CN105687243A - 阿胶在制备治疗卵巢功能早衰药物或保健品中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了阿胶制备治疗卵巢功能早衰的药物或保健品中的用途，属于阿胶的新医药用途领域。本发明采用环磷酰胺建立卵巢早衰动物模型的基础上，观察阿胶对卵巢早衰动物体重、增重、摄食量、动情周期、卵巢脏器系数、性激素水平、组织病理学、卵泡计数等的影响，实验结果发现阿胶对环磷酰胺造模后的雌鼠体重恢复具有一定作用，具有增加雌鼠卵巢、子宫重量及其脏器系数的趋势，对于卵泡发育具有一定的正向调节作用，表明阿胶有增加卵巢系数和增进其功能的作用，对于卵巢功能早衰具有抑制作用，能应用于制备治疗卵巢功能早衰的药物或保健品。
Description
技术领域
本发明涉及阿胶新医药用途，尤其涉及阿胶在制备治疗卵巢功能早衰药物或保健品中的应用，属于阿胶新医药用途领域。
背景技术
卵巢早衰(POF)是指女性40岁之前由于卵巢内卵泡耗竭或因医源性损伤而发生的卵巢功能衰竭和闭经，主要以低雌激素水平和高促性腺激素为特征。据统计，本病发病率在1％～3％。卵巢合成性激素功能低下或不能合成，降低了对垂体的负反馈作用，卵巢储备卵泡极度减少或耗竭，卵巢向萎缩性改变发展，同时由于雌激素显著降低，子宫内膜发育不良，引起闭经和不孕。在闭经人群中，其发病率为4％-10％。卵巢早衰患者的自然妊娠率为5-10％，严重影响患者的生活质量(金志春,黄晓桃,杨雅琴,等.补肾活血方联合雌孕激素治疗卵巢早衰的临床研究[J].中国中西医结合杂志,2013,33(5):586-589.)。
阿胶是中国宝贵的传统中药、非物质文化遗产，它为马科动物驴的皮去毛后熬制而成的胶块。多由胶原及其部分水解产物所成。性味：甘，平。入肺、肝、肾经。功能主治：滋阴补血，安胎。治血虚，虚劳咳嗽，吐血，衄血、便血，妇女月经不调，崩中，胎漏。具有化痰清肺、益气补血、提高机体免疫力等功效。但是阿胶对卵巢功能早衰是否有防治作用国内外尚未见报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供阿胶在制备卵巢功能早衰药物上的新用途。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
本发明采用环磷酰胺建立卵巢早衰动物模型的基础上，观察东阿阿胶对卵巢早衰动物体重、增重、摄食量、动情周期、卵巢脏器系数、性激素水平、组织病理学、卵泡计数等的影响，实验结果发现阿胶对环磷酰胺造模后的雌鼠体重恢复具有一定作用，具有增加雌鼠卵巢、子宫重量及其脏器系数的趋势，对于卵泡发育具有一定的正向调节作用，表明阿胶有增加卵巢系数和增进其功能的作用，能有效防治卵巢功能早衰。
本发明设溶媒对照组(0.5％CMC-Na)、模型对照组(造模后给予0.5％CMC-Na)、东阿阿胶低剂量组(0.9g/kg)、高剂量组(4.5g/kg)和DHEA组(0.006g/kg)5组，在卵巢早衰造模成功的基础上，SD雌鼠分别给予东阿阿胶4周和8周。结果表明：①造模药物环磷酰胺对雌鼠体重、摄食量和动情周期变化具有一定的延迟毒性；②市售对照DHEA对雌鼠一般状况、体重增重、摄食量、激素水平、卵巢、子宫重量及其脏器系数、卵巢和子宫的组织形态均未见明显影响，对雌鼠的动情周期和卵泡发育等具有正向调节作用；③东阿阿胶对雌鼠一般状况、摄食量、激素水平、动情周期、卵巢和子宫的组织形态均未见明显影响；④东阿阿胶对环磷酰胺造模后的雌鼠体重恢复具有一定作用，具有增加雌鼠卵巢、子宫重量及其脏器系数的趋势，对于卵泡发育具有一定的正向调节作用。上述结果说明：东阿阿胶有增加卵巢系数和增进其功能的作用，说明阿胶具有治疗卵巢功能早衰的作用。因此，阿胶可以用于制备治疗卵巢功能早衰的药物。
本发明公开了阿胶在制备治疗卵巢功能早衰的药物中的用途。
其中，所述药物的剂型包括片剂、冲剂、丸剂、乳剂、颗粒剂、软胶囊、硬胶囊或微胶囊。
本发明也公开了阿胶在制备改善卵巢功能早衰的保健品中的用途。
其中，所述保健品的剂型包括：片剂、冲剂、丸剂、乳剂、颗粒剂、软胶囊、硬胶囊或微胶囊。
本发明又公开了阿胶在制备改善卵巢功能早衰的饮品中的用途。
本发明还公开了阿胶在制备改善卵巢功能早衰的食品中的用途。
本发明进一步公开了一种治疗卵巢功能早衰的药物组合物，包括:有效量的阿胶和药学上可接受的辅料或载体。
所述的载体或辅料是指药学领域常规的载体或辅料，例如：稀释剂、崩裂剂、润滑剂、赋形剂、粘合剂、助流剂、填充剂、表面活性剂等；另外，还可以在组合物中加入其它辅助剂，如香味剂和甜味剂。所述稀释剂可以是一种或几种增加片剂重量和体积的成分，常用的稀释剂包括乳糖、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、山梨醇、甘露醇以及无机钙盐等；其中最常用为乳糖、淀粉、微晶纤维素。所述崩解剂可以为交联聚乙烯吡咯烷酮，交联羧甲基纤维素钠、海藻酸、微晶纤维素中之一种或几种混合物；其中以交联聚乙烯吡咯烷酮，交联羧甲基纤维素钠为佳。所述的润滑剂包括硬脂酸，硬脂酸钠，硬脂酸镁，硬脂酸钙，聚乙二醇，滑石粉，氢化植物油中之一种或几种混合物；其中以硬脂酸镁最为适宜。所述的粘合剂可以是一种或几种有利于制粒的成分；可以是淀粉浆，羟丙基甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮，以聚乙烯吡咯烷酮的乙醇水溶液为佳。所述助流剂可以为微粉硅胶、滑石粉、三硅酸镁中之一种或几种混合物。所述表面活性剂可以为一种或几种能够提高润湿性和增加药物溶出的成分，常用为十二烷基硫酸钠。
