CN104805161A - 生产奥利万星前体a82846b的方法及培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法及培养基。本发明公开的种子培养基包含酵母粉、聚合蛋白胨、麦芽浸粉和葡萄糖；所述的种子培养基的pH值为6.5～7.5。本发明公开的发酵培养基包含碳源、氮源和矿物质；碳源的含量为30～180g/L；氮源的含量为5～60g/L；矿物质的含量为2～5g/L；所述的碳源包含葡萄糖、糊精和红糖；所述的氮源包含蛋白胨和/或水解酪蛋白；所述的矿物质包含碳酸钙；所述的发酵培养基的pH值为6.5～7.5。本发明的种子培养基和发酵培养基及生产方法可以大大提高A82846B的发酵单位，提高生产效率，适用于奥利万星前体A82846B的大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法及培养基。
背景技术
A82846B是一种天然的糖肽，是从诺卡氏土分离的东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）的培养基中分离的发酵产物，该糖肽的化学结构除多含一个4-表-万古胺（4-epi-Vancosamine）外与万古霉素相似，分子式是C73H88N10O26Cl2，其抗菌活性比万古霉素大4～8倍，其阻断细胞壁合成的作用机理与其他糖肽如万古霉素和Teicoplanin相同。
奥利万星（oritavancin）是以A82846B为前体的半合成糖肽类抗生素。奥利万星是最初由美国礼来公司研发，后转让给美国Targanta Therapeutics生物制药公司，对革兰阳性菌有广谱抗菌效果（包括耐万古霉素细菌），用于治疗皮肤感染、肺炎球菌感染和全身感染的适应征，目前均处于Ⅲ期临床研究阶段。同时，奥利万星是第一个进入大规模临床试验的二代半合成糖肽类抗生素，作用机制与万古霉素、达巴万星和替考拉宁相似，但是，因其生物活性更强，半衰期更长，从而具有诱人的开发前景。随着耐药菌的不断出现，具有良好抗MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）和VRE（耐万古霉素肠球菌）作用的抗生素的开发速度却十分的缓慢。因此，奥利万星的出现给临床治疗耐药菌带来了新的希望和突破，而其前体A82846B的微生物发酵工艺也倍受业内人士的瞩目。目前，A82846B主要由美国TargantaTherapeutics生物制药公司通过发酵进行生产，其报道的发酵培养基中的组分和含量为：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、10.0g/L的胰蛋白胨、2.0g/L的CaCO3和20.0g/L的糖蜜，发酵培养的温度为30℃，发酵培养的时间为260h，但是，上述发酵培养基进行发酵后菌体活力较差，发酵单位较低。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的培养基用于生产奥利万星前体A82846B的发酵单位低以及菌体活力差的缺陷，而提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法及其种子培养基和发酵培养基。本发明的种子培养基和发酵培养基及生产方法可以大大提高A82846B的发酵单位，提高生产效率，适用于奥利万星前体A82846B的大规模生产。
本发明提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的种子培养基，所述的种子培养基包含酵母粉、聚合蛋白胨、麦芽浸粉和葡萄糖；所述的种子培养基的pH值为6.5～7.5。
所述的酵母粉的含量较佳地为3g/L～5g/L。所述的聚合蛋白胨的含量较佳地为10g/L～15g/L，更佳地为11g/L～13g/L。所述的麦芽浸粉的含量较佳地为3g/L～5g/L。所述的葡萄糖的含量较佳地为15g/L～20g/L，更佳地为15g/L～17g/L。以上含量是指1L发酵培养基中各组分的质量。
本发明还提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的发酵培养基，所述的发酵培养基包含碳源、氮源和矿物质；所述的碳源的含量为30g/L～180g/L；所述的氮源的含量为5g/L～60g/L；所述的矿物质的含量为2g/L～5g/L；所述的碳源包含葡萄糖、糊精和红糖；所述的氮源包含蛋白胨和/或水解酪蛋白；所述的矿物质包含碳酸钙（CaCO3）；以上含量是指1L发酵培养基中各组分的质量；所述的发酵培养基的pH值为6.5～7.5。
所述的发酵培养基中，所述的碳源的含量较佳地为50g/L～105g/L。所述的氮源的含量较佳地为5g/L～30g/L。所述的矿物质的含量较佳地为2g/L～4g/L。
所述的发酵培养基还可按照本领域常规的酸碱调节剂进行调节，使得发酵培养基的pH值在6.5～7.5之间。
所述的发酵培养基中，所述的葡萄糖的含量较佳地为10g/L～20g/L。所述的糊精的含量较佳地为10g/L～50g/L。所述的红糖的含量较佳地为10g/L～60g/L，更佳地为40g/L～60g/L。所述的蛋白胨的含量较佳地为5g/L～30g/L。所述的水解酪蛋白的含量较佳地为5g/L～10g/L。所述的碳酸钙的含量较佳地为1g/L～5g/L。
所述的糊精可为本领域常规使用的糊精，较佳地包含土豆糊精和/或麦芽糊精。其中，所述的土豆糊精的含量较佳地为0～40g/L；所述的麦芽糊精的含量较佳地为0～50g/L，且土豆糊精和麦芽糊精的含量不同时为0。
当糊精包含土豆糊精时，所述的土豆糊精的含量较佳地为20g/L～40g/L。当糊精包含麦芽糊精时，所述的麦芽糊精的含量较佳地为10g/L～50g/L。
所述的蛋白胨可为本领域常规使用的蛋白胨，较佳地包含鱼粉蛋白胨、肉胨、大豆蛋白胨和胰蛋白胨中的一种或多种；更佳地为鱼粉蛋白胨。其中，所述的鱼粉蛋白胨的含量较佳地为0～30g/L；所述的肉胨的含量较佳地为0～15g/L；所述的大豆蛋白胨的含量较佳地为0～15g/L；所述的胰蛋白胨的含量较佳地为0～30g/L，且鱼粉蛋白胨、肉胨、大豆蛋白胨和胰蛋白胨的含量不同时为0。
当蛋白胨包含鱼粉蛋白胨时，所述的鱼粉蛋白胨的含量较佳地为5g/L～30g/L，更佳地为10g/L～15g/L。当蛋白胨包含肉胨时，所述的肉胨的含量较佳地为10g/L～15g/L。当蛋白胨包含大豆蛋白胨时，所述的大豆蛋白胨的含量较佳地为5g/L～15g/L。当蛋白胨包含胰蛋白胨时，所述的胰蛋白胨的含量较佳地为10g/L～30g/L。
较佳地，所述的碳源还可进一步包含糖蜜、甘油和玉米淀粉中的一种或多种。其中，所述的糖蜜的含量较佳地为0～20g/L；所述的甘油的含量较佳地为0～30g/L；所述的玉米淀粉的含量较佳地为0～30g/L，且糖蜜、甘油和玉米淀粉的含量不同时为0。
