CN105624048A - 一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法 - Google Patents

一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105624048A
CN105624048A CN201610134434.XA CN201610134434A CN105624048A CN 105624048 A CN105624048 A CN 105624048A CN 201610134434 A CN201610134434 A CN 201610134434A CN 105624048 A CN105624048 A CN 105624048A
Authority
CN
China
Prior art keywords
thraustochytriale
bacterium colony
isolation medium
microscopic examination
thraustochytrids
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610134434.XA
Other languages
English (en)
Inventor
王秋珍
汪光义
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin University
Original Assignee
Tianjin University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin University filed Critical Tianjin University
Priority to CN201610134434.XA priority Critical patent/CN105624048A/zh
Publication of CN105624048A publication Critical patent/CN105624048A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法，其分离培养基是用下述方法制成：称取葡萄糖、酵母提取物、蛋白胨、玉米浆、谷氨酸钠、琼脂、人工海盐，加入超纯水并搅拌均匀，灭菌；无菌条件下，将温度降至50±5℃，加入现配制的经0.22um滤膜过滤的抗生素混合液，摇匀，倒平板，即得破囊壶菌的分离培养基；所述抗生素混合液是用下述方法制成：称取氨苄西林0.5-1g，链霉素0.5-1.5g，制霉菌素5-20mg，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素混合液。利用本发明的破囊壶菌的分离培养基能方便地从潮间带红树植物腐败落叶或潮间带红树林地区海水样品中分离出破囊壶菌，培养基成本低，分离操作简便。