本发明中，所述阿胶优选的为东阿阿胶。
本发明技术方案与现有技术相比有以下有益效果：
本发明阿胶对卵巢功能早衰具有抑制作用，能有效的治疗卵巢功能早衰，能应用于制备治疗卵巢功能早衰的药物或保健品。
附图说明
图1为环磷酰胺造模对SD雌鼠体重和增重的影响其中，与溶媒对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；
图2为环磷酰胺造模对SD雌鼠摄食的影响其中，与溶媒对照组相比，**P<0.01；
图3为环磷酰胺造模对SD雌鼠动情周期的影响其中，与溶媒对照组相比，*P<0.05；
图4为环磷酰胺造模对SD雌鼠激素水平的影响其中：A:溶媒对照组自身前后比较；B：造模组自身前后比较与溶媒对照组相比，**P<0.01；
图5为东阿阿胶灌胃对雌性SD雌鼠体重的影响
图6为东阿阿胶灌胃对雌性SD雌鼠体重增重的影响其中，*表示组间有统计学差异；
图7为东阿阿胶灌胃对SD雌鼠摄食的影响其中，*表示组间有统计学差异；
图8为东阿阿胶灌胃对SD雌鼠雌二醇的影响
图9为东阿阿胶灌胃对SD雌鼠促卵泡激素的影响
图10为东阿阿胶灌胃对SD雌鼠孕酮的影响
图11为东阿阿胶灌胃对SD雌鼠黄体生成素的影响
图12为东阿阿胶灌胃对SD雌鼠催乳素的影响其中，与溶媒对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，与模型对照组相比，##P<0.01；
图13为大体解剖图；其中：(1)模型对照组258#，给药4周，卵巢囊泡；(2)高剂量268#，给药8周，卵巢囊肿；
图14为东阿阿胶雌鼠灌胃治疗因卵巢功能早衰探索性研究病理图片(给药4周)；其中：(1)溶媒对照组，242#，卵巢，正常，×100；(2)溶媒对照组，242#，子宫，正常，×100；(3)溶媒对照组，242#，阴道，正常，×100；(4)溶媒对照组，274#，卵巢，囊泡形成，×40；(5)溶媒对照组，234#，子宫，陈旧出血灶，×100；(6)溶媒对照组，267#，子宫，腺体扩张，×40；(7)溶媒对照组，284#，子宫，腺体轻度扩张，腺腔中性粒细胞聚集，×100；(8)溶媒对照组，234#，阴道，腔内上皮细胞碎片残留，×100；(9)溶媒对照组，245#，阴道，萎缩，×100；(10)模型对照组，258#，卵巢，囊泡形成，×40；(11)模型对照组，292#，卵巢，囊泡形成，×40；(12)模型对照组，263#，卵巢，卵泡，出血，×100；(13)模型对照组，263#，子宫，腺体轻度扩张，腺腔中性粒细胞聚集，×100；(14)模型对照组，294#，子宫，腺体扩张，×40；(15)低剂量组，290#，卵巢，囊泡形成，×40；(16)低剂量组，236#，子宫，腺体扩张，×40；(17)低剂量组，290#，子宫，腺体扩张，×100；(18)低剂量组，236#，阴道，萎缩，×100；(19)高剂量组，227#，卵巢，萎缩，×40；(20)高剂量组，227#，阴道，腔内中性粒细胞聚集，×100；(21)DHEA组，228#，子宫，腺体扩张，×40；(22)DHEA组，228#，子宫，腺体扩张，×100；
图15为东阿阿胶雌鼠灌胃治疗因卵巢功能早衰探索性研究病理图片(给药8周)；其中：(1)溶媒对照组，249#，卵巢，正常×100；(2)溶媒对照组，249#，子宫，正常×100；(3)溶媒对照组，249#，阴道，正常，×100；(4)溶媒对照组，257#，卵巢，萎缩，×40；(5)溶媒对照组，291#，卵巢，髓质水肿，×100；(6)溶媒对照组，291#，卵巢，髓质水肿，×400；(7)溶媒对照组，257#，子宫，腺体轻度扩张，腺腔中性粒细胞聚集，×100；(8)溶媒对照组，264#，子宫，腺体轻度扩张，×40；(9)模型对照组，306#，卵巢，萎缩，×40；(10)模型对照组，315#，卵巢，萎缩，×40；(11)模型对照组，319#，卵巢萎缩×40(12)模型对照组，319#，子宫，腺体扩张，×40；(13)低剂量组，272#，卵巢，萎缩，×40；(14)低剂量组，317#，卵巢，萎缩，×40；(15)低剂量组，310#，子宫，腺腔中性粒细胞聚集，×100；(16)高剂量组，265#，卵巢，萎缩，×40；(17)高剂量组，293#，卵巢，萎缩，×40；(18)DHEA组，260#，卵巢，萎缩，×40；(19)DHEA组，313#，卵巢，萎缩，×40；(20)DHEA组，260#，阴道，腔内中性粒细胞聚集，×100。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚；但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成限制；本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