当碳源包含糖蜜时，所述的糖蜜的含量较佳地为3g/L～20g/L。当碳源包含甘油时，所述的甘油的含量较佳地为15g/L～30g/L。当碳源包含玉米淀粉时，所述的玉米淀粉的含量较佳地为20g/L～30g/L。
较佳地，所述的氮源还可进一步包含麸质粉、豆粕、烤黄豆粉和酵母粉中的一种或多种，更佳地为麸质粉。其中，所述的麸质粉的含量较佳地为0～20g/L；所述的烤黄豆粉的含量较佳地为0～15g/L；所述的豆粕的含量较佳地为0～10g/L；所述的酵母粉的含量较佳地为0～10g/L，且麸质粉、豆粕、烤黄豆粉和酵母粉的含量不同时为0。
当氮源包含麸质粉时，所述的麸质粉的含量较佳地为10g/L～20g/L。当氮源包含烤黄豆粉时，所述的烤黄豆粉的含量较佳地为5g/L～15g/L。当氮源包含豆粕时，所述的豆粕的含量较佳地为5g/L～10g/L。当氮源包含酵母粉时，所述的酵母粉的含量较佳地为5g/L～10g/L。
所述的发酵培养基中，所述的矿物质一般作为渗透压调节剂，所述的矿物质还可进一步包含KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2中的一种或多种。其中，所述的KH2PO4的含量较佳地为0～1.25g/L；所述的MgSO4含量较佳地为0～1.0g/L；所述的Mg3(PO4)2的含量较佳地为0～1.5g/L，且KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2的含量不同时为0。
当矿物质包含KH2PO4时，所述的KH2PO4的含量较佳地为0.25g/L～1.25g/L。当矿物质包含MgSO4时，所述的MgSO4含量较佳地为0.5g/L～1g/L。当矿物质包含Mg3(PO4)2时，所述的Mg3(PO4)2的含量较佳地为1g/L～1.5g/L。
在本发明的一较佳实施例中，所述的碳源为葡萄糖、糊精和红糖，以及下述物质中的一种或多种：糖蜜、甘油和玉米淀粉。
在本发明的另一较佳实施例中，所述的氮源为蛋白胨和/或水解酪蛋白，以及下述物质中的一种或多种：麸质粉、豆粕、烤黄豆粉和酵母粉。
在本发明的另一较佳实施例中，所述的矿物质为碳酸钙，以及下述物质中的一种或多种：KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2。
所述的发酵培养基中，较佳地还可以进一步包含氨基酸。所述的氨基酸一般作为前体物质，其含量较佳地为1g/L～5g/L。所述的氨基酸可为本领域培养基中常规使用的氨基酸，所述的氨基酸较佳地为亮氨酸。
所述的发酵培养基较佳地包含10g/L～20g/L的葡萄糖、10g/L～50g/L的麦芽糊精或土豆糊精、5g/L～40g/L的麸质粉、0～15g/L的烤黄豆粉、10g/L～20g/L的红糖、0～60g/L的糖蜜、10g/L～60g/L的蛋白胨中的一种或多种、1g/L～5g/L的CaCO3，以及0.25g/L～1.5g/L的KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2中的一种或多种。
所述的发酵培养基更佳地包含10g/L～20g/L的葡萄糖、20g/L～40g/L的土豆糊精、10g/L～30g/L的麸质粉、40g/L～60g/L的红糖、5g/L～15g/L的鱼粉蛋白胨、2.0g/L～4.0g/L的CaCO3和0.1g/L～0.2g/L的Mg3(PO4)2。
所述的发酵培养基更佳地包含10g/L～20g/L的葡萄糖、20g/L～40g/L的土豆糊精、10g/L～30g/L的麸质粉、40g/L～60g/L的红糖、5g/L～15g/L的鱼粉蛋白胨、2.0g/L～4.0g/L的CaCO3和0.25g/L～1.25g/L的KH2PO4。
本发明还提供了一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法，其包含下列步骤：
（1）将东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）活化后接种于上述种子培养基中培养，得种子液；所述的培养的温度为20℃～40℃；所述的培养的时间为24～48小时；
（2）将所述的种子液接种于上述发酵培养基中进行发酵培养，即得含有奥利万星前体A82846B的发酵液；所述的发酵培养的温度为20℃～40℃；所述的发酵培养的时间为5～15天。
步骤（1）中，所述的东方拟无枝酸菌可为本领域常规使用的东方拟无枝酸菌菌株，只要能产生奥利万星前体A82846B即可，较佳地为从诺卡氏土分离的东方拟无枝酸菌NRRL18099。该菌株已在US005843437A中公开。
步骤（1）中，所述的东方拟无枝酸菌活化的方法和条件可为本领域常规的方法和条件，本发明优选将东方拟无枝酸菌划线于种子斜面培养基，在28～30℃的条件下培养5～8天，即可。其中，所述的斜面培养基可为本领域常规使用的斜面培养基。
步骤（2）中，所述的东方拟无枝酸菌的种子液的用量较佳地为5%～15%，所述的百分比是指种子液的体积与发酵培养基的体积百分比。所述的发酵培养的温度较佳地为25℃～32℃，更佳地为28℃～30℃。所述的发酵培养的时间较佳地为6～8天。所述的含有奥利万星前体A82846B的发酵液可按照本领域常规的方法将奥利万星前体A82846B分离出来，较佳地为将所述的含有奥利万星前体A82846B的发酵液进行离心处理，取上清液，即可。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的培养基在用于发酵生产奥利万星前体A82846B时能够大大提高A82846B的产量，提高生产效率，适用于A82846B的大规模生产。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1
取东方拟无枝酸菌（NRRL18099）划线于种子斜面培养基，在28℃的条件下培养5天后接种于20mL的种子培养基中，在28℃的条件下，200rpm的旋转式摇床培养48h，得东方拟无枝酸菌的种子液。将东方拟无枝酸菌的种子液以10%（v/v）的接种量接种于30mL的发酵培养基中培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为6天，即得含有A82846B的发酵液。将发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B产量对比按专利“US005843437A”记载的发酵培养基培养后的产量150mg/L提高了303%，为604.5mg/L。
其中，所述的斜面培养基包含：10g/L的大豆胨、10g/L的可溶性淀粉和20g/L的琼脂粉，斜面培养基的pH值为7.0。
