CN105648088A - 一种ad或mci检测标志物及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种AD或MCI检测标志物及其检测方法，其中，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA包括hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p和hsa-miR-150-5p。本发明血清采集快速简单，与脑脊液取样相比创伤性小，安全性高，与PET等影像学手段相比，对患者无放射性损伤。本发明采用miRCURYTM？LNA？Array基因芯片及miRNA检测新技术S-Poly(T)法结合，提高了方法的准确性和灵敏度。此外，检测miRNA表达量变化与量表检测及影像学诊断相比，具有定量检测的优点，人为主观性降低，更为准确。

Description

一种AD或MCI检测标志物及其检测方法
技术领域
本发明涉及疾病检测技术领域，尤其涉及一种AD或MCI检测标志物及其检测方法。
背景技术
阿尔茨海默病(AD)是一种退行性脑病变疾病，临床上以智能损害为主。多发病于老年期，病程进展缓慢，晚期病情具有不可逆性。随着我国人口老龄化，AD发病率有逐年增加的趋势。严重的认知功能衰退和语言能力障碍等导致AD患者交流困难、生活不能自理，给患者造成痛苦，同时也给家庭和社会带来沉重的负担，成为一个严重的社会问题，引起了世界各国政府和医学界的普遍关注。因此，寻找一种快速、有效的AD早期诊断方法，对疾病的防治意义重大。
目前，用于临床诊断AD的方法仅局限于量表得分检测和MRI、PET等影像学检测手段和脑脊液中生物标记物的检测。量表诊断受人为因素影响较大、准确性差；影像学检测费用昂贵，社区小医院无条件检测；脑脊液样品获取具有创伤性，取样困难，病人及家属多不愿配合。因此，目前尚无灵敏、特异、准确的用于从外周血中进行AD早期诊断的生物标记物。
MicroRNA(miRNA)是一类内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控，调节生物体生长、发育和凋亡等过程。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNA也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。在医学研究领域，miRNA参与调控多种疾病的发生和发展进程，同时，miRNA基于其调控机制，也有望成为疾病诊断的新生物学标记物。在诊断方面，miRNA作为肿瘤、心脏病、糖尿病等疾病诊断的生物学标志物的研究已有报道。
在结直肠癌患者的血清中miR-92水平显著提高，可作为该癌症筛选的一种非损伤性分子标志物。在脓毒症患者血清中miR-146a和miR-223显著降低。miR-423-5p可以作为心脏病的诊断标志物。然而，AD患者血清中的miRNA水平变化及作为生物标记物的报道，目前尚缺乏。且目前现有技术中尚无灵敏、特异、准确的用于从外周血中进行轻度认知障碍(MCI)诊断的生物标记物。
因此，现有技术有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种AD或MCI检测标志物及其检测方法，旨在解决现有技术中尚无灵敏、特异、准确的用于从外周血中进行AD或MCI诊断的生物标记物的问题。
本发明的技术方案如下：
一种AD或MCI检测标志物，其中，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA包括hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p和hsa-miR-150-5p。
所述AD或MCI检测标志物，其中，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-150-5p。
所述AD或MCI检测标志物，其中，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p和hsa-miR-15a-5p中的任意两种或多种。
所述AD或MCI检测标志物，其中，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-150-5p与以下五种hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p中任意两种或多种形成的miRNA组合。
一种基于如上任一所述AD或MCI标志物的检测方法，其中，采集血清，采用miRCURYTMLNAArray基因芯片方法或Q-PCR方法确定血清中是否存在如上任一所述的血清miRNA。
所述AD或MCI标志物的检测方法，其中，确定血清中存在所述血清miRNA后还包括：采用miRNA检测新技术S-Poly(T)法对血清miRNA进行逐个检测，确定检测到的血清miRNA的表达量变化。
有益效果：本发明确定了可用于诊断AD或MCI的血清miRNA检测标志物，作为明确的AD或MCI诊断的生化检测指标，采用基因芯片、Q-PCR和S-Poly(T)等方法，定量检测上述血清miRNA水平在AD或MCI患者中的变化。该检测结果较为客观、定量、准确地反映AD或MCI病理发展状况。
附图说明
图1为采用miRCURYTMLNAArray基因芯片进行microRNA表达谱差异分析，检测到的所有在AD/MCI患者与健康对照者之间差异表达的miRNA的聚类分析示意图。
图1.1～1.16为18个候选miRNA中获得的16个miRNA的相对表达量示意图，其中两个miRNA未检测出。
图2.1～2.10为大样本量(AD患者和健康对照者的样本量分别为n患者＝17；n对照＝18)验证在AD或MCI与健康对照者之间可能存在差异表达的miRNA的相对表达量示意图。
具体实施方式
本发明提供一种AD或MCI检测标志物及其检测方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供一种AD或MCI检测标志物，其中，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA包括hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p和hsa-miR-150-5p。上述hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p和hsa-miR-150-5p的各种组合可作为AD或MCI检测标志物。
优选地，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA可以为hsa-miR-150-5p。本发明中该hsa-miR-150-5p即可作为AD或MCI检测标志物，采用该hsa-miR-150-5p即可实现对AD或MCI的诊断。
优选地，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA可以为hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p和hsa-miR-15a-5p中的任意两种或多种。本发明上述hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p和hsa-miR-15a-5p中的任意两种或多种可作为AD或MCI检测标志物，实现对AD或MCI的诊断。
优选地，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-150-5p与以下五种hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p中任意两种或多种的组合。本发明上述hsa-miR-150-5p与以下五种hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p中任意两种或多种形式组合，可作为AD或MCI检测标志物，实现对AD或MCI的诊断。
本发明还提供一种基于如上所述AD或MCI检测标志物的检测方法，其中，采集血清，采集血清，采用miRCURYTMLNAArray基因芯片方法或Q-PCR方法确定血清中是否存在如上任一所述的血清miRNA。即采用miRCURYTMLNAArray基因芯片进行miRNA表达水平检测，或采用Q-PCR方法进行血清中上述miRNA水平检测。本发明仅限于血清中的miRNA，采用miRCURYTMLNAArraymiRNA基因芯片方法或Q-PCR方法，检测血清中是否存在上述所述的血清miRNA。若检测到血清中存在上述miRNA时，则诊断为AD或MCI患者，反之正常。本发明通过基因芯片与Q-PCR技术，检测血清中是否存在上述差异表达的6个血清miRNA，将这6个血清miRNA中的两种或两种以上以组合作为AD或MCI检测标志物，用于临床诊断，可极大提高诊断特异性和准确性。本发明中血清的采集快速简单，与脑脊液取样相比创伤性小、安全性高。与AD的影像学检测方法如PET检测相比，对患者无毒副作用，且具有定量检测的效果。
本发明还提供一种基于如上所述AD或MCI检测标志物的检测方法，其中，采用miRNA检测新技术S-Poly(T)法对上述血清miRNA进行逐个检测，确定上述血清miRNA的表达量变化，以进一步提高AD或MCI诊断准确性。
本发明检测AD或MCI血清miRNA的表达量变化，与目前临床使用的量表检测及影像学诊断相比，人为主观性降低，更为准确，而且具有定量检测的效果。
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
分别采集AD患者血清及其同龄正常人血清，然后采用miRCURYTMLNAArray基因芯片对AD患者血清及其同龄正常人血清进行miRNA表达谱的检测和比对分析。结果获得差异表达倍数≥2.0的miRNA有92个，其中包括66个表达量下调miRNA和26个表达量上调miRNA。从上述92个差异表达miRNA中选取18个变化倍数较明显的miRNA进一步采用Q-PCR的方法对单个血清样本进行逐个验证。根据验证结果选取5个差异表达miRNA及5个已报道的在AD或MCI患者中有差异表达的miRNA采用miRNA检测新技术S-Poly(T)法进行大量血清样本验证，根据各个miRNA在血清中的表达量变化进行诊断。
