CN105714288B - 一种制备量子点自组装膜的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了利用Ni‑NTA作用来制备量子点自组装膜的方法，该方法包括：在蒸镀金属层基底表面修饰羧基；在水溶性量子点表面修饰氮川三乙酸和二价镍离子；以及表面修饰羧基的蒸镀金属层基底浸在上述修饰氮川三乙酸和二价镍离子的量子点溶液中，真空条件下，使量子点组装在蒸镀金属层基底上。本发明还提供了包含蒸镀金属层基底以及通过上述方法制备的自组装膜的材料。本发明还提供所述自组装膜在光电材料、生物材料等领域的应用。本发明的制备方法操作简单、节省时间、可控性好，制备的量子点纳米颗粒自组装膜成膜性好、性质稳定，在光电材料，生物材料等领域都有广泛的应用。

Description

一种制备量子点自组装膜的方法

技术领域

本发明属于纳米材料制备技术与纳米材料组装领域，具体而言，本发明涉及一种利用Ni-NTA作用来制备量子点自组装膜的方法，包含该自组装膜的材料以及该自组装膜的应用。

背景技术

根据相关文献和专利报道，量子点(QD)，即半导体纳米粒子，具有优异的光学性质，如宽吸收，窄发射且尺寸可调和高量子产率等，更是优秀的荧光共振能量转移和电子转移的给体，也被人们期待用来开发新一代的太阳能电池和新型的光电智能材料。

由于CdSe纳米颗粒具有优良的光学性质以及较好的稳定性，在太阳能电池，光学材料，生物标记等方面都有广泛的应用，同时，纳米光电器件，生物传感器的研究需要纳米颗粒自组装膜。自组装膜是分子通过化学键相互作用自发吸附在固/液或气/固界面而形成的热力学稳定和能量最低的有序膜。形成自组装膜的化学作用主要有静电作用、疏水作用、氢键作用以及π-π堆积作用，这些力的作用都不强，因此在利用这些作用力来形成纳米颗粒自组装膜时，成膜性不好，颗粒容易脱落。因此，当前需要一种能够形成具有更好的成膜性和颗粒稳定性的纳米颗粒自组装膜的方法。

发明内容

基于现有技术的不足，本申请人发现，Ni-NTA与羧基的螯合作用比较强，利用Ni-NTA作用来提纯蛋白已经是很成熟的工艺，因此，本申请提供了一种利用Ni-NTA作用来制备纳米颗粒自组装膜的方法。

本发明的一个目的是提供一种利用Ni-NTA作用(Ni与NTA和蒸镀金属层基底表面羧基的螯合作用)来制备量子点自组装膜的方法。本发明的另一个目的是提供包含蒸镀金属层基底和上述制备的自组装膜的材料。本发明的又一个目的是提供上述制备的自组装膜的应用。

本发明的目的是采用如下技术方案实现的。

一方面，本发明提供一种制备量子点自组装膜的方法，该方法包括如下步骤：

(1)制备表面修饰羧基的蒸镀金属层基底：

将蒸镀金属层基底浸没在浓度为5mM/L-10mM/L的长链羧酸中16-24h，得到表面修饰羧基的蒸镀金属层基底；

(2)制备表面修饰氮川三乙酸(Nitilotriacetic acid，NTA)与Ni²⁺的量子点：

在量子点中分别加入EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)水溶液和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)水溶液以活化量子点表面羧基基团，然后再加入NTA水溶液进行反应，反应后加入二价镍盐溶液，离心分离，得到表面修饰NTA和Ni²⁺的量子点；

其中，所述EDC水溶液的浓度为1mM到1M，优选为50mM到0.5M，更优选为0.1M；

所述NHS水溶液的浓度为1mM到1M，优选为50mM到0.5M，更优选为0.4M；

所述NTA水溶液的浓度为1mM到1M，优选为5mM到0.1M，更优选为10mM；所述二价镍盐溶液的浓度为1mM到1M，优选为5mM到0.1M，更优选为10mM；

以及

(3)制备量子点自组装膜

将步骤(1)制备的表面修饰羧基的蒸镀金属层基底浸没在步骤(2)制备的表面修饰NTA与Ni²⁺的量子点溶液中，在室温及真空下孵化4-6h，得到位于蒸镀金属层基底表面的量子点自组装膜。

