CN114608999A - 红细胞模拟物粒子、其制备方法及含该红细胞模拟物粒子的质控物或校准物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种红细胞模拟物粒子、其制备方法及含该红细胞模拟物粒子的质控物或校准物,采用该制备方法可对人红细胞及动物红细胞进行处理,可以增加红细胞的稳定性,延长红细胞的保存时间,使用该制备方法制备的红细胞模拟物粒子可用于人或动物血细胞分析仪用质控物及校准物的模拟粒子。该制备方法采用两种处理试剂,处理试剂A用于增加细胞膜流动性,使氧化剂及防腐剂可以更加均匀,更加深入的处理红细胞,对细胞中蛋白的氧化及防腐效果更加充分;处理试剂B用于降低细胞膜流动性,使细胞膜上的蛋白变性,降低细胞活性,减缓细胞的代谢活动,从而达到增加红细胞的稳定性,延长红细胞的保存时间的目的。
Description
技术领域
本发明涉及血液细胞分析领域,特别涉及一种红细胞模拟物粒子、其制备方法及含该红细胞模拟物粒子的质控物或校准物。
背景技术
红细胞是人血液中的重要组成成分,红细胞的数量和形态相关参数是血液常规筛查的重要参数。血液细胞分析仪器对外周全血进行分析可以获得红细胞的参数信息,为了有效的对仪器的红细胞相关结果输出进行监控和校准,需要制备能够有效模拟红细胞特征的红细胞模拟物粒子。
现有的红细胞模拟物在有效期保存期间存在红细胞体积变化较大的问题,在仪器上表现为MCV参数变化较大;由于保存液中含有细胞代谢所需的营养物质,导致试剂的防腐效果不理想;目前现有公布的专利所用的处理试剂涉及国家管控的剧毒品或易制毒品,给试剂采购也带来了一定的困难。因此,如何解决上述问题是本领域技术人员的研究方向之一。
发明内容
有鉴于此,本发明提出一种红细胞模拟物粒子的制备方法。
本发明还提出一种采用上述制备方法所制备出的红细胞模拟物粒子。
本发明还提出一种含有上述红细胞模拟物粒子的血液细胞分析质控物或校准物。
本发明提供一种红细胞模拟物粒子的制备方法,包括以下步骤:
(1)使用离心、静置的方式去除血液样本中的白细胞及血小板,并进行洗涤,得到纯化的红细胞悬浮液;
(2)配置红细胞处理液,所述红细胞处理液包括处理试剂A和处理试剂B,所述处理试剂A包含:生物碱、重金属盐、缓冲体系及防腐剂,将所述处理试剂A的渗透压控制在220-1500mOsm/L,PH值控制在6-10;所述处理试剂B包含:氟化物、醛类及缓冲体系,将所述处理试剂B的渗透压控制在220-1500mOsm/L,PH值控制在6-10;
(3)取适量所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按一定比例混合,混合后放入37℃环境下处理1h;
(4)将步骤(3)处理后的红细胞进行洗涤,并与所述处理试剂B按一定比例混合,室温放置0.5h或1h;
(5)将步骤(4)处理后的红细胞进行洗涤、保存,得到红细胞模拟物粒子。
在一些实施例中,所述步骤(1)中静置的方式为:将血液样本采用直立放置的方式静置3天。
在一些实施例中,所述步骤(3)中的所述37℃环境为37℃水浴锅或37℃恒温培养箱。
在一些实施例中,所述步骤(5)中保存红细胞的方式为:使用自配的保存液稀释并置于2-8℃环境下进行保存,所述保存液包含缓冲体系、糖类、防腐剂及分散剂。
在一些实施例中,所述处理试剂A包含:龙葵碱3g/L,亚硝酸钠1g/L,磷酸二氢钾0.2g/L,十二水合磷酸氢二钠2.9g/L,氯化钠8g/L,PC3005g/L及纯水1L;所述处理试剂B包含:磷酸二氢钠0.4g/L,磷酸氢二钠5.8g/L,氯化钠5g/L,甲醛0.3g/L,氟化钠2g/L及纯水1L。
在一些实施例中,所述步骤(3)中,所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按1:1的比例混合;所述步骤(4)中,洗涤后的样液与所述处理试剂B按1:2的比例混合。
在一些实施例中,所述处理试剂A包含:山莨菪碱4.5g/L,氯化汞2.5g/L,柠檬酸钠12g/L,硫柳汞钠1g/L及纯水1L;所述处理试剂B包含:柠檬酸钠10g/L,多聚甲醛0.6g/L,氟化铯0.5g/L及纯水1L。
在一些实施例中,所述步骤(3)中,所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按1:2的比例混合;所述步骤(4)中,洗涤后的样液与所述处理试剂B按1:1的比例混合。
在一些实施例中,所述处理试剂A包含:莲心碱8g/L,硫酸铜1.5g/L,甲基异噻唑啉酮0.8g/L及Tris缓冲溶液1L;所述处理试剂B包含:氟化铍0.8g/L,戊二醛0.08g/L及Tris缓冲溶液1L。
