CN105639048A - 一种具有醒酒护肝活性的高f值玉米寡肽的工业化生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法。该方法包括步骤:将玉米黄粉(CGM)经过高速剪切乳化,利用碱性蛋白与复合风味蛋白酶组合进行酶解,酶解后灭酶,板框过滤,活性炭吸附脱苦脱色及去除芳香族氨基酸,再经超滤设备分离纯化,纳滤除盐,喷雾干燥获得高F值玉米寡肽。本发明制得的产品能够使酒精性肝损伤小鼠肝脏的肝细胞脂肪变性指数降低,同时可以使肝脏中的甘油三酯(TG)、丙二醛(MAD)含量降低,还原性谷胱甘肽(GSH)含量升高,结果表明本方法生产的高F值玉米寡肽具有预防小鼠酒精性肝损伤的作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,属于植物蛋白深加工领域。
背景技术
高F值玉米寡肽是由玉米黄粉(CGM)制备的分子量在1000Da以下由2-6个氨基酸残基组成的混合小肽体系,其显著特征是支链氨基酸与芳香族氨基酸含量的摩尔数比值(F值)较高,一般大于20。高F值玉米寡肽具有抗疲劳、补充人体必需氨基酸、促进酒精代谢、保肝护肝、改善手术后和卧床病人的蛋白营养状况等多种生理功能。我国CGM粉资源丰富,年产量30万吨以上,尚未得到合理利用。利用CGM制备高F值寡肽可有效提高玉米CGM蛋白质资源的利用率,实现CGM的高附加值利用。而高F值寡肽的开发研究也逐渐成为近几年来的研究热点。
目前国内已有利用CGM制备高F值寡肽的研究,并对其醒酒护肝活性进行了一定的探究。但现有的制备高F值玉米寡肽的技术存在成本高、工艺复杂、自动化程度且产品的得率、纯度和保肝活性较低,苦味值较高等问题比较突出。致使目前高F值玉米寡肽仅限于实验室的探究性试验研究,尚未实现高F值玉米寡肽的工业化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简便可行、自动化程度高,精密度高的工业化生产方法,以实现高F值玉米寡肽的高纯度、高活性、高产量的工业化生产。
为达到上述目的,本发明是通过下述体系来实现的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于:
(1)CGM的乳化:将CGM按料液比1:9的比例进行配比加水,在乳化罐中8000-10000r/min高速剪切乳化30min-60min。
(2)酶解、灭酶、过滤:将乳化液转入酶解罐中,调温度50-60℃,pH9-11,按酶活比(1-5):1加入碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶,酶解1-3h酶解结束,将酶解罐升温至90-100℃灭酶10-15min。灭酶后,利用板框过滤进行过滤。
(3)活性炭吸附:将上述滤液调pH至2.5-3.5,按固液比1:10加入活性炭,静态吸附2-3h,并进行板框过滤。
(4)分离纯化:将上述滤液经10000Da、5000Da、1000Da超滤膜分级超滤,再经150Da纳滤膜进行除盐以及游离氨基酸。
(5)浓缩干燥:将上述溶液经浓缩,进行喷雾干燥,设置入口温度180-190℃,出口温度80-90℃,获得高F值玉米寡肽制品。
步骤(1)中所述乳化罐为大型工业化生产设备,用于对CGM的乳化预处理。
步骤(2)中所述碱性pH调节剂为NaOH。所述碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶分别为Alacalase2.4L、Flavourzyme500MG,两种蛋白酶分别为外切与内切蛋白酶。所述板框过滤,为适用于工业化生产的大型过滤设备。
步骤(3)中所述活性炭为食品级果壳粉末状活性炭,细度为200目。
步骤(4)中所述超滤纳滤膜为工业化生产中用于分离纯化的先进的膜过滤系统,可对不同分子量大小物质及颗粒进行分级分离与纯化。
步骤(5)中所述喷雾干燥,所用设备为大型喷雾干燥塔,且喷雾条件为入口温度180-190℃,出口温度80-90℃。所述高F值玉米寡肽制品:粗蛋白含量≥93.04%,肽含量(以干基计)≥92.39%,且分子量大部分集中于200-700Da,灰分含量≤3.19%,水分含量≤3.81%,F值为30.12。
本发明与现有技术相比,具有以下优点和品质效果:
1.生产工艺简单、自动化程度高、精密度高,首次实现高F值玉米寡肽的工业化生产。
2.在酶解前对CGM进行高速剪切乳化预处理,乳化的CGM在水解体系中分散均匀,易于与蛋白酶接触,且高速剪切使CGM蛋白质的空间结构破坏,酶切位点暴露易于蛋白酶的酶解,提高水解度,进而提高高F值玉米寡肽的产量。
3.酶解使用外切Alacalase2.4L与内切Flavourzyme500MG两种复合蛋白酶,可有效提高CGM蛋白的水解度,而Flavourzyme500MG的使用可改善高F值玉米寡肽的口味,降低高F值玉米寡肽的苦味。
