CN105616839A - 一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方 - Google Patents
一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方 Download PDFInfo
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Abstract
一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,所述中药药效组分复方由甘草有效组分和香附有效组分组成;所述甘草有效组分为甘草多糖提取物、甘草三萜提取物,香附有效组分为香附挥发油提取物。所述甘草多糖提取物、甘草三萜提取物、香附挥发油提取物的优选的重量比为4.4328:1.6028:1。所述中药药效组分复方可添加药学上可接受的辅料及载体应用于临床抗抑郁新药的开发。本发明提供的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,通过对甘草和香附有效组分的配伍,得到了高效的抗抑郁中药药效组分复方,为抗抑郁方面的新药开发奠定基础,克服了传统中药配伍有效成分不清楚、质量无法控制而导致治疗效果不明确的缺陷。
Description
技术领域
本发明涉及中医药技术领域,尤其涉及一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方。
背景技术
抑郁症又称抑郁障碍,以显著而持久的心境低落为主要临床特征,是心境障碍的主要类型。临床可见心境低落与其处境不相称,情绪的消沉可以从闷闷不乐到悲痛欲绝,自卑抑郁,甚至悲观厌世,可有自杀企图或行为;甚至发生木僵;部分病例有明显的焦虑和运动性激越,严重危害人类的身体健康。
抑郁症的发病机制错综复杂,涉及的病因有很多种,劳累、饮食不节、精神因素等,均可导致植物神经功能紊乱,胃肠动力紊乱,胃肠激素异常及原发和继发性功能性肠腹泻。现代医学多采用促胃肠动力药,效果不甚理想,近年来中医药在治疗此病方面取得了丰富的经验和较好的疗效,中药已经成为治疗抑郁症的一个新的研究方向和目标。SH-SY5Y细胞(神经母细胞瘤细胞)在治疗抗抑郁、帕金森病等神经系统疾病研究方面应用较为普遍,SH-SY5Y细胞氧化损伤模型常用于抗抑郁药物的筛选研究。
香附是莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根茎,性平,味辛、微苦、微甘,归肝、脾、三焦经,具有行气解郁,调经止痛,理气调中的功效,用于肝郁气滞,胸、胁、脘腹胀痛,消化不良,脘痞胀满,寒病腹痛,乳房胀痛,月经不调,经闭痛经。
甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(GlycyrrhizaLinn)多种植物的根和根茎,有益气补中、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效。
发明内容
针对上述问题,本发明提供一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,将甘草、香附抗抑郁有效组分进行配伍,对SH-SY5Y细胞有很好的保护作用,将其应用于抑郁症的治疗研究,研发出潜在的抗抑郁症复方制剂。
为实现本发明的上述目的,本发明提供一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,由甘草有效组分和香附有效组分组成,所述甘草有效组分为甘草多糖提取物、甘草三萜提取物,香附有效组分为香附挥发油提取物。
香附主要含挥发油、生物碱、黄酮类、多糖等成分。
甘草主要含有黄酮类、三萜类、多糖类、氨基酸类、多种生物碱类、木质素类、香豆素类、雌性激素和多种有机酸类等成分。
所述中药药效组分复方由甘草多糖提取物、甘草三萜提取物,香附挥发油提取物配伍组成;所述甘草多糖提取物、甘草三萜提取物、香附挥发油提取物的重量为(1~50份):(1~50份):(1~50份)。
所述中药药效组分复方中甘草多糖提取物、甘草三萜提取物、香附挥发油提取物的最佳重量比为4.4328:1.6028:1。
所述抗抑郁中药药效组分复方中各有效组分的制备方法为。
甘草三萜提取物的制备:取甘草,加8~12倍体积,体积浓度为90%的乙醇,例如取1g甘草,加入8mL体积浓度为90%的乙醇。浸渍1~5h后,回流提取1~3次,每次提取时间1~2h,合并提取液,浓缩成浓度为0.5~1.5g·mL-1药液,上X-5大孔吸附树脂,湿法上柱,先用水冲洗1~5BV柱体积除杂,再用体积浓度为30~90%的乙醇溶液洗脱1~10BV柱体积,收集洗脱液,再用有机溶剂萃取1~3次,挥干溶剂,即得甘草三萜提取物,纯度>90%。
甘草多糖提取物的制备:取甘草,加6~30倍体积水,回流提取1~3次,每次0.5~2h,提取液浓缩至0.5~2mg/mL,加乙醇,调节终浓度至70~90%,沉淀12~36h,过滤,挥干,即得甘草多糖提取物,纯度>50%。