Description

一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法
技术领域
本发明涉及微生物培养技术领域，特别是涉及一种破囊壶菌的分离培养基及其分离纯化方法。
背景技术
破囊壶菌(Thraustochytrids)是一类异养的类真菌海洋原生生物，现被分类至假菌界(Chromista)或管毛生物界(Straminipila)、不等鞭毛类(Heterokonta)、网粘菌纲(Labyrinthulomycetes或Labyrinthulomycota)、破囊壶菌目(Thraustochytriales)、破囊壶菌科(Thraustochytriaceae)
破囊壶菌在各类海洋生态系统中广泛存在，如近岸红树林系统、珊瑚礁、盐沼、近海水域、深海水域以及底泥环境中。作为一类腐食性的微生物，破囊壶菌对于整个海洋生态系统的营养物质循环意义重大，对于维持海洋生态系统的正常生态功能具有重要贡献。传统的生态学研究认为，海洋细菌(包括真细菌和古细菌)和海洋真菌是海洋生态系统中的主要分解者，在有机碎屑的降解和营养物质循环方面充当了重要的角色。然而，近年来的研究资料表明，破囊壶菌在海水中的丰度可处于103到106的水平，在个别水域中破囊壶菌的生物量甚至会高于细菌。有研究发现，破囊壶菌在赤道印度洋海域水体中的生物量可以高达总生物量(破囊壶菌和细菌生物量总和)的99.4％。因此，破囊壶菌在对海洋碳库贡献显著，在海洋碳循环系统中具有重要作用。而除了在海洋水体中丰度较高外，破囊壶菌在底泥中的细胞密度也很高。此外，也有报道显示，浮游植物腐殖质中破囊壶菌的生物量也经常会高于细菌的生物量。破囊壶菌在不同海洋生态系统中的高生物量表明，破囊壶菌具有重要的生理生态功能，可能在不同生态系统中都占据着特定的生态位，但针对可培养破囊壶菌的培养方法及培养基组成的研究并不多。
在破囊壶菌的应用研究方面，大家发现破囊壶菌细胞内的脂肪酸含量高，可以达到生物质含量的50％以上。其脂肪酸的主要成分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。其中，饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸是生物柴油的主要组成成分。此外，破囊壶菌还可以合成胞外多糖、胞外酶及类胡萝卜素等。
发明内容
本发明的目的是提供一种破囊壶菌的分离培养基。
本发明的第二个目的是提供一种破囊壶菌的分离纯化方法。
本发明的第三个目的是提供另一种破囊壶菌的分离纯化方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种破囊壶菌的分离培养基，用下述方法制成：称取葡萄糖2g、酵母提取物1g、蛋白胨1g、玉米浆1g、谷氨酸钠1g、琼脂20g、人工海盐33g于锥形瓶中，加入995ml超纯水并搅拌均匀，115℃灭菌21分钟；无菌条件下，将温度降至50±5℃，加入5ml现配制的经0.22um滤膜过滤的抗生素混合液，摇匀，倒平板，即得破囊壶菌的分离培养基；所述抗生素混合液是用下述方法制成：称取氨苄西林0.5-1g，链霉素0.5-1.5g，制霉菌素5-20mg，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素混合液。
一种破囊壶菌的分离纯化方法，包括如下步骤：
用灭过菌的剪刀将潮间带红树植物腐败落叶剪成直径0.5-1.5cm碎片，用灭菌海水冲洗2-3遍，贴于权利要求1的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养3-4次，得到纯培养的破囊壶菌单菌落。
另一种破囊壶菌的分离纯化方法，包括如下步骤：
采集20ml潮间带红树林地区海水样品于培养皿中，撒0.5-1g松花粉，摇匀，于28±1℃培养1-2天，用接种环挑取花粉粒划线于权利要求1的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3-10天，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养3-4次，得到纯培养的破囊壶菌单菌落。
本发明的优点：
利用本发明的破囊壶菌的分离培养基能方便地从潮间带红树植物腐败落叶或潮间带红树林地区海水样品中分离出破囊壶菌，培养基成本低，分离操作简便。
附图说明
图1为实施例4分离出来的破囊壶菌的显微形态。
图2为实施例5分离出来的破囊壶菌的显微形态。
图3为实施例6分离出来的破囊壶菌的显微形态。
图4为实施例7分离出来的破囊壶菌的显微形态。
图5为实施例8分离出来的破囊壶菌的显微形态。
图6为实施例9分离出来的破囊壶菌的显微形态。
具体实施方式
本发明使用的人工海盐为法国红十字公司生产的小丑盐。但并不对本发明作任何限制。
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种破囊壶菌的分离培养基，用下述方法制成：称取葡萄糖2g、酵母提取物1g、蛋白胨1g、玉米浆1g、谷氨酸钠1g、琼脂20g、人工海盐33g于锥形瓶中，加入995ml超纯水并搅拌均匀，115℃灭菌21分钟；无菌条件下，将温度降至50℃，加入5ml现配制的经0.22um滤膜过滤的抗生素混合液，摇匀，倒平板，即得破囊壶菌的分离培养基；所述抗生素混合液是用下述方法制成：称取氨苄西林0.5g，链霉素0.75g，制霉菌素10mg，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素混合液。
实施例2
一种破囊壶菌的分离培养基，用下述方法制成：称取葡萄糖2g、酵母提取物1g、蛋白胨1g、玉米浆1g、谷氨酸钠1g、琼脂20g、人工海盐33g于锥形瓶中，加入995ml超纯水并搅拌均匀，115℃灭菌21分钟；无菌条件下，将温度降至45℃，加入5ml现配制的经0.22um滤膜过滤的抗生素混合液，摇匀，倒平板，即得破囊壶菌的分离培养基；所述抗生素混合液是用下述方法制成：称取氨苄西林0.5g，链霉素0.5g，制霉菌素5mg，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素混合液。
实施例3
一种破囊壶菌的分离培养基，用下述方法制成：称取葡萄糖2g、酵母提取物1g、蛋白胨1g、玉米浆1g、谷氨酸钠1g、琼脂20g、人工海盐33g于锥形瓶中，加入995ml超纯水并搅拌均匀，115℃灭菌21分钟；无菌条件下，将温度降至55℃，加入5ml现配制的经0.22um滤膜过滤的抗生素混合液，摇匀，倒平板，即得破囊壶菌的分离培养基；所述抗生素混合液是用下述方法制成：称取氨苄西林1g，链霉素1.5g，制霉菌素20mg，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素混合液。
实施例4
2015年8月24日，从深圳福田红树林自然保护区采集红树植物腐败落叶，用灭过菌的剪刀将潮间带红树植物腐败落叶剪成直径0.5-1.5cm碎片，用灭菌海水冲洗2遍，贴于实施例1制备的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养4次，得到22个纯培养的破囊壶菌单菌落，经18SrRNA鉴定为破囊壶菌Schizochytrium属。显微形态见图1。
实施例5
2015年9月4日，从福建泉州湾采集红树植物腐败落叶，用灭过菌的剪刀将潮间带红树植物腐败落叶剪成直径0.5-1.5cm碎片，用灭菌海水冲洗3遍，贴于实施例2制备的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养3次，得到12个纯培养的破囊壶菌单菌落，经18SrRNA鉴定为破囊壶菌Aurantiochytrium属。显微形态见图2。
实施例6
2015年9月5日，从浙江乐清湾采集红树植物腐败落叶，用灭过菌的剪刀将潮间带红树植物腐败落叶剪成直径0.5-1.5cm碎片，用灭菌海水冲洗2遍，贴于实施例3制备的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养4次，得到20个纯培养的破囊壶菌单菌落。经18SrRNA鉴定为破囊壶菌Aurantiochytrium属。显微形态见图3。
实施例7
2015年7月31日，采集海南海甸岛潮间带红树林地区海水，取20ml于培养皿中，撒0.5g马尾松未破壁花粉，摇匀，于28±1℃培养2天，用接种环挑取花粉粒划线于实施例1制备的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养4次，得到26个纯培养的破囊壶菌单菌落。经18SrRNA鉴定为破囊壶菌Schizochytrium属。显微形态见图4。
实施例8
2015年9月5日，采集浙江乐清湾潮间带红树林地区海水，取20ml于培养皿中，撒1g马尾松未破壁花粉，摇匀，于28±1℃培养1天，用接种环挑取花粉粒划线于实施例2制备的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养3次，得到35个纯培养的破囊壶菌单菌落。经18SrRNA鉴定为破囊壶菌Aurantiochytrium属。显微形态见图5。
实施例9
2015年9月4日，采集福建泉州湾潮间带红树林地区海水，取20ml于培养皿中，撒1g马尾松未破壁花粉，摇匀，于28±1℃培养2天，用接种环挑取花粉粒划线于实施例3制备的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养4次，得到20个纯培养的破囊壶菌单菌落。经18SrRNA鉴定为破囊壶菌Aurantiochytrium属。显微形态见图6。