优选地，所述步骤(1)中的蒸镀金属层基底中的基底选自玻璃、石英和/或硅基底，优选为高折射率的玻璃基底。蒸镀金属层基底的制备是通过热蒸镀法或磁控溅射蒸镀法在清洗后的基底表面镀金、银和/或铝等金属，所述金属优选为金；所述蒸镀金属层的厚度为10nm到100nm，优选为30nm到60nm，更优选为50nm。

优选地，所述步骤(1)中的长链羧酸为含有巯基且链长大于六个碳原子的脂肪酸，优选为巯基十一酸。

优选地，所述步骤(2)中量子点选自CdTe、CdSe和CdSe/ZnS等量子点纳米颗粒，优选为CdSe纳米颗粒。

优选地，所述步骤(2)中量子点为水溶性量子点，其制备方法包括：通过高温油相法制备油溶性量子点以及通过配体置换法将所述油溶性量子点转换为水溶性量子点的步骤。

优选地，当量子点为CdSe纳米颗粒时，其制备方法包括：

将三辛基氧膦、十二胺、十四烷基磷酸和氧化镉混合，加热，抽真空30-60min，惰性气体保护，加热，加入硒的三辛基膦溶液，反应4-6h，得到油溶性CdSe纳米颗粒；优选地，所述油溶性CdSe纳米颗粒的浓度为5×10^-6mol/L-5×10^-2mol/L，更优选地，为5×10^-3mol/L-5×10^-2mol/L；以及

将得到的油溶性CdSe纳米颗粒分散于有机溶剂中，加入巯基乙酸，磁力搅拌，反应后加入氢氧化钠溶液震荡，离心分离，得到水溶性CdSe纳米颗粒；

优选地，所述有机溶剂为正己烷或甲苯，所述油溶性CdSe纳米颗粒与所述有机溶剂的摩尔比为1：1-5：1。

优选地，在步骤(2)中，所述量子点的浓度为5×10^-6mol/L-5×10^-2mol/L，更优选地，所述量子点的浓度为5×10^-3mol/L-5×10^-2mol/L；

优选地，所述二价镍盐为硫酸镍或者氯化镍，其浓度为1×10^-6mol/L-1×10^-1mol/L，所述二价镍盐溶液的pH值为10-14。

优选地，所述步骤(2)还包括在活化羧基前，将所述量子点分散于pH为5-6的磷酸盐缓冲溶液中。

另一方面，本发明还提供一种包含蒸镀金属层基底以及通过上述方法制备的量子点自组装膜的材料，其结构包括基底表面，基底表面的金属覆盖层，表面化学修饰和量子点层。

又一方面，本发明还提供通过上述方法制备的量子点自组装膜在制备光电材料、生物材料中的应用，优选地，所述生物材料为表面等离子共振动力学检测生物芯片，表面荧光增强的分子识别生物芯片，以及太阳能电池的生物电极。

本发明的原理是：如图1所示，在蒸镀金属层基底表面修饰羧基；在量子点表面(例如CdSe纳米颗粒表面)修饰Ni²⁺与NTA；将表面修饰羧基的蒸镀金属层基底与上述修饰后的量子点相结合，从而形成量子点(例如CdSe纳米颗粒)自组装膜。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明制备量子点自组装膜的方法包括如下步骤(以量子点CdSe纳米颗粒为例)：

第一步：高温油相法制备油溶性CdSe纳米颗粒

将一定量的三辛基氧膦、十二胺、十四烷基磷酸、氧化镉混合，加热，抽真空，惰性气体保护，加热，加入一定量的硒的三辛基膦溶液，反应一定时间，停止加热，得到需要粒径的CdSe纳米颗粒，离心分离得到粒径均一的CdSe纳米颗粒；

采用油相法合成具有粒度可控、形貌均匀、无团聚等特点；且纳米颗粒经过修饰后，仍然可以保持粒度均一的特点，为进一步形成自组装膜提供了良好的基础；当然，如本领域所公知的，也可以采用其他方法来制备油溶性量子点。

