞中的应用，所述红细胞模拟粒子的形状为球形，所述红细胞模拟粒子的体积与新鲜血中所述无核红细胞的体积类似。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红细胞模拟粒子是将天然红细胞经过球形化和固定化后得到的球形细胞。
3.一种用于模拟无核红细胞的红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制红细胞处理液，采用所述红细胞处理液对血液样本中的红细胞进行球形化和固定化一步处理或分步进行球形化处理、固定化处理，所述红细胞处理液包括以下组分：
细胞球形化组分：其包括至少一种表面活性剂，所述表面活性剂为阳离子、阴离子、非离子和/或两性离子表面活性剂，所述表面活性剂的质量浓度以不破坏红细胞且不出现血红蛋白泄漏到胞外的浓度为准；
细胞膜磷脂固定组分，用于固定细胞膜磷脂；
血红蛋白氧化组分，用于氧化血红蛋白；
细胞膜蛋白质固定组分：其包括醛类，用于固定细胞膜蛋白质；
将所述红细胞处理液的渗透压控制为300-800Osm/kg·H2O，pH控制为5.0-9.0；
(2)将经步骤(1)处理后的红细胞进行洗涤、保存，得到红细胞模拟粒子，所述红细胞模拟粒子的形状为球形，所述红细胞模拟粒子的体积与新鲜血中所述无核红细胞的体积类似。
4.如权利要求3所述的红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于，所述红细胞处理液包括红细胞处理液A和红细胞处理液B，所述红细胞处理液A包括所述细胞球形化组分，所述红细胞处理液B包括所述细胞膜磷脂固定组分、所述血红蛋白氧化组分和所述细胞膜蛋白质固定组分。
5.如权利要求3所述的红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂为通式I或II所示的表面活性剂，
其中R1为C6-14烷基，R2为C1-4烷基，R3为C1-4烷基，R4为C1-4烷基或苄基，Z-为卤素离子；
R5-SO3X (II)，其中R5为C12-18烷基，X为碱金属离子。
6.如权利要求5所述的红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂为十二烷基磺酸钠、十六烷基三甲基氯化铵、十烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基氯化铵或十二烷基二甲基苄基氯化铵。
7.如权利要求3所述的红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于，所述细胞膜磷脂固定组分和所述血红蛋白氧化组分中均包括重铬酸盐，优选的，重铬酸盐为重铬酸钾或重铬酸钠。
8.如权利要求3所述的红细胞模拟粒子的制备方法，其特征在于，所述醛类为甲醛、戊二醛、乙二醛、丙酮醛和多聚甲醛中的至少一种。
9.一种红细胞模拟粒子，其特征在于，所述红细胞模拟粒子由权利要求3-8任一项所述的制备方法制得。
10.血液细胞分析质控物或校准物，其特征在于，包含按照权利要求3-8任一项所述的制备方法制得的红细胞模拟粒子。
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