所述的种子培养基包含：3g/L的酵母粉、11g/L的聚合蛋白胨（polypeptone），3g/L的麦芽浸粉和17g/L的葡萄糖，种子培养基的pH值为6.8。
所述的发酵培养基包含：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、15g/L的鱼粉蛋白胨、2g/L的CaCO3、45g/L的红糖和10g/L的麸质粉。发酵培养基的pH值为7.0。
实施例2
取东方拟无枝酸菌（NRRL18099）划线于种子斜面培养基，在30℃的条件下培养8天后接种于20mL的种子培养基中，在20℃的条件下，200rpm的旋转式摇床培养24h，得东方拟无枝酸菌的种子液。将东方拟无枝酸菌的种子液以5%（v/v）的接种量接种于30mL的发酵培养基中培养，发酵培养的温度为20℃，发酵培养的周期为5天，即得含有A82846B的发酵液。
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3、和0.25g/L的KH2PO4。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了546%，为969mg/L。
实施例3
取东方拟无枝酸菌（NRRL18099）划线于种子斜面培养基，在30℃的条件下培养8天后接种于20mL的种子培养基中，在20℃的条件下，200rpm的旋转式摇床培养36h，得东方拟无枝酸菌的种子液。将东方拟无枝酸菌的种子液以15%（v/v）的接种量接种于30mL的发酵培养基中培养，发酵培养的温度为30℃，发酵培养的周期为10天，即得含有A82846B的发酵液。
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和0.5g/L的MgSO4。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了305%，为607.5mg/L。
实施例4
取东方拟无枝酸菌（NRRL18099）划线于种子斜面培养基，在30℃的条件下培养8天后接种于20mL的种子培养基中，在40℃的条件下，200rpm的旋转式摇床培养24h，得东方拟无枝酸菌的种子液。将东方拟无枝酸菌的种子液以15%（v/v）的接种量接种于30mL的发酵培养基中培养，发酵培养的温度为40℃，发酵培养的周期为5天，即得含有A82846B的发酵液。
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和1g/L的MgSO4。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了280%，为570mg/L。
实施例5
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和5g/L的亮氨酸。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了252.7%，为529mg/L。
实施例6
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和0.75g/L的KH2PO4。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了248%，为522mg/L。
实施例7
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、55g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了232%，为498mg/L。
实施例8
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和2g/L的亮氨酸。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了228.7%，为493mg/L。
实施例9
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和3g/L的亮氨酸。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了228%，为492mg/L。
实施例10
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、40g/L的麦芽糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、10g/L麸质粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了228%，为492mg/L。
实施例11
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和1g/L的亮氨酸。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了225.3%，为487.95mg/L。
实施例12
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的胰蛋白胨、10g/L酵母粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了219.3%，为478.5mg/L。
实施例13
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和1.25g/L的KH2PO4。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了218%，为477mg/L。
实施例14
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和4g/L的亮氨酸。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了218%，为477mg/L。
实施例15
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、50g/L的麦芽糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、10g/L麸质粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了205.3%，为457.95mg/L。
实施例16
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了202.5%，为453mg/L。