本发明对患者血清中差异表达的miRNA进行筛选和验证，并获得能作为AD或MCI血清样本检测的标志物。其优点在于：一、血清采集快速简单，与脑脊液取样相比创伤性小，安全性高，与PET相比对患者无需服用放射性示踪剂，与MRI相比，设备需求简易；二、采用miRCURYTMLNA基因芯片、Q-PCR和S-Poly(T)法新技术定量检测miRNA表达水平变化，提高了miRNA筛选的准确性和灵敏度，确定了定量检测AD或MCI的血清miRNA标志物和检测方法；三、检测miRNA表达量变化与量表检测及影像学诊断相比，人为主观性降低，具有定量检测的优点，方法更为准确。在AD或MCI与健康对照者之间差异表达的miRNA见表1.1和表1.2。
获取差异表达miRNA的方法如下：
初筛：通过miRCURYTMLNAArray基因芯片对混合血清中全部人的miRNA进行检测，获得表达差异显著的miRNA作为候选标志物。
根据MMSE量表、影像学资料及临床诊断将样本分为AD或MCI组和正常对照组。
单个验证：通过改进荧光定量PCR(S-Poly(T))法测定单个血清样本中候选miRNA的含量，筛选出可作为AD或MCI检测的miRNA标志物。
大样本验证：收集大样本血清采用S-Poly(T)法对候选miRNA逐个验证，获得差异表达显著的miRNA。
确定标志物：可用于检测AD或MCI的miRNA标志物及其组合(hsa-miR-150-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p)。
获取差异表达miRNA的具体步骤如下：
初筛：本发明初筛采用miRCURYTMLNAArray基因芯片进行差异表达谱检测与分析。该芯片是第七代miRCURYLNA阵列(v.18.0)(Exiqon)，包含3100捕获探针，涵盖miRBase18.0数据库注明的所有人类、小鼠和大鼠的miRNA，以及与这些物种相关的所有病毒的miRNA。此外，该数据库包含25个人类miRNA的miRPlusTM捕获探针。
一、RNA提取
根据制造商的说明书提取总RNA，有效地回收所有RNA种类，分离miRNA。RNA的质量和数量用NanoDropND-1000分光光度计(NanoDropTechnologies)测得。
二、RNA标记
从样品中分离RNA后，采用miRCURYTMHy3TM/Hy5TM标记试剂盒(Exiqon，丹麦)，按说明书标记miRNA。每个样品用1μgHy3TM荧光标记3′-末端，用T4RNA连接酶通过以下程序连接：RNA溶于1μLCIP1.0缓冲液和CIP(Exiqon)混合的2μl体系中，将混合物37℃温育30min，并在95℃终止温育5min。然后将3μl标记缓冲液、1.5μl荧光标记的(Hy3TM)、2.0μl的DMSO，2.0μl标记酶加入到混合物中。标记反应物16℃、温育1h，在65℃下终止孵育15min。
三、芯片杂交
停止标记后，将Hy3TM标记的样品根据阵列手工杂交到miRCURYTMLNA芯片(v.18.0)(Exiqon)上。将含25μl杂交缓冲液的Hy3TM标记的样品混合物进行第一次变性(95℃，2min)。在冰上温育2min，然后杂交到微阵列(56℃、16-20h)在12-bay杂交系统(NimbleGen，美国)上进行杂交，。杂交后，用洗涤缓冲液试剂盒(Exiqon)洗涤，离心(400rpm)干燥5min。最后用AxonGenePix4000B芯片扫描仪(Axon)扫描。
四、数据分析
扫描图像，然后导入GenePixPro的6.0软件(Axon公司)进行网格对齐和数据提取。求扩增得到的miRNA的平均值，计算在所有样品中miRNA荧光强度＞＝30的归一化因子。使用中值正常化表达数据标准化。标准化后，差异表达的miRNA通过倍数变化进行筛选鉴定。使用MEV软件(V4.8，TIGR)进行分层聚类。
芯片检测结果如下：
表1.1、miRCURYTMLNAArray检测的AD(或MCI)与健康对照者的相比表达水平上调的miRNA(上调倍数大于2.0)
表1.2miRCURYTMLNAArray检测的AD(或MCI)与健康对照者相比表达水平下调的miRNA(下调倍数大于2.0)
由芯片结果分析，选取其中18个差异表达较明显的miRNA进一步进行单个血清样本验证，验证结果如表2。
表2、从芯片初筛结果中选取的差异表达明显的候选miRNA
单个验证：
单个验证采用改良Q-PCR方法(S-Poly(T)法)对初筛中收集的6个AD患者血清及其同龄对照组血清进行逐个验证。
一、总RNA提取
用S/PRNAisokit(内参为cel-miR-54-5p)提取12个血清样本的总RNA并各提取200μl，然后把同一个样本的两份总RNA混合。
二、miRNA表达检测
1、RT-PCR反应体系见表3。
表3、RT-PCR反应体系
先将4×反应预混缓冲液、血清总RNA、(PolyA+RT)酶混合物和RNase-free水配成9μl/T的混合物；
将以上混合物等量分为18管，将1μl的RT引物混合物分别加进这18管，混匀后进行逆转录反应。
2、RT-PCR反应条件见表4。
表4、RT-PCR反应条件
3、Q-PCR反应体系见表5。
表5、Q-PCR反应体系
组成 体积(μl)
5×qPCR探针混合物 4
SM-Taq聚合酶 0.5
特异前引物(10μM) 0.4
