CN105606596A - 一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医疗用品技术领域，具体公开了一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括70R-17194抗体包被微孔板、10R-1128抗体酶结合物、缓冲液、底物工作液、发光底物、洗涤液、质控品；其中70R-17194抗体和10R-1128抗体为购自Fitzgerald的脑型脂肪酸结合蛋白抗体。该试剂盒特异性强，具有非常好的线性范围，其线性范围为0.05ng/ml～1500ng/ml，最低检测限为0.01ng/ml，阳性预测值≥9ng/ml，检测结果准确度高，批间精密度＜11％，批内精密度＜6％，为缺血性脑卒中的早期诊断、疗效观察及预后判断提供了一种可靠的检测方法。

Description

一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明涉及医疗用品技术领域，尤其涉及生物和医学检测用医疗用品技术领域，具体涉及一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法。

背景技术

流行病学研究发现，随着老龄化人口的增加，缺血性脑卒中(ischemicstroke,IS)的发病率也随之升高，给人类的健康带来严重的危害。由于在IS发病的早期常用的CT、核磁共振、彩超不能准确的检测该疾病的病灶，同时由于以前没有特异性的生化检测方法，往往使病人在早期错过最佳的治疗时机。研究表明，脑型脂肪酸结合蛋白(brainfattyacidbindingprotein,B-FABP)是神经组织特异性蛋白标志物，脑型脂肪酸结合蛋白属于脂肪酸结合蛋白大家族中的一员，这个家族有九个成员组成，有30％--70％的氨基酸序列同源性，脑型脂肪酸结合蛋白有131个氨基酸组成，分子量为14750，脑型脂肪酸结合蛋白在IS疾病发病的早期有高表达，且与IS疾病的损伤程度及预后有相关性，可以作为IS疾病的独立特异的预测因子。

免疫分析法是利用抗原抗体特异性结合产物检测药物、激素、蛋白质、微生物的分析方法，其中包括非标记免疫分析技术和标记的免疫分析技术，标记的免疫分析技术包括酶免疫分析、放射免疫分析、荧光免疫分析、胶体金免疫技术、放光免疫技术和铁蛋白免疫技术。基于免疫分析法的技术，研究开发出一种针对脑型脂肪酸结合蛋白检测用试剂盒，对于脑血型脑卒中的预防和质量具有重要的意义。中国专利CN103713135A公开了采用免疫荧光试剂盒测定人脑型脂肪酸结合蛋白的方法，该方法实现了利用免疫荧光法测定人脑型脂肪酸结合蛋白。化学发光免疫分析是将高灵敏度的化学发光测定技术和高选择性的免疫反应相结合的检测分析技术，相比免疫荧光法具有更高的特异性、灵敏度和准确性，然而目前还没有研究实现采用化学发光免疫分析技术检测脑型脂肪酸结合蛋白。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，该试剂盒特异性高、灵敏度高、准确性高。

同时，本发明还在于提供一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白的制备方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，包括70R-17194抗体包被微孔板、10R-1128抗体酶结合物、缓冲液、底物工作液、发光底物、洗涤液、质控品；其中70R-17194抗体和10R-1128抗体为购自Fitzgerald的脑型脂肪酸结合蛋白抗体。

所述质控品为市售脑型脂肪酸结合蛋白标准品。

所述10R-1128抗体酶结合物为10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物。

所述发光底物为CSPD。

所述微孔板为24孔、48孔或96孔微孔板。

优选的，所述微孔板为96孔微孔板。

上述化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的制备方法，包括以下操作步骤：

1)制备70R-17194抗体包被微孔板：

A：取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液，向其中加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.02％，制得包被缓冲液；将70R-17194抗体用包被缓冲液稀释至0.05～0.3㎎/μl，制得70R-17194抗体包被液；

B：取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中，37℃包被2小时，弃去孔内液体，4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板，然后向微孔板中加入封闭液，37℃封闭2小时，弃去孔内液体，然后用生理盐水冲洗微孔板，冷冻干燥，即得70R-17194抗体包被板，密封4℃保存备用；其中封闭液的制备方法为：向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN₃，制得封闭液；封闭液中BSA的质量百分比浓度为1％，NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