实施例17
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、55g/L的红糖、20g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了192.7%，为439.05mg/L。
实施例18
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、30g/L的麦芽糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、10g/L麸质粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了191.3%，为436.9mg/L。
实施例19
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的胰蛋白胨、5g/L酵母粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了182.7%，为424mg/L。
实施例20
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的胰蛋白胨、5g/L烤黄豆粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了181.3%，为421.95mg/L。
实施例21
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、10g/L的鱼粉蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了180.7%，为421.05mg/L。
实施例22
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的胰蛋白胨、5g/L豆粕和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了163%，为394.5mg/L。
实施例23
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的胰蛋白胨、10g/L豆粕和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了160.7%，为391.05mg/L。
实施例24
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、10g/L的麦芽糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、10g/L麸质粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了160.7%，为391.05mg/L。
实施例25
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的麦芽糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、10g/L麸质粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了159.3%，为388.95mg/L。
实施例26
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、60g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了159%，为388.5mg/L。
实施例27
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的胰蛋白胨、10g/L烤黄豆粉和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了153.3%，为379.95mg/L。
实施例28
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了153%，为379.5mg/L。
实施例29
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、10.0g/L的肉胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了129.3%，为343.5mg/L。
实施例30
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、40g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、20g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了118%，为327mg/L。
实施例31
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、30g/L的土豆糊精、40g/L的红糖、20g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了110%，为316.5mg/L。
实施例32
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、55g/L的红糖、30g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了107.3%，为316mg/L。
实施例33
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、35g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了101.3%，为301mg/L。
实施例34
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、15g/L的肉胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了97.3%，为295.95mg/L。
实施例35
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、5g/L的亮氨酸、2g/L的CaCO3和0.25g/L的KH2PO4。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了96.7%，为295mg/L。