普通后引物(10μM) 0.4
探针 0.5
已稀释的cDNA 8
dH2O 6.2
总体积(μl) 20
(1)逆转录的cDNA用RNase-free水稀释16倍，Q-PCR的每个反应cDNA的加入体积相应提高16倍，保证在稀释和不稀释cDNA时每个反应中的cDNA量相同；
(2)每个96孔板可检测12个样本的4个miRNA，每个反应做两个复孔；
(3)考虑到加液和移液误差，母液配制时需多配的量(％)：20个反应一下多配10％；20～50个反应多配15％，＞50个反应多配20％。96个反应可配置116个反应的量；
(4)按以上体系，先配置116个反应的母液量(除cDNA和F引物)；
(5)各取27×11.6＝313.2μl的母液到4个新的EP管中；
(6)各取对应的F-primer10.8μl，分别加入4个EP管中，混匀；
(7)再将4个EP管中的试剂分别加入96孔板中对应的24个孔位，每孔12μl；
(8)将稀释好的cDNA混匀，用排枪加入对应的cDNA8μl。
4、Q-PCR反应条件见表6。
表6、Q-PCR反应条件
三、数据分析，得到miRNA的相对表达量
1、去除Ct值＞35的值，剩余的复孔取平均值(AVG)；
2、计算ΔCt值。ΔCt＝AVG(检测的miRNA)-AVG(内参基因)；
3、分别计算12个样本中这18个miRNA的相对表达量——2^-ΔCt值。
复筛结果：
在18个候选miRNA中有2个采用本方法未被检出，其余16个miRNA的检出结果如图1.1-1.16，其中miR-92b-5p在AD/MCI和对照者之间表达水平具有显著差异。
大样本量验证：
结合芯片结果、单个验证结果与文献报道，选取10个miRNA作为潜在的生物标志物进行大样本量验证，miRNA编号、序列如表7所示。验证方法采用S-Poly(T)法，对17个AD或MCI患者血清及18个同龄健康对照者血清进行miRNA检测。
表7、大样本验证AD或MCI潜在miRNA生物标志物
验证结果：
大样本验证差异表达miRNA结果如图2.1～2.10所示，获得6个差异表达miRNA，其中包括5个下调(hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p)，1个上调(hsa-miR-150-5p)。
综上所述，本发明提供一种AD或MCI检测标志物及其检测方法，本发明所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA由hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p和hsa-miR-150-5p中的任意两种或多种组成。本发明上述血清miRNA作为AD或MCI检测标志物进行AD或MCI检测，其优点在于：一、血清采集快速简单，与脑脊液取样相比创伤性小，安全性高，与PET等影像学检测手段相比，对患者无毒性及放射损伤，且仪器设备简单；二、miRCURYTMLNAArray基因芯片与miRNA检测新技术S-Poly(T)法结合，提高miRNA检测的准确性和灵敏度；三、检测miRNA表达量变化与量表检测和影像学诊断相比，人为主观性降低，有定量检测数据，结果更为准确。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (6)

1.一种AD或MCI检测标志物，其特征在于，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA包括hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p和hsa-miR-150-5p。
2.根据权利要求1所述AD或MCI检测标志物，其特征在于，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-150-5p。
3.根据权利要求1所述AD或MCI检测标志物，其特征在于，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p和hsa-miR-15a-5p中的任意两种或多种。
4.根据权利要求1所述AD或MCI检测标志物，其特征在于，所述AD或MCI检测标志物为血清miRNA，所述血清miRNA为hsa-miR-150-5p与以下五种hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-15b-5p、hsa-let-7d-3p、hsa-let-7d-5p、hsa-miR-15a-5p中任意两种或多种形成的miRNA组合。
5.一种基于如权利要求1～4任一所述AD或MCI检测标志物的检测方法，其特征在于，采集血清，采用miRCURYTMLNAArray基因芯片方法或Q-PCR方法确定血清中是否存在如权利要求1～4任一所述的血清miRNA。
6.根据权利要求5所述AD或MCI检测标志物的检测方法，其特征在于，确定血清中存在所述血清miRNA后还包括：采用miRNA检测新技术S-Poly(T)法对血清miRNA进行逐个检测，确定检测到的血清miRNA的表达量变化。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108192968A (zh) * 2018-03-16 2018-06-22 深圳大学 轻度认知障碍和/或阿尔茨海默病检测的生物标志物