2)制备10R-1128抗体酶结合物：

a：取1.3mg的酶、1～4mg的10R-1128抗体，加入PBS缓冲液中，然后再加入0.05ml戊二醛，室温下搅拌30分钟，避光反应4小时，然后再加入乙醇胺至乙醇胺的浓度为0.1～0.3mol/L，室温下搅拌2小时，4℃下PBS透析过夜，然后与等体积的甘油混合，再加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.01％，即得10R-1128抗体酶结合物，于4℃条件下保存备用；

3)制备缓冲液：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

4)制备底物工作液：取400～700μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液；

5)制备洗涤液：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％；

6)取发光底物、质控品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液，组装，即得所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。

上述化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的使用方法，包括以下操作步骤：

Ⅰ：用不含脑型脂肪酸结合蛋白的正常人血清稀释质控品，制成具有系列浓度梯度的脑型脂肪酸结合蛋白标准品溶液；

Ⅱ：分别取待测样品人体血清和具有系列浓度梯度的脑型脂肪酸结合蛋白标准品溶液，加入70R-17194抗体包被的微孔板的不同孔中，之后加入10R-1128抗体酶结合物，再加入发光底物CSPD，震荡均匀，37℃温育1小时，用洗涤液洗涤后控干，再加入底物工作液和分析缓冲液，室温避光反应10分钟后，在发光仪上测定发光强度；

Ⅲ：把不同浓度的脑型脂肪酸结合蛋白标准品的浓度值和测得的发光强度数据做双对数处理，绘制出标准曲线，得出脑型脂肪酸结合蛋白的浓度与发光强度关系式，将测得的待测样品人体血清样品的发光强度代入该关系式，计算得出待测样品人体血清中脑型脂肪酸结合蛋白的浓度值。

本发明化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，以购自Fitzgerald的70R-17194抗体和10R-1128抗体分别可以与脑型脂肪酸结合蛋白不同的抗原决定簇结合，通过用10R-1128抗体酶结合物作为检测抗体，以70R-17194抗体作为捕获抗体包被在固相载体上，建立了检测脑型脂肪酸结合蛋白的双抗体夹心法，实现了缺血性脑卒中标志物脑型脂肪酸结合蛋白的化学发光免疫分析检测，为缺血性脑卒中的早期诊断、疗效观察及预后判断提供了一种可靠的检测方法。

本发明化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，特异性强，具有非常好的线性范围，其线性范围为0.05ng/ml～1500ng/ml，最低检测限为0.01ng/ml，阳性预测值≥9ng/ml。同时，本发明试剂盒检测结果准确度高，批间精密度＜11％，批内精密度＜6％；操作使用简便，稳定性好，并实现快速检测，具有临床应用价值。

本发明化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的制备方法，操作简便，易于控制，适于工业化推广应用。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

下述实施例中70R-17194抗体、10R-1128抗体、不含脑性脂肪酸结合蛋白的正常人血清、脑型脂肪酸结合蛋白标准品均购自Fitzgerald；发光底物CSPD、发光底物增强剂均购自Bio-Rad。

实施例1

本实施例化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，包括70R-17194抗体包被96孔微孔板、10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物、缓冲液、底物工作液、CSPD、洗涤液、脑型脂肪酸结合蛋白标准品。

本实施例化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的制备方法，具体操作步骤为：

1)制备70R-17194抗体包被微孔板：

A：取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液，向其中加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.02％，制得包被缓冲液；将70R-17194抗体用包被缓冲液稀释至0.1㎎/μl，制得70R-17194抗体包被液；

B：取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中，37℃包被2小时，弃去孔内液体，4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板，然后向微孔板中加入封闭液，37℃封闭2小时，弃去孔内液体，然后用生理盐水冲洗微孔板，冷冻干燥，即得70R-17194抗体包被板，密封4℃保存备用；其中封闭液的制备方法为：向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN₃，制得封闭液；封闭液中BSA的质量百分比浓度为1％，NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

2)制备10R-1128抗体酶结合物：

a：取1.3mg的酶、2.5mg的10R-1128抗体，加入PBS缓冲液中，然后再加入0.05ml戊二醛，室温下搅拌30分钟，避光反应4小时，然后再加入乙醇胺至乙醇胺的浓度为0.2mol/L，室温下搅拌2小时，4℃下PBS透析过夜，然后与等体积的甘油混合，再加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.01％，即得10R-1128抗体酶结合物，于4℃条件下保存备用；

