CN105671112A - 一种发酵制备a82846b的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种发酵制备A82846B的方法，针对A82846B与A82846A、A82846C结构上的差异，提供了一种氯化盐添加工艺，大幅提高了A82846B发酵单位和组分比例，降低了生产成本。本发明的操作简单，条件温和，原材料来源广泛价格便宜，设备要求低，适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵生产技术领域，涉及糖肽类抗生素的发酵方法，具体涉及一种通过发酵制备获得A82846B的方法。
背景技术
糖肽抗生素是由微生物产生，或由微生物产生并进行部分修饰的一大类物质。万古霉素和替考拉宁为市售的抗菌产品。在上世纪九十年代发现的糖肽中，包括称作A82846A（也称作ereomomycin）、A82846B（也称作氯东方霉素chloroorienticinA）、A82846C（也称作东方霉素orienticinC）及东方霉素A。已经对天然存在的糖肽进行了多种修饰，其中一种是对糖肽中的反应性胺的还原烷基化的修饰。
2014年8月7日FDA批准抗生素奥利万星(oritavancin)用于由敏感革兰氏阳性菌导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染成人患者的治疗。奥利万星是一种单剂量治疗方案的抗生素,具有良好的市场前景。
A82846B是合成奥利万星的关键中间体，可由东方诺卡菌(Nocardiaorientalis)发酵产生。除了A82846B，东方诺卡菌发酵时还会产生两种主要成分A82846A和A82846C，其结构式如下：
A82846A分子式为C73H89N10O26Cl,A82846B分子式为C73H88N10O26Cl2,A82846C分子式为C73H90N10O26。
由上可知，三种物质结构非常接近，分离纯化工作相当困难，发酵液中A82846B的组分比例（A82846B在三种物质中所占比例）的高低将极大影响提取收率。目前我国关于A82846B的研究较少，发酵单位和组分比例都较低，导致生产成本居高不下。
发明内容
本发明公开了一种发酵制备A82846B的新方法，通过优化A82846B发酵的工艺，不仅提高了发酵单位，而且也提高了A82846B的组分比例，提高了收率。
使用东方诺卡菌(Nocardiaorientalis)发酵A82846B工艺中，最大的难点在于A82846A、A82846B、A82846C结构极其相似，分离纯化相对困难，使得生产成本非常高，本发明技术人员经过大量的研究工作，发现提高培养基中氯的含量有助于提高A82846B的发酵单位和组分比例。
虽然现有的发酵工业中，在发酵培养基中常常添加氯化盐，常见如氯化钠，但添加的主要目的提供阳离子来参与酶的组成、调节酶的活性，另一个重要的添加目的是维持发酵培养基的渗透压，并没有说明添加氯化盐对于利用东方诺卡菌发酵A82846B的发酵单位和组分比例有任何影响。
本发明技术人员通过大量的研究工作，发现添加氯化盐的种类和采用何种添加方式以及添加多少都对A82846B的发酵单位和组分比例有较大影响。
本发明所述发酵制备A82846B的新方法为利用东方诺卡菌进行发酵，在发酵培养基中加入氯化盐以提高氯离子，从而来提高A82846B在整个发酵产物中的比例，提高收率，降低成本。
本发明所述的氯化盐可为任何可提供氯离子的无机盐，优选氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化铵中的一种或多种。
本发明所述发酵培养基为本领域技术人员在利用东方诺卡菌进行发酵时所使用的常规发酵液。
本发明所述的氯化钠的添加浓度为0.2-0.8%。优选的，添加浓度为0.4-0.6%。
本发明所述的氯化钾的添加浓度为0.25-1%。优选的，添加浓度为0.5-0.75%。
本发明所述的氯化钙的添加浓度为0.6-1.2%。优选的，添加浓度为0.8-1%。
本发明所述的氯化铵的添加浓度为0.2-0.8%。优选的，添加浓度为0.4-0.6%。
本发明所述的添加方式是在发酵开始前一次性加入发酵培养基中。
本发明技术方案优选的发酵实施过程是，在发酵培养基中加入0.5%氯化钠、0.625%氯化钾、0.9%氯化钙和0.5%氯化铵，接入成熟种子后，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
具体实施例
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不意味着对本发明有任何限制。
以下为具体实施例中种子瓶、发酵瓶以及各类氯化盐的配置方法
种子培养基：麦芽糊精20g/L，葡萄糖10g/L，黄豆粉15g/L，酵母提取物3g/L，碳酸钙1g/L，pH7.0。
发酵培养基：麦芽糊精40g/L，糖蜜20g/L，黄豆粉20g/L，酵母粉10g/L，碳酸钙3g/L，pH7.0。
250ml三角瓶装30ml种子培养基，120℃灭菌30min待用。
250ml三角瓶装50ml发酵培养基，120℃灭菌30min待用。
分别配置浓度为20%的氯化钠、氯化钾、氯化钙和和氯化铵溶液，120℃灭菌30min待用。
以下为具体实施例中摇瓶种子的培养方法：将低温保存的A82846B生产菌种接种到准备好的种子瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养40-50h，即可得到成熟的摇瓶种。
