CN105603068B - 大豆株高紧密连锁的分子标记及其应用 - Google Patents

大豆株高紧密连锁的分子标记及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了大豆株高紧密连锁的分子标记及其应用。本发明公开的利用大豆株高紧密连锁的分子标记鉴定大豆株高性状的方法包括：分别以待测大豆、大豆A和大豆B的基因组DNA为模板，用该分子标记的PCR引物对分别进行PCR扩增，得到待测大豆PCR产物、大豆A PCR产物和大豆B PCR产物；如果待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C，待测大豆的株高高于或候选高于大豆B的株高；如果PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，待测大豆的株高高于或候选高于大豆B的株高；如果待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为T，待测大豆的株高低于或候选低于大豆A的株高。

Description

大豆株高紧密连锁的分子标记及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域中大豆株高紧密连锁的分子标记及其应用。
背景技术
第一次绿色革命中矮杆基因的发现与利用，促使小麦、水稻中育成了矮杆和半矮杆品种，抗倒伏性增强使得产量大幅增加。大豆(Glycine max L.)是重要的经济作物和油料作物，是人类食用植物油和优质植物蛋白的重要来源。虽然大豆是我国主要农作物之一，但单产远远落后于小麦、水稻、玉米等几个农作物。研究证实株高与产量密切相关。因而，研究株高对于大豆产量的提高具有重要的理论和现实意义。
目前多数研究认为，同其它作物一样大豆株高为数量性状，并已定位多个QTL，但是这些株高QTL在不同组合和环境的可重复性较差。因而利用现有定位QTL改良大豆株高则显得较为困难。矮杆突变体是改善作物株型和培育抗倒、高产新品种的基础，也是研究植物矮化基因及其调控机理的重要材料。矮杆突变体本身就是重要的种质资源，或直接作为新品种用于生产，或作为品种选育的中间材料。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何鉴定大豆的株高。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的方法。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的方法，包括M1)和M2)：
M1)分别以待测大豆、大豆A和大豆B的基因组DNA为模板，用名称为X1的PCR引物对分别进行PCR扩增，得到所述待测大豆PCR产物、所述大豆A的PCR产物和所述大豆B的PCR产物；所述X1由与大豆基因组DNA中序列1的第299位上游特异结合的单链DNA和与所述大豆基因组DNA中序列1的第299位下游特异结合的单链DNA组成；所述大豆A的PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述大豆B的PCR产物对应于序列1的第299位为T；
所述待测大豆是所述大豆A与所述大豆B进行杂交得到的杂交后代；所述大豆A的株高高于所述大豆B的株高；
M2)将所述待测大豆PCR产物进行测序，根据M21)、M22)、M23)或M24)确定所述待测大豆的株高性状：
M21)如果所述待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为T，所述待测大豆的株高低于或候选低于所述大豆A的株高；
M22)如果所述待测大豆PCR产物中860bpDNA片段的序列为序列1，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述PCR产物中860bpDNA片段的序列为序列1和序列2，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述PCR产物中860bpDNA片段的序列为序列2，所述待测大豆的株高低于或候选低于所述大豆A的株高；
M23)如果所述待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物对应于序列1的第299位为T，所述待测大豆为或候选为矮杆大豆；
M24)如果所述待测大豆PCR产物中860bp DNA片段的序列为序列1，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物中860bpDNA片段的序列为序列1和序列2，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物中860bpDNA片段的序列为序列2，所述待测大豆为或候选为矮杆大豆。
上述方法中，所述X1可由序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成。
为解决上述技术问题，本发明还提供了与大豆株高相关的大豆分子标记。