香附挥发油提取物的制备:取香附,加7~9倍体积水,水蒸气蒸馏提取3~7h,即得香附挥发油提取物,相对于水的密度为0.9000~0.9999。
所述中中药药效组分复方可添加药学上可接受的辅料及载体应用于临床抗抑郁新药的开发,药物剂型可以为:糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、蜜丸剂、散剂、丹剂、注射剂、栓剂、硬膏剂、糖浆剂、针粉剂、口崩剂或缓释胶囊剂等。
与现有技术相比本发明的有益效果。
本发明提供的一种具有抗抑郁作用的中药制剂,通过体外药效实验,证明香附、甘草有效组分,甘草多糖提取物、甘草三萜提取物,香附挥发油提取物组成的组分复方对SH-SY5Y细胞具有很好的保护作用,细胞存活率达88.75%,证明本发明的组分复方具有显著的抗抑郁作用,为抗抑郁方面的新药开发奠定基础。
本发明中药组分配伍研究是开展中药现代化研究的重要途径,它以中医理论为基础,以现代科学为指导,遵循传统方剂配伍理论与原则,优化设计,筛选出药效物质基础明确、适应临床病症的组分中药复方。
本发明通过甘草和香附有效组分配伍,甘草多糖提取物、甘草三萜提取物,香附挥发油提取物,具有疗效优越、有效成分明确、药效针对性强、服用剂量小、作用机制明确、质量易于控制等特点,对缺氧损伤神经细胞具有很好的保护作用,克服了传统中药配伍有效组分不清楚、质量无法控制而导致治疗效果不明确的缺陷,对目前抗抑郁药物的发展有重要意义。
本发明结合体外实验,由于细胞直接来源于机体组织,生物性状尚未发生大的变化,具有操作简便、周期短、节约成本等优势。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细说明本发明,但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述的实施例,凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
1实验材料。
1.1实验细胞株。
人骨髓神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y(购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)。
1.2药材与试剂。
甘草、香附药材(均由辽宁华润本溪三药有限公司提供);DMEM/F12培养基(美国GIBCO公司);胎牛血清(FCS)(杭州四季青生物工程材料有限公司);水为超纯水。
1.3仪器与设备。
USAUTOFLOW型CO2培养箱(德国NUAIRE公司);AE31型倒置相差显微镜(Motic公司);SUNRISE酶标仪(瑞士TECAN公司);LEGENDMICRO17R型低温高速离心机(ThermoFisherScientific)。
2有效组分的制备。
甘草三萜提取物的制备:取甘草,加8~12倍体积,体积浓度为90%的乙醇,例如取1g甘草,加入8mL体积浓度为90%的乙醇。浸渍1~5h后,回流提取1~3次,每次提取时间1~2h,合并提取液,浓缩成浓度为0.5~1.5g·mL-1药液,上X-5大孔吸附树脂,湿法上柱,先用水冲洗1~5BV柱体积除杂,再用体积浓度为30~90%的乙醇溶液洗脱1~10BV柱体积,收集洗脱液,再用有机溶剂萃取1~3次,挥干溶剂,即得甘草三萜提取物,纯度>90%。
甘草多糖提取物的制备:取甘草,加6~30倍体积水,回流提取1~3次,每次0.5~2h,提取液浓缩至0.5~2mg/mL,加乙醇,调节终浓度至70~90%,沉淀12~36h,过滤,挥干,即得甘草多糖提取物,纯度>50%。
香附挥发油提取物的制备:取香附,加7~9倍体积水,水蒸气蒸馏提取3~7h,即得香附挥发油提取物,相对于水的密度为0.9000~0.9999。
3均匀设计方案。
按照U6(63)均匀设计表设计方案,分别精密称取甘草多糖(A)、甘草三萜(B)、香附挥发油(C),配制成6个不同比例的配伍组,均匀设计表如下。
表1均匀设计表U6(63)。
水平 | A | B | C |
1 | 2 | 4 | 6 |
2 | 3 | 6 | 2 |
3 | 6 | 5 | 4 |
4 | 1 | 2 | 3 |
5 | 5 | 3 | 1 |
6 | 4 | 1 | 5 |
表2实际组分配伍剂量均匀设计表。
水平 | A(mg·mL-1) | B(mg·mL-1) | C (mg·mL-1) |
1 | 0.50 | 5.00 | 200.00 |
2 | 9.43 | 188.53 | 7.52 |
3 | 114.17 | 45.67 | 45.66 |
4 | 0.00 | 12.87 | 193.41 |
5 | 182.67 | 22.83 | 0.00 |
6 | 12.09 | 0.00 | 193.41 |
4MTT法药效检测。