具体实施例
实施例1发酵瓶生产A82846B(不添加氯化盐)
将5ml成熟的摇瓶种子接种到装有50ml料液的发酵瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
实验结果见下表1：
表1:发酵瓶生产A82846B(不添加氯化盐)
由表1结果可以看出，不加氯化盐，A82846B单位只有20mg/L，组分比例为3%，主要产物是A82846C。
实施例2发酵瓶生产A82846B(添加氯化钠)
在装有50ml料液的发酵瓶中分别加入0.5ml、1ml、1.5ml和2ml的20%氯化钠溶液，使发酵培养基氯化钠浓度分别约为0.2%、0.4%、0.6%和0.8%。再将5ml成熟的摇瓶种子接种到上述发酵瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
实验结果见下表2：
表2:发酵瓶生产A82846B(添加氯化钠)
由表1和表2结果对比可以看出，添加氯化钠可以大幅提高A82846B的单位和组分比例，添加浓度为0.2%-0.8%更好，而0.4-0.6%则显著大幅提高A82846B的单位和组分比例。
实施例3发酵瓶生产A82846B(添加氯化钾)
在装有50ml料液的发酵瓶中分别加入0.625ml、1.25ml、1.875ml和2.5ml的20%氯化钾溶液，使发酵培养基氯化钾浓度分别约为0.25%、0.5%、0.75%和1%。再将5ml成熟的摇瓶种子接种到上述发酵瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
实验结果见下表3：
表3:发酵瓶生产A82846B(添加氯化钾)
由表1和表3结果对比可以看出，添加氯化钾可以大幅提高A82846B的单位和组分比例，添加浓度为0.25%-1.0%更好，而0.5-0.75%则显著大幅提高A82846B的单位和组分比例。
实施例4发酵瓶生产A82846B(添加氯化钙)
在装有50ml料液的发酵瓶中分别加入1.5ml、2ml、2.5ml和3ml的20%氯化钙溶液，使发酵培养基氯化钙浓度分别约为0.6%、0.8%、1%和1.2%。再将5ml成熟的摇瓶种子接种到上述发酵瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
实验结果见下表4：
表4:发酵瓶生产A82846B(添加氯化钙)
由表1和表4结果对比可以看出，添加氯化钙可以大幅提高A82846B的单位和组分比例，添加浓度为0.6%-1.2%更好，而0.8-1.0%则显著大幅提高A82846B的单位和组分比例。
实施例5发酵瓶生产A82846B(添加氯化铵)
在装有50ml料液的发酵瓶中分别加入0.5ml、1ml、1.5ml和2ml的20%氯化铵溶液，使发酵培养基氯化铵浓度分别约为0.2%、0.4%、0.6%和0.8%。再将5ml成熟的摇瓶种子接种到上述发酵瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
实验结果见下表5：
表5:发酵瓶生产A82846B(添加氯化铵)
由表1和表5结果对比可以看出，添加氯化铵可以大幅提高A82846B的单位和组分比例，添加浓度为0.2-0.8%更好，而0.4-0.6%则显著大幅提高A82846B的单位和组分比例。
实施例6发酵瓶生产A82846B(添加多种氯化盐)
在装有50ml料液的发酵瓶中加入多种氯化盐，根据浓度的不同，分成三个组。
第一组：1ml的20%氯化钠溶液（培养基浓度0.4%）、1.25ml的20%氯化钾溶液（培养基浓度0.5%）、2ml的20%氯化钙溶液（培养基浓度0.8%）和1ml的20%氯化铵溶液（培养基浓度0.4%）。
第二组：1.25ml的20%氯化钠溶液（培养基浓度0.5%）、1.56ml的20%氯化钾溶液（培养基浓度0.625%）、2.25ml的20%氯化钙溶液（培养基浓度0.9%）和1.25ml的20%氯化铵溶液（培养基浓度0.5%）。
第三组：1.5ml的20%氯化钠溶液（培养基浓度0.6%）、1.875ml的20%氯化钾溶液（培养基浓度0.75%）、2.5ml的20%氯化钙溶液（培养基浓度1%）和1.5ml的20%氯化铵溶液（培养基浓度0.6%）。
将5ml成熟的摇瓶种子接种到上述发酵瓶中，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。
实验结果见下表6：
表6:发酵瓶生产A82846B(添加多种氯化盐)
表6:发酵瓶生产A82846B(添加多种氯化盐)
由表6结果可以看出，添加多种氯化盐可以大幅提高A82846B的单位和组分比例，添加浓度0.4-0.6%氯化钠、0.5-0.75%氯化钾、0.8-1%氯化钙和0.4-0.6%氯化铵较为合适。
Claims (8)
1.一种使用东方诺卡菌发酵制备A82846B的方法，其特征在于，在发酵培养基中添加氯化盐。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氯化盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化铵中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯化钠的添加浓度为0.2-0.8%，优选为0.4-0.6%。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯化钾的添加浓度为0.25-1.0%，优选为0.5-0.75%。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯化钙的添加浓度为0.6-1.2%，优选为0.8-0.1.0%。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯化铵的添加浓度为0.2-0.8%，优选为0.4-0.6%。
