CN105616556A - 一种防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法,可有效解决传统的水煎剂服用不方便且不利于方中主要有效成分的溶出的问题,其解决的技术方案是,1)上样液的制备;2)对树脂预处理;3)装柱与洗脱;本发明的芪芍方有效组分,质量稳定、可控、对小鼠酒精性肝损伤具有显著的保护作用,能够有效用于制备治疗上述疾病相应的药物,是医药领域内的创新。
Description
技术领域
本发明涉及医药,特别是一种防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法。
背景技术
酒精性肝病在世界范围内发病率不断上升,是一种进行性发展且后期会严重危害身体健康甚至生命的疾病。现代医学治疗酒精性肝病除了戒酒、对症治疗外,尚无特效疗法。近年来中医药在防治酒精性性肝病方面积累了丰富的经验。芪芍方为自拟方,由黄芪,赤芍,葛根组成,具有健脾化湿解酒、疏肝活血软坚的功效,临床用于急性酒精损伤的预防和治疗。目前芪芍方临床用药方式为传统的水煎剂,服用不方便且不利于方中主要有效成分的溶出。
药效学研究表明芪芍方有效组分具有显著的抗酒精性肝损伤作用,有效用于:
1、抗酒精性肝损伤作用:芪芍方有效组分可显著降低酒精性肝损伤模型小鼠血清中AST、ALT的水平;
2、抗脂质过氧化作用:能显著抑制SOD、丙二醛的生成,保护模型小鼠肝脏细胞脂质过氧化损伤;
芪芍方有效组分具有显著的抗酒精性肝损伤作用。其作用显著优于葛根单味药。物质基础明确,工艺稳定、可控。可用于酒精性肝损伤的治疗与预防。
中药复方化学成分复杂,组分特点各异,正是由于其复杂的化学成分和多靶点的作用机理使中药复方制剂在治疗复杂疾病中体现了西药难以比拟的优势。合适的亲水、亲脂比是中药(或中药复方)取得良好临床疗效的基础。大孔吸附树脂分离技术是20世纪60年代末发展起来的继离子交换树脂后的分离新技术之一,由于其对中药(或中药复方)复杂成分亲水、亲脂比的构建方面具有高度的选择性,近十余年大孔吸附树脂富集技术在药学领域(特别是天然药物精制)中的应用日益广泛,且呈现出良好的发展态势。
采用大孔吸附树脂法制备提取物及有效组分虽然是一种较广泛的技术,但中药化学成分复杂,组分特点各异,大孔吸附树脂型号、制备参数为是否能够获得合适有效组分的关键。本发明应用这一技术,对大孔吸附树脂型号、参数进行系统优化,首次制备出具有解酒保肝作用的芪芍方复方有效组分。
发明内容
针对上述情况,为解决现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法,可有效解决传统的水煎剂服用不方便且不利于方中主要有效成分的溶出的问题。
本发明解决的技术方案是,包括以下步骤:
1)上样液的制备:将干燥药材葛根、赤芍、黄芪按1:1:1比例粉碎,加药材6倍重量的体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,得水分散液,水分散液浓度相当于0.1-0.2g/mL生药,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加1-2倍药材重量的体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液(浓度相当于生药材0.1-0.2g/ml);
2)对树脂预处理:方法是,大孔吸附树脂用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h后,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为树脂5倍的体积量,再水洗至无醇味后,依次用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为树脂3倍体积量,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为树脂3倍体积量,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;所述的大孔吸附树脂为S8型、AB-8型、HPD-4006型、HPD-826型、NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂中的一种;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,使树脂床径高比达1:1-30,再将步骤1)中的上样液通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
本发明的芪芍方有效组分,质量稳定、可控、对小鼠酒精性肝损伤具有显著的保护作用(作用效果优于葛根单味药及市场上同类产品),能够有效用于制备治疗上述疾病相应的药物,是医药领域内的创新。
附图说明
图1为本发明上样液泄漏曲线。
图2为本发明葛根素、芍药苷、黄芪总皂苷的洗脱曲。
图3为本发明有效组分制备工艺流程图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
1)上样液的制备:将干燥的药材葛根、赤芍、黄芪共1.5kg粉碎,加9L体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加1500mL体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液15L(15000mL)(浓度相当于生药材0.1g/mL);
