CN105684880B - 一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法 - Google Patents
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于包括以下步骤:(1)收集、筛选生长旺盛的脐型紫菜并清洗,经波长为254 nm紫外线照射3~10 min进行杀菌作为培养对象;(2)将步骤(1)所得脐型紫菜放入管道式藻类培养池进行海水培养,控制温度在20~35℃,pH在5.6~6.4,由紫外灯、紫光灯、绿光灯、黄光灯四种光源组成的多光源连续照射培养3~5个周期,培养过程中泵入空气使脐型紫菜保持悬浮状态,定期观察去除可能存在的杂藻,使脐型紫菜不断生长,直立枝长度达到4~5 cm后收集晒干,采用氨基酸分析仪和UHPLC测得晒干脐型紫菜中MAAs的含量。本发明生产成本低,所培养的脐型紫菜中MAAs的含量显著增加。
Description
技术领域
本发明涉及海藻的培养,特别涉及一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法。
背景技术
脐型紫菜(Porphyra suborbiculata Kjellm)属海产红藻(Red algae),含有高达29~35%的蛋白质,其中蛋白质水解后的一种氨基酸活性物,类菌胞素氨基酸又称三苯甲咪唑氨基酸(mycosporine-like amino acids,简称MAAs)是一类水溶性、小分子(<400Da)、具有紫外吸收特性的化合物。MAAs化合物的吸收峰在310~360 nm之间,因而对紫外辐射具有吸收能力可减少紫外线对细胞造成的损伤。此外,MAAs还具有抑制过氧化物、活性氧和自由基的功能,应用于化妆品中的抗氧化效果佳。以材料易得、价格低廉的紫菜作为原料,利用生物科技手段从天然海洋产物中提取纯品MAAs,可用作防晒类化妆品的生物活性添加剂。
中国专利201120053539.5公开了一种用于海藻培养的通气式培养瓶,提高海藻培养的成功率。中国专利201410830000.4公开了一种海藻的育苗方法,即孢子采苗培养法。上述专利技术中公开的海藻养殖的培养方法及装置,均存在工艺复杂且难以放大,条件不易控制,人工劳动强度大、投资成本高等缺点。
发明内容
本发明提供了一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,本方法连续培养的脐型紫菜与常规自然光照下海水养殖的脐型紫菜相比,类菌胞素氨基酸的含量显著增加。
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)收集、筛选生长旺盛的脐型紫菜并清洗,经波长为254 nm紫外线照射3~10min进行杀菌作为培养对象;
(2)将步骤(1)所得脐型紫菜放入管道式藻类培养池进行海水培养,控制温度在20~35 ℃,pH在5.6~6.4,由紫外灯、紫光灯、绿光灯、黄光灯四种光源组成的多光源连续照射培养3~5个周期,所述多光源连续照射培养每个周期为8 h,光照顺序为紫外光单独照射1 h,然后绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射1h;培养过程中泵入空气使脐型紫菜保持悬浮状态,定期观察去除可能存在的杂藻,使脐型紫菜不断生长,直立枝长度达到4~5cm后收集晒干,采用氨基酸分析仪和UHPLC测得晒干脐型紫菜中MAAs的含量。
所述管道式藻类培养池底部均匀铺设滤网,滤网孔直径为0.5 cm,藻类培养池内壁设置四组特定波长的光源。
所述紫外灯的紫外波长为356 nm、光强为8 mW/cm2。
所述紫光灯的紫光波长449 nm、光强15 mW/cm2。
所述绿光灯的波长509 nm、光强为25 mW/cm2。
所述黄光灯的波长594 nm、光强为25 mW/cm2。
经实验测得在自然光照射海水培养的脐型紫菜中含MAAs的质量分数为0.25~0.30%,本发明以经过特定波长的紫外线和紫光、绿光、黄光三种单色光连续照射处理,在合适温度、pH等条件下,海水池中连续养殖,测得晒干脐型紫菜中含MAAs的质量分数为0.50~0.65%。且以此光照顺序,周期8 h,循环光照3~5个周期, MAAs的产量为最高,继续增加光照周期MAAs的产量无明显变化。
本发明与传统的培养方法相比,生产成本低,所培养的脐型紫菜中MAAs的含量显著增加,可为后续MAAs的提取纯化提供了优质的原材料。
具体实施方式
下面通过实施例作进一步说明。
实施例1:
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸累积的培养方法,采用以下骤:
(1)收集29°32′~31°04′N,121°31′~123°25′E范围,固着生长在舟山群岛潮间带及近海区海藻,筛选藻类宽厚、富有光泽、无明显坏死组织的脐型紫菜,经煮沸过的淡水清洗2遍、波长为254 nm紫外线照射3 min进一步去除可能的杂藻和原生微生物。藻类培养池置于阴凉通风处,通入10 μm条件下过滤并灭菌的海水。
(2)将待培养的脐型紫菜均匀分散于藻类培养池中,开启培养池底部空气鼓风机泵入空气使紫菜处于悬浮状态,控制培养池水温20 ℃,pH为5.6,紫外灯照射1h,转入绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射,弱光静止培养1h。以此顺序进行8 h多光源照射连续培养3个周期,使脐型紫菜不断生长。培养期间定期观察藻类生长状态,直至紫菜直立枝长度达到4~5 cm后收集,测得脐型紫菜中MAAs的含量占干重的0.52%。
实施例2:
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸累积的培养方法,采用以下骤:
(1)收集29°32′~31°04′N,121°31′~123°25′E范围,固着生长在舟山群岛潮间带及近海区海藻,筛选藻类宽厚、富有光泽、无明显坏死组织的脐型紫菜,经煮沸过的淡水清洗2遍、波长为254 nm紫外线照射5 min进一步去除可能的杂藻和原生微生物。藻类培养池置于阴凉通风处,通入10 μm条件下过滤并灭菌的海水。