第二步：配体置换法制备水溶性的CdSe纳米颗粒

取一定量的第一步制备的油溶性CdSe纳米颗粒，在正己烷中分散，加入巯基乙酸，磁力搅拌，反应一段时间，加入氢氧化钠溶液震荡，离心分离，得到水溶性的CdSe纳米颗粒。

第三步：制备表面修饰NTA与Ni²⁺的CdSe纳米颗粒

取一定量的第二步制备的水溶性CdSe纳米颗粒，在pH为5-6的磷酸盐缓冲溶液中分散，加入EDC与NHS溶液活化羧基后，加入NTA的水溶液，反应一段时间，加入硫酸镍溶液，离心分离，得到表面修饰了NTA与Ni²⁺的CdSe纳米颗粒。

第四步：制备表面修饰羧基的蒸镀金属层基底

在玻璃片的表面真空蒸镀金，使金层厚度为50nm左右，将镀金的玻璃片浸没在浓度为5mM/L-10mM/L的巯基十一酸的溶液中16-24h，三次水冲洗，吹干，得到表面修饰了羧基的蒸镀金属层基底，即镀金玻璃片。

以上第四步制备表面修饰羧基的蒸镀金属层基底也可以在第一步至第三步中任何一步之前或同时进行。

第五步：制备CdSe纳米颗粒自组装膜

将第三步制备的表面修饰NTA与Ni²⁺的CdSe纳米颗粒用三次水分散，将第四步制备的表面修饰羧基的蒸镀金属层基底浸没其中，真空孵化4-6h，水洗，氮气吹干，得到在镀金玻璃片表面的CdSe纳米颗粒自组装膜。

与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：

本发明首次利用Ni-NTA作用来制备纳米颗粒自组装膜；

本发明的自组装膜采用了Ni-NTA与羧基的螯合作用，该作用比传统形成自组装膜的化学作用，例如静电作用、疏水作用、氢键作用以及π-π堆积作用等都强，因此成膜性好，不容易从基底表面脱落；

本发明利用Ni-NTA作用来制备量子点自组装膜的方法可以先用高温油相法得到粒度均匀的纳米颗粒(例如CdSe纳米颗粒)，采用油相法合成具有粒度可控、形貌均匀、无团聚等特点；且纳米颗粒经过修饰后，仍然可以保持粒度均一的特点，为进一步形成自组装膜提供了良好的基础；

本发明利用Ni-NTA作用来制备量子点自组装膜的方法操作简单、节省时间、可控性好，制备的CdSe纳米颗粒自组装膜成膜性好、性质稳定。该量子点表面的制备，与其他技术方法不同的是，可以解决量子点在芯片表面的有序和高效的固定，同时实现蛋白质的固定和电子能量的传递，并容易与现今存在的带有标签的表达蛋白相结合，实现功能蛋白在表面的捕获和固定，开发在生物传感器，生物芯片，以及生物太阳能电池等方面的应用。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中：

图1为本发明制备量子点自组装膜的实验原理图；

图2为水溶性CdSe纳米颗粒的透射电镜图；

图3为水溶性CdSe纳米颗粒的尺寸分布统计图；以及

图4为本发明制备的镀金玻璃片表面的CdSe纳米颗粒自组装膜的扫描电镜图。

图5为本发明的镀银金双金属层的玻璃片表面的CdTe纳米颗粒自组装膜应用于表面等离子共振成像动力学检测芯片中的检测结果。

图6为本发明的镀金玻璃片表面的CdSe/ZnS纳米颗粒自组装膜应用于表面荧光增强生物分子相互作用芯片的检测结果。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明所提供的利用Ni-NTA作用来制备量子点自组装膜的方法进行详细说明。

实施例1镀金玻璃片表面的CdSe纳米颗粒自组装膜制备方法以及生物太阳能电池的应用

1、高温油相法制备油溶性CdSe纳米颗粒

将2g的三辛基氧膦、2.8g的十二胺、0.3g的十四烷基磷酸、0.05g的氧化镉在三口烧瓶中混合，磁力搅拌，抽真空，惰性气体保护，加热至300℃，反应6h，加入1mL硒的三辛基膦溶液，反应15min，停止加热，得到粒径为5nm的油溶性CdSe纳米颗粒，离心分离得到粒径均一的油溶性CdSe纳米颗粒；

2、配体置换法制备水溶性CdSe纳米颗粒

取第1步制备的油溶性CdSe纳米颗粒，加入4mL正己烷，CdSe纳米颗粒的浓度为5×10^-3mol/L，加入2mL巯基乙酸，磁力搅拌，反应4h，加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液1mL，震荡，离心分离，得到水溶性CdSe纳米颗粒；

3、水溶性CdSe纳米颗粒的表面修饰

取第2步制备的水溶性CdSe纳米颗粒，加入pH为5.7的磷酸盐缓冲溶液2mL，得到浓度为5×10^-3mol/L的水溶性CdSe纳米颗粒，加入浓度为0.2mol/L EDC溶液和浓度为0.05mol/L NHS溶液各1mL，反应30min，离心分离得到活化羧基的水溶性CdSe纳米颗粒，将该纳米颗粒加入浓度为10^-2mol/L的NTA水溶液2mL，反应1h，加入4×10^-2mol/L NiSO₄碱性溶液1mL，离心分离，得到表面修饰了NTA与Ni²⁺的CdSe纳米颗粒；

4、镀金玻璃片表面的修饰

在玻璃片的表面真空蒸镀金，金层的厚度是50nm左右，将镀金玻璃片浸没在浓度为5×10^-3mol/L的巯基十一酸的溶液中16h，三次水冲洗，吹干，得到表面修饰了羧基的镀金玻璃片；

5、制备CdSe纳米颗粒自组装膜

将第3步得到的表面修饰NTA与Ni²⁺的CdSe纳米颗粒用2mL三次水分散，将第4步得到的表面修饰羧基的镀金玻璃片浸没在其中，室温真空孵化6h，水洗，氮气吹干，得到在镀金玻璃片表面的CdSe纳米颗粒自组装膜，该自组装膜的扫描电镜图如图4所示。

6、蛋白质原位表达

将表达光合蛋白的带有his标签的质粒DNA于室温条件下，与CellFree Science公司出产的麦胚无细胞表达体系混合并在37摄氏度温度下孵育，表达该带有his标签的光合作用蛋白。表达出的蛋白质将通过其标签被CdSe纳米颗粒自组装膜通过Ni²⁺捕获并形成整张芯片的光合作用蛋白的固定。其芯片侧端与电极相连接，其产生的电子传递给芯片基底，实现生物太阳能电池的进一步应用。其生物太阳能电池实验部分，不在此处赘述。

实施例2镀银金双金属层的玻璃片表面的CdTe纳米颗粒自组装膜制备方法以及基于表面等离子共振成像动力学检测芯片的应用

1、水溶性CdTe纳米颗粒的表面修饰

水溶性带有羧基末端的CdTe纳米颗粒从合作伙伴国家纳米科学中心制备完成后，加入pH为5.7的磷酸盐缓冲溶液4mL，得到浓度为2.5×10^-3mol/L的水溶性CdTe纳米颗粒，加入浓度为0.2mol/L EDC溶液和浓度为0.05mol/LNHS溶液各1mL，反应60min，离心分离得到活化羧基的水溶性CdTe纳米颗粒，将该纳米颗粒加入浓度为10^-2mol/L的NTA水溶液2mL，反应2h，加入6×10^-2mol/L NiSO₄碱性溶液1mL，离心分离，得到表面修饰了NTA与Ni²⁺的CdTe纳米颗粒；

2、镀银金双金属层的玻璃片表面的修饰

在玻璃片的表面真空蒸镀银42nm后，蒸镀13nm的金层，将镀银金双金属层的玻璃片浸没在浓度为5mM的巯基十一酸的溶液中过夜，酒精清洗后，三次水冲洗，吹干，得到表面修饰了羧基的镀金玻璃片；

3、制备CdTe纳米颗粒自组装膜

将第1步得到的表面修饰NTA与Ni²⁺的CdTe纳米颗粒用2mL三次水分散，将第2步得到的表面修饰羧基的镀银金双金属层的玻璃片浸没在其中，室温真空孵化6h，水洗，氮气吹干，得到在镀银金双金属层的玻璃片表面的CdTe纳米颗粒自组装膜，