2)对树脂预处理:方法是,S8型大孔吸附树脂2.4L用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为12L,再水洗至无醇味后,用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为7.2L,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为7.2L,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,于内径为10cm的层析柱,使树脂床径高比达1︰6,再将步骤1)中的上样液15L通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,弃去水洗脱液;再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,弃去5%乙醇洗脱液;再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收溶剂乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
实施例2
1)上样液的制备:将干燥的药材葛根、赤芍、黄芪共3kg粉碎,加18L体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加3000mL体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液30L(30000mL)(浓度相当于生药材0.1g/mL);
2)对树脂预处理:方法是,AB-8型大孔吸附树脂4.8L用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为24L,再水洗至无醇味后,用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为14.4L,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为14.4L,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,于内径为10cm的层析柱,使树脂床径高比达1︰6,再将步骤1)中的上样液30L通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,弃去水洗脱液;再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,弃去5%乙醇洗脱液;再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收溶剂乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
实施例3
1)上样液的制备:将干燥的药材葛根、赤芍、黄芪共6kg粉碎,加36L体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加6000mL体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液30L(30000mL)(浓度相当于生药材0.2g/mL);
2)对树脂预处理:方法是,HPD-4006型大孔吸附树脂9.6L用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为48L,再水洗至无醇味后,用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为28.8L,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为28.8L,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,于内径为10cm的层析柱,使树脂床径高比达1︰6,再将步骤1)中的上样液30L通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,弃去水洗脱液;再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,弃去5%乙醇洗脱液;再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收溶剂乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
采用高效液相色谱法测定有效组分中葛根素的含量为27.49%、大豆苷的含量为6.16%、芍药苷的含量为23.19%,黄芪甲苷的含量为0.46%;采用可见分光光度法测定黄芪总皂苷的含量为9.25%。有效组分中可控质量成分达到66.09%
采用上述方法对不同量的处方药材进行制备,均取得了相同或相近似的结果,表明本方法工艺稳定可靠,产品质量好,纯度高,其产品有效用于抗酒精性肝损失、抗脂质过氧化、降低作用,并经实验得到了充分证明,有关实验资料如下:
一、树脂筛选
1、树脂类型的选择:选择五种类型的树脂作为考察对象,见表1。本实验以树脂对总二萜吸附-解吸率及洗脱物中指标性成分的含量为考察指标,筛选富集树脂。
表1五种大孔树脂的基本性质和物理结构参数
2、树脂预处理条件的选择
各种型号树脂均用95%乙醇浸泡24小时后,湿法装柱,并用95%乙醇动态清洗5倍树脂体积,水洗至无醇味后,依次用5%盐酸(浸泡6小时后,动态清洗3倍树脂体积,水洗至中性)和5%NaOH(浸泡6小时后,动态清洗3倍树脂体积,水洗至中性)处理,最后用95%乙醇动态清洗至乙醇洗脱液与水混合(1:5)不呈白色混浊溶液止,用水洗去乙醇后备用。
3、动态吸附量测定
取30mL不同型号树脂分别装入五根层析柱(直径:2.0cm,长:30.5cm),将样品液(浓度相当于0.1g/mL生药材)分别通过柱床,进行动态吸附。
漏点的考察方法:每10毫升收集一份,注入高效液相色谱仪,发现葛根素最先泄漏,故选择以葛根素为考察指标,确定吸附是否达饱和。待树脂开始泄漏时,停止上样,记录上样量,计算葛根素、芍药苷和黄芪甲苷吸附量。结果见表2。
表2不同型号树脂的最大吸附量
综合分析上述数据,五种树脂的吸附量为S8>NKA-Ⅱ>HPD826>AB-8>HPD-4006,S8型树脂的吸附性能优于其它树脂。