实施例36
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、15g/L的鱼粉蛋白胨、15g/L麸质粉、2g/L的CaCO3和1.5g/L的Mg3(PO4)2。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了91.6%，为287.4mg/L。
实施例37
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、45g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了91.3%，为286mg/L。
实施例38
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、30g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了84.7%，为277mg/L。
实施例39
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、15g/L的大豆蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了83.3%，为274.95mg/L。
实施例40
将实施例1中的种子培养基替换为：5g/L的酵母粉、10g/L的聚合蛋白胨（polypeptone），5g/L的麦芽浸粉和15g/L的葡萄糖，种子培养基的pH值为6.8。
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了76%，为264mg/L。
实施例41
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、30g/L的土豆糊精、10g/L的红糖、20g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了64%，为240mg/L。
实施例42
将实施例1中的发酵培养基替换为：20g/L的葡萄糖、10g/L的麦芽糊精、30g/L的玉米淀粉、10g/L的红糖、3g/L的糖蜜、15g/L的甘油、15g/L的烤黄豆粉、5g/L的水解酪蛋白和4g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其余条件同实施例2。A82846B产量对比报道提高了53.7%，为230.1mg/L。
实施例43
将实施例1中的发酵培养基替换为：20g/L的葡萄糖、30g/L的麦芽糊精、20g/L的玉米淀粉、10g/L的红糖和20g/L的糖蜜、30g/L的甘油、15g/L的烤黄豆粉、5g/L的水解酪蛋白和1g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其余条件同实施例2。A82846B产量对比报道提高了25%，为187mg/L。
实施例44
将实施例1中的发酵培养基替换为：20g/L的葡萄糖、50g/L的麦芽糊精、30g/L的玉米淀粉、10g/L的红糖、3g/L的糖蜜、25g/L的甘油、5g/L的烤黄豆粉、5g/L的水解酪蛋白和4g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。
按实施例中1的制备方法制得的种子液以10%（v/v）接种量接种于发酵培养基中，发酵温度为28℃，发酵周期为11天，其他条件同实施例1。A82846B产量对比报道提高了43.7%，为215.5mg/L。
实施例45
将实施例1中的发酵培养基替换为：20g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、30g/L的玉米淀粉、10g/L的红糖、3g/L的糖蜜、25g/L的甘油、15g/L的烤黄豆粉、10g/L的水解酪蛋白和4g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其余条件同实施例1。A82846B产量对比报道提高了20%，为180mg/L。
实施例46
将实施例1中的种子培养基替换为：15g/L的葡萄糖、3g/L的酵母粉、5g/L的麦芽浸粉、15g/L的聚合蛋白胨（polypepton），种子培养基的pH值为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、20g/L的红糖、10g/L的胰蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了32.7%。
实施例47
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、10g/L的红糖、5g/L的鱼粉蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.5。培养时间为15天，其他条件同实施例1。A82846B产量对比文献报道提高了22.7%，为187mg/L。
实施例48
将实施例1中的发酵培养基替换为：10g/L的葡萄糖、20g/L的土豆糊精、10g/L的红糖、5g/L的大豆蛋白胨和2g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为6.5。其他条件同实施例1。A82846B产量的提高了24.7%，为187mg/L。
对比实施例1
按专利“US005843437A”记载的内容，按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为8天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为150mg/L。其中，制备种子液时使用的种子培养基的配方为：葡萄糖10g/L、可溶性淀粉20.0g/L、酵母浸粉5.0g/L、酶解酪蛋白5.0g/L、CaCO31.0g/L，种子培养基的pH为7.5；其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、10.0g/L的胰蛋白胨、2.0g/L的CaCO3和20.0g/L的糖蜜，pH值不需要调节，为5.8左右。
对比实施例2
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、糖蜜3.0g/L和甘油25.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为8天，其他条件同实施例1。A82846B产量为151mg/L。
对比实施例3
