CN1891815B - 制备细胞模拟物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种制备细胞模拟物的方法，取得动物红细胞后，将所述红细胞进行固定处理，再除去固定剂，将所述除去固定剂后的红细胞再进行水浴处理，控制温度使该红细胞性质发生变化至更加稳定的阶段，同时所述红细胞的体积被调节而达到要制备的细胞模拟物体积要求，所述水浴的温度为40℃～60℃。同现有技术相比较，本发明的技术效果在于：1、被处理的红细胞的体积稳定性强，符合正常人白细胞的分布，使用过程中不会产生异常报警信息，满足质量控制要求；2、样本来源丰富而且没有限制。
Description
技术领域 本发明涉及来自动物的血红细胞医用配制技术，特别是涉及利用动物的血红细胞制备细胞模拟物的技术。
背景技术 人外周白细胞主要由淋巴、单核、粒细胞3群细胞组成，它们在体积上是一个连续分布的整体，而血小板是体积更小的一个分布群体，典型的测试分布如图1、图2所示。人血液测定主要通过血液细胞分析仪进行，为了保证测试仪器的准确，需要制备长期稳定的质控和校准物进行质量控制和校准维护。在多参数的质控物中，含有一定大小的细胞粒子，称为人细胞模拟物或类细胞。这些粒子一般为塑胶粒子或体积固定后的动物红细胞粒子。美国专利US3541137、US4179398、US4264470、US4704364等描述了3分群血液细胞分析仪质控的白细胞和血小板研制方法，其中人粒细胞模拟物可以从爬行类、鱼类红细胞经过固定后进行模拟。特别指出了鳄鱼和鲨鱼可以使用，人单核细胞使用火鸡红细胞固定处理；淋巴使用人或其他哺乳动物红细胞处理，血小板使用山羊红细胞处理等等。
现有细胞模拟物存在一定的不足，如使用塑胶粒子成本比较高，不适合降低临床工作的成本，广泛应用限制大；而使用动物源的固定红细胞粒子一般不容易使其体积处于人细胞正常分布范围，特别是粒细胞容易产生体积变化而导致测量数据的变异较大而使质控失败，或产生无意义的报警信息，如图3、图4-1和图5-1所示。模拟白细胞的体积变化会导致整个白细胞3个分群比例发生变化，产生错误的质控信息，所以很多质控物产品无法提供分类信息的质量控制能力。
发明内容 本发明要解决的技术问题在于避免上述现有技术的不足之处而提出一种制备细胞模拟物的方法，解决固定粒子的体积变化问题，使人细胞模拟物的体积长期保持稳定。
本发明解决所述技术问题可以通过采用以下技术方案来实现：
提出一种制备细胞模拟物的方法，选用的所述动物红细胞经过固定处理后继续进行 水浴处理，控制温度使该红细胞性质发生变化至更加稳定的阶段，同时所述红细胞的体积被调节而达到要制备的细胞模拟物体积要求，所述水浴的温度为40℃～60℃。
同现有技术相比较，本发明的技术效果在于：
1、被处理的红细胞的体积稳定性强，符合正常人细胞的分布，满足质量控制要求；
2、样本来源丰富而且没有限制，而现有技术中提到的样本来源如鳄鱼属于保护动物，鲨鱼加工难度比较高。
附图说明
图1是正常人外周血液白细胞体积测试分布示意图；
图2是正常人血小板体积测试分布示意图；
图3是粒细胞模拟物体积变化导致白细胞的3分群细胞比例发生变化的测试分布示意图；
图4是本发明实施例一制备过程中细胞测试分布情况示意图；其中图4-1是细胞进行固定处理后的测试分布情况示意图，图4-2是细胞进行水浴处理后的测试分布情况示意图；
图5是本发明实施例二制备过程中细胞测试分布情况示意图；其中图5-1细胞进行固定处理后的测试分布情况示意图，图5-2是细胞进行水浴处理后的测试分布情况示意图；
图6是本发明实施例三制备过程中细胞测试分布情况示意图；其中图6-1是细胞进行固定处理后的测试分布情况示意图，图6-2是细胞进行水浴处理后的测试分布情况示意图；
图中，横坐标单位为细胞体积单位：飞升(f1)，纵坐标单位为细胞数量单位；R2、R3、R4为细胞异常分布报警提示信息。
具体实施方式 以下结合附图所示之最佳实施例作进一步详述。