4吸附-解吸率测定
五根树脂柱分别用水清洗至流出液近无色,改用5%乙醇洗脱2BV,70%乙醇洗脱至洗脱液近无色。将70%乙醇洗脱液蒸干,称重,测定葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的含量,计算葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的吸附-解吸率。结果见表3。
表3不同型号树脂的吸附-解吸率测定结果
综合分析上述数据,S8、AB-8型树脂的吸附-解吸率优于其它树脂。结合S8型树脂富集部位各有效成分的含量及成品的色度。故选择S8型大孔树脂用于芪芍方有效部位的富集。
二、S8型树脂纯化分离工艺条件
1树脂柱径高比的确定
选择不同直径(cm)色谱柱3根(直径:2.0cm,长:30.5cm),湿法填装S8树脂,使树脂床径高比分别达1:4、1:6、1:8,取浓度(相当于)0.1g/mL生药材的样品液通过树脂柱,以I1mL/min的流速进行动态吸附。检查流出液,待葛根素开始流出时,停止上样,记录上柱量,计算葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的吸附量。结果见表4。从以上数据可知,树脂柱径高比为1:6时,对葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的吸附量高于1:4和1:8组,故选择1:6树脂柱径高比较合适。
表4不同径高比的吸附量
2吸附流速的确定
将220mL(相当于生药材浓度0.1g/mL)的样品液通过A型树脂柱(树脂床直径与高度比值为1:6,树脂湿体积38mL),分别以1、2和3mL/min的流速进行动态吸附。待葛根素开始泄漏时,停止上样,记录上柱量,计算葛根素、芍药苷及黄芪甲苷的吸附量。结果见表5。根据树脂的吸附量,确定以1mL/min为最佳吸附流速。
表5不同吸附流速的吸附量(mg)
3泄漏曲线考察
按上述所确定的吸附条件,取样品液330mL(相当于生药材0.1g/mL)通过S8型树脂柱(树脂床直径与高度比值为1:6,树脂湿体积38mL),进行动态吸附,每10mL收集1份,共收集33份。每份流出液用HPLC法测定葛根素和芍药苷的含量,结果见表6。以流出液中葛根素、芍药苷含量与上样液中葛根素、芍药苷浓度之比值为纵坐标,上样体积(mL)为横坐标绘制泄漏曲线见图1。通过对黄芪皂苷的检查,黄芪皂苷的泄漏在芍药苷的后面,300mL未泄漏,故可不考虑黄芪皂苷的泄漏。
表6流出液中葛根素、芍药苷的含量
由上表可知,上样240mL后葛根素开始泄漏,至290mL后明显泄漏,320mL后树脂吸附达到饱和而完全泄漏;芍药苷上样270mL后芍药苷开始泄漏,至上样290mL时明显泄漏。
4除杂条件的确定
取相当于生药材0.1g/mL的样品液100mL,分别通过4根树脂柱(树脂床直径与高度比值为1:6,树脂湿体积38mL),按上样量与树脂体积比进行动态吸附。待吸附完成后,树脂柱先分别用2、4、6、4倍体积水,2倍5%乙醇洗,再用70%乙醇洗脱至洗脱液近无色为止。收集70%乙醇洗脱液,蒸干,称重,测定70%乙醇洗脱液中葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的含量,计算葛根素、芍药苷、黄芪甲苷的吸附-解吸率。结果见表7。
表7水洗脱体积的确定
由表7可知,以4倍树脂体积的蒸馏水洗脱,再用5%乙醇2BV洗脱,即有利于有效地去除杂质,又能较好地保留芍药苷、葛根素和黄芪甲苷。
5洗脱剂选择
取浓度为0.1g/mL的样品液100mL,分别通过3根S8型大孔吸附树脂柱(树脂床直径与高度比值为1:6,树脂湿体积38mL),各上样100mL进行动态吸附。待吸附完成后,3根树脂柱先用4倍树脂体积的蒸馏水洗脱,再用2倍柱体积5%乙醇洗脱。最后分别用50%、70%、90%乙醇洗脱至洗脱液近无色为止。收集乙醇洗脱液,分别蒸干,称重,测定葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的含量,计算葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的吸附-解吸率,结果见表8。
表8洗脱剂的考察
由表8可知,葛根素和芍药苷的含量,用30%、50%、70%乙醇洗脱树脂柱,没有显著性差异,但70%乙醇吸附-解吸率洗脱明显优于前者;洗脱剂用量有显著差异:洗脱体积30%乙醇>50%乙醇>70%乙醇,30%乙醇洗脱体积是70%乙醇洗脱体积的近4倍;黄芪甲苷总苷的洗脱率70%乙醇明显高于50%乙醇洗脱,而30%乙醇部位用所建立的含量测定方法未能检测到黄芪甲苷。故30%乙醇对黄芪甲苷的洗脱率很差。根据洗脱物中主要成分葛根素、芍药苷、黄芪甲苷的含量及其吸附-解吸率,结合生产成本等因素,认为选择70%乙醇为洗脱剂比较合适。
6洗脱流速考察
取浓度相当于0.1g/mL生药样品液,分别通过3根S8型大孔树脂柱(树脂床直径与高度比值为1:6,树脂湿体积38mL),各上样100mL,以1mL/min的流速进行动态吸附。待吸附完成后,3根树脂柱分别先用4倍树脂体积的蒸馏水清洗,再用2倍树脂体积的5%乙醇以2mL/min的流速进行除杂,继续以70%的乙醇为洗脱剂进行洗脱,洗脱流速分别为1、2和3mL/min,至洗脱液近无色为止。分别收集70%乙醇洗脱液,蒸干,称重,测定葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的含量,计算葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的吸附-解吸率。结果见表9。
表9洗脱流速的确定
由表9中数据可知,洗脱流速对葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的吸附-解吸率无显著影响,结合生产效率和生产成本,最终确定洗脱流速为2mL/min。
7洗脱曲线的制备及洗脱终点的确定