在一些实施例中,所述步骤(3)中,所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按1:2的比例混合;所述步骤(4)中,洗涤后的样液与所述处理试剂B按1:2的比例混合。
本发明还提供一种红细胞模拟物粒子,所述红细胞模拟物粒子由上述制备方法制得。
本发明还提供一种血液细胞分析质控物或校准物,包含按照上述制备方法制得的红细胞模拟物粒子。
综上所述,本发明提供一种红细胞模拟物粒子、其制备方法及含该红细胞模拟物粒子的质控物或校准物,采用该制备方法可对人红细胞及动物红细胞进行处理,可以增加红细胞的稳定性,延长红细胞的保存时间,使用该制备方法制备的红细胞模拟物粒子可用于人或动物血细胞分析仪用质控物及校准物的模拟粒子。
该制备方法采用两种处理试剂,处理试剂A用于增加细胞膜流动性,使氧化剂及防腐剂可以更加均匀,更加深入的处理红细胞,对细胞中蛋白的氧化及防腐效果更加充分;处理试剂B用于降低细胞膜流动性,使细胞膜上的蛋白变性,降低细胞活性,减缓细胞的代谢活动,从而达到增加红细胞的稳定性,延长红细胞的保存时间的目的。且本发明所涉及的试剂均为常规试剂,易采购。将处理后的红细胞使用自配的保存液进行保存,置于2-8℃环境下进行储存,得到红细胞模拟物悬浮液,也可以与其他白细胞模拟物及血小板模拟物混合制成血液质控物或校准物。
附图说明
图1为本发明实施例一中对红细胞模拟物粒子的监测数据曲线图。
图2为本发明实施例二中对红细胞模拟物粒子的监测数据曲线图。
图3为本发明实施例三中对红细胞模拟物粒子的监测数据曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例,更具体地说明本发明的内容。应当理解,本发明的实施并不局限于下面的实施例,对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
本发明提供一种红细胞模拟物粒子、其制备方法及含该红细胞模拟物粒子的质控物或校准物,该红细胞模拟物粒子的制备方法包括以下步骤:
(1)使用离心、静置的方式去除血液样本中的白细胞及血小板,并进行洗涤,得到纯化的红细胞悬浮液;
(2)配置红细胞处理液,所述红细胞处理液包括处理试剂A和处理试剂B,所述处理试剂A包含:生物碱、重金属盐、缓冲体系及防腐剂,将所述处理试剂A的渗透压控制在220-1500mOsm/L,PH值控制在6-10;所述处理试剂B包含:氟化物、醛类及缓冲体系,将所述处理试剂B的渗透压控制在220-1500mOsm/L,PH值控制在6-10;
(3)取适量所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按一定比例混合,混合后放入37℃环境下处理1h;
(4)将步骤(3)处理后的红细胞进行洗涤,并与所述处理试剂B按一定比例混合,室温放置0.5h或1h;
(5)将步骤(4)处理后的红细胞进行洗涤、保存,得到红细胞模拟物粒子。
优选地,所述步骤(1)中静置的方式为:将血液样本采用直立放置的方式静置3天。
优选地,所述步骤(3)中的所述37℃环境为37℃水浴锅或37℃恒温培养箱。
优选地,所述步骤(5)中保存红细胞的方式为:使用自配的保存液稀释并置于2-8℃环境下进行保存,所述保存液包含缓冲体系、糖类、防腐剂及分散剂。
下面以具体的实施例对本发明进行详细说明。
实施例一
1.将血液样本直立放置静置3天,至红细胞与血浆完全分层,去除上血小板及中间层白细胞,使用生理盐水洗涤3次,得到纯化的红细胞悬浮液;
2.配制处理试剂A和处理试剂B:
处理试剂A:
试剂名称 | 浓度 |
龙葵碱 | 3g/L |
亚硝酸钠 | 1g/L |
磷酸二氢钾 | 0.2g/L |
十二水合磷酸氢二钠 | 2.9g/L |
氯化钠 | 8g/L |
PC300 | 5g/L |
纯水 | 1L |
处理试剂B:
试剂名称 | 浓度 |
磷酸二氢钠 | 0.4g/L |
磷酸氢二钠 | 5.8g/L |
氯化钠 | 5g/L |
甲醛 | 0.3g/L |
氟化钠 | 2g/L |
纯水 | 1L |
3.取适量步骤1中制得的红细胞悬浮液与上述处理试剂A按1:1比例进行混合,混合后放入37℃水浴锅处理1h,使得细胞膜的流动性增加,进而可以使细胞内部蛋白及环境处理更充分;
4.步骤3处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次,并与处理试剂B按1:2比例进行混合,室温放置1h,以降低细胞膜的流动性,减缓红细胞的代谢活性,增加细胞的稳定性;