本发明所提供的大豆分子标记，其名称为SNP08-1，是以大豆基因组DNA为模板，采用所述X1的PCR引物对进行扩增得到的DNA分子；所述大豆分子标记在大豆中的多态性，为大豆基因组DNA中对应于序列1的第299位碱基为C或T。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的引物对。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的引物对，为所述X1。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的系统。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的系统，由所述X1和Y1组成；所述Y1为进行PCR扩增所需的试剂和/或仪器。所述进行PCR扩增所需的试剂可为进行聚合酶链式反应所需的聚合酶(如KOD-Plus-Neo酶或EasyTaq酶)、PCR反应缓冲液、dNTPs和mg2+。
为解决上述技术问题，本发明还提供了鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法。
本发明所提供的鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法，所述基因型为C/C基因型、C/T基因型和T/T基因型，所述方法包括如下K1)和K2)：
K1)以待测大豆基因组DNA为模板，采用所述X1进行PCR扩增得到PCR产物；
K2)检测步骤K1)得到的PCR产物的序列，根据所述PCR产物确定大豆基因型：所述PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述待测大豆为C/C基因型；所述PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，所述待测大豆为C/T基因型；所述PCR产物对应于序列1的第299位为T，所述待测大豆为T/T基因型。
所述鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法或所述鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的方法中，进行PCR扩增的反应体系可含有：所述待测大豆的基因组DNA，所述X1，所述聚合酶、所述PCR反应缓冲液、dNTPs和mg2+。
进行PCR扩增时的退火温度可为58℃。
为解决上述技术问题，本发明还提供了下述任一用途：
H1)所述鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的方法在大豆育种中的应用；
H2)所述大豆分子标记或其多态性在鉴定或辅助鉴定大豆株高性状中的应用；
H3)所述大豆分子标记或其多态性在大豆育种中的应用；
H4)所述X1或所述系统在鉴定或辅助鉴定大豆株高性状中的应用；
H5)所述X1或所述系统在制备鉴定或辅助鉴定大豆株高性状产品中的应用；
H6)所述X1或所述系统在大豆育种中的应用；
H7)所述鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法在鉴定或辅助鉴定大豆株高性状中的应用；
H8)所述鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法在大豆育种中的应用。
为解决上述技术问题，本发明还提供了大豆育种方法。
本发明所提供的大豆育种方法，按照所述鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法鉴定大豆的基因型，选择T/T基因型的大豆作为亲本进行育种。
本发明中，所述大豆A为矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任一种，所述大豆B为矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任一种；
所述大豆和所述待测大豆均可为R1)或R2)：
R1)矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任两种的杂种后代中的F2及其以后世代的家系；
R2)矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任一种的自交后代。
实验证明，大豆基因组DNA对应于序列1的第299位核苷酸多态性(即分子标记SNP08-1的多态性)与大豆的株高相关：在与序列1或序列2所示DNA片段对应的大豆基因组中，大豆亲本A与大豆亲本B(大豆亲本A的株高高于大豆亲本B的株高)的后代基因组DNA中对应于序列1的第299位核苷酸为T(即该大豆为T/T基因型)时，该大豆株高低于大豆亲本A；大豆亲本A与大豆亲本B的后代基因组DNA中对应于序列1的第299位的两条同源染色体中一条同源染色体的核苷酸为T，另一条同源染色体的核苷酸为C(即该大豆为C/T基因型)时，则该大豆株高高于大豆亲本B；大豆亲本A与大豆亲本B的后代基因组DNA中对应于序列1的第299位核苷酸为C(即该大豆为C/C基因型)时，则该大豆株高高于大豆亲本B。说明，利用本发明的方法鉴定大豆株高性状的准确率可达96％以上。可利用大豆基因组DNA中对应于序列1的第299位核苷酸多态性(即分子标记SNP08-1的多态性)鉴定大豆的株高。
附图说明
图1为矮杆突变体(dw)与野生型中品661(zp661)的表型。