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L和甘油25.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为8天，其他条件同实施例1。A82846B产量151mg/L。
对比实施例4
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、可溶性淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L和糖蜜3.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为8天，其他条件同实施例1。A82846B产量151mg/L。
对比实施例5
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、可溶性淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、甘油25.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为8天，其他条件同实施例1。A82846B产量157mg/L。
对比实施例6
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为11天，其他条件同实施例1。A82846B产量为60mg/L。
对比实施例7
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、糖蜜3.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为12天，其他条件同实施例1。A82846B产量为105mg/L。
对比实施例8
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、氧化淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、糖蜜3.0g/L、甘油25.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为11天，其他条件同实施例1。A82846B产量为105mg/L。
对比实施例9
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、氧化淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为8天，其他条件同实施例1。A82846B产量为105mg/L。
对比实施例10
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、氧化淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、糖蜜3.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为12天，其他条件同实施例1。A82846B产量为105mg/L。
对比实施例11
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、氧化淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、甘油25.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为4天，其他条件同实施例1。A82846B产量为120mg/L。
对比实施例12
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、可溶性淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L、糖蜜3.0g/L、甘油25.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。培养时间为8天，其他条件同实施例1。A82846B产量为105mg/L。
对比实施例13
将实施例1的种子培养基替换为：3.0g/L的酵母浸粉、11.0g/L的聚合蛋白胨（polypeptone），3.0g/L的麦芽浸粉和15.0g/L的葡萄糖，种子培养基的pH值为6.8。其他条件同实施例1。A82846B产量为135mg/L。
对比实施例14
将实施例1中的种子培养基替换为：葡萄糖10g/L、可溶性淀粉20.0g/L、酵母浸粉5.0g/L、酶解酪蛋白5.0g/L、CaCO31.0g/L，种子培养基的pH为7.5。其他条件同实施例1。A82846B产量对为90mg/L。
对比实施例15
将实施例1的种子培养基替换为：葡萄糖30.0g/L、可溶性淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、酵母浸粉15.0g/L、CaCO34.0g/L，种子培养基的pH为7.0。
将实施例1中的发酵培养基替换为：葡萄糖20.0g/L、玉米淀粉30.0g/L、黄豆粉15.0g/L、水解酪蛋白5.0g/L、CaCO34.0g/L，发酵培养基中的pH值为7.0。发酵培养的时间为12天，其他条件同实施例1。A82846B产量为15mg/L。
对比实施例16
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为11天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为40mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：20.0g/L的麸质粉、20.0g/L的黄豆粉、115.0g/L的麦芽糊精、1.3g/L的NaCl、3.0g/L的CaCO3，加入去离子水1L，pH为7.0。
对比实施例17
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为6天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为95mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：20.0g/L的麦芽糊精、10.0g/L的胰蛋白胨、20.0g/L的乳糖、2.0g/L的CaCO3，加入去离子水1L，pH不需调节，约为5.8左右。
对比实施例18