3)制备缓冲液：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

4)制备底物工作液：取600μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液；

5)制备洗涤液：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％；

6)取CSPD、脑型脂肪酸结合蛋白标准品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液，组装，即得所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。

实施例2

本实施例化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，包括70R-17194抗体包被24孔微孔板、10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物、缓冲液、底物工作液、CSPD、洗涤液、脑型脂肪酸结合蛋白标准品。

本实施例化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的制备方法，具体操作步骤为：

1)制备70R-17194抗体包被板：

A：取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液，向其中加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.02％，制得包被缓冲液；将70R-17194抗体用包被缓冲液稀释至0.3㎎/μl，制得70R-17194抗体包被液；

B：取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中，37℃包被2小时，弃去孔内液体，4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板，然后向微孔板中加入封闭液，37℃封闭2小时，弃去孔内液体，然后用生理盐水冲洗微孔板，冷冻干燥，即得70R-17194抗体包被板，密封4℃保存备用；其中封闭液的制备方法为：向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN₃，制得封闭液；封闭液中BSA的质量百分比浓度为1％，NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

2)制备10R-1128抗体酶结合物：

a：取1.3mg的酶、4mg的10R-1128抗体，加入PBS缓冲液中，然后再加入0.05ml戊二醛，室温下搅拌30分钟，避光反应4小时，然后再加入乙醇胺至乙醇胺的浓度为0.3mol/L，室温下搅拌2小时，4℃下PBS透析过夜，然后与等体积的甘油混合，再加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.01％，即得10R-1128抗体酶结合物，于4℃条件下保存备用；

3)制备缓冲液：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

4)制备底物工作液：取400μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液；

5)制备洗涤液：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％；

6)取CSPD、脑型脂肪酸结合蛋白标准品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液，组装，即得所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。

实施例3

本实施例化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，包括70R-17194抗体包被48孔微孔板、10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物、缓冲液、底物工作液、CSPD、洗涤液、脑型脂肪酸结合蛋白标准品。

本实施例化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的制备方法，具体操作步骤为：

1)制备70R-17194抗体包被板：

A：取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液，向其中加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.02％，制得包被缓冲液；将70R-17194抗体用包被缓冲液稀释至0.05㎎/μl，制得70R-17194抗体包被液；

B：取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中，37℃包被2小时，弃去孔内液体，4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板，然后向微孔板中加入封闭液，37℃封闭2小时，弃去孔内液体，然后用生理盐水冲洗微孔板，冷冻干燥，即得70R-17194抗体包被板，密封4℃保存备用；其中封闭液的制备方法为：向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN₃，制得封闭液；封闭液中BSA的质量百分比浓度为1％，NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

2)制备10R-1128抗体酶结合物：

a：取1.3mg的酶、1mg的10R-1128抗体，加入PBS缓冲液中，然后再加入0.05ml戊二醛，室温下搅拌30分钟，避光反应4小时，然后再加入乙醇胺至乙醇胺的浓度为0.1mol/L，室温下搅拌2小时，4℃下PBS透析过夜，然后与等体积的甘油混合，再加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.01％，即得10R-1128抗体酶结合物，于4℃条件下保存备用；

3)制备缓冲液：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

4)制备底物工作液：取700μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液；

5)制备洗涤液：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％；

6)取CSPD、脑型脂肪酸结合蛋白标准品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液，组装，即得所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。

实施例4

使用本发明实施例1～3提供的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒测定缺血性脑卒中人体血清中脑型脂肪酸结合蛋白的浓度，具体使用方法的操作步骤如下：

Ⅰ：取10μg脑型脂肪酸结合蛋白标准品加入1ml的不含脑型脂肪酸结合蛋白的正常人血清中，制成10μg/ml的母液；用不含脑型脂肪酸结合蛋白的正常人血清稀释该母液，分别制成1500ng/ml、200ng/ml、30ng/ml、4ng/ml、0.5ng/ml、0.1ng/ml、0.05ng/ml、0.01ng/ml、0.005ng/ml的脑性脂肪酸结合蛋白标准溶液；取缓冲液稀释10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物，稀释比为1:1000～4000；