取浓度为0.1g/mL的样品液220mL通过S8型树脂柱,按上述所确定的吸附、除杂和洗脱条件操作,每15mL收集一份洗脱液,共收集10份。测定葛根素、芍药苷、黄芪总皂苷含量,计算相应洗脱量。结果见表10。分别以洗脱量为纵坐标,洗脱液体积为横坐标绘制洗脱曲线,见图2。
表10各流份洗脱量测定结果(mg)
结论:从洗脱曲线可知,洗脱6倍树脂体积,可将葛根素、芍药苷、黄芪总皂苷基本洗脱完全。
以上试验,其他大孔吸附树脂经试验,均取得了与S8型大孔吸附树脂相同或相近似的结果,不再一一列举,防止累述。
三、工艺验证
1有效组分制备,见图3。
2含量测定和提取率、转移率计算
测定药材、有效组分中葛根素、芍药苷和黄芪甲苷的含量,计算提取纯化过程中最终转移率。结果见表11,表12。
表113批样品的含量测定结果
表123批样品中各有效成分转移率(%)
3三批有效组分中指标性成分的含量测定结果见表13。
表133批有效部位样品中指标性成分含量测定
本发明芪芍方有效组分的活性实验,采用常规实验方法:对小鼠急性酒精性肝损伤模型的影响进行实验。
分组与给药:将70只小鼠适应性喂养,按体重随机分成4组,即正常组,模型组,芪芍方组分组、葛根组分组,每组14只。每日禁食6小时后,模型组小鼠按体重计每日灌服0.3ml/10g的56℃白酒,芪芍方组分组除灌服同剂量的白酒外,小鼠按体重计每天灌服芪芍方7mg/10g(根据药理实验,动物给药折算方法按成60kg计算),葛根组分组除灌服同剂量的白酒外,小鼠按体重计每天灌服葛根组分7mg/10g,连续7天。护肝胶囊组小鼠按体重计每天灌服葛根组分3mg/10g,空白组给予等量白开水。
标本采集:于第3天晚开始禁食,16h后割尾采血,测血清ALT。于第6天晚开始禁食,16h后小鼠摘眼球采血,3600r/min离心血清备测AST;肝脏样本:取血后处死动物,解剖,迅速精确称量200mg肝组织,用生理盐水制作5%的肝匀浆,其各指标采用生化法按试剂盒操作说明书进行检测。
表14各组小鼠肝匀浆中SOD、MDA的含量
组别 | n | SOD(U/mg·prot) | MDA(nmol/mg·prot) |
空白对照组 | 14 | 57.27±7.12 | 10.13±2.02 |
模型组 | 10 | 28.15±5.17* | 16.11±3.17* |
芪芍方有效组份组 | 12 | 51.78±6.02★★☆ | 10.46±1.07★★☆ |
葛根组 | 12 | 43.13±8.23★★ | 13.62±1.19★ |
护肝胶囊组 | 12 | 52.97±9.65★★ | 12.43±2.43★★ |
*表示模型组与空白组相比有显著性差异,★★表示给药组与模型组相比有显著性差异(P<0.01)
★给药组与模型组相比有显著性差异(P<0.05),表示☆表示芪芍方组与葛根组相比有显著性差异;
n,表示存活动物数。
表15各组小鼠血清中ALT、AST的含量(U/L)
*表示模型组与空白组相比有显著性差异,★★表示给药组与模型组相比有显著性差异(P<0.01);
★给药组与模型组相比有显著性差异(P<0.05),表示☆表示芪芍方组与葛根组相比有显著性差异;
n,表示存活动物数。
实验结果表明,芪芍方有效组分可显著降低酒精性肝损伤模型小鼠血清中AST、ALT的水平,与葛根单味相比具有显著性差异,与阳性对照护肝胶囊组相比其作用结果优于护肝胶囊组;能显著抑制模型小鼠肝组织SOD、丙二醛的生成,具有显著的保护模型小鼠肝脏细胞脂质过氧化损伤,其作用效果显著优于葛根单味药组分。
本发明采用正交试验法对芪芍方提取工艺进行了优化,采用大孔树脂纯化方法建立了芪芍方有效组分的制备方法,为临床提供一种简便、有效、质量稳定的药物组成,为芪芍方的开发提供科学支撑,本发明方法简单,易操作使用,制备的有效组分质量稳定、重现性好,各指标成分的转移率均大于70%,质量好,简便实用、无污染、符合临床方便用药的使用特点,针对主要有效成分和杂质成分的性质最大吸附量和吸附-解吸率,以及不同型号树脂的脱色能力为考察指标,优化筛选了树脂类型,以方中的主要成分葛根素、芍药苷、黄芪甲苷的含量为主要指标,优化了大孔树脂法制备芪芍方解酒保肝有效组分的生产方法,所制备的有效组分质量稳定可控、药效明确、方便临床使用和运输,使用方便、便于携带、高疗效、质量稳定,临床、经济和社会效益突出。
Claims (5)
1.一种防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法,其特征在于,由以下步骤实现:
1)上样液的制备:将干燥药材葛根、赤芍、黄芪按1:1:1比例粉碎,加药材6倍重量的体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,得水分散液,水分散液浓度相当于0.1-0.2g/mL生药,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加1-2倍药材重量的体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液;
2)对树脂预处理:方法是,大孔吸附树脂用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h后,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为树脂5倍的体积量,再水洗至无醇味后,依次用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为树脂3倍体积量,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为树脂3倍体积量,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;所述的大孔吸附树脂为S8型、AB-8型、HPD-4006型、HPD-826型、NKA-Ⅱ型大孔吸附树脂中的一种;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,使树脂床径高比达1:1-30,再将步骤1)中的上样液通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
2.根据权利要求1所述的防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法,其特征在于,由以下步骤实现:
1)上样液的制备:将干燥的药材葛根、赤芍、黄芪共1.5kg粉碎,加9L体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加1500mL体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液15L;
2)对树脂预处理:方法是,S8型大孔吸附树脂2.4L用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为12L,再水洗至无醇味后,用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为7.2L,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为7.2L,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,于内径为10cm的层析柱,使树脂床径高比达1︰6,再将步骤1)中的上样液15L通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,弃去水洗脱液;再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,弃去5%乙醇洗脱液;再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收溶剂乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
3.根据权利要求1所述的防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法,其特征在于,由以下步骤实现:
1)上样液的制备:将干燥的药材葛根、赤芍、黄芪共3kg粉碎,加18L体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加3000mL体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液30L;
2)对树脂预处理:方法是,AB-8型大孔吸附树脂4.8L用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为24L,再水洗至无醇味后,用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为14.4L,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为14.4L,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,于内径为10cm的层析柱,使树脂床径高比达1︰6,再将步骤1)中的上样液30L通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,弃去水洗脱液;再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,弃去5%乙醇洗脱液;再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收溶剂乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
4.根据权利要求1所述的防治酒精性肝损伤有效组分的制备方法,其特征在于,由以下步骤实现:
1)上样液的制备:将干燥的药材葛根、赤芍、黄芪共6kg粉碎,加36L体积浓度为70%的乙醇,提取2次,每次1.5h,合并两次提取液,减压回收溶剂至无醇味,加水分散,在3600r/min下离心30min,倾取上清液,不溶物加6000mL体积浓度为5%的乙醇溶解,在3600r/min下离心30min,合并两次上清液制得上样液30L;
2)对树脂预处理:方法是,HPD-4006型大孔吸附树脂9.6L用体积浓度为95%的乙醇浸泡24h,湿法装柱,并用体积浓度为95%的乙醇动态清洗树脂,乙醇加入量为48L,再水洗至无醇味后,用体积浓度为5%的盐酸浸泡6h,动态清洗树脂,盐酸加入量为28.8L,再次水洗至中性,之后用体积浓度为5%的NaOH溶液浸泡6h,动态清洗树脂,NaOH溶液加入量为28.8L,并用水洗至中性,用体积浓度为95%的乙醇动态清洗,再用水清洗至不呈白色混浊溶液为止,得预处理好的树脂;
3)装柱与洗脱:将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱,于内径为10cm的层析柱,使树脂床径高比达1︰6,再将步骤1)中的上样液30L通过树脂柱,以1.6BV/h流速进行动态吸附,吸附完后,树脂柱先用4倍体积水洗脱,弃去水洗脱液;再用2倍体积的体积浓度为5%的乙醇洗脱,弃去5%乙醇洗脱液;再用6倍体积的体积浓度为70%的乙醇洗脱,每次洗脱流速均为3.2BV/h,收集体积浓度为70%乙醇的洗脱液,减压回收溶剂乙醇,蒸干,即得防治酒精性肝损伤有效组分。
5.权利要求1-4任一项所述的防治酒精性肝损伤有效组分在制备治疗酒精性肝损伤药物中的应用。
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CN1879714A (zh) * | 2006-04-29 | 2006-12-20 | 程建明 | 一种用于治疗血栓的中药组合物 |
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