Claims (3)

1.一种破囊壶菌的分离培养基，其特征是用下述方法制成：称取葡萄糖2g、酵母提取物1g、蛋白胨1g、玉米浆1g、谷氨酸钠1g、琼脂20g、人工海盐33g于锥形瓶中，加入995ml超纯水并搅拌均匀，115℃灭菌21分钟；无菌条件下，将温度降至50±5℃，加入5ml现配制的经0.22um滤膜过滤的抗生素混合液，摇匀，倒平板，即得破囊壶菌的分离培养基；所述抗生素混合液是用下述方法制成：称取氨苄西林0.5-1g，链霉素0.5-1.5g，制霉菌素5-20mg，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素混合液。
2.一种破囊壶菌的分离纯化方法，其特征是包括如下步骤：
用灭过菌的剪刀将潮间带红树植物腐败落叶剪成直径0.5-1.5cm碎片，用灭菌海水冲洗2-3遍，贴于权利要求1的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3天后，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养3-4次，得到纯培养的破囊壶菌单菌落。
3.一种破囊壶菌的分离纯化方法，其特征是包括如下步骤：
采集20ml潮间带红树林地区海水样品于培养皿中，撒0.5-1g松花粉，摇匀，于28±1℃培养1-2天，用接种环挑取花粉粒划线于权利要求1的破囊壶菌的分离培养基上，于28±1℃培养，培养3-10天，显微观察破囊壶菌形态，将显微观察其形态为破囊壶菌的单菌落，用接种环将破囊壶菌单菌落挑至新的破囊壶菌的分离培养基上划线纯化培养；长出单菌落后显微观察其形态；划线纯化培养3-4次，得到纯培养的破囊壶菌单菌落。
CN201610134434.XA 2016-03-08 2016-03-08 一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法 Pending CN105624048A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610134434.XA CN105624048A (zh) 2016-03-08 2016-03-08 一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610134434.XA CN105624048A (zh) 2016-03-08 2016-03-08 一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105624048A true CN105624048A (zh) 2016-06-01