将动物细胞体积固定后模拟人白细胞已经有多年历史，但由于动物红细胞不容易符合人细胞体积的正常分布，所以对细胞模拟物的处理和保存提出了很高要求。即使这样，目前也缺乏非常稳定不变的红细胞源性的细胞模拟物。
通过研究发现，细胞随温度变化体积会发生一定的变化，固定细胞也是如此，所以 可以通过温度的变化来将固定细胞体积处理到一个更稳定的阶段。因而可以通过温度控制处理的方法处理出希望的细胞模拟物。比如人淋巴细胞体积分布比较窄，使用人或其他哺乳动物红细胞加工不容易满足要求。含细胞核的禽类或鸟类红细胞分布就比较窄符合人淋巴细胞体积分布特性，但其体积往往偏离人淋巴细胞体积范围，此时使用温度控制调节体积范围，就可以制造比较好的淋巴细胞模拟物。再以人粒细胞模拟物为例，美国专利US4704364介绍的爬行类、鱼类的红细胞固定后虽然可以一定时间内符合人粒细胞正常分布，但随着时间延长，可能会发生不稳定情况。而本专利则可以解决这一问题：使用高温度条件对红细胞进行处理，处理后的红细胞会到达一个更稳定的体积阶段。另外，通过研究进一步证明，粒细胞模拟物体积最好使用更大的拟白细胞粒子来源，因为经过高温处理后细胞体积一般会缩减。为了解决这一问题，通过使用两栖类动物的固定红细胞进行处理模拟，其红细胞一般情况下比爬行类、鱼类红细胞大，经过高温处理后体积缩减，所以可更好地符合人正常粒细胞的分布特征。对于其他淋巴细胞、单核、血小板模拟物也有同样道理。
本发明方法是在将所述红细胞进行固定处理后，继续进行水浴处理，控制温度使该红细胞性质发生变化至更加稳定的阶段，同时所述红细胞的体积被调节而达到预制备的细胞模拟物体积要求，所述水浴的温度为40℃～60℃。
所述取得动物红细胞和将所述红细胞进行固定处理和温度控制处理的步骤具体如下：
1、配制试剂。
抗凝剂：0.8％的生理盐水加入1％的乙二胺四乙酸二钠(EDTA2钠盐)；
基础试剂：1～5g聚乙二醇(PEG)
1～5g 葡萄糖
0.5～5g 柠檬酸钠
0.1～2g 青霉素
0.1～2g 链霉素
0.5～5g 硫柳汞
1～5g 氯化钠
将上述成份加入蒸馏水配制为1L，使用氯化钠调节渗透压到300mOsm/kgH2O(人正常渗透压为300mOsm/kgH2O)，可以使用盐酸和氢氧化钠调节试剂ph范围。
固定试剂：使用基础试剂配制0.5～5％甲醛溶液，还可以是一定浓度的聚甲醛、戊二醛、烯醛或混合醛。
2、处理过程
(1)将取得的动物血液使用抗凝剂抗凝；
(2)使用基础试剂对抗凝后的血液进行离心洗涤1～3次，去掉上清中的血浆蛋白成分；可以将多个样本进行混合以增加处理样本总量；
(3)固定处理：加入固定试剂静置30分钟～3小时；
(4)使用基础试剂或者生理盐水充分离心洗涤去掉甲醛，静置沉淀红细胞，此时固定红细胞体积会比人粒细胞正常分布大；
(5)温度控制处理：使用高温水浴处理固定细胞，处理后固定红细胞体积落在人粒细胞正常分布范围，所述水浴处理温度为40℃～60℃；
(6)可以继续洗涤最后保存，即得要制备的细胞模拟物。
实施例一：取得牛蛙红细胞，首先进行固定处理，再进行温度控制处理，具体处理过程如上述。所述固定试剂是使用上述基础试剂配制的浓度为3％的甲醛溶液。进行温度控制处理时，将水浴温度控制为45℃，对经过固定处理的牛蛙红细胞水浴处理2小时，即得要制备的人粒细胞模拟物。经过固定处理和温度控制处理的牛蛙红细胞测试分布情况如图4所示。两两比较图4-1、图4-2和图1，可以得知，经过固定处理和温度控制处理的牛蛙红细胞体积落在人粒细胞正常分布范围，不再出现异常报警信息R4。
实施例二：取得牛蛙红细胞，首先进行固定处理，再进行温度控制处理，具体处理过程如上述。所述固定试剂是使用上述基础试剂配制的浓度为3％的甲醛溶液。进行温度控制处理时，将水浴温度控制为60℃，对经过固定处理的牛蛙红细胞水浴处理30分钟。经过固定处理和温度控制处理的牛蛙红细胞测试分布情况如图5所示。两两比较图5-1、图5-2和图1，可以得知，经过固定处理和温度控制处理的牛蛙红细胞也落在人粒细胞正常分布范围。
