CN105646063A - 蜜环菌母种培养基、培养蜜环菌菌种的方法、棉花秸秆制作菌棒的方法及菌棒栽培天麻的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提供的一种蜜环菌母种的培养基，本发明还公开了一种使用上述培养基培养蜜环菌菌种的方法，本发明还公开了一种棉花秸秆使用上述蜜环菌菌种制作菌棒的方法，包括下述步骤：棉花秸秆装袋灭菌，然后取液体蜜环菌菌种4~6ml接种在棉花秸秆上，接种温度为20~22℃；接种后的棉花秸秆控制温度为20~25℃，含水率保持40-50%，生长时间为35~45天制成菌棒，本发明还公开了一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，采用本发明的技术方案，保证四季温差大低海拔地区天麻生长的稳定，棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，为大量的棉花秸秆找到了发挥其经济价值的出路，解决了焚烧棉花秸秆带来的环境污染。

Description

蜜环菌母种培养基、培养蜜环菌菌种的方法、棉花秸秆制作菌棒的方法及菌棒栽培天麻的方法

技术领域

本发明属于生物应用领域，更具体地说，本发明涉及一种棉花秸秆培养蜜环菌培养基、使用培养基培养蜜环菌的方法及蜜环菌栽培天麻的方法。

背景技术

天麻，学名：Gastrodiaelata，又名赤箭、离母、鬼督邮、神草、独摇芝、赤箭脂、定风草、合离草、独摇、自动草、水洋芋、明天麻等，为兰科天麻属植物，种加词elata意为“高的”，所以又翻为高赤箭。立冬后至次年清明前采挖（以冬麻为好），是著名的中药材。早在二千多年前就已入药，以云南昭通产者为优；富含天麻素，香荚兰素，蛋白质，氨基酸，微量元素。其性辛、温、无毒，有抗癫痫，抗悸厥，抗风湿；镇静，镇痉，镇痛，补虚，平肝息风的功效，临床应用证明，对血管性神经性头痛、脑震荡后遗症等有显著疗效。

天麻生于腐殖质较多而湿润的林下，向阳灌丛及草坡亦有。须与白蘑科真菌密环菌〔Armillariellamellea（VahkexFr.）Karst.〕和紫萁小菇（Mycenaosmundicola）共生，才能使种子萌芽，形成圆球茎，并生长成为常见的天麻块茎。天麻GastrodiaelstaBl，属兰科(Orchidaceae)，没有根和绿叶，不能进行光合作用，是异养型植物，紫萁小菇为种子萌发提供营养，蜜环菌为原球菌长成天麻块茎提供营养。

天麻共分5个变型，分别是原变型红天麻（Gastrodiaelataf.elata）、乌天麻（Gastrodiaelataf.glaucaS.Chow(1983)）、绿天麻（Gastrodiaelataf.viridis(Makino)Makino(1940)）、黄天麻（Gastrodiaelataf.flavidaS.Chow(1983)）、松天麻（Gastrodiaelataf.albaS.Chow(1983)）。

蜜环菌营养丰富，还具有药用价值。据报道，干蜜环菌含粗蛋白11.4%，脂肪5.2%，碳水化合物75.9%，纤维素5.8%，灰分7.5%，热量384千卡；子实体中还含D-苏来醇，维生素A等，对治疗腰腿疼痛、佝偻病、癫痫病有功效；经常食用蜜环菌，可预防视力减退、夜盲、皮肤干燥，并可增强人体对某些呼吸道及消化道传染病的抵抗力；从蜜环菌子实体中分离出的水溶性葡聚糖和多肽葡聚糖，经动物试验，后者对小白鼠肉瘤S-180的抑制率为70%，对艾氏腹水癌的抑制率为80%，现代医学还从蜜环菌子实体中分离出一种AMG-l的化合物，对大脑具有保护和镇静作用；蜜环菌的固体发酵制品，蜜环菌片、银蜜片，可代替天麻作药，对高血压椎基底动脉供血不足、美尼尔氏症、植物神经功能紊乱等疾病引起眩晕的病人，治疗效果较好。对肢麻、失眠、耳鸣、中风后遗症等也有一定的疗效；蜜环菌是天麻不可缺少的互慧共生菌，蜜环菌在生长过程中能够产生菌索，菌索能够从其提供营养物质的基物中伸出，并进入到另一个不支持其生长的基物中生长，栽培天麻必需蜜环菌的帮助，同时还需要消耗大量的木质素，栽培天麻所需要的需蜜环菌是通过硬质树木制作的菌棒，现有技术栽培天麻所需的菌棒和木质素都来源于硬质树木。

中国棉花种植面积超6300万亩，棉花种植地大部分为沙土地，棉花秸秆较硬，木质素含量高，现有技术的棉花秸秆大部分都就地焚烧了，这种就地焚烧的处理方式不仅破坏环境同时是资源的浪费。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种适应当地环境的培养蜜环菌培养基，使用该培养基培养蜜环菌，利用棉花秸秆制作蜜环菌棒，蜜环菌棒伴生天麻的方法。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：所提供的一种蜜环菌母种的培养基，由下述方法制得：马铃薯去皮切块后加入马铃薯重量份多一倍的水煮沸腾后再煮20~30分钟，冷却至室温，过滤制得母液，加入蔗糖1.3~1.6%、蛋白胨0.1~0.3%、KH₂PO₄0.2~0.4%、MgSO₄0.1~0.2%、酵母膏0.3~0.6%和四环素0.01~0.03%。

本发明公开的一种蜜环菌母种的培养基，培养基的PH值为5~6；所述的母液过滤是采用四层纱布过滤，蔗糖可以由葡萄糖代替。

本发明还公开了一种使用上述培养基培养蜜环菌菌种的方法，包括下述步骤：将成熟的密环菌子实体消毒后取菌帽碎化，取其中碎片置于盛装培养基的锥形瓶中，锥形瓶中的培养基溶液为100ml，密封锥形瓶口，然后锥形瓶置于摇床上培养，培养过程避光，培养时间为30~45天，制成液体蜜环菌菌种。

本发明公开的一种使用上述培养基培养蜜环菌菌种的方法，摇床的转速140~150转/min，培养温度为22~24℃。

本发明公开的一种使用上述培养基培养蜜环菌菌种的方法，蜜环菌子实体为蜜环菌M-8、a9子实体。

本发明还公开了一种棉花秸秆使用上述蜜环菌菌种制作菌棒的方法，包括下述步骤：棉花秸秆装袋灭菌，然后取液体蜜环菌菌种4~6ml接种在棉花秸秆上，接种温度为20~22℃；

接种后的棉花秸秆控制生长温度为20~25℃，含水率保持40~50%，生长时间为35~55天制成菌棒。

本发明公开了一种棉花秸秆使用上述蜜环菌菌种制作菌棒的方法，棉花秸秆灭菌将棉花秸秆旁枝去除，秸秆主干切段，装袋，置于温度121℃，压力为0.15Mp环境，时间为240~300min；然后加入5~10%的多菌灵溶液。

本发明还公开了一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，包括下述步骤：

（1）栽培坑的制作；

（2）放置菌棒后将天麻种子接种于菌棒上；

（3）栽培坑回填，填埋高度略高于周围地面；

（4）生长时间为10~12个月。

本发明公开了一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，栽培坑建在海拔20~100m的丘陵地带的沙壤土地，栽培坑的深度为23~37cm，宽度为60~80cm；栽培坑坑底平铺含水15~25%的棉花秸秆，，菌棒置于棉花秸秆上，菌棒靠近两端分别接种天麻子；

栽培坑菌棒放置12~16cm，菌棒两端分别接种2~4个天麻子；控制天麻生长温度低于28℃。

本发明公开了一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，天麻种子为红麻种子或乌麻种子。

本发明公开的一种蜜环菌母种的培养基，由下述方法制得：马铃薯去皮切块后加入马铃薯重量份多一倍的水煮沸腾后再煮20~30分钟，冷却至室温，过滤制得母液，加入蔗糖1.3~1.6%、蛋白胨0.1~0.3%、KH₂PO₄0.2~0.4%、MgSO₄0.1~0.2%、酵母膏0.3~0.6%和四环素0.01~0.03%，培养基的PH值为5~6；所述的母液过滤采用四层纱布过滤，蔗糖可以由葡萄糖代替；采用本发明的技术方案，该培养基提供了蜜环菌生长所需的营养成分，所用组分的来源广泛，制备方式简单。

本发明还公开了一种使用上述培养基培养蜜环菌菌种的方法，包括下述步骤：将蜜环菌子实体消毒后碎化，取其中碎片置于盛装培养基的锥形瓶中，锥形瓶中的培养基溶液为100ml，锥形瓶口部密封，然后锥形瓶置于摇床上培养，培养过程避光，培养时间为30~45天，制成液体蜜环菌菌种，摇床的转速140~150转/min，培养温度为22~24℃，蜜环菌菌种制作方式有固体制作和液体制作两种，固体制种时间长，采用本发明的技术方案，蜜环菌菌种生长采用液体制种，该生长周期短，菌种成本低，栽培种生长均匀、速度快；提高了栽培种的成品率，采用摇床培养，生长条件稳定，易于控制；蜜环菌子实体为蜜环菌M-8、a9子实体，这两种蜜环菌更适合低海拔环境，适应性强，可以伴生多种天麻。

本发明还公开了一种棉花秸秆使用上述蜜环菌菌种制作菌棒的方法，包括下述步骤：棉花秸秆装袋灭菌，然后取液体蜜环菌菌种4~6ml接种在棉花秸秆上，接种温度为20~22℃；接种后的棉花秸秆控制生长温度为20~25℃，含水率保持40~50%，生长时间为35~55天制成菌棒；采用本发明的技术方案，农作物秸秆大部分都就地焚烧了，这种就地焚烧的处理方式不仅破坏环境同时是资源的浪费，现有技术对很多作物秸秆的处理是分解后加入高分子材料制作合成材料，或者加入纸浆中用于造纸，但是，棉花秸秆较硬，木质素含量高，上述处理都不适用，很多地方依然采用就地焚烧的方式；本发明采用棉花秸秆蜜环菌制作菌棒，不仅解决了棉花秸秆利用的问题，更进一步的是天麻的生长需要一定量的木质素，有效缓解了现有技术种植天麻使用硬质树木制作菌棒成本大的缺陷。

本发明公开了一种棉花秸秆使用上述蜜环菌菌种制作菌棒的方法，棉花秸秆灭菌将棉花秸秆旁枝去除，秸秆主干切段，装袋，置于温度121℃，压力为0.15Mp环境，时间为240~300min；然后加入5~10%的多菌灵溶液，棉花秸秆灭菌后再接种蜜环菌，保证菌棒的质量，避免其它杂菌的侵入，加入多菌灵溶液的量越大，效果越好，但是，过度使用农药会导致残留，因此，使用量达到目的即可，一般选择小剂量的农药使用量。

本发明还公开了一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，其特征在于：包括下述步骤：

（1）栽培坑的制作；

（2）放置菌棒后将天麻种子接种于菌棒上；

（3）栽培坑回填，填埋高度略高于周围地面；

（4）生长时间为10~12个月；天麻须与白蘑科真菌密环菌共生，才能使种子萌芽，形成圆球茎，并生长成为常见的天麻块茎，天麻在生长过程中需要一定量的木质素，采用本发明的技术方案，棉花秸秆深埋在地下在蜜环菌的作用下分解出木质素，供给天麻的生长，同时菌棒上的蜜环菌与天麻伴生，天麻得到了满足生长需要的养分，保证收获的天麻块茎的粒度；栽培坑回填，填埋高度略高于周围地面，以利于雨水及时排掉，避免积水影响天麻的生长；采用栽培坑栽培天麻，避免高温对天麻伤害，保证四季温差大低海拔地区天麻生长的稳定，棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，为大量的棉花秸秆找到了发挥其经济价值的出路，解决了焚烧棉花秸秆带来的环境污染。

栽培坑建在海拔20~100m的低海拔丘陵地带的沙壤土地，栽培坑的深度为23~37cm，宽度为60~80cm，长度不限；栽培坑坑底平铺含水15~25%的棉花秸秆，，菌棒置于棉花秸秆上，菌棒靠近两端分别接种天麻子；栽培坑菌棒放置间隔12~16cm，菌棒两端分别接种2~4个天麻子；控制天麻地下生长温度低于28℃；中国棉花种植面积超6300万亩，棉花种植地大部分为沙壤土，非常适合天麻的栽培，天麻在生长过程中，没有根和叶子，透过土层进行呼吸，因此，沙土地才适合天麻的栽培；低海拔的棉区或丘陵地带冬季的温度大部分高于0℃，地下的温度更高，不影响天麻的栽培，经过冬季的生长，天麻的药用价值更高。

天麻种子为红麻种子或乌麻种子，这两种天麻适合生长的条件比较宽，适于低海拔的棉区或丘陵地带的生长。

以下将结合实施例，对本发明进行较为详细的说明。

附图说明

下面对本说明书各幅附图所表达的内容及图中的标记作简要说明：

图1为室外栽培坑生长成熟的天麻的照片。

具体实施方式

下面对照附图，通过对实施例的描述，对本发明的具体实施方式如所涉及的各构件的形状、构造、各部分之间的相互位置及连接关系、各部分的作用及工作原理、制造工艺及操作使用方法等，作进一步详细的说明，以帮助本领域的技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。

KH₂PO₄、MgSO₄、蛋白胨、酵母膏均为市售化工级，马铃薯随机购买，蔗糖或葡萄糖为市售食品级。

蜜环菌M-8、a9子实体和红麻种子由安徽岳西县菌种场购得；乌麻种子由湖北宜昌购得。

试验场地为安徽安庆，海拔20~30m。

实施例1

制备蜜环菌的培养基一，各组分如下：马铃薯500g去皮切块，加入1000ml水煮沸腾后再煮20分钟，四层纱布过滤，加入蔗糖15g、蛋白胨2g、KH₂PO₄3g、MgSO₄1.5g、酵母膏5g，四环素0.1g；定容1000ml；培养基的PH值为5.5；

制备蜜环菌的培养基二，各组分如下：马铃薯500g去皮切块，加入1000ml水煮沸腾后再煮30分钟，四层纱布过滤，加入蔗糖16g、蛋白胨3g、KH₂PO₄3g、MgSO₄1.8g、酵母膏4g，四环素0.1g；定容1000ml；，培养基的PH值大约为6；分别取上述配置好的培养基一100ml置于编号为Ct-1~Ct-4的四个三角瓶中；分别取上述配置好的培养基二100ml置于编号为Ct-5~Ct-8的四个三角瓶中；密封锥形瓶，然后锥形瓶置于摇床上培养，摇床的转速140~150转/min，培养温度为22~24℃培养过程避光，培养时间为35~45天，制成液体蜜环菌菌种；

成熟的蜜环菌M-8、a9子实体消毒后取菌帽碎化，收集蜜环菌孢子，将采集到的M-8子实体分别标号Ct-1---Ct-4，a9子实体分别标号Ct-5---Ct-8，每个子实体取三片菌褶悬挂于三角瓶中，观察到孢子萌发情况：

注：“＋”代表子实体孢子萌发长势

上述结果表明编号，孢子萌发情况略有差别，Ct-1的子实体孢子萌发情况略好于其它编号，培养基一优于培养基二。

实施例2

收集当地的棉花秸秆，安庆是棉花产区，当地的棉花分为有酚和低酚，收集相同分量的有酚、低酚棉花秸秆制作菌棒；

棉花秸秆去小枝，秸秆主干切段，装袋，置于温度121℃，压力为0.15Mp环境，时间为240~300min；

随机抽取其中数袋接种蜜环菌M-8；40天结果如下：

表1

＋代表蜜环菌生长，－代表绿霉

试验表明，棉花秸秆能被蜜环菌侵染并出现菌索，这一结果说明，棉花秸秆有可能栽培出天麻，因为蜜环菌是天麻生长的营养提供者。同时杂菌绿霉都有感染。灭菌时间长，感染率低；

将灭菌后剩下的的棉花秸秆分成两份，一份加入5%的多菌灵溶液再次灭菌；另一份加入加入75%乙醚，乙醚对酚类物质有溶解作用；

分别对经过上述处理后的棉花秸秆接种液体蜜环菌菌种，接种时保持温度20℃，结果如表2：

注：“＋”代表蜜环菌长势

试验表明有酚和低酚棉花秸秆制作的菌棒没有区别，加入多菌灵10ml比5ml效果要好，加乙醚效果不大，说明棉花秸秆制作菌棒使用乙醚没有影响。

实施例3

海拔20米，沙壤土地，制作栽培坑多个，购买岳西县菌种场栎树菌棒和表1制得的棉花秸秆菌棒，地下菌床栽培试验，时间为当年的8月27日~10月15日，结果列表如下：

注：“＋”代表蜜环菌生长，“－”代表绿霉

上述试验表明利用棉花秸秆菌棒培菌床不仅能侵染棉花秸秆，也能侵染木质杨树。同时，棉花秸秆菌棒与购买的栎树菌棒培养菌床的效果相当。但自制棉花秸秆菌棒出现少量绿霉。

实施例4

栽培坑深度试验：栽培种分别购自岳西菌种厂栎树菌棒和自制蜜环菌为M-8菌棒，栽培坑栽培，深度列表如下，栽培坑坑底平铺含水15~25%的棉花秸秆，重量为五公斤，在棉秆上放上菌种棒，在菌棒两头放上天麻子，天麻子为岳西购买的二代红麻子；用土覆盖栽培坑至地面且地中间稍高，覆盖稻草保温。其中两个覆盖地膜，地膜第二年3月10日揭去；第二年6月18日下午两点多小心刨开土观察，试验结果如下：

表A1

注：“＋”代表天麻长势

试验表明栽培坑的深度在31-35cm最佳。

实施例5

不同麻种对比试验：天麻种为红麻种和乌麻种，乌麻麻种购自湖北宜昌，红麻麻种购自安徽岳西，均为杂交一代；蜜环菌分别为M-8和a9种，第二年3月26号栽培，栽培坑深度33cm，每平方米用棉花秸秆5kg；第二年1月17日取麻，每平方米鲜麻重量(kg)，结果如下：

表A2

结果分析：乌麻M-8:平均1.04kg，红麻:M-8:1.23kg，乌麻a9:1.03kg，红麻a9:1.27kg

从实验结果看，红麻比乌麻好，M-8比a9好,最好的组合是红麻a9.每公斤棉花秸秆产鲜麻乌麻：0.21kg（:M-8）；红麻0.246kg（:M-8）；乌麻：0.21kg（a9），红麻0.254kg（a9）。

实施例6

棉花秸秆栽培天麻的室内实验：实验用的菌棒分别为棉秆菌棒和栎树菌棒，蜜环菌为M-8，天麻子为红麻杂交一代子。

8箱用自制棉花秸秆菌棒，4箱为栎树菌棒。箱底铺土4cm,土壤为当地的细沙壤土，然后平铺干燥棉花秸秆，棉花秸秆随机使用有酚和低酚棉花秸秆，每箱2.5kg，秸秆上每箱放上一包菌棒，杂交红麻子4个。栽培时间第二年3月26日，室内。

第三年3月2日取麻，鲜麻重(kg)结果如下：

试验结果看，栎树菌棒的产量略高于棉花秸秆菌棒的产量，但差别不大，说明使用棉花秸秆菌棒生产天麻是可行的。

实施例7

栽培有性天麻子试验：天麻为红麻，从安徽岳西购买，两个鲜麻重量分别为186g和213g，于第二年3月10日实验室盆栽，3月26日抽苔，4月1日开花，花期到4月9日结束，开花期间，每天上午9点人工杂交授粉。4月14日陆续收获天麻果实，将每天收获的果实放入冰箱中收藏，温度4℃。4月22日结束，一共收获了96个果实。

第二年4月24日室内栽培，萌发菌购自安徽岳西菌种厂，菌棒为M-8栎树菌棒，土壤采自棉花所试验地，细沙壤土，室内栽培四厢。第三年3月6日取麻子，收获0.56kg杂交麻子，129个，最大8g，最小1.5g。

从上述实施例可以看出，利用棉花秸秆制作菌棒，与传统的使用树木的杆制作的菌棒伴生天麻，对天麻生长的影响没有区别，这就为棉花秸秆提供了经济价值高的处理方法，也为当地的经济提供了高附加值的种植品种。

置于栽培坑中的天麻环境对其影响较小，覆盖栽培坑的土层，可以有效的平衡温度。

较其它种植作物栽培坑培养天麻，更少了田间管理的劳作，目前还没有发现对其生长有较大危害的虫类。

上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种蜜环菌母种的培养基，其特征在于：由下述方法制得：马铃薯去皮切块后加入马铃薯重量份多一倍的水煮沸腾后再煮20~30分钟，冷却至室温，过滤制得母液，加入蔗糖1.3~1.6%、蛋白胨0.1~0.3%、KH₂PO₄0.2~0.4%、MgSO₄0.1~0.2%、酵母膏0.3~0.6%和四环素0.01~0.03%。

2.按照权利要求1所述的一种蜜环菌母种的培养基，其特征在于：所述的培养基的PH值为5~6；所述的母液过滤采用四层纱布过滤，蔗糖可以由葡萄糖代替。

3.一种使用权利要求1~2任一项所述的培养基培养蜜环菌菌种的方法，其特征在于：包括下述步骤：将成熟的密环菌子实体消毒后取菌帽碎化，取其中碎片置于盛装培养基的锥形瓶中，锥形瓶中的培养基溶液为100ml，密封锥形瓶口，然后锥形瓶置于摇床上培养，培养过程避光，培养时间为30~45天，制成液体蜜环菌菌种。

4.按照权利要求3所述的一种使用培养基培养蜜环菌菌种的方法，其特征在于：所述的摇床的转速140~150转/min，培养温度为22~24℃。

5.按照权利要求3所述的一种使用培养基培养蜜环菌菌种的方法，其特征在于：所述的蜜环菌子实体为蜜环菌M-8、a9子实体。

6.一种棉花秸秆使用权利要求3或4所述的蜜环菌制作菌棒的方法，其特征在于：包括下述步骤：棉花秸秆装袋灭菌，然后取液体蜜环菌菌种4~6ml接种在棉花秸秆上，接种温度为20~22℃；

接种后的棉花秸秆控制生长温度为20~25℃，含水率保持40~50%，生长时间为35~55天制成菌棒。

7.按照权利要求6所述的一种棉花秸秆使用蜜环菌制作菌棒的方法，其特征在于：所述的棉花秸秆灭菌将棉花秸秆旁枝去除，秸秆主干切段，装袋，置于温度121℃，压力为0.15Mp环境，时间为240~300min；然后加入5~10%的多菌灵溶液。

8.一种使用权利要求1~7所述的棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，其特征在于：包括下述步骤：

（1）栽培坑的制作；

（2）放置菌棒后将天麻种子接种于菌棒上；

（3）栽培坑回填，填埋高度略高于周围地面；

（4）生长时间为10~12个月。

9.按照权利要求8所述的一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，其特征在于：所述的栽培坑建在海拔20~100m的低海拔丘陵地带的沙壤土地，栽培坑的深度为23~37cm，宽度为60~80cm；栽培坑坑底平铺含水15~25%的棉花秸秆，菌棒置于棉花秸秆上，菌棒靠近两端分别接种天麻子；

栽培坑菌棒放置间隔12~16cm，菌棒两端分别接种2~4个天麻子；控制天麻地下生长温度低于28℃。

10.按照权利要求8所述的一种棉花秸秆制作的菌棒栽培天麻的方法，其特征在于：所述的天麻种子为红麻种子或乌麻种子。