4、表面等离子共振成像的生物分子的固定与检测

纯化的蛋白质乙肝病毒表面抗原，乙肝病毒表面抗体，乙肝病毒核心抗原，乙肝病毒核心抗体，艾滋病病毒p24抗原，艾滋病病毒gp41抗原、艾滋病病毒pg120抗原，丙肝病毒抗原，手足口病毒抗原等人类疾病的生物标志物固定在芯片表面。芯片由1mg/ml的BSA水溶液4度条件下封闭16小时后，在Plexera的表面等离子共振成像检测仪上检测，以及流过其对应相互作用的纯化抗体或抗原，其浓度范围为50ng/ml到2000ng/ml，溶剂为磷酸缓冲溶液。

检测结果如图5所示，EV71抗体特异性地识别病毒蛋白质的位点，具有很高的信噪比，可以作为免标记动力学分析的检测表面。抗体与靶标的稳定结合也说明了固定在芯片表面上的蛋白质具有稳定性。

实施例3镀金玻璃片表面的CdSe/ZnS纳米颗粒自组装膜制备方法以及基于表面荧光增强生物分子相互作用芯片的应用

1、水溶性CdSe/ZnS纳米颗粒的表面修饰

将水溶性带有羧基末端的CdSe/ZnS纳米颗粒(购自国家纳米科学中心)加入pH为5.7的磷酸盐缓冲溶液2mL，得到浓度为5×10^-3mol/L的水溶性CdSe/ZnS纳米颗粒，加入浓度为0.2mol/L EDC溶液和浓度为0.05mol/L NHS溶液各1mL，反应60min，离心分离得到活化羧基的水溶性CdSe/ZnS纳米颗粒，将该纳米颗粒加入浓度为10^-2mol/L的NTA水溶液4mL，反应3h，加入1×10^-2mol/L Ni₂Cl碱性溶液1mL，离心分离，得到表面修饰了NTA与Ni²⁺的CdSe/ZnS纳米颗粒；

2、镀金层的玻璃片表面的修饰

在玻璃片的表面真空蒸镀金30nm，将镀金层的玻璃片浸没在浓度为1mM的巯基十一酸的溶液中过夜，酒精清洗后，三次水冲洗，吹干，得到表面修饰了羧基的镀金玻璃片；

3、制备CdSe/ZnS纳米颗粒自组装膜

将第1步得到的表面修饰NTA与Ni²⁺的CdSe/ZnS纳米颗粒用3mL三次水分散，将第2步得到的表面修饰羧基的镀金玻璃片浸没在其中，室温真空孵化10h，水洗，氮气吹干，得到在镀金玻璃片表面的CdSe/ZnS纳米颗粒自组装膜。

4、表面等离子共振成像的生物分子的固定于检测

纯化的蛋白质乙肝病毒表面抗原，乙肝病毒核心抗原，艾滋病病毒p24抗原，艾滋病病毒gp41抗原、艾滋病病毒pg120抗原，丙肝病毒抗原，手足口病毒抗原等人类疾病的生物标志物固定在芯片表面。芯片由1mg/ml的牛奶水溶液下封闭过夜。芯片表面覆盖有由博鳌生物公司生产的反应盖玻片后，在芯片中注射患病人员疾病，其稀释比例为1:1000，其溶剂为PBS。清洗后加入Cy3-Cy5标记的人IgG抗体用于显色，其信号通过该量子点基底表面形成放大。

检测乙肝病毒核心抗原的荧光检测结果如图6所示，通过量子点的信号放大作用，检测信噪比高，点样点边缘清晰，适合用于高通量的蛋白质芯片，针对靶标进行筛选。

Claims (31)

1.一种制备量子点自组装膜的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)制备表面修饰羧基的蒸镀金属层基底：

将蒸镀金属层基底浸没在浓度为5mM-10mM的长链羧酸中16-24h，得到表面修饰羧基的蒸镀金属层基底；

(2)制备表面修饰NTA与Ni²⁺的量子点：

在量子点中分别加入EDC水溶液和NHS水溶液以活化量子点表面羧基基团，然后再加入NTA水溶液进行反应，反应后加入二价镍盐溶液，离心分离，得到表面修饰NTA和Ni²⁺的量子点；