Family

ID=56039398

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610134434.XA Pending CN105624048A (zh) 2016-03-08 2016-03-08 一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105624048A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107513503A (zh) * 2017-09-08 2017-12-26 天津大学 一种隐球酵母的分离纯化培养及鉴定方法
CN107557303A (zh) * 2017-09-08 2018-01-09 天津大学 一种高产胞外多糖的海洋破囊壶菌菌株分离筛选方法
CN108424938A (zh) * 2017-09-14 2018-08-21 天津大学 一种破囊壶菌高产脂肪酸的发酵培养基及其应用
CN112481133A (zh) * 2019-09-11 2021-03-12 天津大学青岛海洋技术研究院 一种分离破囊壶菌的培养基及其纯化方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PURNIMA SINGH等: "Ecological dynamics and biotechnological implications of thraustochytrids from marine habitats.", 《APPL MICROBIOL BIOTECHNOL》 *
周茂洪等: "1株裂殖壶菌（Schizochytrium sp.）的分离鉴定", 《微生物学通报》 *
梁英等编著: "《海水生物饵料培养技术》", 31 October 1998, 青岛海洋大学出版社 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107513503A (zh) * 2017-09-08 2017-12-26 天津大学 一种隐球酵母的分离纯化培养及鉴定方法
CN107557303A (zh) * 2017-09-08 2018-01-09 天津大学 一种高产胞外多糖的海洋破囊壶菌菌株分离筛选方法
CN108424938A (zh) * 2017-09-14 2018-08-21 天津大学 一种破囊壶菌高产脂肪酸的发酵培养基及其应用
CN112481133A (zh) * 2019-09-11 2021-03-12 天津大学青岛海洋技术研究院 一种分离破囊壶菌的培养基及其纯化方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105624048A (zh) 一种破囊壶菌的分离培养基及分离纯化方法
CN101781627A (zh) 海水蛭弧菌微生态制剂的制备与应用
Lyu et al. Cultivation and diversity analysis of novel marine thraustochytrids
CN101407761B (zh) 酵母融合菌、白地霉菌和根霉菌液体菌剂及其制备方法和应用
CN105600942B (zh) 一种利用蓝藻水华形成生物絮团的方法
CN102899269A (zh) 海水环境中氯氰菊酯降解菌及其分离纯化和应用
CN105168260A (zh) 拟无枝酸菌wp1在制备革兰氏菌活性抑制剂中的应用
CN1785851A (zh) 一种利用微生物降解去除微囊藻毒素的方法
AU2012284645B2 (en) Method for obtaining an open phototrophic culture with improved storage compound production capacity
CN103740615A (zh) 光合细菌sc01及其快速培养方法和应用
CN104686587B (zh) 一种藻类天然抑藻剂及其制备方法和应用
CN108359609A (zh) 高生存性小球藻cv-6、其筛选方法及其应用
CN111286522B (zh) 一种含有鼠李糖脂的发酵液的制备方法
JP6611715B2 (ja) オーランチオキトリウム（Ａｕｒａｎｔｉｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属藻類の低塩分濃度条件順化方法
CN105217799A (zh) 一种溶藻链霉菌活性物质的工业化发酵方法
CN108130287B (zh) 一种黄杆菌、分泌物的应用及制备方法
JP4051448B2 (ja) 海洋性微生物の培養法
KR101155435B1 (ko) 신균주 쎄네데스무스 오블리쿼스 ｙｓｗ１５
JPWO2020026794A1 (ja) パームオイル工場排出液（ｐｏｍｅ）をつかった従属栄養性微細藻類の培養方法及びｄｈａ製造方法
CN105754908B (zh) 一种铜绿假单胞菌菌株及其应用
CN102899270A (zh) 拟除虫菊酯类农药降解菌及其分离纯化方法和应用
CN113462576B (zh) 一种利用水生植物培养淡水硅藻的方法
RU2814816C9 (ru) Способ культивирования гриба rhizopus oryzae
RU2814816C2 (ru) Способ культивирования гриба rhizopus oryzae
Bie et al. Sucrose biotransformation by immobilized Phaffia rhodozyma and continuous neokestose production in a packed-bed reactor

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Wang Guangyi

Inventor after: Wang Qiuzhen

Inventor before: Wang Qiuzhen

Inventor before: Wang Guangyi

CB03 Change of inventor or designer information
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160601

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication