CN105640888A - 一种前列地尔注射制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种前列地尔脂质体注射剂及其制备方法，主要由前列地尔、二油酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚乙二醇2000、海藻糖制成。与现有技术相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，疗效更显著。

Description

一种前列地尔注射制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种前列地尔注射剂，具体涉及一种前列地尔注射制剂及其制备方法，属于医药领域。

背景技术

前列地尔(Alprostadil)是前列腺素(PG)系列中的一种，也称前列腺素E₁(以下简称PGE₁)，通常遍布于人和动物的组织和体液中，是一种作用较强的生理活性物质，具有外周血管扩张、抑制血小板聚集、保护肝细胞和改善肝功能等作用。

列地尔在胃肠道易被分解代谢，不宜口服给药，因此通常采用静脉注射方式给药。然而，前列地尔静脉给药后在体内的生物稳定性差，其主要代谢途径是在15羟-前列腺素脱氢酶的作用下，首先形成15-酮-前列地尔，而后在一系列酶的作用下，再经一系列变化形成代谢终末产物。15羟-前列腺素脱氢酶广泛存在于肺、肝、肾和脂肪等组织中。其中肺脏是其主要的代谢场所。药物静脉给药经肺循环后，相当于给药量60％～90％的前列地尔被代谢而失去药理活性。

前列地尔传统注射剂型为前列地尔环糊精包合物(PGE₁-CD)，但该制剂经肺一次灭活效价70％～95％，体内半衰期只有3～5min。为使血药浓度维持在有效范围内，须大剂量持续5小时以上的静脉给药，而由此产生的副作用如静脉炎常使患者难以接受。为解决前列地尔传统制剂静脉给药所致的不良反应问题，并减少其在肺部的代谢失活，前列地尔注射乳液现已开发并应用于临床，取得了良好的效果。然而，前列地尔的化学结构中含有β-羟基酮，在酸、碱条件下易脱水生成前列腺素A1，并在碱性条件下继续发生重排发应生成前列腺素B1而失去药理活性。现有市售前列地尔注射乳液采用热压旋转灭菌工艺(即117℃30分钟，或121℃15分钟)处理后药物降解率超过30％，且现有市售前列地尔注射乳液须在0～5℃的环境下进行保存和运输，有效期也仅有1年。

综上可见，进一步减少前列地尔在肺部的降解，提高其生物利用度；增强前列地尔的热稳定性，延长前列地尔注射的有效期，是一个重要的尚待解决的技术难题，同时也是前列地尔注射制剂的技术发展发向。

脂质体(Liposome)最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

然而，制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关。

因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的前列地尔脂质体注射液是首要解决的问题。

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种前列地尔脂质体注射剂，其不仅能有效减少前列地尔在肺部的降解，提高其生物利用度；而且还能增强前列地尔的热稳定性，延长前列地尔注射的有效期。

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的前列地尔、二油酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚乙二醇2000、海藻糖，可以形成品质优异的前列地尔脂质体注射剂，从而完成本发明。

本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，脂质体具有良好的包封率，较现有产品具有更好的生物利用度，本发明制得的脂质体注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，适合于工业化大生产。

本发明解决的技术方案如下：

本发明提供一种前列地尔脂质体注射剂，主要由前列地尔、二油酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚乙二醇2000、海藻糖制成。

本发明提供一种前列地尔脂质体冻干粉针注射剂，主要由下列重量份数比的成分制成：

本发明提供一种前列地尔脂质体冻干粉针注射剂，各组分的优选重份数为：

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本发明中，作为药物活性成分的前列地尔，其脂溶性差，水溶性良好。针对前列地尔的特点，本发明人通过研究发现二油酰磷脂酰甘油特别适于作为基础磷脂成膜材料。

二油酰磷脂酰甘油作为一种合成磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。二油酰磷脂酰甘油的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性和渗漏率等性质差。在本发明的前列地尔脂质体注射剂中，相对于1重量份的前列地尔而言，二油酰磷脂酰甘油的用量为3-8重量份。如果二油酰磷脂酰甘油的用量低于3重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果二油酰磷脂酰甘油的用量高于8重量份，则作为药物活性成分的前列地尔的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的前列地尔脂质体注射剂中，胆固醇、聚乙二醇2000用于调节脂质体的膜稳定性。

胆固醇是一种双亲性分子，与二油酰磷脂酰甘油相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入二油酰磷脂酰甘油双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。

因此，本发明的前列地尔脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的前列地尔脂质体注射剂中，相对于1重量份的前列地尔而言，二油酰磷脂酰甘油的用量为3-8重量份，胆固醇为1-5重量份时，所形成的前列地尔脂质体注射剂的包封率高。

在本发明的前列地尔脂质体注射剂中，使用聚乙二醇2000来进一步改进脂质体膜的稳定性，当用于二油酰磷脂酰甘油双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高前列地尔脂质体注射剂的稳定性。

在本发明的前列地尔脂质体注射剂中，相对于1重量份的前列地尔而言，聚乙二醇2000的用量为0.5-5重量份。如果聚乙二醇2000的用量低于0.5重量份，则由于其用量过低导致对前列地尔脂质体注射剂的稳定性改进不够，反之，如果聚乙二醇2000的用量高于2重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