其中，所述EDC水溶液的浓度为1mM到1M；所述NHS水溶液的浓度为1mM到1M；所述NTA水溶液的浓度为1mM到1M；所述二价镍盐溶液的浓度为1mM到1M；

(3)制备量子点自组装膜：

将步骤(1)制备的表面修饰羧基的蒸镀金属层基底浸没在步骤(2)制备的表面修饰NTA与Ni²⁺的量子点溶液中，在室温及真空下孵化4-6h，得到蒸镀金属层基底表面的量子点自组装膜。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中EDC水溶液的浓度为50mM到0.5M。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中EDC水溶液的浓度为为0.1M。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中NHS水溶液的浓度为50mM到0.5M。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中NHS水溶液的浓度为0.4M。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中NTA水溶液的浓度为5mM到0.1M。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中NTA水溶液的浓度为10mM。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中二价镍盐溶液的浓度为5mM到0.1M。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中二价镍盐溶液的浓度为10mM。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的基底选自玻璃、石英和/或硅基底表面。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中蒸镀金属层基底通过真空蒸镀法在基底表面镀金属层制备而成。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述金属选自金、银和/或铝。

13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中蒸镀金属层的厚度为10nm到100nm。

14.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中蒸镀金属层的厚度为30nm-60nm。

15.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中蒸镀金属层的厚度为50nm。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的长链羧酸为含有巯基且链长大于六个碳原子的脂肪酸。

17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的长链羧酸为巯基十一酸。

18.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的量子点选自CdTe、CdSe和CdSe/ZnS纳米颗粒。

19.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的量子点为CdSe纳米颗粒。

20.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的量子点的浓度范围为5×10^-6mol/L-5×10^-2mol/L。

21.根据权利要求20所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的量子点的浓度范围为5×10^-3mol/L-5×10^-2mol/L。

22.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的量子点为水溶性量子点，其制备方法包括通过高温油相法制备油溶性量子点以及通过配体置换法将所述油溶性量子点转换为水溶性量子点的步骤。

23.根据权利要求22所述的制备方法，其特征在于，当量子点为CdSe纳米颗粒时，其制备方法包括以下步骤：

将三辛基氧膦、十二胺、十四烷基磷酸和氧化镉混合，加热，抽真空30-60min，惰性气体保护，加热，加入硒的三辛基膦溶液，反应4-6h，得到油溶性CdSe纳米颗粒；

以及

将得到的油溶性CdSe纳米颗粒分散于有机溶剂中，加入巯基乙酸，磁力搅拌，反应后加入氢氧化钠溶液震荡，离心分离，得到水溶性CdSe纳米颗粒。

24.根据权利要求23所述的制备方法，其特征在于，所述油溶性CdSe纳米颗粒的浓度为5×10^-6mol/L-5×10^-2mol/L。

25.根据权利要求23所述的制备方法，其特征在于，所述油溶性CdSe纳米颗粒的浓度为5×10^-3mol/L-5×10^-2mol/L。

26.根据权利要求23所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为正己烷或甲苯，所述油溶性CdSe纳米颗粒与所述有机溶剂的摩尔比为1：1-5：1。

27.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述二价镍盐为硫酸镍或者氯化镍，其浓度为1×10^-6mol/L-1×10^-1mol/L，所述二价镍盐溶液的pH值为10-14。

28.根据权利要求1-15中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)还包括以下步骤：

在活化羧基前，将所述量子点分散于pH为5-6的磷酸盐缓冲溶液中。

29.一种包含蒸镀金属层基底以及根据权利要求1至28中任一项所述的方法制备的量子点自组装膜的材料，所述材料包括基底表面，基底表面的金属覆盖层，表面化学修饰和量子点层。

30.权利要求1至28中任一项所述的方法制备的量子点自组装膜或权利要求29所述的材料在制备光电材料、生物材料中的应用。

31.根据权利要求30所述的应用，其特征在于，所述生物材料为表面等离子共振动力学检测生物芯片、表面荧光增强的分子识别生物芯片或太阳能电池的生物电极。