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为6天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为84mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、15.0g/L的鱼粉蛋白胨、2.0g/L的CaCO3、45.0g/L的红糖、15.0g/L麸质粉和0.5g/L的Mg3(PO4)2。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例19
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为6天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为141mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、15.0g/L的鱼粉蛋白胨、2.0g/L的CaCO3、45.0g/L的红糖、15.0g/L麸质粉和3.0g/L的Mg3(PO4)2。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例20
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为6天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为139mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、5.0g/L的肉胨、2.0g/L的CaCO3和20.0g/L的红糖。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例21
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为8天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为167.4mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：20.0g/L的葡萄糖、30.0g/L的玉米淀粉、15.0g/L的黄豆粉、5.0g/L的CaCO3和25.0g/L的甘油。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例22
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为11天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为174mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、10.0g/L的麸质粉、2.0g/L的CaCO3和20.0g/L的红糖。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例23
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为4天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为150.6mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：20.0g/L的葡萄糖、30.0g/L的玉米淀粉、15.0g/L的黄豆粉、5.0g/L的水解酪蛋白和4.0g/L的CaCO3。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例24
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为9天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为154mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、10.0g/L的烤黄豆粉、2.0g/L的CaCO3和20.0g/L的红糖。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例25
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为12天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为155mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、15.0g/L的胰蛋白胨、2.0g/L的CaCO3和20.0g/L的红糖。发酵培养基中的pH值为7.0。
对比实施例26
按实施例中1制得的种子液以接种量10%（v/v）接种于30mL的发酵培养基中发酵培养，发酵培养的温度为28℃，发酵培养的周期为4天。发酵结束后发酵液离心取上清，HPLC测定，A82846B的产量为154mg/L。其中，所述的发酵培养基包含下列含量的组分：10.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的土豆糊精、10.0g/L的胰蛋白胨、2.0g/L的CaCO3和50.0g/L的红糖。发酵培养基中的pH值为7.0。
Claims (22)
1.一种用于生产奥利万星前体A82846B的种子培养基，其特征在于，所述的种子培养基包含酵母粉、聚合蛋白胨、麦芽浸粉和葡萄糖；所述的种子培养基的pH值为6.5～7.5。
2.如权利要求1所述的种子培养基，其特征在于，所述的酵母粉的含量为3g/L～5g/L；所述的聚合蛋白胨的含量为10g/L～15g/L；所述的麦芽浸粉的含量为3g/L～5g/L；所述的葡萄糖的含量为15g/L～20g/L；以上含量是指1L发酵培养基中各组分的质量。
3.一种用于生产奥利万星前体A82846B的发酵培养基，其特征在于，所述的发酵培养基包含碳源、氮源和矿物质；所述的碳源的含量为30g/L～180g/L；所述的氮源的含量为5g/L～60g/L；所述的矿物质的含量为2g/L～5g/L；所述的碳源包含葡萄糖、糊精和红糖；所述的氮源包含蛋白胨和/或水解酪蛋白；所述的矿物质包含碳酸钙；以上含量是指1L发酵培养基中各组分的质量；所述的发酵培养基的pH值为6.5～7.5。
4.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的碳源的含量为50g/L～105g/L；所述的氮源的含量为5g/L～30g/L；所述的矿物质的含量为2g/L～4g/L。