图2为利用标记SNP08-1的引物(引物对X1)对中黄13(ZH13)、矮杆突变体(dw)及其F2矮杆个体基因型检测结果。其中左图为部分PCR扩增产物序列的比对结果；右图为F2矮杆个体(编号为D42)基因型检测结果，图中横坐标中的核苷酸位置编号只是测序中的编号，与PCR扩增产物中各核苷酸的实际位置无对应关系。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的矮杆突变体(dw)为大豆品种(Glycine max(L.)Merr.)中品661(zp661)的EMS诱变突变体，株高降低，统一编号为ZDD25365(网址为http://www.cgris.net/query/croplist.php#)，来源于中国国家种质资源库。公众可从中国农业科学院作物科学研究所北京大豆国家改良分中心大豆种质资源实验室获得。将矮杆突变体(dw)播种于北京市中国农业科学院作物科学所顺义试验基地，生育时期为2015年6月10日-10月20日，于成熟时期测量其株高(图1)，株高为43.2±8.2cm，中品661(zp661)在相同条件下生长至成熟时期测量其株高(图1)，株高为117.8±7.5cm。
下述实施例中的冀豆12(JD12)：记载于“陈强,闫龙,杨春燕，等.冀豆12遗传背景下3个回交组合高低蛋白含量后代品系SSR标记分析.中国农业科学,2014年02期”，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。将冀豆12(JD12)种于北京市中国农业科学院作物科学所顺义试验基地，生育时期为2015年6月10日-10月20日，于成熟时期测量其株高，株高为72.5±6cm。
下述实施例中的中黄13(ZH13)：记载于“姜妍,冷建田,费志宏,等.广适应大豆品种中黄13的光周期反应.大豆科学，2009年03期”，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。
实施例1、大豆株高基因连锁标记鉴定
1.株高位点初步定位
以冀豆12(JD12,♂)和矮杆突变体(dw,♀)作亲本组配F1，自交获得F2分离群体。从F2中选取10株高杆个体叶片混和提取DNA，构建高杆池，同时从中选取10株矮杆个体叶片混和提取DNA，构建矮杆池。选取均匀分布全基因组的543对SSR，其中在两亲本间共检测到多态性标记285对，将其对两个池分别进行PCR扩增。电泳检测结果显示，位于Gm08上的2对标记的扩增产物在两个池间存在差异，分别为SSR-08-0935、SSR-08-0941，二者在染色体上物理位置紧密相邻。用SSR-08-0935检测F2矮杆个体基因型，36个F2中有11个体在标记SSR-08-0935与株高基因之间发生了交换，因此可知，SSR-08-0935/08-0941两对标记与株高基因之间存在真实连锁关系。
随后，用同样的方法在标记08-0935/08-0941临近位置检测到SSR-08-0556/SSR-08-0818与株高位点存在连锁，并将这两个标记分别在36个矮杆隐性F2个体中进行了基因型检测。12个F2个体中株高基因与标记SSR-08-0556之间发生了交换，3个F2个体中株高基因与标记SSR-08-0818之间发生交换。因此，标记SSR-08-0818与株高基因之间连锁更紧密，将株高基因初步定位在标记SSR-08-0556～SSR-08-0941之间，物理区间长度为6.7Mb。
2.株高位点精细定位
在SSR-08-0556～SSR-08-0941之间合成了18对SSR标记，从中检测到了标记08-0687、08-0777与株高基因存在连锁。对36个矮杆个体分别进行基因型检测后，将株高基因定位区间缩小至SSR-08-0687～SSR-08-0777之间，物理区间长度为1.8Mb。
为进一步缩小定位区间，从冀豆12(JD12,♂)与矮杆突变体(dw,♀)的450个F2个体中又挑选了104株矮杆个体，并用SSR-08-0687等连锁标记分别进行基因型检测。同时在标记SSR-08-0687～SSR-08-0777之间又进一步筛选到了SSR-08-0692、08-0716等SSR连锁标记，并根据双亲间基因组序列差异成功开发了一个SNP连锁标记(将其命名为分子标记SNP08-1)。F2个体基因型检测结果显示，在140个矮杆个体中(36+104＝140)，株高基因与标记SNP08-1、SSR-08-0716之间分别发生1个交换。最终将目的基因定位在Gm08上SNP08-1～SSR-08-0716之间，物理区间长度为0.5Mb。
SSR引物PCR反应体系：DNA:2μl(20ng/μl)，EasyTaq酶:0.3μl，10×PCR Buffer:2μl，2.5mM dNTPs:2μl，引物(F/R):3.0μl(2μM)，ddH2O:10.7μl。
SSR引物PCR反应程序：先94℃5min；然后94℃30S，56℃30S，72℃30S，扩增36个循环；最后72℃延伸5min，4℃forever。
6％非变性凝胶电泳检测基本流程：制胶、上样、电泳、银染、水洗、显影等，基本步骤类似变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。另外，除不加尿素外非变性胶配置方式同一般变性聚丙烯酰胺凝胶。
引物SNP08-1的PCR反应体系：DNA:3μl(20ng/μl)，KOD-Plus-Neo酶:0.5μl，10×PCR Buffer:2μl，2.5mM dNTPs:2μl，mg2+：2μl，引物(F/R):3.0μl(2μM)，ddH2O:12.5μl。
引物SNP08-1的PCR反应程序：先94℃2min；98℃15S，58℃20S，68℃50S，扩增38个循环；68℃延伸8min，10℃50min。
经2％琼脂糖电泳检测后(140v，25min)，将PCR产物送公司进行双向测序。
表1dw×JD12组合F2群体基因型检测引物序列
实施例2、株高基因连锁标记的应用