1、材料
1.1试验动物
SD雌鼠，SPF级，60只，250天左右，健康性成熟的雌性大鼠，造模时体重320.0～420.0克，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，实验动物质量合格证序号：0181137；实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016，上海市科学技术委员会颁发；实验动物使用许可证号：SYXK(沪)2013-0027，上海市科学技术委员会颁发；
1.2药品
东阿阿胶：棕色粉末，密闭，10～30℃保存；含量：L-羟脯氨酸9.2％，甘氨酸18.8％，丙氨酸7.4％，L脯氨酸11.0％(按干燥品计算)；用0.5％羧甲基纤维素钠配制；供试品号：P2014-016；批号：1503028；由东东阿阿胶股份有限公司提供；
去氢表雄酮(DHEA)：白色结晶性粉末，遮光，密闭保存；批号：20141008；含量：99.18％；用0.5％的羧甲基纤维素钠的配制，现用现配；由武汉胜天宇生物科技有限公司提供；
环磷酰胺(CP)：白色粉末，常温、避光保存；含量：99.2％；用生理盐水配制；用生理盐水配制；由SunraypharmaceuticalCo.,Ltd提供；
羧甲基纤维素钠(CMC-Na)：阴凉、密闭；批号：D1509045；用蒸馏水配制；使用浓度为0.5％；由国药集团化学试剂有限公司提供；
蒸馏水(H2O)：密闭、阴凉干燥处；批号：DI20150109；由上海景纯水处理技术有限公司提供；
氯化钠注射液：0.9％NaCl，常温、密闭；批号：K140203；由湖南科伦制药有限公司提供。
1.3仪器设备
BH-2Olympus生物显微镜；ES-15KHTS电子天平；ZENyTh200ST酶联免疫仪和Nikon-ecolipse-50i型病理显微镜。
实验例1阿胶对卵巢功能早衰作用的研究
1、实验方法
1.1实验动物饲养及造模分组
1.1.1实验动物饲养：
动物检疫：动物接收后检疫5天；
饲养环境和条件：SD大鼠在上海市计划生育科学研究所(中国生育调节药物毒理检测中心)SPF级动物房内饲养；室温21℃～24℃，相对湿度46％～56％，光照12小时，黑暗12小时；动物实验开始前检疫5天，适应性饲养至动物年龄体重达到实验要求，经一般行为观察，选用符合要求的大鼠作为实验动物；饲养于400×350×200mm3塑料笼内，每笼饲养同性大鼠3只；自由饮水、摄食。
饲料、垫料及饮用水：饲料为繁殖鼠料，批号：20150103、20150301、20150402、20150501、20150603和20150801，由上海仕林生物科技有限公司提供；垫料为上海市宝山区福禾实验用品供应站提供的木屑垫料；饮用水为自来水；三者均经高温高压灭菌。
1.1.2制造模型
(1)造模前7天进行连续阴道涂片，以观察大鼠的动情周期，选择动情周期正常的60只SD大鼠，按体重随机将雌鼠分为溶媒对照组(12只)和造模组(48只)。
(2)溶媒对照组腹腔注射生理盐水，共2次，间隔11天；造模组腹腔注射环磷酰胺溶液，共2次，90mg/kg(第1次)，50mg/kg(第2次)，间隔11天；每日进行阴道涂片，观察动情周期变化；当模型组雌鼠动情周期紊乱、动情间期延长、无动情周期或动情期，表示大鼠卵巢早衰造模成功，激素水平改变作为辅助参考指标。
1.1.3动物分组
造模成功后，将造模组的48只动物按照随机数字分组为模型对照组(0.5％CMC-Na溶液)、东阿阿胶低剂量组(0.9g/kg)、高剂量组(4.5g/kg)和脱氢表雄酮(DHEA，0.006g/kg)组，每组12只。
1.2给予供试品：
按照表1配制各种药物。
表1、药效学试验供试品和对照品配制方法
根据造模预试验结果，造模20天后，阿胶低剂量和高剂量组歌灌胃给予东阿阿胶，连续给予8周；溶媒对照组、模型对照组灌胃给予等体积0.5％CMC-Na，DHEA组灌胃给予对照品DHEA，1次/天，与东阿阿胶组同步。
1.3观察指标
1.3.1大体解剖
分别在给予东阿阿胶4周和8周后，观察相关指标，详见表2；解剖1/2雌鼠，切开腹部暴露两侧子宫、卵巢和内脏器官，称重子宫和卵巢，计算脏器系数；保存卵巢、子宫、阴道进行组织病理学检查，观察卵巢和子宫内膜形态学变化；发现任何内脏有异常应作好记录，并将所有异常组织切下来，做好标记放入10％福尔马林中固定，以便将来作组织病理学检查。
表2、动物解剖计划表
1.3.2指标测定
(1)一般状况观察：按实验动物一般状况观察规定，每天观察1～2次动物的外观体征，记录动物外观、行为或异常体征；发现死亡或濒死动物，及时剖检。
(2)体重：按小动物体重测定方法，每周测定2次动物体重；
(3)摄食量：按小动物摄食量测定方法，每周测定1次动物摄食量。
(4)动情周期：按大鼠动情周期分析和大鼠阴道涂片检查方法进行阴道涂片检查，从造模前7天开始阴道涂片直至给药结束，观察雌鼠动情周期的变化。
(5)脏器系数：卵巢和子宫称重，计算脏器系数。