7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法为同时添加氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化铵这四种盐，优选浓度为0.4-0.6%氯化钠、0.5-0.75%氯化钾、0.8-1%氯化钙和0.4-0.6%氯化铵。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，氯化盐的添加方式是在发酵开始前一次性加入发酵培养基中。
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|---|---|
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108728390A (zh) * | 2017-04-19 | 2018-11-02 | 上海医药工业研究院 | 一种生产a82846b的基因工程菌及其制备方法和应用 |
| CN109971809A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-07-05 | 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 | 一种糖肽类抗生素中间体的发酵制备方法 |
| CN110055294A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-07-26 | 重庆乾泰生物医药有限公司 | 奥利万星中间体的发酵方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5187082A (en) * | 1990-08-16 | 1993-02-16 | Eli Lilly And Company | Process for producing A83850 antibiotics |
| CN104805161A (zh) * | 2014-01-29 | 2015-07-29 | 上海医药工业研究院 | 生产奥利万星前体a82846b的方法及培养基 |
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2015
- 2015-08-03 CN CN201510465825.5A patent/CN105671112A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5187082A (en) * | 1990-08-16 | 1993-02-16 | Eli Lilly And Company | Process for producing A83850 antibiotics |
| CN104805161A (zh) * | 2014-01-29 | 2015-07-29 | 上海医药工业研究院 | 生产奥利万星前体a82846b的方法及培养基 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 肖冬光: "《微生物工程原理》", 31 July 2004, 中国轻工业出版社 * |
| 郑玲辉等: "奥利万星中间体A82846B的菌株选育与培养基优化", 《中国医药工业杂志》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108728390A (zh) * | 2017-04-19 | 2018-11-02 | 上海医药工业研究院 | 一种生产a82846b的基因工程菌及其制备方法和应用 |
| CN109971809A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-07-05 | 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 | 一种糖肽类抗生素中间体的发酵制备方法 |
| CN110055294A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-07-26 | 重庆乾泰生物医药有限公司 | 奥利万星中间体的发酵方法 |
| CN109971809B (zh) * | 2019-04-02 | 2023-04-28 | 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 | 一种糖肽类抗生素中间体的发酵制备方法 |
| CN110055294B (zh) * | 2019-04-02 | 2023-08-25 | 重庆乾泰生物医药有限公司 | 奥利万星中间体的发酵方法 |
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