将中黄13(ZH13)和矮杆突变体(dw)进行杂交，得到其子代F1，子代F1自交获得F2。将中黄13(ZH13)和矮杆突变体(dw)及F2个体均播种于海南省三亚市中国农业科学院作物科学所南繁试验基地，生育时期为2015年11月5日-2月20日，于鼓粒后期测量植株株高(此后株高基本无明显改变)。中黄13(ZH13)和矮杆突变体(dw)及F2个体株高如表2和表3所示。每株大豆的株高重复测量三次。
提取这50株F2矮杆个体和100株高杆个体以及中黄13(ZH13)和矮杆突变体(dw)的基因组DNA，并分别用分子标记SNP08-1的引物对(名称为X1，由实施例1中的SNP08-1F和SNP08-1R组成)进行PCR扩增，PCR反应体系与PCR反应程序如下：
PCR反应体系：DNA:3μl(20ng/μl)，KOD-Plus-Neo酶:0.5μl，10×PCR Buffer:2μl，2.5mM dNTPs:2μl，mg2+：2μl，引物(F/R):3.0μl(2μM)，ddH2O:12.5μl。
PCR反应程序：先94℃2min；98℃15S，58℃20S，68℃50S，扩增38个循环；68℃延伸8min，10℃50min。
经2％琼脂糖电泳检测后(140v，25min)，将PCR产物送公司进行双向测序。
中黄13(ZH13)和矮杆突变体(dw)的SNP08-1的引物对扩增产物除第299位外其它序列均相同，中黄13(ZH13)、矮杆突变体(dw)与部分F2植株的扩增产物的部分序列的比对结果如图2所示，为叙述方便，特作以下定义：
SNP08-1的引物对的扩增产物长度为860bp，比较中黄13(ZH13)、矮杆突变体(dw)的扩增产物，扩增产物的第299位发生C到T的改变，扩增产物的第299位存在多态性，为C或T，即分子标记SNP08-1的多态性为大豆基因组DNA中对应于序列1的第299位为C或T；
中黄13(ZH13)经SNP08-1的引物对扩增的产物长度为860bp，其序列为序列1，其第299位碱基均为野生型，即为C，为叙述方便，将中黄13(ZH13)的基因型定义为C/C(野生型，二倍体基因组)。
矮杆突变体(dw)经SNP08-1的引物对扩增的产物长度为860bp，其序列为序列2，其第299位碱基均为突变型，即为T，为叙述方便，将矮杆突变体(dw)的基因型定为T/T(突变型，二倍体基因组)；
F1经SNP08-1的引物对扩增的产物长度为860bp，其第299位碱基为碱基C或T(其产物包括中黄13(ZH13)和矮杆突变体(dw)两种类型产物)，为叙述方便，将F1的基因型定为C/T(杂合基因型，二倍体基因组)；
F2个体中凡扩增产物与中黄13(ZH13)一致者(即扩增产物的序列仅为序列1)，其基因型均为C/C(纯合野生型)；凡扩增产物与矮杆突变体(dw)一致者(即扩增产物的序列仅为序列2)，其基因型均为T/T(纯合突变型)；凡扩增产物与F1一致者(即扩增产物的序列为序列1和序列2)，其基因型均为杂合基因型C/T。
结果显示，中黄13(ZH13)的基因型为C/C，其株高为21.6±1.8cm；矮杆突变体(dw)的基因型为T/T，其株高为8.7±1.0cm；F2矮杆个体的植株高度均在6-14cm间，株高均低于中黄13(ZH13)，50株矮杆个体中49株基因型为T/T，1株基因型为C/T；F2中高杆个体植株高度均在18-28cm间，株高均显著高于矮杆突变体(dw)。100株高杆个体中31株基因型为C/C，64株基因型为C/T，另有5株高杆个体基因型为T/T。因此，在中黄13(ZH13)与矮杆突变体(dw)的后代中若用分子标记SNP08-1对株高进行鉴定或辅助鉴定，具体鉴定方法为：
M1)分别以待测大豆、大豆A和大豆B的基因组DNA为模板，用分别进行PCR扩增，得到待测大豆PCR产物、大豆A PCR产物和大豆B PCR产物；X1由大豆基因组DNA中与序列1的第299位上游特异结合的单链DNA和与序列1的第299位下游特异结合的单链DNA组成；大豆APCR产物对应于序列1的第299位为C，大豆B PCR产物对应于序列1的第299位为T；
待测大豆是大豆A与大豆B进行杂交得到的杂交后代；大豆A的株高高于大豆B的株高；
M2)将待测大豆PCR产物进行测序，根据M21)或M22)序列确定待测大豆的株高性状：
M21)如果待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C(即C/C基因型)，待测大豆的株高高于或候选高于大豆B的株高；如果PCR产物对应于序列1的第299位为C和T(即C/T基因型)，待测大豆的株高高于或候选高于大豆B的株高；如果待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为T(即T/T基因型)，待测大豆的株高低于或候选低于大豆A的株高；
M22)如果待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C(即C/C基因型)，待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果PCR产物对应于序列1的第299位为C和T(即C/T基因型)，待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果PCR产物对应于序列1的第299位为T(即T/T基因型)，待测大豆为或候选为矮杆大豆。
利用本发明的方法鉴定大豆株高性状的准确率可达96％(1-100％×(1+5)/(50+100)＝96％)。实验结果证明，分子标记SNP08-1的基因型(即分子标记SNP08-1产物第299位碱基的多态性)与大豆的株高相关，可利用该位点的多态性对大豆株高进行有效分子标记辅助选择。