5.将步骤4处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3遍,使用保存液稀释进行保存,得到红细胞模拟物粒子。
将实施例一中制得的红细胞模拟物粒子在血细胞分析仪上进行监测,监测周期为20周,每周测试1次,每次取3个重复测试结果的平均值,观察红细胞MCV参数的变化。最终结果,红细胞平均体积变化的极值为1.6fl,请参考图1。
实施例二
1.将血液样本直立放置静置3天,至红细胞与血浆完全分层,去除上血小板及中间层白细胞,使用生理盐水洗涤3次,得到纯化的红细胞悬浮液;
2.配制处理试剂A和处理试剂B:
处理试剂A:
试剂名称 | 浓度 |
山莨菪碱 | 4.5g/L |
氯化汞 | 2.5g/L |
柠檬酸钠 | 12g/L |
硫柳汞钠 | 1g/L |
纯水 | 1L |
处理试剂B:
试剂名称 | 浓度 |
柠檬酸钠 | 10g/L |
多聚甲醛 | 0.6g/L |
氟化铯 | 0.5g/L |
纯水 | 1L |
3.取适量步骤1中制得的红细胞悬浮液与上述处理试剂A按1:2比例进行混合,混合后放入37℃恒温培养箱放置1h,使得细胞膜的流动性增加,进而可以使细胞内部蛋白及环境处理更加充分;
4.步骤3处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次,并与处理试剂B按1:1比例进行混合,室温放置1h,以降低细胞膜的流动性,减缓红细胞的代谢活性,增加细胞的稳定性;
5.将步骤4处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3遍,使用保存液稀释进行保存,得到红细胞模拟物粒子。
将实施例二中制得的红细胞模拟物粒子在血细胞分析仪上进行监测,监测周期为20周,每周测试1次,每次取3个重复测试结果的平均值,观察红细胞MCV参数的变化。最终结果,红细胞平均体积变化的极值为2.3fl,请参考图2。
实施例三
1.将血液样本直立放置静置3天,至红细胞与血浆完全分层,去除上血小板及中间层白细胞,使用生理盐水洗涤3次,得到纯化的红细胞悬浮液;
2.配制处理试剂A和处理试剂B:
处理试剂A:
试剂名称 | 浓度 |
莲心碱 | 8g/L |
硫酸铜 | 1.5g/L |
甲基异噻唑啉酮 | 0.8g/L |
Tris缓冲溶液 | 1L |
处理试剂B:
试剂名称 | 浓度 |
氟化铍 | 0.8g/L |
戊二醛 | 0.08g/L |
Tris缓冲溶液 | 1L |
3.取适量步骤1中制得的红细胞悬浮液与上述处理试剂A按1:2比例进行混合,混合后放入37℃水浴锅处理1h,使得细胞膜的流动性增加,进而可以使细胞内部蛋白及环境处理更充分;
4.步骤3处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3次,并与处理试剂B按1:2比例进行混合,室温放置0.5h,以降低细胞膜的流动性,减缓红细胞的代谢活性,增加细胞的稳定性;
5.将步骤4处理后的红细胞使用生理盐水洗涤3遍,使用保存液稀释进行保存,得到红细胞模拟物粒子。
将实施例三中制得的红细胞模拟物粒子在血细胞分析仪上进行监测,监测周期为20周,每周测试1次,每次取3个重复测试结果的平均值,观察红细胞MCV参数的变化。最终结果,红细胞平均体积变化的极值为1.8fl,请参考图3。
实施例一至实施例三说明,采用本发明的制备方法制得的红细胞模拟物粒子具有很好的体积稳定性。本发明制备的红细胞模拟物粒子在一定期限内MCV(平均红细胞体积)变化较小,体积稳定,能够有效模拟红细胞特征,可以应用于血液细胞分析质控物及校准物中,对红细胞的分析测定进行准确的质量控制。
综上所述,本发明提供一种红细胞模拟物粒子、其制备方法及含该红细胞模拟物粒子的质控物或校准物,采用该制备方法可对人红细胞及动物红细胞进行处理,可以增加红细胞的稳定性,延长红细胞的保存时间,使用该制备方法制备的红细胞模拟物粒子可用于人或动物血细胞分析仪用质控物及校准物的模拟粒子。
该制备方法采用两种处理试剂,处理试剂A用于增加细胞膜流动性,使氧化剂及防腐剂可以更加均匀,更加深入的处理红细胞,对细胞中蛋白的氧化及防腐效果更加充分;处理试剂B用于降低细胞膜流动性,使细胞膜上的蛋白变性,降低细胞活性,减缓细胞的代谢活动,从而达到增加红细胞的稳定性,延长红细胞的保存时间的目的。且本发明所涉及的试剂均为常规试剂,易采购。将处理后的红细胞使用自配的保存液进行保存,置于2-8℃环境下进行储存,得到红细胞模拟物悬浮液,也可以与其他白细胞模拟物及血小板模拟物混合制成血液质控物或校准物。