Ⅱ：取各浓度的脑型脂肪酸结合蛋白标准品溶液各50微升，加入70R-17194抗体包被的微孔板的不同孔中，之后加入稀释后的10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物50微升，之后加入发光底物CSPD，震荡均匀，37℃温育1小时，用洗涤液洗5次，在吸水纸上控干，再加入底物工作液和缓冲液各50微升，室温避光反应10分钟后，在发光仪上测定发光强度；各浓度的脑型脂肪酸结合蛋白标准品溶液分别检测五次，计算各浓度的脑型脂肪酸结合蛋白标准溶液测得的发光强度平均值；把各浓度的脑型脂肪酸结合蛋白标准品溶液的浓度值和对应的发光强度平均值做双对数处理，绘制标准曲线，得出脑型脂肪酸结合蛋白的浓度与发光强度关系式；

Ⅲ：取待测样品人体血清50微升，加入70R-17194抗体包被的微孔板的孔中，之后加入稀释后的10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物50微升，之后加入发光底物CSPD，震荡均匀，37℃温育1小时，用洗涤液洗5次，在吸水纸上控干，再加入底物工作液和缓冲液各50微升，室温避光反应10分钟后，在发光仪上测定发光强度将测得的待测样品人体血清样品的发光强度，将该发光强度代入步骤Ⅱ所得的关系式中，计算得出待测样品人体血清中脑型脂肪酸结合蛋白的浓度值。

临床试验：

试验例

1、使用实施例1提供的试剂盒采用实施例4所述的方法绘制标准曲线过程中，各浓度脑型脂肪酸结合蛋白标准品溶液重复检测五次的批间精密度＜11％，批内精密度＜6％，该结果表明本发明提供的试剂盒检测结果准确度高。其线性范围为0.05ng/mL～1500ng/mL，最低检测限为0.01ng/mL，阳性预测值≥9ng/mL。

2、使用实施例1提供的试剂盒采用实施例4所述的方法分别测定从医院取来的15例健康人的血清样本和15例病人血清样本中脑型脂肪酸结合蛋白的浓度(ng/ml)，其结果如下表1所示：

表1

Claims (10)

1.一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，包括70R-17194抗体包被微孔板、10R-1128抗体酶结合物、缓冲液、底物工作液、发光底物、洗涤液、质控品；其中70R-17194抗体和10R-1128抗体为购自Fitzgerald的脑型脂肪酸结合蛋白抗体。

2.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述质控品为市售脑型脂肪酸结合蛋白标准品。

3.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述10R-1128抗体酶结合物为10R-1128抗体碱性磷酸酶结合物。

4.如权利要求3所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述发光底物为CSPD。

5.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述微孔板为24孔、48孔或96孔微孔板。

6.如权利要求5所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述微孔板为96孔微孔板。

7.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述缓冲液由以下方法制备而得：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％。

8.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述底物工作液由以下方法制备而得：取400～700μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液。

9.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于，所述洗涤液由以下方法制备而得：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％。

10.一种如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1)制备70R-17194抗体包被微孔板：

A：取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液，向其中加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.02％，制得包被缓冲液；将70R-17194抗体用包被缓冲液稀释至0.05～0.3㎎/μl，制得70R-17194抗体包被液；

B：取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中，37℃包被2小时，弃去孔内液体，4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板，然后向微孔板中加入封闭液，37℃封闭2小时，弃去孔内液体，然后用生理盐水冲洗微孔板，冷冻干燥，即得70R-17194抗体包被板，密封4℃保存备用；其中封闭液的制备方法为：向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN₃，制得封闭液；封闭液中BSA的质量百分比浓度为1％，NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

2)制备10R-1128抗体酶结合物：

a：取1.3mg的酶、1～4mg的10R-1128抗体，加入PBS缓冲液中，然后再加入0.05ml戊二醛，室温下搅拌30分钟，避光反应4小时，然后再加入乙醇胺至乙醇胺的浓度为0.1～0.3mol/L，室温下搅拌2小时，4℃下PBS透析过夜，然后与等体积的甘油混合，再加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.01％，即得10R-1128抗体酶结合物，于4℃条件下保存备用；

3)制备缓冲液：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

4)制备底物工作液：取600μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液；

5)制备洗涤液：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％；

6)取发光底物、质控品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液，组装，即得所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。