CN109055541A (zh) * 2018-09-26 2018-12-21 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） Ad所致mci诊断标志物及其应用
CN114277159A (zh) * 2021-12-29 2022-04-05 中国人民解放军海军军医大学 基于一组外周血白细胞中miRNA的辐射生物剂量估算方法
CN114277122A (zh) * 2021-12-29 2022-04-05 中国人民解放军海军军医大学 外周血白细胞miR-150-5p在计算辐射剂量中的应用
CN116713044A (zh) * 2023-04-18 2023-09-08 深圳市龙岗中心医院 一种基于垂直石墨烯和纳米金的荧光检测芯片、其制备方法及在ad标志物检测中的应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GIOVANNI LUGLI ET AL.: "Plasma exosomal miRNAs in Persons with and without Alzheimer Disease:Altered Expression and prospects of Biomarkers", 《PLOS ONE》 *
JUN-ICHI SATOH ET AL.: "MicroRNA-Seq data analysis pipeline to identify blood biomarkers for Alzheimer’s disease from public date", 《BIOMARK INSIGHTS》 *
L CHENG ET AL.: "Prognostic serum miRNA biomarkers associated with Alzheimer’s disease shows concordance with neuropsychological and neuroimaging assessment", 《MOLECULAR PSYCHLATRY》 *
PAVAN KUMAR ET AL.: "Circulating miRNA biomarkers for Alzheimer’s Disease", 《PLOS ONE》 *
PETRA LEIDINGER ET AL.: "A blood based 12-miRNA signature of Alzheimer disease patients", 《GENOME BIOLOGY》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108192968A (zh) * 2018-03-16 2018-06-22 深圳大学 轻度认知障碍和/或阿尔茨海默病检测的生物标志物
CN109055541A (zh) * 2018-09-26 2018-12-21 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） Ad所致mci诊断标志物及其应用
WO2020063034A1 (zh) * 2018-09-26 2020-04-02 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） Ad所致mci诊断标志物及其应用
JP2022508304A (ja) * 2018-09-26 2022-01-19 シャンハイ メンタル ヘルス センター （シャンハイ サイコロジカル カウンセリング トレーニング センター） Ａｄ誘発ｍｃｉの診断マーカーとその応用
JP7291221B2 (ja) 2018-09-26 2023-06-14 シャンハイ メンタル ヘルス センター （シャンハイ サイコロジカル カウンセリング トレーニング センター） Ａｄ誘発ｍｃｉの診断マーカーとその応用
CN114277159A (zh) * 2021-12-29 2022-04-05 中国人民解放军海军军医大学 基于一组外周血白细胞中miRNA的辐射生物剂量估算方法
CN114277122A (zh) * 2021-12-29 2022-04-05 中国人民解放军海军军医大学 外周血白细胞miR-150-5p在计算辐射剂量中的应用
CN114277159B (zh) * 2021-12-29 2024-02-27 中国人民解放军海军军医大学 基于一组外周血白细胞中miRNA的辐射生物剂量估算方法
CN116713044A (zh) * 2023-04-18 2023-09-08 深圳市龙岗中心医院 一种基于垂直石墨烯和纳米金的荧光检测芯片、其制备方法及在ad标志物检测中的应用
CN116713044B (zh) * 2023-04-18 2024-05-14 深圳市龙岗中心医院 一种基于垂直石墨烯和纳米金的荧光检测芯片、其制备方法及在ad标志物检测中的应用

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