(6)组织病理学：待试验终末后解剖动物，保存卵巢、子宫和阴道以及肉眼观察有异常的脏器，进行组织学检查；光镜下观察大鼠卵巢和子宫内膜形态学变化以及卵泡发育等。
(7)激素水平检测：
a.造模前后，雌鼠尾静脉或眼眶采血1ml左右，分离血清，测定母鼠体内雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)和黄体生成素(LH)激素水平；
b.连续4周给予东阿阿胶，末次给予供试品后雌鼠尾静脉或眼眶采血1ml左右，分离血清，测定母鼠体内雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)和黄体生成素(LH)激素水平；
c.连续8周给予东阿阿胶，末次给予供试品后雌鼠尾静脉或眼眶采血1ml左右，分离血清，测定母鼠体内雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)和黄体生成素(LH)激素水平。
1.4统计分析
实验数据用表示；造模前后进行独立样本的T检验；体重、摄食量、脏器系数和激素检测等计量资料采用单因素方差分析来进行检验。
2、实验结果
2.1模型组观察
环磷酰胺造模对雌鼠体重、摄食和动情周期等影响；
(1)一般状况：造模组SD雌鼠给予环磷酰胺后，动物表现出反应迟缓、背毛竖起、蓬松以及活动减少等体征。
(2)体重变化：结果见表3和图1，从表3和图1中可以看出，与溶媒对照组相比，给予环磷酰胺D5、D8、D12、D15和D19，造模组动物体重降低，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。
表3、环磷酰胺造模对SD雌鼠体重的影响
注：与溶媒对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；
(3)增重变化：结果见表4和图1，从表4和图1中可以看出，与溶媒对照组相比，造模组D5-1和D15-12体重负增长，D12-8体重增重幅度增加，具有统计学差异(P<0.05)。
表4、环磷酰胺造模对SD雌鼠体重增重的影响
注：与溶媒对照组相比，*P<0.05；
(4)摄食量：结果见表5和图2，从表5和图2中可以看出，与溶媒对照组相比，造模组前2周摄食量下降，具有统计学差异(P<0.01)。
表5、环磷酰胺造模对SD雌鼠摄食的影响
注：与溶媒对照组相比，**P<0.01；
(5)动情周期：环磷酰胺造模前后，每天观察雌鼠动情周期的变化情况；分析动情间期、动情前期、动情期和动情后期的变化情况，结果见表6和图3。
a.造模前对雌鼠动情周期变化观察7天；
b.造模后，对雌鼠动情周期变化观察20天，与溶媒对照组相比(3.3±1.6个)，造模组(2.5±1.0个)完整动情周期数下降，具有统计学差异(P<0.05)，而造模组各动情周期均无统计学差异(P>0.05)。
表6、环磷酰胺造模对SD雌鼠动情周期的影响
注：周期数依据完整的动情周期循环进行计数；造模后两组间比较采取独立样本T检验，与溶媒对照组相比，*P<0.05；
(6)激素水平：环磷酰胺造模前后，分别眼眶采血，检测体内雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)、催乳素(PRL)和黄体生成素(LH)的变化情况，结果见表7和图4。
a.溶媒对照组与造模组同步采血检测，自身前后比较：上述各项激素水平在一定范围内波动，未见统计学差异(P>0.05)；
b.与造模前相比，造模组自身前后比较：E2、P水平降低，具有统计学差异(P<0.01)；其余指标未见统计学差异(P>0.05)。
表7、环磷酰胺造模对SD雌鼠激素水平的影响
注：两组间比较采取独立样本T检验，与相同处理的造模前相比，**P<0.01；
上述结果显示：给予造模药物环磷酰胺后，动物表现出反应迟缓、背毛竖起、蓬松以及活动减少等体征，伴随多个时间点体重和摄食量的明显下降，具有统计学差异(P<0.01)，该异常是细胞毒类抗肿瘤药物常见的毒副反应特点；雌鼠造模后E2和P水平降低(P<0.01)，雌鼠完整的动情周期循环数明显下降(P<0.05)，同时可见动情前期和动情后期缩短，动情期延长的趋势，根据卵巢早衰模型的判定标准，造模组雌鼠动情周期紊乱，认为大鼠卵巢早衰造模成功。
2.2阿胶组观察
2.2.1一般状况
造模后20天，SD雌鼠灌胃给予东阿阿胶共8周，期间各组动物活动正常，被毛浓密有光泽，眼睛鲜红而有精神，呼吸正常，鼻部无血性分泌物，与溶媒对照组动物相比无明显异常；未见给予东阿阿胶对动物一般状况造成明显影响；表明DHEA和东阿阿胶不会对动物一般状况造成明显影响。
2.2.2雌鼠体重
给予东阿阿胶对雌鼠体重的影响详见表8和图5。
表8东阿阿胶灌胃对SD雌鼠体重的影响
注：各剂量组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用Bonferroni分析，方差不齐时采用Tamhane分析；与溶媒对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；与DHEA组相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；