4.采用先进超滤设备对高F值玉米寡肽进行分级超滤,同时使用纳滤膜过滤技术除盐,操作简便,可实现自动化作业,稳定性好,维护方便。并且纳滤可滤去CGM酶解液中大部分的游离按激素,提高高F值玉米寡肽的纯度与活性。
具体实施方式
下面结合实例对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施案例1
(1)CGM的乳化:将100kgCGM按料液比1:9的比例进行配比加水,在乳化罐中8000r/min高速剪切乳化30min。
(2)酶解、灭酶、过滤:将乳化液转入酶解罐中,调温度50℃,pH9,按酶活比3:1加入碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶,酶解1-3h。酶解结束,将酶解罐升温至90℃灭酶10min。灭酶后,进行板框过滤。
(3)活性炭吸附:将上述滤液调pH至2.5,按固液比1:10加入活性炭,静态吸附2h。并进行板框过滤。
(4)分离纯化:将上述滤液经10000Da、5000Da、1000Da超滤膜分级超滤,再经150Da纳滤膜进行除盐以及游离氨基酸。
(5)浓缩干燥:将上述溶液经浓缩,进行喷雾干燥,设置入口温度180℃,出口温度80℃。获得12.07kg高F值玉米寡肽制品。
实施案例2
(1)CGM的乳化:将100kgCGM按料液比1:9的比例进行配比加水,在乳化罐中9000r/min高速剪切乳化45min。
(2)酶解、灭酶、过滤:将乳化液转入酶解罐中,调温度55℃,pH10,按酶活比4:1加入碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶,酶解2h。酶解结束,将酶解罐升温至95℃灭酶13min。灭酶后,利用板框过滤过滤酶解液。
(3)活性炭吸附:将上述滤液调pH至3,按固液比1:10加入活性炭,静态吸附2.5h。并进行板框过滤。
(4)分离纯化:将上述滤液经10000Da、5000Da、1000Da超滤膜分级超滤,再经150Da纳滤膜进行除盐以及游离氨基酸。
(5)浓缩干燥:将上述溶液经浓缩,进行喷雾干燥,设置入口温度185℃,出口温度85℃。获得12.45kg高F值玉米寡肽制品。
实施案例3
(1)CGM的乳化:将100kgCGM按料液比1:9的比例进行配比加水,在乳化罐中10000r/min高速剪切乳化60min。
(2)酶解、灭酶、过滤:将乳化液转入酶解罐中,调温度60℃,pH11,按酶活比5:1加入碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶,酶解3h。酶解结束,将酶解罐升温至100℃灭酶15min。灭酶后,利用板框过滤过滤酶解液。
(3)活性炭吸附:将上述滤液调pH至3.5,按固液比1:10加入活性炭,静态吸附3h。并进行板框过滤。
(4)分离纯化:将上述滤液经10000Da、5000Da、1000Da超滤膜分级超滤,再经150Da纳滤膜进行除盐以及游离氨基酸。
(5)浓缩干燥:将上述溶液经浓缩,进行喷雾干燥,设置入口温度190℃,出口温度90℃。获得13.01kg高F值玉米寡肽制品。
以上三种案例中获得的高F值寡肽各项指标如下表1
表1实例1-3获得高F值寡肽各项指标检测结果
下面通过高F值玉米寡肽预防小鼠酒精性肝损伤作用的实验来进一步说明本发明产品的保肝护肝生理功能。
1.材料与方法
1.1实验材料
清洁级昆明雄性小鼠100只,体重(20-25)g,由山东省实验动物中心提供。甘油三酯测定试剂盒、丙二醛试剂盒、谷胱甘肽试剂盒,购自南京建成生物工程研究所。无水乙醇,购自天津市恒兴化学试剂制造有限公司。
1.2实验方法
将新购实验小鼠置于实验室自由摄食和饮水,适应环境一周。
小鼠随机分为5组每组20只。按高F值玉米寡肽低(100mg·kg-1-BW)、中(400mg·kg-1-BW)、高(700mg·kg-1-BW)设3个剂量组。另设乙醇模型对照组和空白对照组。
高F值寡肽剂量组和乙醇模型对照组按4800mg·kg-1ig50%乙醇5mL·kg-1,空白对照组给予等量去离子水。每天1次,连续32d。同时各高F值寡肽剂量组第1天开始喂食高F值玉米寡肽,按10mL·kg-1体积灌胃,每天1次,连续32d,乙醇模型对照组和空白对照组给予等量去离子水。动物每周称重两次,按体重调整灌胃量。
末次给药后,将高F值寡肽剂量组和乙醇模型对照组1次灌胃给予50%(V/V)乙醇0.12mL·10g-1BW,空白对照组给予去离子水,禁食12h后处死动物,取肝脏制成0.1g·mL-1肝匀浆,检测丙二醛(MAD)、还原型谷胱甘肽(GSH)和甘油三酯(TG)含量。同时取肝脏进行脂肪染色,镜检,以肝细胞内脂滴分布,稀少为0分;含脂滴的肝细胞不超过1/4,1/2,3/4分别为1分,2分,3分;肝组织几乎被脂滴代替为4分,用来评价小鼠肝脏病理组织学变化(脂肪变性)。
2.实验结果
实验结果数据用数据处理软件SPSS进行处理。结果如表2
表2高F值玉米寡肽对小鼠MAD、GSH、TG含量和脂滴分布的影响
2.1对小鼠体重的影响
各剂量组小鼠实验初始、中期、终末的体重与对照组相比,均无显著性差异(P>0.05)。
2.2对小鼠肝脏丙二醛(MDA)含量的影响
模型对照组与空白对照组相比,肝组织中MDA含量明显升高,差异有显著性(P<0.05);高F值寡肽高剂量组MDA含量比模型对照组降低,差异有显著性(P<0.05),见表2。
2.3对小鼠肝脏还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响
模型对照组与空白对照组相比,肝组织中GSH,含量明显降低,差异有极显著性(P<0.01);高F值玉米寡肽低,高剂量组GSH含量高于模型对照组,差异有极显著性(P<0.01),见表2。
2.4对小鼠肝脏甘油三酯(TG)含量的影响
模型对照组与空白对照组相比,肝组织中TG含量明显升高,差异有极显著性(P<0.01);高F值玉米寡肽高剂量组TG含量明显低于模型对照组,差异有极显著性(P<0.01),见表2。
2.5对小鼠肝脏脂滴分布的影响
模型对照组肝组织100%出现脂肪变性,与空白对照组比较,差异有极显著(P<0.01);高F值玉米寡肽高剂量组肝脏脂肪变性程度比模型对照组明显降低,差异有极显著性(P<0.01),见表2。
结果表明本发明制得的高F值玉米寡肽能够使酒精性肝损伤小鼠肝脏的肝细胞脂肪变性指数降低,同时可以使肝脏中的甘油三酯(TG)、丙二醛(MAD)含量降低,还原性谷胱甘肽(GSH)含量升高。因此本方法生产的高F值玉米寡肽具有明显的预防小鼠酒精性肝损伤作用。
根据上述说明书的揭示和教导,上述实例为本发明较佳的实施方式。因此,本发明并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明实质与原理下所作的改变、组合、修饰,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于包括以下操作步骤:
(1)玉米黄粉的乳化:将玉米黄粉按料液比1:9的比例进行配比加水,在乳化罐中8000-10000r/min高速剪切乳化30min-60min;
(2)酶解、灭酶、过滤:将乳化液转入酶解罐中,调温度50-60℃,pH9-11,按酶活比(1-5):1加入碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶,酶解1-3h;
酶解结束,将温度升至90-100℃灭酶10-15min;灭酶后,利用板框过滤过滤酶解液;
(3)活性炭吸附:将上述滤液调pH至2.5-3.5,按固液比1:10加入活性炭,静态吸附2-3h;并进行板框过滤;
(4)分离纯化:将上述滤液经10000Da、5000Da、1000Da超滤膜分级超滤,再经150Da纳滤膜进行除盐以及游离氨基酸;
(5)浓缩干燥:将上述溶液经浓缩后,进行喷雾干燥,设置入口温度180-190℃,出口温度80-90℃;获得高F值玉米寡肽制品。
2.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(1)中所述乳化为玉米黄粉预处理的一种方法,在乳化罐中进行。
3.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(2)中所述碱性pH调节剂为NaOH。
4.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(2)中所述碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶分别为Alacalase2.4L、Flavourzyme500MG,两种蛋白酶分别为外切与内切蛋白酶。
5.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(2)中所述板框过滤,为适用于工业化生产的大型过滤设备。
6.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(3)中所述活性炭为食品级果壳粉末状活性炭,细度为200目。
7.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(4)中所述超滤纳滤膜为工业化生产中用于分离纯化的先进的膜过滤系统,可对不同分子量大小物质及颗粒进行分级分离与纯化。
8.根据权利要求1所述的一种具有醒酒护肝活性的高F值玉米寡肽的工业化生产方法,其特征在于步骤(5)所述喷雾干燥,所用设备为大型喷雾干燥塔,且喷雾条件为入口温度180-190℃,出口温度80-90℃。
9.一种根据权利要求1-8任一项所述方法制备得到的高F值玉米寡肽。
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