CN105646725A - 浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，所述的浒苔多糖由以下步骤制得：(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；(2)将浒苔研磨至粉末，100℃煮沸2-3h，重复4次；(3)合并滤液，加入乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心；(4)取沉淀，溶解于超纯水中；(5)sevage法除蛋白；(6)加入3-4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30-35min；(7)取沉淀，除脂，得浒苔多糖，冷冻保持；(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。本发明解决浒苔污染环境问题，是变废为宝利国利民的事情；而且可以减少畜禽传染病的发生，生产绿色安全的畜禽产品。

Description

浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途
技术领域
本发明涉及浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，属于兽用疫苗免疫增强剂技术领域。
背景技术
免疫增强剂(immunopotentiator)：通过不同方式，达到增强机体免疫力的一类免疫治疗药物。临床上常用于治疗与免疫功能低下有关的疾病及免疫缺陷病。
申请公布号CN104800275A，发明名称：畜禽用中药多糖免疫增强剂，中药多糖免疫增强剂是由黄芪、党参、茯苓、香菇制备；黄芪、党参、茯苓、香菇的重量份配比比例为：1:1:1:1。加工方法：将黄芪、党参、茯苓、香菇粉碎成粉末，按重量份配比混合均匀，经过超声细胞粉碎提取，然后通过乙醇溶液进行醇沉处理，之后经过洗涤、烘干后获得棕黄色粉末即为中药多糖免疫增强剂，最后将棕黄色粉末分装入库。改发明可显著改善畜禽的体液免疫反应，呈现免疫增强作用；明显提高畜禽的成活率，而且还可以显著降低料肉比；能对抗病毒对畜禽生长发育的影响，对病毒伤害的畜禽内脏有修复作用；在畜禽体内均能促进对淋巴细胞的转化，增强非特异性细胞免疫的生物学活性。但是配方复杂，成本高。
浒苔(Enteromorpha)俗称苔条、海苔，是绿藻植物石莼科中的水生藻类植物。浒苔作为海域的天然海藻，产量极大，浒苔给人们印象最深的不是它的药用和营养价值，而是对海水的污染，大量浒苔漂浮聚集到岸边，阻塞航道，而且大量浒苔生长会对海洋环境造成生态危害，是成本低廉的绿色植物。浒苔多糖是浒苔的关键活性成分，大量提取浒苔多糖，是变废为宝利国利民的事情。目前已经证实多种中药多糖具有增强免疫的功效，但针对浒苔多糖作为免疫增强剂在畜禽方面的研究国内外鲜有报道。
发明内容
本发明提供了浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，提供了一种新的畜禽免疫增强剂，不但可以提高畜禽疫苗免疫原性，而且浒苔多糖提取成本低，属于废物利用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
本发明提供了浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的浒苔多糖的剂型为注射剂。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的浒苔多糖单独使用或者和其他疫苗一起使用。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的浒苔多糖由以下步骤制得：
(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
(2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g：300-500ml，100℃煮沸2-3h，重复4次；
(3)合并滤液，加入3-4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30-35min；
(4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1g：80-120ml；
(5)sevage法除蛋白，取上清，重复3-4次；
(6)加入3-4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30-35min；
(7)取沉淀，沉淀加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体；加入10倍量丙酮浸泡30min后弃去液体；加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，冷冻保持；
(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
本发明的有益效果：
本发明解决浒苔污染环境问题，是变废为宝利国利民的事情；而且可以减少畜禽传染病的发生，生产绿色安全的畜禽产品。
本发明的浒苔多糖得提取方法简单，最大限度了保护浒苔多糖的活性，所提取的浒苔多糖活性高、产品纯度高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式进行描述，以便更好的理解本发明。
实施例1
浒苔多糖注射剂的制备：包括以下步骤：
(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
(2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g：300ml，加超纯水，100℃煮沸3h，重复4次；
(3)合并滤液，加入3倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30min；
(4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1g：80ml；
(5)sevage法除蛋白，取上清，重复4次；
(6)加入4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心35min；
(7)取沉淀，沉淀加加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体；加入10倍量丙酮浸泡30min后弃去液体；加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，苯酚-硫酸法测的浒苔多糖含量为62％，冷冻保存。
(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
实施例2
浒苔多糖注射剂的制备：包括以下步骤：
(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