(1)给予东阿阿胶1～4周期间
a.与溶媒对照组相比
模型对照组：D2和D6体重降低，具有统计学差异(P<0.05)；
b.与DHEA组和模型对照组相比，各组均未见统计学差异(P>0.05)。
(2)给予东阿阿胶5～8周期间
a.与溶媒对照组相比
DHEA组：D34、D37、D41、D44、D48、D51、D55和D57体重下降，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。
b.与模型对照组相比
a)溶媒对照组：D34、D37、D44、D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；
b)低剂量组：D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05)；
c)高剂量组：D37、D44、D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；
d)DHEA组：D34、D37、D44、D48、D51、D55和D57体重下降，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；
c.与DHEA组相比
a)溶媒对照组：D34、D37、D41、D44、D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；
b)模型对照组：D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05)；
c)低剂量组：D37、D44、D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)；
d)高剂量组：D34、D37、D41、D44、D48、D51、D55和D57体重增加，具有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。
上述结果显示：(1)环磷酰胺：给予东阿阿胶1～4周期间，与溶媒对照组相比，模型对照组、低、高剂量组和DHEA组体重均表现为下降趋势，模型对照组体重个别时间点出现具有统计学差异的降低(P<0.05)；给予东阿阿胶5～8周期间，模型对照组、低、高剂量组和DHEA组体重均下降(P<0.01或P<0.05)，考虑为环磷酰胺的延迟毒性所致。
(2)DHEA：给予东阿阿胶8周期间，与模型对照组相比，DHEA组体重下降，缘于解剖后剩余动物体重本底值较低；与溶媒对照组相比，DHEA组体重下降(P<0.05或P<0.01)，但与东阿阿胶各剂量组体重变化趋势较为一致，未见统计学差异(P>0.05)，故认为DHEA对雌性大鼠体重不会产生明显影响。
(3)东阿阿胶：给予东阿阿胶8周，特别是5～8周期间，与模型对照组和DHEA组相比，低和高剂量组体重增加(P<0.05或P<0.01)，认为东阿阿胶对环磷酰胺造模后的雌鼠体重恢复具有一定作用。
2.2.3雌鼠增重
给予东阿阿胶对雌鼠体重增重的影响详见表9和图6。
表9、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠体重增重的影响
注：各剂量组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用Bonferroni分析，方差不齐时采用Tamhane分析；与溶媒对照组相比，*P<0.05，与模型对照组相比，#P<0.05；与DHEA组相比，▲P<0.05；
(1)给予东阿阿胶1～4周期间：与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各组增重均未见统计学差异(P>0.05)。
(2)给予东阿阿胶5～8周期间
a.与溶媒对照组相比
a)DHEA组：D48-44为负增长，具有统计学差异(P<0.05)；
b)高剂量组：D48-44和D57-55负增长，具有统计学差异(P<0.05)。
①与模型对照组相比
溶媒对照组：D48-44体重增重幅度增加，具有统计学差异(P<0.05)。
②与DHEA组相比
溶媒对照组：D48-44体重增重幅度增加，具有统计学差异(P<0.05)。
上述结果显示：给予东阿阿胶8周期间，与溶媒对照组相比，DHEA组D48-44为负增长，高剂量组：D48-44和D57-55负增长，尽管上述改变具有统计学差异(P<0.05)，但仅1～2个时间点改变，且总体看来模型对照组、东阿阿胶各组和DHEA组变化趋势一致，故考虑与环磷酰胺造模有关，与给予东阿阿胶无关。
2.2.4雌鼠摄食量
给予东阿阿胶对雌鼠摄食量的影响详见表10和图7；
表10、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠摄食的影响
注：各剂量组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用Bonferroni分析，方差不齐时采用Tamhane分析；与溶媒对照组相比，*P<0.05；与模型对照组相比，#P<0.05；与DHEA组相比，▲P<0.05。