实施例三：取得鸡红细胞，首先进行固定处理，再进行温度控制处理。具体处理过程如上述。所述固定试剂是使用上述基础试剂配制的浓度为3％的甲醛溶液。进行温度控 制处理时，将水浴温度控制为40℃，对经过固定处理的鸡红细胞水浴处理2小时，经过固定处理和温度控制处理的鸡红细胞测试分布情况如图6所示。两两比较图6-1、图6-2和图1，可以得知，经过固定处理和温度控制处理的鸡红细胞落在人淋巴细胞正常分布范围。
本发明的技术特色在于将体积固定处理过的细胞进行温度控制进一步对细胞体积进行处理，使其结构达到更稳定的阶段。所以本发明可以应用在其他相似研究领域。比如使用红细胞模拟体积差异比较大的淋巴、单核、血小板等等。制备人粒细胞模拟物的红细胞可以从两栖类动物如蛙类取得；制备人淋巴细胞模拟物的红细胞从禽类或鸟类动物取得，如家鸡，鸽。
使用本发明方法还可以制备非人血细胞的其他细胞模拟物。
Claims (9)
1.一种制备细胞模拟物的方法，取得动物红细胞后，将所述红细胞用固定试剂进行固定处理，其特征在于：
选用的所述动物红细胞经过固定处理后除去固定试剂中的醛，然后继续进行水浴处理，控制温度使该红细胞性质发生变化至更加稳定的阶段，同时所述红细胞的体积被调节而达到要制备的细胞模拟物体积要求，所述水浴的温度为40℃～60℃；
所述固定试剂是指：使用基础试剂配制0.5～5％的醛类溶液，包括甲醛、聚甲醛、戊二醛；
所述基础试剂是指：1～5g聚乙二醇、1～5g葡萄糖、0.5～5g柠檬酸钠、0.1～2g青霉素、0.1～2g链霉素、0.5～5g硫柳汞和1～5g氯化钠，使用蒸馏水配制为1L，使用氯化钠调节渗透压到人正常渗透压水平。
2.如权利要求1所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：所述取得动物红细胞和将所述红细胞进行固定处理和水浴处理的步骤具体如下：
①将取得的动物血液使用抗凝剂抗凝；
②使用所述基础试剂对抗凝后的血液进行离心洗涤，去掉上清中的血浆蛋白成分；
③加入所述固定试剂静置30分钟～3小时；
④使用所述基础试剂或者生理盐水充分离心洗涤去掉固定试剂中的醛，静置沉淀红细胞，获得的红细胞体积比要制备的细胞模拟物体积大；
⑤使用水浴处理固定所述红细胞，处理后的固定红细胞体积落在人细胞体积的正常分布范围。
3.如权利要求2所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：所述抗凝剂是指0.8％生理盐水加入1％的乙二胺四乙酸二钠。
4.如权利要求1或2所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：所述细胞模拟物是血小板模拟物。
5.如权利要求1或2所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：所述细胞模拟物是白细胞模拟物。
6.如权利要求5所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：从两栖类动物取得红细胞制备人粒细胞模拟物，或者，从禽类或鸟类动物取得红细胞制备人淋巴细胞模拟物。
7.如权利要求6所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：所述禽类动物是家鸡，所述鸟类动物是鸽。
8.如权利要求6所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：所述两栖类动物是蛙类。
9.如权利要求8所述的制备细胞模拟物的方法，其特征在于：从牛蛙取血，所述经过固定处理后的牛蛙红细胞的水浴处理温度为45度，水浴时间为2小时。
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