取对数生长期、生长状态良好的SH-SY5Y细胞,经PBS清洗,用0.25%胰蛋白酶消化,待细胞趋于变圆,用含15%进口胎牛血清的DMEM培养液冲洗吹打细胞,制成单细胞悬液。以每毫升1×105个细胞接种于96孔培养板中,每孔100μL(除空白调零孔外),将培养板置于CO2培养箱中继续培养,24h后模型组和给药组加入含H2O2(终浓度为100μmol·L-1)的PBS溶液,构建氧化损伤抑郁模型,空白对照组加无H2O2的PBS溶液,造模2h后空白对照组和模型组加入10%血清的培养基100μL培养,各给药组分别加入10%血清的含药培养基100μL。设空白调零组(只加培养基,酶标仪调零用)、空白对照组、模型组(只加细胞)和给药组(加入各配伍组药物),设5个复孔。在37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h后,每孔吸取细胞上清液50μL,置-20℃保存,留作测试剂盒用,每孔补加50μL培养液,继续培养3h,每孔加入20μL(5mg/mL)MTT,继续培养4h后吸净孔内上清液,每孔加入150μLDMSO用酶标仪振摇10min,使紫色结晶完全溶解,在492nm处,测定吸光度(OD)值。结果如表3所示。其中细胞存活率=OD试验组/OD空白对照组×100%。
表3层次分析结果。
组别 | OD492MTT | 细胞存活率(%) |
空白对照组 | 1.3200 | - |
模型组 | 0.5300 | 40.1394 |
给药组1 | 0.2061 | 15.6089 |
给药组2 | 0.9340 | 70.7361 |
给药组3 | 0.3377 | 25.5756 |
给药组4 | 0.2107 | 15.9573 |
给药组5 | 0.6065 | 45.9331 |
给药组6 | 0.5682 | 43.0324 |
5数据处理。
应用CSZ均匀设计软件对数据进行处理。回归方程为:Y=-30.2328-8.1764X3-0.1531X22+1.4452X1X2+1.2133X2X3(R2=0.9998),F=599.6378>F(1,4) 0.05。以细胞存活率为抗抑郁症体外药效指标,得到抗抑郁有效组分的最佳配伍量为:甘草多糖提取物:70.7361mg,甘草三萜提取物:25.5756mg,香附挥发油提取物:15.9573mg。抗抑郁有效组分的最佳配伍比例为甘草多糖提取物:甘草三萜提取物:香附挥发油提取物=4.4328:1.6028:1。
6验证试验。
按筛选出的最佳配伍量配置中药组分复方,考察其对SH-SY5Y细胞的保护作用,结果细胞存活率达88.75%(n=5)。
由以上结果可知,甘草多糖提取物、甘草三萜提取物、香附挥发油提取物组成的中药药效组分复方对SH-SY5Y细胞有很好的保护作用,具有较强的抗抑郁作用,为抗抑郁新药的开发提供理论依据。
Claims (6)
1.一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,其特征在于,所述中药药效组分复方由甘草有效组分和香附有效组分组成;所述甘草有效组分为甘草多糖、甘草三萜,香附有效组分为香附挥发油。
2.如权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,其特征在于,所述甘草多糖、甘草三萜、香附挥发油的用量比为(1~50份):(1~50份):(1~50份)。
3.如权利要求2所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,其特征在于,所述中药药效组分复方中甘草多糖、甘草三萜、香附挥发油的用量最佳配伍比为4.4328:1.6028:1。
4.如权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,其特征在于:
所述甘草多糖的制备:取甘草,加8~12倍量90%乙醇,浸渍1~5h后,回流提取1~3次,每次提取时间1~2h,合并提取液,浓缩成浓度为0.5~1.5g·mL-1药液,上X-5大孔吸附树脂,湿法上柱,先用水冲洗1~5BV柱体积除杂,再用浓度为30~90%的乙醇溶液洗脱1~10BV柱体积,收集洗脱液,再用有机溶剂萃取1~3次,挥干溶剂,即得甘草三萜,纯度>90%;
所述甘草三萜的制备:取甘草,加6~30倍量水,回流提取1~3次,每次0.5~2h,提取液浓缩至0.5~2mg/mL,加乙醇,调节终浓度至70~90%,沉淀12~36h,过滤,挥干,即得甘草多糖提取物,纯度>50%;
所述香附挥发油的制备:取香附,加7~9倍量水,水蒸气蒸馏提取3~7h,即得香附挥发油,相对于水的密度为0.9000~0.9999。
5.如权利要求1所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,其特征在于,所述中药药效组分复方可以制备成多种制剂,并可添加药学上可接受的辅料及载体应用于临床抗抑郁新药的开发。
6.如权利要求5所述的一种具有抗抑郁作用的中药药效组分复方,其特征在于,所述制剂的剂型可以为:糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、蜜丸剂、散剂、丹剂、注射剂、栓剂、硬膏剂、糖浆剂、针粉剂、口崩剂或缓释胶囊剂等。
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GR01 | Patent grant | ||
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