研究发现，当使用上述特定量的前列地尔、二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚乙二醇2000时，可以得到品质优良的前列地尔脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

在本发明的前列地尔脂质体注射剂中，使用海藻糖作为赋形剂，用于形成稳定的注射剂。

本发明的目的之一，提供前列地尔脂质体注射剂在制备具有外周血管扩张、抑制血小板聚集、保护肝细胞和改善肝功能的药物中的用途。

另一方面，本发明还提供一种前列地尔脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

(1)将二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚乙二醇2000溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次20分钟；

(3)无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入前列地尔，不断搅拌1-3小时，制得前列地尔脂质体溶液；

(4)向上述脂质体溶液中加入海藻糖，0.45um微孔滤膜过滤，定容，分装，冷冻干燥，即得前列地尔脂质体冻干粉针注射剂；

或者，向上述脂质体溶液中加入氯化钠，0.45um微孔滤膜过滤，定容，快速冷冻，然后恢复到室温，定容，灌装，灭菌，即得前列地尔脂质体注射液。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液是选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中的一种。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液为pH为6.1的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液。

上述所述的制备方法，其中步骤(3)中所述的熔融状态脂质体的温度为70℃。

上述所述的制备方法，其中步骤(4)中所述的冷冻的温度为-55℃。

制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的前列地尔脂质体注射剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的前列地尔脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1

前列地尔脂质体冻干粉针剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用以下制备工艺制备前列地尔脂质体冻干粉针剂：

(1)将二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚乙二醇2000溶于800mlpH为6.1的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次20分钟；

(3)无菌条件下，向70℃熔融状态的脂质体中加入前列地尔，不断搅拌2小时，制得前列地尔脂质体溶液；

(4)向上述脂质体溶液加入海藻糖，0.45um微孔滤膜过滤，定容至1000ml，分装，冷冻干燥，即得前列地尔脂质体冻干粉针剂。

实施例2

前列地尔脂质体冻干粉针剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用以下制备工艺制备前列地尔脂质体注射液：

(1)将二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚乙二醇2000溶于2000mlpH为6.1的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次20分钟；

(3)无菌条件下，向70℃熔融状态的脂质体中加入前列地尔，不断搅拌2小时，制得前列地尔脂质体溶液；

(4)向上述脂质体溶液加入海藻糖，0.45um微孔滤膜过滤，定容至2000ml，分装，快速冷冻，即得前列地尔脂质体冻干粉针剂。

实施例3

前列地尔脂质体冻干粉针剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用以下制备工艺制备前列地尔脂质体注射液：

(1)将二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚乙二醇2000溶于2000mlpH为6.1的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次20分钟；

(3)无菌条件下，向70℃熔融状态的脂质体中加入前列地尔，不断搅拌2小时，制得前列地尔脂质体溶液；

(4)向上述脂质体溶液加入海藻糖，0.45um微孔滤膜过滤，定容至2000ml，分装，快速冷冻，即得前列地尔脂质体冻干粉针剂。

对比例1-3前列地尔脂质体注射剂的制备

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成前列地尔脂质体注射剂：

表1对比例1-3中所用成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的前列地尔脂质体注射剂，置于SubmicronParticleSizerModel370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得前列地尔脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的前列地尔脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得前列地尔脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的前列地尔脂质体注射剂以10000r/min的转速高速离心，离心5分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测前列地尔含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品和对比例1-3制备的样品分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，对比例制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的前列地尔脂质体注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的前列地尔脂质体注射剂具有更高的稳定性。

试验例5生物利用度的测定

取24只大鼠，体重(205±10)g，随机分成4组，其中三组静脉注射实施例1-3制备的样品，另一组注射对比例1的样品。给药后2h采血到48小时，测定其生物利用度。使用软件3p87和WT1.4进行数据分析。试验结果如下表。

表5有关药动学参数

由以上实验数据可以看出，本发明实施例1-3的样品生物利用度大大由于对比例1的样品，特定成分制备的脂质体注射剂，促进吸收的效果明显的体现出来，使得注射剂大大地提高生物利用度，获得了预料不到技术效果。

Claims (5)

1.一种前列地尔脂质体注射剂，其特征在于主要由前列地尔、二油酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚乙二醇2000、海藻糖制成。

2.根据权利要求1所述的前列地尔脂质体注射剂，其特征在于主要由下列重量份数比的成分制成：

。

3.根据权利要求2所述的前列地尔脂质体注射剂，其特征在于各组分的优选重份数为：

。

4.一种前列地尔脂质体注射剂的制备方法，其特征在于包括如下制备步骤：

(1)将二油酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚乙二醇2000溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次20分钟；

(3)无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入前列地尔，不断搅拌1-3小时，制得前列地尔脂质体溶液；

(4)向上述脂质体溶液中加入海藻糖，0.45um微孔滤膜过滤，定容，分装，冷冻干燥，即得前列地尔脂质体冻干粉针注射剂。

5.权利要求1-4任一项所述的前列地尔脂质体注射剂在制备具有外周血管扩张、抑制血小板聚集、保护肝细胞和改善肝功能的药物中的用途。