(2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g：400ml，加超纯水，100℃煮沸2h，重复4次；
(3)合并滤液，加入3倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心35min；
(4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1g：100ml；
(5)sevage法除蛋白，取上清，重复3次；
(6)加入4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心35min；
(7)取沉淀，沉淀加加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体；加入10倍量丙酮浸泡30min后弃去液体；加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，苯酚-硫酸法测的浒苔多糖含量为63％，冷冻保存；
(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
实施例3
浒苔多糖注射剂的制备：包括以下步骤：
(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
(2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g：500ml，加超纯水，100℃煮沸2.5h，重复4次；
(3)合并滤液，加入4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30min；
(4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1g：120ml；
(5)sevage法除蛋白，取上清，重复3次；
(6)加入3倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30min；
(7)取沉淀，加10倍量无水乙醇，浸泡30min后弃去液体；加入10倍量丙酮浸泡30min后弃去液体；加入10倍量乙醚浸泡30min后弃去液体除脂，得浒苔多糖，苯酚-硫酸法测的浒苔多糖含量为65％，冷冻保存；
(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得。
免疫性实验
1材料
1.1试验动物1日龄白羽肉公鸡，由山东畜牧兽医职业学院动物饲养房提供。
1.2免疫增强剂制备方法选取实施例1所制备的浒苔多糖注射剂。
1.3新城疫LaSota弱毒疫苗，购自齐鲁动物保健品有限公司，生产批号：150252014；
新城疫标准抗原和阳性血清，由山东畜牧兽医职业学院防检系微生物与传染病试验室提供。
1.4新城疫HI抗体测定：采用国标，用微量法，红细胞的工作浓度为1﹪。
2方法
2.1试验设计与分组
1日龄白羽肉公鸡养至14日龄(平均母源抗体效价为4.2log2)，随机分为6组，1、2、3、4、5、6组，每组30只。1、2、3组为实验组，4组为疫苗对照组，5组为空白对照组，6组为多糖对照组。1组每只鸡注射0.1g/kg浒苔多糖，2组每只鸡注射0.2g/kg浒苔多糖，3组每只鸡注射0.3g/kg浒苔多糖，6组每只鸡注射0.2g/kg浒苔多糖作为多糖对照组。1、2、3、4组每只鸡颈部皮下注射新城疫LaSota弱毒疫苗，1羽份/只，5组对照组(Control)注射等量生理盐水，6组不接种疫苗。
2.2鸡新城疫HI抗体滴度的测定
于免疫后3、7、11、14、21翼下静脉采血0.5mL，3000r/min离心5min分离血清，用微量血凝抑制法测定鸡新城疫HI抗体滴度。(国标)
2.3数据处理
利用SPSSStatistics19.0统计分析软件进行数据分析，多重比较用LSD法进行，试验数据用用平均值±标准差并进行显著性比较。
3.结果
3.1浒苔多糖对新城疫抗体滴度的影响见表1。
同时注射浒苔多糖和疫苗的试验组1、2、3组产生抗体的速度要比仅仅注射疫苗的4组对照组快，在免疫后第14d就能达到高水平的抗体。1、2、3试验组的抗体滴度均高于4组对照组，同时1、2、3试验组在免疫后3、7、11、14、21d的同期抗体水平显著高于4对照组(P<0.05)；空白组5组抗体水平逐渐降低，注射多糖没注射疫苗实验组6组抗体水平在3、7、11、14d时维持原有抗体水平，21d后逐渐降低。免疫后第7d1、2、3试验组的抗体滴度显著高于4对照组，免疫后第3d试验组2组的抗体水平显著高于试验组1组和3组(P<0.05)，实验组3组抗体水平显著高于实验组1组(P<0.05)。免疫14d所有组抗体滴度都达到最高峰值，免疫后21d所有组的抗体滴度都开始降低，试验组仍维持高水平的抗体。
表1HI抗体滴度的影响log2
组别 3d 7d 11d 14d 21d
1 4.7±0.5a 5.6±0.4a 8.3±0.3a 10.3±0.5a 9.7±0.3a
2 5.1±0.4b 6.4±0.5b 9.0±0.4b 11.3±0.7b 10.9±0.7b
3 4.8±0.6a 6.0±0.5c 8.5±0.5c 10.7±0.4c 10.1±0.5c
4 4.3±0.2c 5.1±0.5d 8.0±0.5d 9.8±0.3d 9.0±0.4d
5 4.0±0.3d 3.5±0.7e 3.0±0.5e 2.7±0.2e 2.2±0.3e
6 4.2±0.4c 4.2±0.3f 4.2±0.6f 4.2±0.5f 4.0±0.4f
注:同列数据肩标字母不同表示差异显著(P<0.05),字母相同表示差异不显著(P>0.05)。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，其特征在于：所述的浒苔多糖的剂型为注射剂。
3.根据权利要求1所述的浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，其特征在于：所述的浒苔多糖单独使用或者和其他疫苗一起使用。
4.根据权利要求1-3任一项所述的浒苔多糖在制备畜禽免疫增强剂中的用途，其特征在于：所述的浒苔多糖由以下步骤制得：
(1)新鲜浒苔，清洗干净，晾干；
(2)将浒苔研磨至粉末，按照料液比100g：300-500ml，加超纯水，100℃煮沸2-3h，重复4次；
(3)合并滤液，加入3-4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30-35min；
(4)取沉淀，溶解于超纯水中，沉淀与超纯水比例为1g：80-120ml；
(5)sevage法除蛋白，取上清，重复3-4次；
(6)加入3-4倍量95％乙醇，4℃过夜，4000r/min，离心30-35min；
(7)取沉淀，沉淀加无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤除脂，得浒苔多糖，冷冻保持；
(8)取浒苔多糖溶解于超纯水中，过滤除菌，即得浒苔多糖注射剂。
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