表2 50个F2矮杆个体与亲本的平均株高及基因型
表3 100株F2高杆个体的株高及基因型

Claims (11)

1.鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的方法，包括M1)和M2)：
M1)分别以待测大豆、大豆A和大豆B的基因组DNA为模板，用名称为X1的PCR引物对分别进行PCR扩增，得到所述待测大豆PCR产物、所述大豆A PCR产物和所述大豆B PCR产物；所述X1由与大豆基因组DNA中序列1的第299位上游特异结合的单链DNA和序列1的第299位下游特异结合的单链DNA组成；所述大豆A PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述大豆B PCR产物对应于序列1的第299位为T；
所述待测大豆是所述大豆A与所述大豆B进行杂交得到的杂交后代；所述大豆A的株高高于所述大豆B的株高；
M2)将所述待测大豆PCR产物进行测序，根据M21)、M22)、M23)或M24)确定所述待测大豆的株高性状：
M21)如果所述待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为T，所述待测大豆的株高低于或候选低于所述大豆A的株高；
M22)如果所述待测大豆PCR产物中860bp DNA片段的序列为序列1，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述PCR产物中860bp DNA片段的序列为序列1和序列2，所述待测大豆的株高高于或候选高于所述大豆B的株高；如果所述PCR产物中860bpDNA片段的序列为序列2，所述待测大豆的株高低于或候选低于所述大豆A的株高；
M23)如果所述待测大豆PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物对应于序列1的第299位为T，所述待测大豆为或候选为矮杆大豆；
M24)如果所述待测大豆PCR产物中860bp DNA片段的序列为序列1，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物中860bp DNA片段的序列为序列1和序列2，所述待测大豆为或候选为非矮杆大豆；如果所述PCR产物中860bp DNA片段的序列为序列2，所述待测大豆为或候选为矮杆大豆。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述X1由序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成。
3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于：所述大豆A为矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任一种，所述大豆B为矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任一种。
4.鉴定或辅助鉴定大豆株高性状的系统，由权利要求1或2中所述X1和Y1组成；所述Y1为进行PCR扩增所需的试剂和/或仪器。
5.根据权利要求4所述的系统，其特征在于：所述大豆为R1)或R2)：
R1)矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任两种的杂种后代中的F2及其以后世代的家系；
R2)矮杆突变体(dw)、中黄13和冀豆12中的任一种的自交后代。
6.鉴定或辅助鉴定大豆基因型的方法，所述基因型为C/C基因型、C/T基因型和T/T基因型，所述方法包括如下K1)和K2)：
K1)以待测大豆基因组DNA为模板，采用权利要求1或2中所述X1进行PCR扩增得到PCR产物；
K2)检测步骤K1)得到的PCR产物的序列，根据所述PCR产物确定大豆基因型：所述PCR产物对应于序列1的第299位为C，所述待测大豆为C/C基因型；所述PCR产物对应于序列1的第299位为C和T，所述待测大豆为C/T基因型；所述PCR产物对应于序列1的第299位为T，所述待测大豆为T/T基因型。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述待测大豆为权利要求5中所述R1)或所述R2)。
8.下述任一用途：
H1)权利要求1或2所述方法在大豆育种中的应用；
H2 )权利要求1或2中所述X1或权利要求4或5所述系统在鉴定或辅助鉴定大豆株高性状中的应用；
H3 )权利要求1或2中所述X1或权利要求4或5所述系统在制备鉴定或辅助鉴定大豆株高性状产品中的应用；
H4 )权利要求1或2中所述X1或权利要求4或5所述系统在大豆育种中的应用；
H5 )权利要求6或7所述方法在鉴定或辅助鉴定大豆株高性状中的应用；
H6 )权利要求6或7所述方法在大豆育种中的应用。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：
所述大豆为权利要求5中所述R1)或所述R2)。
10.大豆育种方法，按照权利要求6或7所述的方法鉴定大豆的基因型，选择T/T基因型的大豆作为亲本进行育种。
11.根据权利要求10所述方法，其特征在于：所述大豆为权利要求5中所述R1)或所述R2)。
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