(1)给予东阿阿胶1～4周期间：与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各组摄食量均未见统计学差异(P>0.05)；
(2)给予东阿阿胶5～8周期间：与溶媒对照组相比，模型对照组、低剂量组、高剂量组和DHEA组相比，摄食量减少，具有统计学差异(P<0.05)。
上述结果显示：给予东阿阿胶8周期间，与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，除第8周外，各剂量组摄食量未见统计学差异(P>0.05)，但从第6周开始，除溶媒对照组外，各组摄食量呈现轻度下降趋势，结合体重下降情况，考虑为环磷酰胺的延迟毒性所致，与给予东阿阿胶无关。
2.2.5动情周期
给予东阿阿胶后，对雌鼠动情周期持续观察8周；分析动情间期、动情前期、动情期和动情后期的变化情况，结果见表11。
表11、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠动情周期的影响
注：周期数依据完整的动情周期循环进行计数；与DHEA组相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01；
(1)给予东阿阿胶1～4周期间，动情周期观察28天。
a.动情周期数：与溶媒对照组(4.5±2.3个)、模型对照组(4.0±1.6个)和DHEA组(4.3±1.7个)相比，低和高剂量组动情周期数量分别为3.7±2.1个和3.1±2.4个，未见统计学差异(P>0.05)；
b.动情期：与溶媒对照组(4.4±3.2天)、模型对照组(4.5±2.4天)和DHEA组(4.4±4.1天)相比，低和高剂量组动情期分别为7.3±8.0天和3.9±3.5天，未见统计学差异(P>0.05)；
c.其它：与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各剂量组动情间期、动情前期和动情后期的变化均无统计学差异(P>0.05)。
(2)给予东阿阿胶5～8周期间，动情周期观察28天。
a.动情周期数：与溶媒对照组(4.2±1.7个)、模型对照组(2.8±1.3个)和DHEA组(4.0±1.5个)相比，低和高剂量组动情周期数量分别为3.7±1.8个和2.3±2.3个，未见统计学差异(P>0.05)；
b.动情期：与溶媒对照组(4.3±3.6天)、模型对照组(6.5±6.8天)和DHEA组(4.2±2.4天)相比，低和高剂量组动情期分别为5.0±5.1天和3.0±4.0天，未见统计学差异(P>0.05)；
c.其它：与DHEA组相比，高剂量组动情前期变短(P<0.05)；与溶媒对照组、模型对照组相比，各剂量组动情间期、动情前期和动情后期的变化均无统计学差异(P>0.05)。
上述结果显示：(1)环磷酰胺：给予东阿阿胶1～4周和5～8周两个时间段，比较动情周期数据，尽管无统计学差异(P>0.05)，但模型对照组和东阿阿胶各剂量组动情周期，特别是完整的动情周期数量，均呈降低趋势，考虑与环磷酰胺造模有关；(2)DHEA：分析1～4周和5～8周动情周期数据，特别是完整的动情周期数量和动情期，可见DHEA组(市售对照)与溶媒对照组更为接近，表明DHEA具有正向调节大鼠动情周期的作用；(3)东阿阿胶：分析1～4周和5～8周动情周期数据，与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，低和高剂量组的动情周期数量、动情间期、动情前期、动情期和动情后期未见增加或减少趋势，表明东阿阿胶对动情周期的调节作用不明显。
2.2.6脏器系数
给予东阿阿胶对雌鼠脏器系数的影响，结果见表12。
表12、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠脏器重量和脏器系数的影响
注：各剂量组间比较采用单因素方差分析，方差齐时采用Bonferroni分析，方差不齐时采用Tamhane分析；与模型对照组相比，#P<0.05；与DHEA组相比，▲P<0.05；
(1)给予东阿阿胶4周后，与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各剂量组卵巢、子宫重量及其脏器系数均未见统计学差异(P>0.05)；
(2)给予东阿阿胶8周后，与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各剂量组卵巢、子宫重量及子宫脏器系数均未见统计学差异(P>0.05)，低剂量组和高剂量组卵巢脏器系数分别比DHEA组和模型对照组增加，具有统计学差异(P<0.05)。
上述结果显示：给予东阿阿胶4周和8周后，与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各剂量组卵巢、子宫重量及其子宫脏器系数均未见统计学差异(P>0.05)，但与DHEA组和模型对照组相比，低剂量组和高剂量组卵巢脏器系数增加(P<0.05)；与溶媒对照组比，上述脏器重量和脏器系数尽管未见统计学差异，但也呈现增加的趋势；总体看来，给予东阿阿胶8周，表现出增加雌鼠卵巢、子宫重量及其脏器系数的趋势。
2.2.7激素水平
分别在给予东阿阿胶4周和8周后，检测雌鼠性激素水平，结果见表13和图8～12。
表13、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠激素水平的影响
注：与溶媒对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，与模型对照组相比，##P<0.01；
(1)给予东阿阿胶4周后
与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各组雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P)、促黄体激素(LH)和泌乳素(PRL)均在一定范围内波动，但未见统计学差异(P>0.05)。
(2)给予东阿阿胶8周后
a.与溶媒对照组、模型对照组和DHEA组相比，各组雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P)和促黄体激素(LH)均在一定范围内波动，但未见统计学差异(P>0.05)；
b.泌乳素(PRL)：与溶媒对照组相比，模型对照组、高剂量组和DHEA组PRL水平升高，具有统计学差异(P<0.01或P<0.05)；与模型对照组相比，溶媒对照组PRL水平降低，具有统计学差异(P<0.01)。
上述结果显示：(1)DHEA：给予4周和8周DHEA后，雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P)、促黄体激素(LH)和泌乳素(PRL)变化水平与东阿阿胶各组趋势一致，表明DHEA对雌鼠性激素水平影响不明显；(2)东阿阿胶：给予东阿阿胶4周和8周后，上述激素变化水平趋势基本一致，表明东阿阿胶对雌鼠性激素水平影响不明显。
2.2.8组织病理学
给予东阿阿胶4周和8周后，分别有6只动物进行病理检查，具体病理特征汇总，结果见表14、15和图13-15。
表14、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠组织病理学的影响(单位：只，给药4周)
表15、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠组织病理学的影响(单位：只，给药8周)
(1)给予东阿阿胶4周
a.子宫
a)溶媒对照组1只大鼠(234#)子宫轻度陈旧出血灶，1只大鼠(267#)子宫腺体轻度扩张，1只大鼠(284#)子宫腺体轻度扩张，腺腔中性粒细胞聚集；
b)模型对照组1只大鼠(263#)子宫腺体轻度扩张，腺腔中性粒细胞聚集，1只大鼠(294#)子宫腺体轻度扩张；
c)低剂量组2只大鼠(236#和290#)子宫腺体轻度扩张；
d)DHEA组1只大鼠(228#)子宫腺体轻度扩张。
b.卵巢
a)溶媒对照组1只大鼠(274#)卵巢轻度囊泡形成；
b)模型对照组2只大鼠(258#和292#)卵巢轻度囊泡形成，1只大鼠(263#)卵泡轻度出血；
c)低剂量组1只大鼠(290#)卵巢轻度囊泡形成；
d)高剂量组1只大鼠(227#)轻度萎缩。
c.阴道
a)溶媒对照组1只大鼠(234#)阴道腔内上皮细胞碎片残留，1只大鼠(245#)阴道轻度萎缩；
b)低剂量组1只大鼠(236#)阴道上皮轻度萎缩；
c)高剂量组1只大鼠(227#)阴道腔内轻度中性粒细胞聚集。
(2)给予东阿阿胶8周
a.子宫
a)溶媒对照组1只大鼠(257#)子宫腺体轻度扩张，腺腔中性粒细胞聚集，1只大鼠(264#)子宫腺体轻度扩张；
b)模型对照组1只大鼠(319#)子宫腺体中度扩张；
c)低剂量组1只大鼠(310#)子宫，腺腔中性粒细胞聚集。
b.卵巢
a)溶媒对照组1只大鼠(257#)卵巢轻度萎缩，1只大鼠(291#)卵巢髓质轻度水肿；
b)模型对照组3只大鼠(306#，315#和319#)卵巢轻度萎缩；
c)低剂量组2只大鼠(272#和317#)卵巢轻度萎缩；
d)高剂量组1只大鼠(265#和293#)卵巢轻度萎缩；
e)DHEA组1只大鼠(260#)卵巢中度萎缩，1只大鼠(313#)卵巢轻度萎缩。
(3)阴道
DHEA组1只大鼠(260#)阴道腔内轻度中性粒细胞聚集。
上述结果显示：给予东阿阿胶4周和8周后，各组均出现个别动物子宫腺体中度扩张、卵巢轻度囊泡形成或萎缩，以及少量动物(1/6或2/6)出现阴道萎缩或轻度中性粒细胞聚集，溶媒对照组有1只动物(1/6)也出现阴道萎缩，上述变化未见剂量-效应和时间-效应关系，考虑为动物的自发病变。
2.2.8卵泡计数
光学显微镜下，对每组雌性大鼠卵巢组织切片的原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡数量进行计数，以其所占比例进行统计，结果见表16。
表16、东阿阿胶灌胃对SD雌鼠卵泡计数的影响
注：以各级卵泡所占比例进行统计；
(1)给予东阿阿胶4周后