(2)将待培养的脐型紫菜均匀分散于藻类培养池中,开启培养池底部空气鼓风机泵入空气使紫菜处于悬浮状态,控制培养池水温25 ℃,pH为5.9,紫外灯照射1 h,转入绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射,弱光静止培养1 h。以此顺序进行8 h多光源照射连续培养4 个周期,使脐型紫菜不断生长。培养期间定期观察藻类生长状态,直至紫菜直立枝长度达到4~5 cm后收集,测得脐型紫菜中MAAs的含量占干重的0.58%。
实施例3:
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸累积的培养方法,采用以下骤:
(1)收集29°32′~31°04′N,121°31′~123°25′E范围,固着生长在舟山群岛潮间带及近海区海藻,筛选藻类宽厚、富有光泽、无明显坏死组织的脐型紫菜,经煮沸过的淡水清洗2遍、波长为254 nm紫外线照射7 min进一步去除可能的杂藻和原生微生物。藻类培养池置于阴凉通风处,通入10 μm条件下过滤并灭菌的海水。
(2)将待培养的脐型紫菜均匀分散于藻类培养池中,开启培养池底部空气鼓风机泵入空气使紫菜处于悬浮状态,控制培养池水温30 ℃,pH为6.2,紫外灯照射1 h,转入绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射,弱光静止培养1 h。以此顺序进行8 h多光源照射连续培养3 个周期,使脐型紫菜不断生长。培养期间定期观察藻类生长状态,直至紫菜直立枝长度达到4~5 cm后收集,测得脐型紫菜中MAAs的含量占干重的0.55%。
实施例4:
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸累积的培养方法,采用以下骤:
(1)收集29°32′~31°04′N,121°31′~123°25′E范围,固着生长在舟山群岛潮间带及近海区海藻,筛选藻类宽厚、富有光泽、无明显坏死组织的脐型紫菜,经煮沸过的淡水清洗2遍、波长为254 nm紫外线照射10 min进一步去除可能的杂藻和原生微生物。藻类培养池置于阴凉通风处,通入10 μm条件下过滤并灭菌的海水。
(2)将待培养的脐型紫菜均匀分散于藻类培养池中,开启培养池底部空气鼓风机泵入空气使紫菜处于悬浮状态,控制培养池水温25 ℃,pH为6.0,紫外灯照射1 h,转入绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射,弱光静止培养1 h。以此顺序进行8 h多光源照射连续培养4 个周期,使脐型紫菜不断生长。培养期间定期观察藻类生长状态,直至紫菜直立枝长度达到4~5 cm后收集,测得脐型紫菜中MAAs的含量占干重的0.65%。
实施例5:
一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸累积的培养方法,采用以下骤:
(1)收集29°32′~31°04′N,121°31′~123°25′E范围,固着生长在舟山群岛潮间带及近海区海藻,筛选藻类宽厚、富有光泽、无明显坏死组织的脐型紫菜,经煮沸过的淡水清洗2遍、波长为254 nm紫外线照射10 min进一步去除可能的杂藻和原生微生物。藻类培养池置于阴凉通风处,通入10 μm条件下过滤并灭菌的海水。
(2)将待培养的脐型紫菜均匀分散于藻类培养池中,开启培养池底部空气鼓风机泵入空气使紫菜处于悬浮状态,控制培养池水温35 ℃,pH为6.4,紫外灯照射1 h,转入绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射,弱光静止培养1 h。以此顺序进行8 h多光源照射连续培养5 个周期,使脐型紫菜不断生长。培养期间定期观察藻类生长状态,直至紫菜直立枝长度达到4~5 cm后收集,测得脐型紫菜中MAAs的含量占干重的0.62%。
Claims (6)
1.一种可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)收集、筛选生长旺盛的脐型紫菜并清洗,经波长为254 nm紫外线照射3~10 min进行杀菌作为培养对象;
(2)将步骤(1)所得脐型紫菜放入管道式藻类培养池进行海水培养,控制温度在20~35℃,pH在5.6~6.4,由紫外灯、紫光灯、绿光灯、黄光灯四种光源组成的多光源连续照射培养3~5个周期,所述多光源连续照射培养每个周期为8 h,光照顺序为紫外光单独照射1 h,然后绿光和黄光同时照射6 h,最后紫光单独照射1h;多光源连续照射培养过程中泵入空气使脐型紫菜保持悬浮状态,定期观察去除可能存在的杂藻,使脐型紫菜不断生长,直立枝长度达到4~5 cm后收集晒干,采用氨基酸分析仪和UHPLC测得晒干脐型紫菜中MAAs的含量。
2.根据权利要求1所述的可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于:所述管道式藻类培养池底部均匀铺设滤网,滤网孔直径为0.5 cm,藻类培养池内壁设置四组特定波长的光源。
3.根据权利要求1所述的可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于:所述紫外灯的紫外波长为356 nm、光强为8 mW/cm2。
4.根据权利要求1所述的可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于:所述紫光灯的紫光波长449 nm、光强15 mW/cm2。
5.根据权利要求1所述的可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于:所述绿光灯的波长509 nm、光强为25 mW/cm2。
6.根据权利要求1所述的可提高脐型紫菜中类菌胞素氨基酸含量的培养方法,其特征在于:所述黄光灯的波长594 nm、光强为25 mW/cm2。
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