本文所描述的概念在不偏离其精神和特性的情况下可以实施成其它形式。所公开的具体实施例应被视为例示性而不是限制性的。因此,本发明的范围是由所附的权利要求,而不是根据之前的这些描述进行确定。在权利要求的字面意义及等同范围内的任何改变都应属于这些权利要求的范围。
Claims (12)
1.一种红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)使用离心、静置的方式去除血液样本中的白细胞及血小板,并进行洗涤,得到纯化的红细胞悬浮液;
(2)配置红细胞处理液,所述红细胞处理液包括处理试剂A和处理试剂B,所述处理试剂A包含:生物碱、重金属盐、缓冲体系及防腐剂,将所述处理试剂A的渗透压控制在220-1500mOsm/L,PH值控制在6-10;所述处理试剂B包含:氟化物、醛类及缓冲体系,将所述处理试剂B的渗透压控制在220-1500mOsm/L,PH值控制在6-10;
(3)取适量所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按一定比例混合,混合后放入37℃环境下处理1h;
(4)将步骤(3)处理后的红细胞进行洗涤,并与所述处理试剂B按一定比例混合,室温放置0.5h或1h;
(5)将步骤(4)处理后的红细胞进行洗涤、保存,得到红细胞模拟物粒子。
2.如权利要求1所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中静置的方式为:将血液样本采用直立放置的方式静置3天。
3.如权利要求1所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中的所述37℃环境为37℃水浴锅或37℃恒温培养箱。
4.如权利要求1所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤(5)中保存红细胞的方式为:使用自配的保存液稀释并置于2-8℃环境下进行保存,所述保存液包含缓冲体系、糖类、防腐剂及分散剂。
5.如权利要求1所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述处理试剂A包含:龙葵碱3g/L,亚硝酸钠1g/L,磷酸二氢钾0.2g/L,十二水合磷酸氢二钠2.9g/L,氯化钠8g/L,PC3005g/L及纯水1L;所述处理试剂B包含:磷酸二氢钠0.4g/L,磷酸氢二钠5.8g/L,氯化钠5g/L,甲醛0.3g/L,氟化钠2g/L及纯水1L。
6.如权利要求5所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按1:1的比例混合;所述步骤(4)中,洗涤后的样液与所述处理试剂B按1:2的比例混合。
7.如权利要求1所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述处理试剂A包含:山莨菪碱4.5g/L,氯化汞2.5g/L,柠檬酸钠12g/L,硫柳汞钠1g/L及纯水1L;所述处理试剂B包含:柠檬酸钠10g/L,多聚甲醛0.6g/L,氟化铯0.5g/L及纯水1L。
8.如权利要求7所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按1:2的比例混合;所述步骤(4)中,洗涤后的样液与所述处理试剂B按1:1的比例混合。
9.如权利要求1所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述处理试剂A包含:莲心碱8g/L,硫酸铜1.5g/L,甲基异噻唑啉酮0.8g/L及Tris缓冲溶液1L;所述处理试剂B包含:氟化铍0.8g/L,戊二醛0.08g/L及Tris缓冲溶液1L。
10.如权利要求9所述的红细胞模拟物粒子的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述红细胞悬浮液与所述处理试剂A按1:2的比例混合;所述步骤(4)中,洗涤后的样液与所述处理试剂B按1:2的比例混合。
11.一种红细胞模拟物粒子,其特征在于,所述红细胞模拟物粒子由权利要求1-10任一项所述的制备方法制得。
12.一种血液细胞分析质控物或校准物,其特征在于,包含按照权利要求1-10任一项所述的制备方法制得的红细胞模拟物粒子。
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