a.原始卵泡：与溶媒对照组60.6±4.3(％)、模型对照组51.3±12.7(％)和DHEA组53.7±7.6％相比，低和高剂量组的原始卵泡百分比分别为51.2±11.6(％)和52.2±11.1(％)，未见统计学差异(P>0.05)；
b.成熟卵泡：与溶媒对照组8.2±6.0(％)、模型对照组11.5±5.5(％)和DHEA组15.3±5.1(％)相比，低和高剂量组的成熟卵泡百分比分别为7.4±6.7(％)和8.6±8.6(％)，未见统计学差异(P>0.05)。
(2)给予东阿阿胶8周后
a.原始卵泡：与溶媒对照组57.2±4.9(％)、模型对照组50.5±11.0(％)和DHEA组55.0±10.2％相比，低和高剂量组的原始卵泡百分比分别为51.3±8.8(％)和58.2±8.6(％)，未见统计学差异(P>0.05)；
b.成熟卵泡：与溶媒对照组12.7±4.1(％)、模型对照组17.5±7.4(％)和DHEA组11.9±12.5(％)相比，低和高剂量组的成熟卵泡百分比分别为9.9±6.2(％)和12.5±7.6(％)，未见统计学差异(P>0.05)。
上述结果显示：给予东阿阿胶4周和8周后，尽管未见统计学差异(P>0.05)，但模型对照组原始卵泡比例均呈现降低趋势，考虑与环磷酰胺造模有关；而这两个时间点DHEA组和东阿阿胶高剂量组的原始卵泡和成熟卵泡比例均更接近于溶媒对照组，表明DHEA组和高剂量东阿阿胶对于卵泡发育均具有一定的正向调节作用。
综合以上分析，得出以下结论：①造模药物环磷酰胺对雌鼠体重、摄食量和动情周期变化具有一定的延迟毒性；②市售对照DHEA对雌鼠一般状况、体重增重、摄食量、激素水平、卵巢、子宫重量及其脏器系数、卵巢和子宫的组织形态均未见明显影响，对雌鼠的动情周期和卵泡发育等具有正向调节作用；③东阿阿胶对雌鼠一般状况、摄食量、激素水平、动情周期、卵巢和子宫的组织形态均未见明显影响；④东阿阿胶对环磷酰胺造模后的雌鼠体重恢复具有一定作用，具有增加雌鼠卵巢、子宫重量及其脏器系数的趋势，对于卵泡发育具有一定的正向调节作用。因此，给予造模组大鼠灌胃东阿阿胶，提示有增加卵巢系数和增进其功能的趋势。
Claims (9)
1.阿胶在制备治疗卵巢功能早衰的药物中的用途。
2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物的剂型包括片剂、冲剂、丸剂、乳剂、颗粒剂、软胶囊、硬胶囊或微胶囊。
3.阿胶在制备改善卵巢功能早衰的保健品中的用途。
4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于：所述保健品的剂型包括：片剂、冲剂、丸剂、乳剂、颗粒剂、软胶囊、硬胶囊或微胶囊。
5.阿胶在制备改善卵巢功能早衰的饮品中的用途。
6.阿胶在制备改善卵巢功能早衰的食品中的用途。
7.按照权利要求1-6任意一项所述的用途，其特征在于：所述阿胶为东阿阿胶。
8.一种治疗卵巢功能早衰的药物组合物，其特征在于，包括:有效量的阿胶和药学上可接受的辅料或载体。
9.按照权利要求8所述的药物组合物，其特征在于：所述阿胶为东阿阿胶。
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| CN201610120841.5A Pending CN105687243A (zh) | 2016-03-03 | 2016-03-03 | 阿胶在制备治疗卵巢功能早衰药物或保健品中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105687243A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108066362A (zh) * | 2018-01-26 | 2018-05-25 | 陕西中医药大学 | 阿胶在制备预防或治疗与雌激素相关疾病的药物中的应用 |
| CN110742907A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-02-04 | 山东福牌阿胶股份有限公司 | 一种阿胶与新阿胶的组合物在制备抗衰老药物中的应用 |
-
2016
- 2016-03-03 CN CN201610120841.5A patent/CN105687243A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 马文熙等: "《抗衰老与健康》", 30 June 2014, 东南大学出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108066362A (zh) * | 2018-01-26 | 2018-05-25 | 陕西中医药大学 | 阿胶在制备预防或治疗与雌激素相关疾病的药物中的应用 |
| CN110742907A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-02-04 | 山东福牌阿胶股份有限公司 | 一种阿胶与新阿胶的组合物在制备抗衰老药物中的应用 |
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