5.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的发酵培养基中，所述的葡萄糖的含量为10g/L～20g/L；所述的糊精的含量为10g/L～50g/L；所述的红糖的含量为10g/L～60g/L；所述的蛋白胨的含量为5g/L～30g/L；所述的水解酪蛋白的含量为5g/L～10g/L；所述的碳酸钙的含量为1g/L～5g/L。
6.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的糊精包含土豆糊精和/或麦芽糊精；其中，所述的土豆糊精的含量为0～40g/L；所述的麦芽糊精的含量为0～50g/L，且土豆糊精和麦芽糊精的含量不同时为0。
7.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的蛋白胨包含鱼粉蛋白胨、肉胨、大豆蛋白胨和胰蛋白胨中的一种或多种；其中，所述的鱼粉蛋白胨的含量为0～30g/L；所述的肉胨的含量为0～15g/L；所述的大豆蛋白胨的含量为0～15g/L；所述的胰蛋白胨的含量为0～30g/L，且鱼粉蛋白胨、肉胨、大豆蛋白胨和胰蛋白胨的含量不同时为0。
8.如权利要求7所述的发酵培养基，其特征在于，当蛋白胨包含鱼粉蛋白胨时，所述的鱼粉蛋白胨的含量为5g/L～30g/L；当蛋白胨包含肉胨时，所述的肉胨的含量为10g/L～15g/L；当蛋白胨包含大豆蛋白胨时，所述的大豆蛋白胨的含量为5g/L～15g/L；当蛋白胨包含胰蛋白胨时，所述的胰蛋白胨的含量为10g/L～30g/L。
9.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的碳源还进一步包含糖蜜、甘油和玉米淀粉中的一种或多种；其中，所述的糖蜜的含量为0～20g/L；所述的甘油的含量为0～30g/L；所述的玉米淀粉的含量为0～30g/L，且糖蜜、甘油和玉米淀粉的含量不同时为0。
10.如权利要求9所述的发酵培养基，其特征在于，当碳源包含糖蜜时，所述的糖蜜的含量为3g/L～20g/L；当碳源包含甘油时，所述的甘油的含量为15g/L～30g/L；当碳源包含玉米淀粉时，所述的玉米淀粉的含量为20g/L～30g/L。
11.如权利要求9所述的发酵培养基，其特征在于，所述的碳源为葡萄糖、糊精和红糖，以及下述物质中的一种或多种：糖蜜、甘油和玉米淀粉。
12.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的氮源还进一步包含麸质粉、豆粕、烤黄豆粉和酵母粉中的一种或多种；其中，所述的麸质粉的含量为0～20g/L；所述的烤黄豆粉的含量为0～15g/L；所述的豆粕的含量为0～10g/L；所述的酵母粉的含量为0～10g/L，且麸质粉、豆粕、烤黄豆粉和酵母粉的含量不同时为0。
13.如权利要求12所述的发酵培养基，其特征在于，当氮源包含麸质粉时，所述的麸质粉的含量为10g/L～20g/L；当氮源包含烤黄豆粉时，所述的烤黄豆粉的含量为5g/L～15g/L；当氮源包含豆粕时，所述的豆粕的含量为5g/L～10g/L；当氮源包含酵母粉时，所述的酵母粉的含量为5g/L～10g/L。
14.如权利要求12所述的发酵培养基，其特征在于，所述的氮源为蛋白胨和/或水解酪蛋白，以及下述物质中的一种或多种：麸质粉、豆粕、烤黄豆粉和酵母粉。
15.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的矿物质还进一步包含KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2中的一种或多种；其中，所述的KH2PO4的含量为0～1.25g/L；所述的MgSO4含量为0～1.0g/L；所述的Mg3(PO4)2的含量为0～1.5g/L，且KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2的含量不同时为0。
16.如权利要求15所述的发酵培养基，其特征在于，当矿物质包含KH2PO4时，所述的KH2PO4的含量为0.25g/L～1.25g/L；当矿物质包含MgSO4时，所述的MgSO4含量为0.5g/L～1.0g/L；当矿物质包含Mg3(PO4)2时，所述的Mg3(PO4)2的含量为1g/L～1.5g/L。
17.如权利要求15所述的发酵培养基，其特征在于，所述的矿物质为碳酸钙，以及下述物质中的一种或多种：KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2。
18.如权利要求3所述的发酵培养基，其特征在于，所述的发酵培养基,还进一步包含氨基酸；所述的氨基酸含量为1g/L～5g/L；所述的氨基酸较佳地为亮氨酸。
19.如权利要求3～18任一项所述的发酵培养基，其特征在于，其包含10g/L～20g/L的葡萄糖、10g/L～50g/L的麦芽糊精或土豆糊精、5g/L～40g/L的麸质粉、0～15g/L的烤黄豆粉、10g/L～60g/L的蛋白胨中的一种或多种、10g/L～20g/L的红糖、0～60g/L的糖蜜、1g/L～5g/L的CaCO3，以及0.25g/L～1.5g/L的KH2PO4、MgSO4和Mg3(PO4)2中的一种或多种。
20.如权利要求3～18任一项所述的发酵培养基，其特征在于，其包含10g/L～20g/L的葡萄糖、20g/L～40g/L的土豆糊精、10g/L～30g/L的麸质粉、5g/L～15g/L的鱼粉蛋白胨、40g/L～60g/L的红糖、2.0g/L～4.0g/L的CaCO3和0.1g/L～0.2g/L的Mg3(PO4)2。
21.如权利要求3～18任一项所述的发酵培养基，其特征在于，其包含10g/L～20g/L的葡萄糖、20g/L～40g/L的土豆糊精、10g/L～30g/L的麸质粉、40g/L～60g/L的红糖、5g/L～15g/L的鱼粉蛋白胨、2.0g/L～4.0g/L的CaCO3和0.25g/L～1.25g/L的KH2PO4。
22.一种用于生产奥利万星前体A82846B的方法，其特征在于包含下列步骤：
（1）将东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）活化后接种于如权利要求1或2所述的种子培养基中培养，得种子液；所述的培养的温度为20℃～40℃；所述的培养的时间为24～48小时；
（2）将所述的种子液接种于如权利要求3～21任一项所述的发酵培养基中进行发酵培养，即得含有奥利万星前体A82846B的发酵液；所述的发酵培养的温度为20℃～40℃；所述的发酵培养的时间为5～15天。
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